附 圖 為 小 萍 進行

Classifications

• • G—PHYSICS
  • G01—MEASURING; TESTING
  • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
  • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
  • G01N30/02—Column chromatography
  • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
  • G01N30/06—Preparation
• • G—PHYSICS
  • G01—MEASURING; TESTING
  • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
  • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
  • G01N30/02—Column chromatography
  • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
  • G01N30/74—Optical detectors

Abstract

本发明提供了一种浮萍及其制剂的特征图谱检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：1)参照物溶液的制备；2)供试品溶液的制备；3)分析特征图谱。供试品特征图谱应呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内；规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。本发明的浮萍及其制剂特征图谱检测方法，可以检测牡荆素，也可用于浮萍药材‑饮片‑提取物及配方颗粒的质量检测，结果可靠，为浮萍颗粒的质量控制提供了新方法。

Description

一种浮萍及其制剂特征图谱检测方法

技术领域

本发明具体涉及一种浮萍及其制剂特征图谱检测方法。

背景技术

浮萍作为浮萍科(Lemnaceae)植物的统称。喜温气候和潮湿环境，忌严寒。宜先水田、池沼、湖泊栽培。生长于水田、池沼或其它静水水域，常与紫萍，Spirodela polyrrhiza混生，形成密布水面的飘浮群落，由于本种繁殖快，有如李时珍所云：“一叶经宿即生数叶”，通常在群落中占绝对优势。带根干燥全草入药，性寒，味辛，功能发汗透疹、清热利水，主治表邪发热、麻疹、水肿等症；浮萍含大量水溶性维生素、无机元素、黄酮及多糖等成分。现代药理研究表明，浮萍具有抗癌、抗氧化、保肝、抗菌、增强免疫等多种生理活性。

由于浮萍的特殊功效，目前成为中药处方药如小儿柴桂退热颗粒、荆防消玫胶囊、紫铜消白颗粒等的原料药，临床应用广泛，但是有关浮萍的质量检测，目前仅限于性状、薄层色谱鉴别和运用液相色谱测定其中个别成分的含量，还未有全面反映和控制浮萍的检测方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种浮萍及其制剂的特征图谱检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1)参照物溶液的制备：取牡荆素对照品，加50％甲醇溶解，即得；

2)供试品溶液的制备：取待测样品，加50％甲醇提取，过滤，取滤液，即得；

3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：

4)分析特征图谱。

进一步地，步骤1)所述对照品牡荆素为每1ml含50μg的溶液。

进一步地，步骤2)所述待测样品为药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的一种或几种。

更进一步地，所述药材、饮片与50％甲醇的质量体积比为1:25g/ml；所述标准汤剂、配方颗粒与50％甲醇的质量体积比为1:125g/mL。

进一步地，步骤2)所述提取为超声提取。

更进一步地，所述超声提取的功率600W，频率40kHz、时间20min。

进一步地步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。

进一步地，步骤3)所述色谱条件的波长为300nm，柱温为30℃，流动相流速为1.00ml/min，理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。

进一步地，步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱规格为柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm。

进一步地，所述步骤4)的特征图谱中应呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内，规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。

本发明的浮萍及其制剂特征图谱检测方法，可以检测牡荆素，也可用于浮萍药材-饮片-提取物及配方颗粒的质量检测，结果可靠，为浮萍配方颗粒的质量控制提供了新方法，也能用于检测浮萍药材、饮片、提取物，具有良好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1浮萍药材特征图谱(S1-S16分别为：010149-1709002、XLS201807869、XLS201807870、XLS201807871、XLS201807872、XLS201807873、XLS201807874、XLS201807875、XLS201807916、XLS201807917、XLS201807918、XLS201807919、XLS201807920、XLS201807921、XLS201807922、XLS201807923)

图2浮萍饮片特征图谱(S1-S16分别为：FP181001、FP181002、FP181003、FP181004、FP181005、FP181006、FP181007、FP181008、FP181009、FP181010、FP181011、FP181012、FP181013、FP181014、FP181015、FP181016)

图3浮萍标准汤剂特征图谱(S1-S16别为：FPBT181001、FPBT181002、FPBT181003、FPBT181004、FPBT181005、FPBT181006、FPBT181007、BT181008、FPBT181009、FPBT181010、FPBT181011、FPBT181012、FPBT181013、FPBT181014、FPBT181015、FPBT181016)

图4浮萍配方颗粒特征图谱

图5药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒对照图谱叠加图

图6牡荆素紫外吸收光谱图

图7浮萍配方颗粒不同波长色谱图

图8柱温考察色谱图

图9流速考察色谱图

图10提取溶剂考察色谱图

图11提取方法考察色谱图

图12提取时间考察色谱图

图13溶剂加入量考察色谱图

图14浮萍对照药材

图15色谱峰指认

图16 3批浮萍配方颗粒特征图谱验证图

图17浮萍配方颗粒对照特征图谱

具体实施方式

1、材料、试剂与仪器

1.1实验仪器

高效液相色谱仪：安捷伦1260型高效液相色谱仪、Waters e2695型高效液相色谱仪、岛津20AD型高效液相色谱仪；

电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司)；

超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；

超声波清洗器：KQ5200DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；

色谱柱：Agilent 5 TC-C18 250×4.6mm、Diamonsil 5μm C18(2)250×4.6mm、Agilent Eclipse XDB-C18 5μm 4.6×250mm

1.2试剂及试药

牡荆素(中国食品药品检定研究院，批号：111687-201704，含量以94.9％计)。

乙腈(SIGMA公司，色谱纯)；磷酸(色谱纯)；水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

浮萍配方颗粒1805034、SY1810001、SY1810002、SY1810003。

浮萍药材010149-1709002、XLS201807869、XLS201807870、XLS201807871、XLS201807872、XLS201807873、XLS201807874、XLS201807875、XLS201807916、XLS201807917、XLS201807918、XLS201807919、XLS201807920、XLS201807921、XLS201807922、XLS201807923

浮萍饮片FP181001、FP181002、FP181003、FP181004、FP181005、FP181006、FP181007、FP181008、FP181009、FP181010、FP181011、FP181012、FP181013、FP181014、FP181015、FP181016

浮萍标准汤剂FPBT181001、FPBT181002、FPBT181003、FPBT181004、FPBT181005、FPBT181006、FPBT181007、FPBT181008、FPBT181009、FPBT181010、FPBT181011、FPBT181012、FPBT181013、FPBT181014、FPBT181015、FPBT181016

实施例1浮萍药材特征图谱

1)参照物溶液的制备：

取牡荆素对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：

分别取16批浮萍药材各1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

3)特征图谱的测定

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件如下：

检测波长：300nm；

色谱柱：C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；

流动相:乙腈(A)和0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0～40min，5％～15％A；40～80min，15％～28％A；80～100min，28％～28％A)；

柱温为30℃；

流速为1.00ml/min；

记录16批浮萍药材的特征图谱。结果见图1。

4)分析特征图谱

浮萍药材特征图谱中呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。

实施例2浮萍饮片特征图谱

1)参照物溶液的制备：

取牡荆素对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：

分别取16批浮萍饮片各1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

3)特征图谱的测定

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件如下：

检测波长：300nm；

色谱柱：C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；

流动相:乙腈(A)和0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0～40min，5％～15％A；40～80min，15％～28％A；80～100min，28％～28％A)；

柱温为30℃；

流速为1.00ml/min；

对16批浮萍饮片进行特征图谱测定，记录图谱。结果见图2。

4)分析特征图谱

浮萍饮片特征图谱中呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。

实施例3浮萍标准汤剂特征图谱

1)参照物溶液的制备：

取牡荆素对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：

分别取16批浮萍标准汤剂粉末0.2g，研细，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3)特征图谱的测定

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件如下：

检测波长：300nm；

色谱柱：C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；

流动相:乙腈(A)和0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0～40min，5％～15％A；40～80min，15％～28％A；80～100min，28％～28％A)；

柱温为30℃；

流速为1.00ml/min；

对16批浮萍标准汤剂进行特征图谱测定，记录图谱。结果见图3。

4)分析特征图谱

浮萍标准汤剂特征图谱中呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。

实施例4浮萍配方颗粒特征图谱

1)参照物溶液的制备：

取牡荆素对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：

分别取3批浮萍配方颗粒粉末0.2g，研细，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3)特征图谱的测定

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；

色谱条件如下：

检测波长：300nm；

色谱柱：C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；

流动相:乙腈(A)和0.1％磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0～40min，5％～15％A；40～80min，15％～28％A；80～100min，28％～28％A)；

柱温为30℃；

流速为1.00ml/min；

对3批浮萍配方颗粒进行特征图谱测定，记录图谱。结果见图4。

4)分析特征图谱

浮萍配方颗粒特征图谱中呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。

实施例5浮萍药材-饮片-提取物及配方颗粒对照图谱

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)分别将实施例1中16批浮萍药材特征图谱合成一张药材对照图谱，实施例2中16批浮萍饮片特征图谱合成一张饮片对照图谱，实施例3中16浮萍标准汤剂特征图谱合成一张标准汤剂对照图谱，实施例4中3批浮萍配方颗粒特征图谱合成一张配方颗粒对照图谱。将以上浮萍药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒对照图谱进行对比，结果见图5。

结果表明：饮片和标准汤剂、配方颗粒中的7个特征峰均能在药材中检出，说明这些成分都来源于药材，同时从对照图谱可知浮萍药材、浮萍饮片、浮萍标准汤剂、浮萍配方颗粒的化学成分相同，物质基础一致。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果：

试验例1特征图谱方法学

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱，理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。

表1流动相梯度洗脱比例

1波长选择

在以上拟定的实验条件基础上，利用二极管阵列检测器分别对牡荆素、供试品溶液(批号1805034浮萍配方颗粒)进行全波段扫描，并分别提取供试品溶液在220nm、240nm、260nm、280nm、300nm、320nm、340nm波长下的色谱图。见图6-7。

结果表明，在检测波长为300nm时色谱峰信息量较大，色谱图基线更平稳，故检测波长确定为300nm。

2柱温考察

在以上拟定的实验条件基础上，取同一供试品溶液，分别对柱温为25℃、30℃、35℃时进行考察。见图8。

柱温考察结果表明，当柱温为30℃时，色谱图峰形均较为对称，分离度均好，故最终确定30℃作为浮萍特征图谱方法的柱温。

3流速考察

在以上拟定的实验条件基础上，取同一供试品溶液，分别对流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时进行了考察。见图9。

结果表明，流速在1.0ml/min时，色谱图峰形较好，分离度适中。故流速确定为1.0ml/min。

综上所述，浮萍特征图谱色谱条件与系统适应性试验确定为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱(0～40min，5％～15％A；40～80min，15％～28％A；80～100min，28％～28％A)；柱温为30℃；检测波长为300nm。理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。

4参照物溶液的制备

取牡荆素对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

5供试品溶液的制备

5.1提取溶剂考察

取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g，置具塞锥形瓶中，分别加入甲醇、75％甲醇、50％甲醇、水、乙醇、50％乙醇、75％乙醇各10ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图10。

结果表明，提取溶剂中50％甲醇作为提取溶剂时色谱峰信息量大，故供试品提取溶剂确定为50％甲醇。

5.2提取方式考察

取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，密塞，分别对供试品提取方法为回流、超声时进行考察，提取时间20min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图11。

结果表明，对供试品分别进行超声提取与回流提取时效果一致。因超声提取操作更为简便，故供试品提取方法确定为超声提取。

5.3提取时间考察

取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)，分别对供试品提取时间为20分钟、30分钟、40分钟时进行考察，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图12。

结果表明，在提取时间为20分钟时，即可充分提取。故供试品提取时间确定为20分钟。

5.4溶剂加入量考察

取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g，置具塞锥形瓶中，分别加入50％甲醇10ml、25ml、50ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)20min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图13。

结果表明，在溶剂加入量为25ml时，特征图谱色谱峰面积适中，基线更平。故供试品溶剂加入量确定为25ml。

5.5确定供试品制备方法：取浮萍制剂，研细，取0.2g，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，超声20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.6特征图谱方法确定为

照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为300nm。理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。

参照物溶液的制备取牡荆素对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备取浮萍药材、饮片粉末1g，置具塞锥形瓶中，加50％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。另取浮萍标准汤剂粉末、配方颗粒，研细，取0.2g，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

试验例2特征图谱方法学考察

1色谱峰指认

供试品溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备浮萍配方颗粒供试品溶液。

参照物溶液的制备：取牡荆素对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

浮萍对照药材溶液的制备：取浮萍对照药材粉末1g，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇25ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备缺浮萍配方颗粒阴性对照溶液。

对浮萍配方颗粒特征图谱峰进行定位。见图14-15。

2精密度试验

取浮萍配方颗粒供试品溶液，按拟定实验方法连续进样6次，每次10μl，计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积。见表2-3。

表2精密度考察-保留时间

表3精密度考察-峰面积

结果表明，该仪器精密度良好。

3重复性考察

精密称取浮萍配方颗粒6份，按拟定实验方法进行制备及测定。见表4-5。

表4重复性考察-相对保留时间比值

表5重复性考察-相对峰面积比值

结果表明，该方法重复性好。

4中间精密度考察

4.1不同仪器考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别精密称取浮萍配方颗粒两份，制备供试品溶液，分别在安捷伦1260、岛津LC-20AD、Waters e2695型高效液相色谱仪上进行测定。见表6-7。

表6仪器耐用性考察-相对保留时间比值

表7仪器耐用性考察-相对峰面积比值

结果表明，用上述3种仪器对供试品进行检测时，各特征峰相对保留时间的RSD范围为0.0％-1.2％。

4.2不同人员和时间考察

在以上拟定的实验条件基础上，由不同人员(A、B)在不同时间(T1、T2)分别精密称取浮萍配方颗粒各两份，制备供试品，进行测定。见表8-9。

表8人员和时间考察-相对保留时间比值

表9人员和时间考察-相对峰面积比值

结果表明，由不同的人员在不同的时间对同一个样品进行测定，方法稳定性较好。

5耐用性考察

5.1色谱柱耐用性考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对色谱柱为Agilent TC-C18 5μm250×4.6mm、Diamonsil 5μm C18(2)250×4.6mm、Agilent Eclipse XDB-C18 5μm 4.6×250mm进行考察。见表10-11。

表10色谱柱耐用性考察-相对保留时间比值

表11色谱柱耐用性考察-相对峰面积比值

结果表明，用上述3种色谱柱对样品进行检测，特征峰相对保留时间的RSD在0.0％～9.8％。

5.2稳定性

在以上拟定的实验条件基础上，取同一供试品溶液，分别于0h，4h，7h，14h，20h，24h时测定。见表12-13。

表12稳定性考察-保留时间

表13稳定性考察-峰面积

结果表明，其相对应的特征峰保留时间的RSD为0.1％，峰面积RSD为0.1％-1.5％，样品溶液在24小时内稳定。

综上所述，各特征峰相对保留时间的RSD在以上各项考察中均符合要求，该方法良好。将上述8个特征峰纳入后续考察。

6特征峰的确定及对照图谱的建立

6.1相对保留时间规定值限度的制定

方法学各考察项目及验证结果汇总见表14。

表14方法学各项目结果RSD％汇总标准—相对保留时间

在色谱柱耐用性考察项中，峰1的RSD为9.8％，RSD值较大，因此不将峰1纳入特征峰范围内。除去峰1，峰2至峰8的RSD范围为0.0％-6.3％，故将各峰的相对保留时间规定值暂定为±8％。

最终规定：供试品特征图谱中应呈现7个特征峰，其中与牡荆素参照物相应的峰为S峰。

6.2 3批浮萍配方颗粒验证结果

采用拟定的方法对浮萍配方颗粒3批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。见图16，表15-16。

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对3批浮萍配方颗粒进行合成，建立了浮萍配方颗粒特征图谱的对照图谱。见图17。

表15 3批浮萍配方颗粒相对保留时间

表16 3批浮萍配方颗粒相对峰面积

根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了7个重复性较好的峰作为特征峰。计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内，规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、峰6)、1.21(峰7)。

通过特征图谱方法学考察，确认了该方法能检测浮萍配方颗粒中的7个特征峰；对浮萍药材、饮片、标准汤剂及浮萍配方颗粒均能检测7个稳定峰，说明浮萍药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒的物质基础一致。该方法能用于药材-饮片-提取物及配方颗粒的质量检测，能准确反应浮萍药材-饮片-提取物及配方颗粒多成分的整体面貌。

Claims (10)

1.一种浮萍及其制剂的特征图谱检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1)参照物溶液的制备：取牡荆素对照品，加50％甲醇溶解，即得；

2)供试品溶液的制备：取待测样品，加50％甲醇提取，过滤，取滤液，即得；

3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：

4)分析特征图谱。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述对照品牡荆素为每1ml含50μg的溶液。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述待测样品为药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述药材、饮片与50％甲醇的质量体积比为1:25g/ml；所述标准汤剂、配方颗粒与50％甲醇的质量体积比为1:125g/mL。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述提取为超声提取。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述超声提取的功率600W，频率40kHz、时间20min。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3)所述色谱条件的波长为300nm，柱温为30℃，流动相流速为1.00ml/min，理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。

9.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱规格为柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述步骤4)的特征图谱中应呈现7个特征峰，与牡荆素参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8％范围之内；规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5，S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。

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