N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 114Classifications
Abstract通过给予内啡肽酶抑制剂或内啡肽酶抑制剂和选择性地一种多巴胺前体或者一种5－羟色胺前体、一种GABA前体或者一种内啡肽或内啡肽酶释放剂或者包括Rhodiola rosea提取物(Pharmaline)和/或石杉碱的某些草药化合物获得了注意力过程的加强。这些成分促进正常神经递质功能的恢复而且联合的成分提高多巴胺在伏核处的释放,而且是非成瘾性的。利用多巴胺前体L－苯丙氨酸、或L－酪氨酸、内啡肽酶抑制剂D－苯丙氨酸、和/或5－羟色胺前体5－羟色氨酸以及天然的乙酰胆碱酯酶抑制剂和铬盐(如吡啶甲酸盐、烟酸盐等)特别优选地,但并不限于,帮助缓解与大脑苯丙氨酸缺陷相关的症状。 Description报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗 发明背景依照国家药物滥用研究所的基金1-ROI-DA08417号以及烟草相关研究疾病计划基金4RT-0110政府拥有本发明中的权利。1、发明领域本发明部分涉及某些脱瘾成分的结合以及一些均参与报偿行为神经递质功能的基因的特定基因分型。本发明的一个方面是理解在脑中央边缘系统(meso-limbic system)中某些已建立的神经递质如何协同工作活化神经通路、导致良好感觉，以及开发影响这些神经通路的物质。本发明部分涉及利用前体氨基酸和某些草药化合物来提高注意力处理过程和记忆以及在健康个体中增加注意力，并且促进体重减轻和控制过食。本发明公开了利用神经递质基因的遗传多态性对各种神经学异常和行为的各种诊断方法以及利用本发明的组合物治疗所鉴定患者的治疗方法。还公开了对多基因性状的诊断方法。2、相关领域的描述在过去的几十年中，对于化学药物依赖性生物学基础的研究已经能够确定参与报偿的一些大脑区域以及神经递质。特别是，对酒精、阿片类物质以及可卡因的依赖看来有赖于一套共同的生物化学机制(Cloninger，1983；Blum，1978；Blum，1989)。在大脑深处参与边缘系统的一种神经元通路以及称为伏核和苍白球的两个区域在服药(drugs)人的报偿表达中似乎是关键的(Wise和Bozarth，1984)。已经证实可卡因、吗啡和酒精的慢性使用导致在边缘多巴胺系统中的几种生物化学适应(Ortiz等，1996)。 中央边缘多巴胺系统联接脑中的高层结构特别框额叶皮质(在前额后的额前区中)与在脑中央的杏仁体以及与伏核，其已经在动物研究中被证实为成瘾中的一个主要活动位点。参与多种成瘾性的各种大脑通路汇集于某些多巴胺能受体(D1、D2、D3、D4、D5)，其中D2位点似乎最突出。虽然每种滥用的物质似乎作用于通路的不同部分，但最后的结果是相同的：在伏核和海马中多巴胺被释放(Koob和Bloom，1988)。多巴胺似乎是这些强化位点的报偿的主要神经递质。 多巴胺代谢的异常涉及几种行为，即性异常(Gessa和Tagiamonte，1975)、躁狂(Goodwin和Jamison，1990)、分裂样行为(Carlsson，1978；Snyder，1976)、ADHD(Shaywitz等，1976)、品行障碍或攻击(Rofeness等，1986；Valzelli，1981；King，1986)、酒精滥用(Blum等，1990)和口吃。此外，已经报道氟哌啶醇，一种DRD2受体拮抗剂，在一些口吃的治疗中有效(Murray等，1977；Prins等，1980)。虽然5-羟色胺能机制最常参与强迫性行为，但多巴胺的异常也已被考虑(Austin等，1991；Delgado等，1990)。丘脑、基底核和额叶中的异常通路参与强迫性障碍(Baxter等1992；Rauch等，1994；Modell等，1989)而特别是在纹状体和额叶中多巴胺是一种主要的神经递质。 中枢去甲肾上腺能机制的缺陷常常参与注意缺陷多动障碍的病因学。已经证实，同没有认知缺陷的ADHD儿童相比，具有阅读和其它认知缺陷的ADHD儿童中血浆去甲肾上腺素(NA)显著增加(Halperin等，YEAR)。他们推测ADHD+认知缺陷同影响顶/颞叶注意中枢的NA失调相关。由于这些大脑区域邻近听觉和语言处理区，所以这可能引起共生的认知障碍。从临床角度看，用可乐定治疗后通常发生症状的显著改善(Hunt等，1985；Comings等，1990)，这提示在至少某些ADHD中NA的作用。可乐定是一种突触前a2-去甲肾上腺素能受体拮抗剂，其导致去甲肾上腺素释放入突触的抑制(Starke等，1974)。 据推测，NA和蓝斑(LC)在注意力的重要方面觉醒和不眠中发挥作用(Aston-Jones等，1984)。据推测，对任务的应激耐受力和良好的表现同儿茶酚胺低基础或紧张水平以及在精神应激时较高的急性释放相关(Dienstbier，1989)。在ADHD中可能相反，具有一增高的NA基线紧张刺激以及应激过程中儿茶酚胺的降低释放(Pliszka等，1996)。为检测NA缺陷参与ADHD的假设，进行了许多CSF、血浆和尿中NA代谢物(3-甲氧基-4-羟基苯基甘油(MHPG))排泄的研究。一些研究表明ADHD患者具有低于对照的MHPG排泄率(Oades，1987；Shekim等，1983；Shekim，Dekirmenjian和Chapel，1997；Yu-cum和Yu-feng，1984)而其它的研究表明没有变化(Rapoport等，1978；Zametkin等，1985)或者NA转化的增加(Khan和Dekirmenjian，1981)。已经报道同对照相比，在ADHD主体中，肾上腺素水平明显较低(Hanna等，1996；Klinteberg和Magnusson，1989；Pliszka等，1994)，或者表现出一种对葡萄糖摄取的迟钝反应(Girardi等，1995)。去甲肾上腺素被由PNMT基因编码的苯乙醇胺N-甲基转移酶转化为肾上腺素。 一种ADHD的模型基于肾上腺素的障碍来强直性抑制蓝斑NA神经元。据报道，均通常用于ADHD治疗的d-安非他明和去甲丙咪嗪导致MHPG排泄的显著降低(Mefford和Potter，1989；Shekim等，1979)。然而，用于ADHD治疗最常用的药物哌醋甲酯(利他林)并不引起MHPG排泄的降低(Zametkin等，1985)，而其它降低MHPG排泄的药物例如氟苯丙胺(Donnelly等，1989)在治疗ADHD中无效。这些观察同存在几种类型的ADHD以及多种神经递质和基因的参与相一致。 据推测NA和肾上腺素能α2受体在一些形式的ADHD中通过在顶/颞叶的皮质后注意力系统的LC处的失调来发挥作用(Posner和Peterson，1990；Pliszka，1996)，而另一种形式的ADHD是由于主要影响同冲动性和执行障碍相关的前额叶注意力系统的多巴胺能缺陷。已经发现几种多巴胺能基因，例如多巴胺D2受体(DRD2)(Comings等，1991)、多巴胺D4受体(DRD4)(Lahoste等，1996)以及多巴胺转运蛋白(DAT1)(Cook等，1995；Comings等，1996；Gill等，1997；Waldmaqn等，1996)基因同ADHD相关。 据报道，具有ADHD和阅读障碍的男孩血浆MHPG水平显著高于仅仅具有ADHD的男孩(Haperin等，1993；Halperin等，1997)。在后一研究中，他们还证实了在血浆MHPG水平和WISC-R言语IQ、以及通过WRAT-R(修订的宽范围成就测试)评价的阅读、拼写和算术问题之间显著的负相关。这种不同与表明具有认知障碍的ADHD是ADHD的一种不同亚型的先前他人的研究(August和Garfinkel，1989；McGee等，1989；Pennington等，1993)一致。还已经表明，同顶叶缺陷相关的注意缺陷类型倾向于一种选择性的注意缺陷(Posner和Peterson，1990；Dykman等，1979；Richards等，1990)。 据推测，ADHD+认知障碍是由于一种涉及肾上腺素能α2受体的LC的NA代谢失调，并且主要影响顶叶皮质的后注意系统(Halperin等，YEAR)。由于这些脑区域邻近听觉和语言处理区域，这可能导致共生的认知障碍。由于ADHD是一种多基因异常(Comings等，1996)，因此假定这些是纯的形式是错误的，而大多数的个体可能具有两种类型的遗传基因。灵长类中的研究表明NA和肾上腺素能α2受体的缺陷在额前叶认知缺陷中也发挥作用(Arnsten，1997)。 多种研究已经提示多巴胺受体参与成瘾行为。可卡因患者在他们的神经元活动水平上表现出降低，这同接受多巴胺能力降低是一致的(Volkow等，1993)。在吗啡成瘾的大鼠中具有D2多巴胺受体的神经元表现为减小25％，并失去大部分它们从邻近神经元接受小量多巴胺的能力(Nestler等，1996)。在阿片类物质依赖主体中观察到的D2受体的减少，据推测这提示在他们开始滥用药物前主体便具有低的D2受体，而且这种降低可能使他们更易于自我服药(Wang等，1997)。 虽然参与报偿生物学的神经递质系统是复杂的，但已知至少三种其它的神经递质在大脑的几处位点参与：5-羟色胺在下丘脑、内啡肽(阿片样肽)在腹侧盖区和伏核、以及抑制性神经递质GABA在黑质、腹侧盖区和伏核(Stein和Belluzzi，1986；Blum和Kozlowski，1990)。有趣的是，葡萄糖受体是下丘脑中5-羟色胺能系统和阿片样肽之间的一个重要连接。另一报偿通路包括在海马中由蓝斑发源的神经纤维对去甲肾上腺素的释放。 有阿片能和多巴胺能系统在解剖上和功能上相互关连的证据，这表明内源性阿片能系统在介导酒精和其它药物对与报偿相关的大脑多巴胺能通路的效应中有作用。多巴胺拮抗剂以及大脑中多巴胺能通路的损伤影响前内啡肽原A活性(Morris等，1988；Normand等，1988)。行为学、药理学以及神经化学研究表明阿片能和多巴胺能系统在增强酒精和其它药物滥用的效应中有作用(Blum等，1976a，b；Blum，1982a；Blum，1977；Blum，1973；Koob和Bloom，1988；Weiss等，1993)。动物研究显示阿片受体激动剂增加对酒精的偏爱，而这些受体的拮抗剂则降低酒精的消耗(Blum，1975；Le等，1993)。此外，对动物和人酒精中毒者的研究表明阿片受体拮抗剂在降低酒精消耗的正性强化效应(positive reinforcing effects)中是有效的(O’Malley，1992；Swift等，1994；Blum，1975；Volpicelli等，1992)。另外，在动物中乙醇诱导的大脑多巴胺水平的增加被阿片受体拮抗剂纳络酮和纳曲酮阻断(Widdowson和Holman，1992；Benjamin等，1993)。最近由Gianoukalis和de Waele所作的综述(1994)支持内源性阿片样物质和滥用药物(酒精)的作用。 在正常人中，这些神经递质在刺激和复杂反应之间的一种激动或抑制级联反应中共同工作，导致一种良好感觉，最终报偿。在报偿的级联反应原理中，这些细胞间相互作用的破坏导致消极情绪。包括某些多态性的遗传异常、长期紧张或精神活性药物(包括葡萄糖)的长期滥用在动物和人中均可以导致异常成瘾的自我持续模式(Blum，1991)。 药理的作用(溴环肽、安非他酮和N-丙基去甲阿扑吗啡)部分是由个体的多巴胺D2基因型决定的。DRD2基因的A1携带者药理学上对D2激动剂反应更强。一个研究已经显示将D2激动剂N-丙基去甲阿扑吗啡直接显微注射至如大鼠的伏核中显著抑制动物阿片类物质戒断后的症状，而多巴胺本身抑制酒精的戒断症状(Harris和Aston-Jones，1994；Blum等，1976b)。在这方面，有多巴胺/内源阿片样肽在伏核和大脑的其它处中相互作用的证据，而且可能是由外源性阿片类物质对阿片样肽系统的过度刺激导致多巴胺功能的降低(Pothos等，1991)。当同正常非酒精偏爱大鼠相比时，酒精偏爱大鼠在下丘脑中具有较少的5-羟色胺神经元、在下丘脑中具有较高水平的内啡肽(因为很少被释放)、在伏核中有更多的GABA神经元以及在边缘系统的某些区域中低密度的D2受体(McBride等，1995；Smith等，1997；和McBride等，1997)。 临床实验已经证明当向SUD或碳水化合物暴食的先证者给予某些神经递质(5-羟色胺和多巴胺)的氨基酸前体以及D-苯丙氨酸(一种通过抑制酶促裂解提高内啡肽活性的物质(美国专利号4,761,429和5,189,064))时，发现减少成瘾、降低紧张的发病率、降低复发率并且增加复原的的可能。 许多实验室追踪在某些基因和各种行为障碍之间的联系，包括多巴胺D2受体等位基因同许多冲动性强迫性成瘾行为之间的关系。除有研究通过SPECT扫描技术表明在抽动-秽语障碍患者中多巴胺转运蛋白位点增加外(Malison等，1995；Tiihonen等，1995)，对于同DAT110/10等位基因或DβHB1等位基因相关联的多态性表达所知甚少。ADHD、抽动-秽语综合征(TS)、品行障碍、ODD、阅读困难、学习障碍、口吃、药物依赖以及酒精中毒均表现为男性为主。DRD2、DβH、DAT的分子遗传学研究(Comings等，1996a)和临床遗传学研究(Comings，1994b；1994c；1995b；Bierderman等，1991；Comings和Comings，1987)表明这些是病因学上相关的系列障碍。已经有人主张神经递质的缺陷参与酒精中毒(Blum，1991)。下面描述了参与神经学通路的基因研究。 雄激素受体基因 据报道雄激素受体(AR)基因的特定突变引起广泛类型的雄激素不敏感综合征(Gottlieb等，1977)。此外，导致蛋白中多氨基酸束的两套多态性三核苷酸重复序列，CAG(Edwards等，1992)和GGC(Sleddens等，1993；Sleddens等，1992)，存在于AR基因的第一个外显子中。已表明，CAG三核苷酸重复序列当高度扩扩展时，43至65倍，导致X连锁脊髓性肌萎缩(La Spada等，1991)。在正常人群中重复序列的长度为11至31倍(Edwards等，1992)。 在正常人群中存在的微卫星和小卫星的非高度扩增的等位基因可能在基因的调节中发挥直接的作用。这是基于这样的观察，即大部分短的串联的重复同Z-DNA的形成相关(Schroth等，1992)，而且Z-DNA重复参与基因调节的各个方面(Rich等，1984；Hamada等，1982；Wolff等，1996)。由于所形成的Z-DNA的量对于重复的长度是高度敏感的(Schroth等，1992)，所以提示重复等位基因的大小本身可能同表型效应相关(Comings，1997)。 一些研究(Olweus等，1988；Mattsson等，1980；Schiavi等，1984；Kreuz和Rose，1972)但并非所有的研究(Bradford和McClean，1984；Schaal等，1998)提示攻击行为和血浆睾酮水平相关。在TS加ADHD的主体中，攻击性行为障碍通常是一种共生病条件(Comings，1995；Stewart等，1981；Biederman和Sprich，1991)并且在TS和ADHD之间存在高程度共生性(Comings和Comings，1984，1990；Knell和Comings，1993)。 多巴胺D1受体基因(DRD1) 在对照和患精神分裂症、躁狂抑郁和酒精中毒的患者中进行DRD1基因的测序没有鉴定出对表型以及在精神分裂症和TD的关联研究上产生效应的外显子突变(Jensen，1993k；Gelertner等，1993k)。在额叶皮质中的D1受体可能在记忆中发挥作用(Comings等，1997k；Williams等，1995k)。已经报道了在大鼠中D1和D2受体激动剂的对可卡因寻找行为的相反作用(Self等，1996)。TD先证者、吸烟者以及病理性赌博者符合负杂种优势，其中最一致的差别是Dde1多态性的12杂合子频率的相对降低以及11和22纯合子的增加(Comings等，1996)。相反，正杂种优势存在于DRD2基因，其定量评分12杂合子为最高，而11和22纯合子最低。虽然对于ADHD的结果单独在DRD1位点并不显著，但检测在DRD1基因上的负杂种优势和/或在DRD2基因上的正杂种优势的存在具有显著的加和效应(Comings等，1997k)。 多巴胺D2受体基因(DRD2)以前的研究已经表明，在ADHD、TS、CD和SUD的个体中，D2A1等位基因存在概率明显增加(Comings等，1991)。由于这些障碍均以差的应激反应为特征，并且对于PTSD的很多诊断标准具有许多同ADHD一致的症状，国家越南退伍兵再调节研究(Kulka等，1990)报道了在PTSD和ADHD及CD一致性儿童期症状史之间具有显著的相关性。从成瘾治疗中曾在越南经历激烈战争条件的人中筛选创伤后应激障碍(PTSD)，并发现在PTSD同携带D2A1等位基因的个体间具有相关性(Comings等，1996k)。 已经检测到在ADHD和DRD2基因的TaqA1等位基因之间的关联性(Comings等，1991k)。刺激剂哌醋甲酯增加局部血流，而在其他人中其降低血流。额叶、颞叶和小脑代谢的改变同D2受体的密度相关——密度越高血流增加的越大。哌醋甲酯降低基底神经节中的代谢活性。这些结果同这种观点一致，其认为导致在边缘系统和额叶中多巴胺能状态的多巴胺代谢中的遗传缺陷引起在基底神经节中多巴胺能活性的代偿性增高，以及哌醋甲酯通过联合其经过对多巴胺转运蛋白的抑制提高大脑多巴胺能神经的多巴胺活性(Volkow等，1996k)以及在基底神经节中多巴胺能活性的随后降低和基底神经节中血流的减少来逆转这一现象。这些研究还同其他人的结果一致，表明在对哌醋甲酯的反应和HVA的CSF水平间具有正相关性(Castellanos等，1996k)，HVA是一种多巴胺的代谢物，其在CSF中的水平同D2受体的密度相关。尽管在小脑中D2受体缺乏，但哌醋甲酯仍增加小脑的代谢(Volkow等，1996k；Hall等，1994k)。这同越来越多的表明小脑在注意力、学习以及记忆中发挥重要作用的证据是一致的(Leiner等，1989k)。已经报道了在A1基因型和局部血流间的相关性。TaqI D2A1携带者表现出在壳(豆状核)、伏核、额叶和颞叶的脑回以及中额前叶、枕颞叶以及眶的皮质中相对葡萄糖代谢显著低于那些具有A22基因型的个体(Nobel等，1997)。Taq D2 A1携带者在基底神经节中具有显著降低的多巴胺D2受体Bmax(Nobel等，1991k)。内啡肽增加同哌醋甲酯相似区域的血流并且因此可能参与一种多巴胺能机制(Blum等，1985k)。在具有脱离(detachment)、社会隔绝以及缺少亲密朋友的个体中检测到多巴胺受体密度的显著降低(Farde等，1997k)。 虽然DRD2基因多态性同许多心理障碍相关，但在被禁闭的药物滥用者中没有发现同某种精神病间具有相关性(Smith等，1993)。在酒精中毒和DRD2等位基因之间相关性的报道变化较大，而已发现在D2A1等位基因和多物质/药物滥用间的相关性(Smith等，1992；Noble等，1993；O’Hara等，1993；Comings等，1994；美国专利号5,210,016和5,500,343)。在首次发现DRD2 A1和重度酒精中毒间的相关性后(Blum等，1990)，几个研究组均不能重复出此观察结果。提示具有两个可能的原因：第一，对于酒精、药物和烟草滥用对照筛选不足；第二，疾病慢性性质和严重性鉴定方面的采样错误(Blum等，1997；Bolos等，1990；Gelertner等，1991；Schwab等，1991；Turner等，1992；Cook等，1992；Goldman等，1992；Goldman等，1993；Suarez等，1994)。 多巴胺起多种不同行为的调节剂的作用(LeMoal和Simon，1991)，而且许多研究已经报道了在DRD2基因的等位基因和可卡因成瘾、多物质滥用、吸烟、注意缺陷多动障碍(ADHD)、抽动-秽语综合征、视觉-知觉障碍、行为障碍、创伤后应激障碍、病理性赌博以及强迫进食之间具有显著的相关性(Blum等，1995；Blum等，1996)。虽然有这些相关性，测序研究没有在外显子中发现能解释这些发现的任何突变。如果D2A1等位基因同一未知的在调节DRD2功能中发挥作用的非外显子突变联结失衡则可以解释这些发现(Comings等，1991)。此外，已经报道酒精中毒的严重性和所用的对照的类型是DRD2A1等位基因同酒精中毒相关性的重要决定因素(Noble等，1994；Geijer等，1994；Parsian等，1991；Blum等，1990；Lawford等，1997)。 利用在DRD2位点的Taq1“A”RFLP和一种微卫星重复多态性在多发罹患酒精中毒的家庭中进行的同胞对连锁分析表明，在该位点和发展为重度酒精中毒的倾向性间具有显著的相关性。在DRD2基因中没有发现相应的突变，该效应可能来自DRD2基因本身以外的一个紧密连锁的位点(Cook等，1996)。已经证明了在酒精依赖患者的DRD2基因第8外显子中的一个点突变(Finch等，1995)，而其他人报道在DRD2基因的编码区中没有结构突变(Gejman等，1993)。 已经发现DRD2基因A1等位基因同许多行为相关，包括重度酒精中毒、多物质依赖、克赖克(crack)/可卡因成瘾、吸烟、病理性赌博、缺乏重性抑郁发作、以及碳水化合物暴食，或者概括为DSM-IV物质利用障碍(Blum等，1996e；Blum等，1995b；Comings等，1996c)。同其他轴II(Anix II)诊断群(反社会、自恋、妄想狂)相比，MCMI-II评价的分裂样/回避群同酒精滥用的量表显著相关(Corbisiero等，1991)。具有代表分裂样/回避品质的MCMI-II升高的患者群倾向于维持治疗少些天，而且复发较早(Fals-Stewart，1992)。分裂样/回避群的高分同无耐心的男性酒精中毒者(Matano等，1994)以及可卡因依赖的患者(Kranzler和Satel，1994)相关。发现分裂样/回避行为(包括低水平感觉)比具有高水平感觉的患者消耗更多的酒精并具有更高的MAST评分(Ohannessian和Hesselbrock，1995)；而且在具有重度暴食障碍的受试者中回避人格显著相关(Yanovski等，1993)。 在健康个体和酒精中毒者中表现出多巴胺受体基因处的分子杂种优势。比较健康自愿者同DRD2 TaqI A1A2和B1B2基因型的脑脊液中单胺代谢物水平，包括多巴胺的HVA、5-羟色胺的5-HIAA以及去甲肾上腺素的MHPG。结果表明在1，1+1，2纯合子对1，2时具有统计学显著的差异，而在分析1，1+1，2对2，2基因型以及1对2等位基因时则没有。TaqI B1B2多态性得出几乎相同的结果(Jonsson等，1996)。相反，在芬兰和美国酒精中毒者中检测CSF HVA水平和DRD2 TaqI A1/A2多态性，当检测1对2等位基因时未发现相关性，而在1，1+1，2对2，2基因型时也没有(Goldman等，1992)。 通过比较HVA的CSF水平表明DRD2基因处的杂种优势为利用TaqI多态性的DRD2基因型(Jonsson等，1996k)。在用于TD受试者的注意力不集中评分表中，12个杂合子表现为最高的注意力不集中评分受试者，他们是具有最低水平的CSF HVA的12个杂合子(Jonsson等，1996)。在11个纯合子中观察到最高水平的HVA，22个纯合子为中等。一些研究，并非所有的研究表明在患有ADHD和TD的儿童中(Shaywitz等，1979k)CSFHVA水平明显较低(Cohen等，1979k)。在电生理异常和DRD2 A1等位基因间发现具有显著的相关性(Blum等，1994k)。这些异常在ADHD受试者以及酒精中毒的儿童中可以观察到(Comings等，1991k；Noble等，1994k)。 据报道在DRD2基因的TaqA1和注意力缺乏障碍(ADHD)及抽动-秽语症之间具有正相关性(Comings等，1991；Comings等，1996a)，而其他人发现同ADHD先证者没有相关性(Sunohara等，1996)。ADHD先证者表现出同D4基因的48bp变体具有显著的相关性，而同DRD2、DRD3或5-羟色胺转运蛋白基因则没有。DRD4的7倍重复等位基因在具有ADHD的儿童中明显更频繁地出现。有D4受体基因的7倍重复等位基因同新奇追求(以冲动、探究、浮躁、易怒、脾气急噪以及言行放肆为特征)具有相关性的证据(Epstein等，1996；Benjamin等，1996)。在可卡因依赖先证者中DRD2 A1等位基因同相反的状态相关：低的新奇追求，其以熟虑、倔强、禁欲、慢脾气、回避、以及具有加强的退缩抑郁为特征(Compton等，1996)。分子遗传学研究已经发现D2多巴胺受体(DRD2)A1等位基因同酒精中毒和药物滥用间的相关性(Blum等，1990)。已经表明同那些没有A1等位基因的(A1-)相比，在携带A1等位基因(A1+)的受试者中具有降低的中枢多巴胺能功能(Nobel等，1997)。虽然目前许多研究表明DRD2基因在许多严重病例中具有显著的作用，但负责酒精中毒的基因仍未知(Noble，1993；Blum等，1995)。 已经将DRD2基因同强迫行为(Comings和Comings，1987b)和成瘾、冲动行为，包括强迫性进食、赌博以及吸烟相关联(Self等，1996；Ogilvie等，1996；Blum等，1995b；Blum等，1996e)。据以前报道在与TS群不同的受试者中这些行为同DRD2基因相关(Comings等，1993a；Noble等，1994d；Blum等，1996a；Comings等，1996c；Noble等，1994c；Noble，1993；Comings等，1996e)。 在酒精中毒者中多巴胺D2受体显著少于非酒精中毒者，并且同最后一次酒精中毒后的天数无关(Volkow等，1997)。DRD2受体对转运蛋白量的比例在非酒精中毒者中明显高于酒精中毒者。同非酒精中毒者相比，酒精中毒者表现出D2受体(突触后标志)而非DA转运蛋白量(突触前标志)的显著降低。由于纹状体中的D2受体主要位于GABA细胞中，这些结果提供了GABA参与酒精中毒者中所见的多巴胺能异常的证据。 多巴胺D3受体基因(DRD3)缺失DRD3基因的敲除(knockout)小鼠显著地比它们带有正常DRD3基因的同窝小鼠活跃(Williams等，1995k)。已经发现所报道的精神分裂症在DRD3位点处的负杂种优势(Crocq等，1992k)。在TD(Comings等，1993j)和病理性赌博(Comings等，1996)中DRD3MscI 12杂合性显著降低。 多巴胺D4受体基因(DRD4) 在多巴胺D4受体基因(DRD4)中，已报道了在编码负责结合至鸟嘌呤核苷酸蛋白的第三个胞浆环的DNA内具有一个48bp和16个氨基酸重复的多态性(Van Tol等，1992k；Lichter等，1993k)。该DNA区域重复2至11次，最常见的等位基因为2、4和7次重复。7等位基因通过细胞内腺苷环化酶的抑制表现一种对多巴胺迟钝的反应(Asghari等，1995k)。正常受试者的两个独立的研究已经表明在7等位基因的存在和新奇追求(novelty seeking)(一种同冲动相关的性状)间具有相关性(Benjamin等，1996k；Ebstein等，1996k)。有一个研究没有发现这种相关性(Malhotra等，1996)。一个同对照相比较的ADHD儿童研究报道，同对照相比更多的ADHD儿童携带至少一个7等位基因(LaHoste等，1996k)。已经报道了在TD中DRD4基因的7等位基因间的相关性(Grice等，1996k)。该领域的其它工作并非模棱两可(Spielman等，1993k)。 多巴胺转运蛋白基因(DAT1)在囊性转运蛋白位点处的DAT1基因标志频率在源自不同欧洲国家的不同美国白人中表现出相当的不均一性，但同物质滥用没有明显的相关性(Uhl等，1993；Persico等，1993)。DAT1 VNTR等位基因的分布不能区分任何物质滥用者或者精神活性剂滥用者的对照样品(Persico等，1996)，然而观察到同日本酒精中毒者相关(Muramatsu和Higuchi，1995)。DAT1基因还被表明在强迫和成瘾障碍中发挥作用。由于可卡因的一种作用方式是抑制多巴胺转运蛋白功能(Riz等，1992；Ritz等，1990)，所以其参与药物成瘾生物学，以及包括帕金森病(Uhl，1990)和抽动-秽语综合征(Singer等，1991)的其它异常。 利用SPECT扫描技术已经证明在抽动-秽语综合征中多巴胺转运蛋白位点增加(Malison等，1995)，而且同非暴力酒精中毒者相比，在暴力酒精中毒者中多巴胺转运蛋白受体位点显著增加(Tiihonen等，1995)。TS受试者的死后样品研究报道，在纹状体中多巴胺摄取位点数目增加，提示或者有更多数目的DAT1分子或者多巴胺神经末端数量增加(Singer等，1991)。这是在ADHD治疗中广泛使用的化合物哌醋甲酯(Volkow等，1995k)以及Dexedrine的作用位点。这些兴奋剂抑制转运过程，导致突触多巴胺的增加。已经报道同对照比，TD受试者的纹状体中多巴胺转运蛋白蛋白水平的显著增高(Maison等，1995k)。DAT1敲除小鼠，其在限定的空间内非常多动，对其研究表明大脑多巴胺水平增加5倍、D2受体下调、D2受体功能的解联以及身体大小降低57％(Giros等，1996k)。仍然不知是否较少见的DAT1重复等位基因同DAT1分子数量的增加或降低相关。 在ADHD/ADD病历(Cook等，1995k)以及抽动-秽语障碍(TD)中的行为变化(Comings等，1996)中报道了同DAT1基因的10等位基因间的相关性。在孤独受试者中的显著增加同一些表明TS和孤独是遗传学相关的、而且涉及相似的几组基因的研究(Burd等，1987；Comings和Comings，1991b；Sverd，1991)是一致的。 同93个人种匹配的非酒精中毒者对照相比，在93个表现出戒断发作或发狂的酒精中毒者中观察到在DAT1基因3’非翻译区的9重复等位基因VNTR多态性的优势显著增加(Sander等，1997)。在药物滥用受试者中检测了DAT1基因中5’UTR 40bp重复多态性，并发现同正常对照相比任何3’UTR重复等位基因频率没有显著的差别(Persico等，1993)。已发现9/10基因型同“病理性暴力”青少年相关；而在戒断发作或发狂的酒精依赖中同9/9基因型相关。已经报道在DAT1基因40bp重复的9等位基因同可卡因诱导的妄想狂间的相关性(Gelernter等，1994a)。 多巴胺-β-羟化酶DβH是多巴胺代谢的主要酶之一，并催化多巴胺向去甲肾上腺素(NE)的转化。在动物研究中，DβH活性的抑制导致去甲肾上腺素水平的降低，其释放酪氨酸羟化酶的抑制，导致多巴胺的过度产生。后者同活动过度、攻击性、自我兴奋以及刻板型活动相关(Randrup和Scheel-Kruger，1966；Shekin等，1983k)。血液DβH酶水平的研究表明该酶在感觉追求(sensation seeking)(Kuperman等，1988k；Comings等，1996)、ADHD和品行障碍(Rogeness等，1982k；Rogeness等，1989k)中的作用。 以前已经将多巴胺β羟化酶(DβH)活性的紊乱同儿童期CD和酒精中毒相关联(Pliszka等，1991)。据推测，表面化(externalizing)障碍如CD同去甲肾上腺素能功能的降低以及多巴胺能功能的增高相关，这是一对可能唯由DβH缺陷造成的条件(Quay，1986)。其他人报道在具有低血浆DBD水平的情绪困扰的男孩中CD的诊断频率增加。然而，Bowden等，1988年的门诊患者研究发现，在患有CD的ADHD儿童中DβH水平低的可能性比没有CD的ADHD儿童大得多(Rongeness等，1987；Pliszka等，1988；Bowden等，1988；Comings等，1996)。相反，在青年拘留中心的门诊患者研究中没有发现在CD和血浆DβH间的相关性。Umberkomen等(1981)已经表明在低DβH水平和感觉追求行为间的相关性。 在具有多种心理障碍包括重性抑郁、双相情感障碍以及精神分裂症的患者中CSF DβH水平的检测发现唯一显著的相关性是在低CSFDβH和双相情感障碍间(Lerner等，1978)。在DβH基因座和精神分裂症(Aschauer和Meszaros，1994)、酒精中毒、抑郁、躁狂抑郁以及抽动-秽语综合征(Comings等，1986)间的联系研究是阴性的。然而，一些同胞对分析表明在ABO血型和DβH、以及一些心理障碍如抑郁和酒精中毒间有弱的关联(Wilson等，1992)。 在DβH基因座和精神分裂症、酒精中毒、抑郁、躁狂抑郁以及抽动-秽语综合征间的联系研究是阴性的(Aschauer和Meszaros，1994；Comings等，1986)。在DβHTaqIB1等位基因和病理性SAB间未发现相关性(Blum等，1997)。据报道TaqI B1/B2多态性同经筛选排除药物、酒精以及烟草滥用的对照相关。然而，多巴胺β羟化酶基因的B1等位基因还同TD先证者以及ADHD先证者相关(Comings等，1996)。 大麻酯受体(CB1)虽然大麻酯受体同报偿通路的联系可能是首要的，但更可能是通过anandaide和大麻酯受体在多巴胺代谢上的调节效应的次级效应。这同在CB1受体和DRD2受体结果间的相似性一致。同CD1基因类似，DRD2基因的遗传学变体同多物质滥用间的联系(O’Hara等，1993；Smith等，1992；Noble等，1993；Comings等，1994)比同酒精中毒本身间的联系是更可重复的。这些观察的一个解释是多巴胺能-大麻报偿通路被药物特别是可卡因和安非他明激活的比被酒精激活的多(DiChiara和Imperato，1988)。 已知在药物依赖动物模型中中央边缘多巴胺系统的激活引发可卡因追求行为的复发。这种引发效应被多巴胺D2激动剂加强，但却被多巴胺D1激动剂抑制(Self等，1996)。在这点上，anandamide引起纹状体中D1和D2受体比率降低的能力可能是说明CB1变体在药物依赖性中作用的原因。 单胺氧化酶已经检测了MAO-A cDNA的同在1460位点处的T→C变体相关的Fnu4H1多态性以及同在941位点处的T→G变体相关的EcoRV多态性(Hotamisligil和Breakefield，1994)。由于它们均涉及在一密码子的第三个碱基的置换，所以它们同氨基酸置换无关。他们检测了已知具有MAO-A活性的40个细胞系。所有携带Fnu4H1 C变体的细胞系均还携带有EcoRV G变体。当基于较低对较高MAO-A活性将样品分成两组时，存在于25％的细胞系中的较少见的Fnu4H1 C或+等位基因(发明者的2等位基因)同较高活性组显著相关。Lin等(1994)报道了在躁狂抑郁中同较低的MAO水平相关(Lin等，1994)，更普遍的MAOAFnu4H1 T或1等位基因(Lin等，1994)显著增高，而Craddock等(1995)和Nothen等(1995)没能证实这一点。 Vanyukov等(1993)利用CA重复多态性在23个男性和34个女性酒精中毒者中检测了MAOA基因并同31个男性和78个女性对照相比较(Black等，1991)。在年轻物质滥用者中在男性中(P＝0.17)而不是女性中(P＝0.8)存在一个同较高分子量等位基因(＞115bp)间的相关性趋势，而＞115bp的等位基因同开始的年龄之间存在弱的相关性(P＝0.03)趋势。Tivol等(1996)最近测定了MAO-A酶活性表现出＞100倍变化的40个对照男性的外显子序列。在编码序列存在显著的保守性。只发现5种多态性。其中，4种涉及第三个密码子位点而氨基酸序列无改变。另一种为一个lys→arg置换。 烟碱受体基因编码CHRNA4基因的基因定位于染色体20q13.2-13.3(Steinlein等，1994)并由6个外显子超过17kb的基因组DNA所组成(Steinlein等，1996)。在一扩展的澳大利亚谱系中发现在CHRNA4基因的跨膜区2中的Ser248Phe错义突变同常染色体显性夜间额叶癫痫(ADNFLE)相关(Steinlein等，1995)。在一挪威谱系中发现M2结构域C-末端编码区中三个核苷酸(GCT)的插入同常染色体显性夜间额叶癫痫相关(Steinlein等，1997b)。大脑功能的两种其它异常，良性家族性新生儿惊厥(Leppert等，1989；Malafosse等，1992)以及低电压EEG(Steinlein等，1992)也同CHRNA4位点的区域相关。D20S19，一个高度多态性的位点，是同引起所有三种这些异常的基因紧密连锁的(Steinlein等，1996)。 Weiland和Steinlein报道了一种定位于CHRNA4基因的第一个内含子中的高度多态性的二核苷酸VNTR多态性(Weiland和Steinlein，1996)。也已经报道了单碱基对多态性(Steinlein等，1995；Phillips和Mulley，1997；Guipponi等，1997；Steinlein等，1997a)。利用三种单碱基对多态性，Steinlein等(1997a)发现CHRNA4基因同恐惧障碍间没有相关性。利用同ADNFLE相关的Ser248Phe错义突变和4种沉默多态性，Steinlein等报道了同对照(.027)相比，在常见的儿童期特发性全身性癫痫中CfoI 595多态性的T等位基因的频率中度增加(.085)。 微/小卫星多态性同不同神经精神候选基因处的微/小卫星多态性相关的行为表型研究已发现，具有各种定量行为性状的较短或较长等位基因和下列基因的小或微卫星间具有显著的相关性：MAOA、MAOB、HTR1A、DAT1、DRD4、HRAS、HTT、OB、CNR1、GABRA3、GABRB3、FRAXA和NO(Comings等，1996k；Comings等，19961；Comings等，1996m；Johnson等，1997；Comings等，1998；Grade等，1997)。显著的表型行为效应与DAT1(Cook，1995；Gelernter等，1994)、DRD4(Benjamin等，1996；Ebstein等，1996；Grice等，1996；Lahoste等，1996)、HRAS(Herault等，1993；Eggers等，1995；Thelu等，1993)、HTT(Ogilvie等，1996；Lesch等，1996)、INS(Bennett等，1955；Kennedy等，1995；Pugliese等，1997；Vafiadis等，1997)和DBH(Wei等，1997)基因相同多态性的特定大小的等位基因相关。这些研究并不排除在这些长度变体的一个亚群中存在单碱基对改变的重要作用(见下面以及Grice等，1996；Lichter等，1993；Krontiris等，1985)。 在多种神经学异常(Caskey等，1992)包括脆性X综合征、亨廷顿病(亨廷顿病联合研究组，1993)、萎缩性肌强直、肯尼迪氏病、弗里德赖希共济失调(Campuzano等，1996)以及其它(Caskey等，1992)中存在长的三联体重复参与的证据。至少这些异常中的5个涉及在各自基因产物的氨基酸序列中产生多聚谷胺酰胺束的基因内GAG重复。 肥胖相关基因从前的研究没有在数百的肥胖个体中鉴定出人OB基因的任何突变(Ezzel等，1995；Hamilton等，1995；Considine等，1996b)。然而，前期研究(Comings，1996b；Comings等，1996c)已经表明参与多基因异常的突变可能是在外显子以外的，而且多态性二核苷酸重复本身可能在调节它们所邻接基因的表达中发挥作用(Krontiris等，1993；Green和Krontiris，1993；Trepicchio和Krontiris，1992；Trepicchio和Krontiris，1993；Bennett等，1955；Kennedy等，1995)。 载脂蛋白基因的TaqI多态性(APOE-D)被发现同肥胖受试者以及在APO-D和空腹胰岛素间相关。该工作表明APO-D多态性可能是肥胖和高胰岛素血症的遗传学标志物(Vijayaraghavan等，1994)。 5-羟色胺基因 该基因的功能变体可能是所观察到的在各种障碍中5-羟色胺和色氨酸同时升高或降低的原因。已经鉴定了人TDO2基因的4种不同多态性。相关性研究表明这些多态性的一个或多个同TS、ADHD、和药物依赖具有显著的相关性。内含子6G-T变体同血小板5-羟色胺水平显著相关(Comings等，1996a)。 多基因分析 多巴胺D4受体基因(DRD4)、大麻酯受体基因(CNR1)和GABAB3受体基因(GABRB3)的联合检测解释了静脉药物滥用性状变化的25％(Saucier等，1996；Comings等1997；Johnson等，1997)。据观察，OB和DRD2基因的测试解释22.8％的体重指数改变，表明多遗传学因素影响体重，而通过单个检测所确定的同精神症状的相关性仅是一较少比例的原因(Comings等，1996b)。已经表明在三个多巴胺能基因处的各个多态性：多巴胺D2受体(DRD2)的TaqIA1、多巴胺β羟化酶(DβH)的TaqIB1以及多巴胺转运蛋白(DAT1)基因的40bp重复的10/10基因型同TS、ADHD和CD具有显著的相关性(Comings，1996)。 神经递质和氨基酸前体的作用除了被认为参与神经异常的基因外，已经研究了神经递质和药物在产生和减轻某些精神性状中的作用。在人体中，已经表明中央额前多巴胺能活性参与人类认知(Weinberger等，1988)。在帕金森病患者以及可能在精神分裂症患者中，在认知过程中额前激活并具有多巴胺能功能的临床征象(Weinberger等，1988k)。在动物中大脑化学物质的转化已经证实了前体氨基酸负载或者系统性和直接中枢神经系统给药后神经递质水平的变化(Blum等，1996a；Blum等，1996b)。动物研究表明NE和多巴胺参与涉及寻找和探索活动、注意力分散、反应率、判别力以及注意力转换的广泛的注意力相关行为。总之，动物和人的研究提示多巴胺和NE分别在信息的早期和晚期处理中发挥作用(Sara等，1994k)。几种神经递质，特别是在大脑功能和情绪调节中起关键作用的多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、GABA、谷胺酰胺以及阿片肽能够被它们的前体氨基酸营养物的循环水平剧烈影响(Wurtman，1981k)。资料提示氨基酸前体和内啡肽酶抑制剂对于酒精、可卡因以及食物成瘾的康复提供重要的效果(Blum等，1987a；Blum等，1987b；Blum等，1987c；Blum等，1989b；Blum等，1990；Strandberg等，1996)。 大脑皮层儿茶酚胺神经支配的一个重要功能可能是控制注意力。特别有趣的是从网状结构向大脑皮层的儿茶酚胺投射，即在中脑腹侧盖区中的多巴胺神经元以及在上脑桥中蓝斑的NE神经元。已经发现乙酰胆碱能(ACH)和多巴胺能系统(DA)对于维持准确认知性能都是关键的。通过放射臂迷宫所揭示的检测认知功能这些方面的一系列研究发现，这两种神经递质系统以一种复杂的方式相互作用(Levin等，1995)。通过阻断毒蕈碱-或烟碱-ACH受体诱导选择准确度缺陷。通过用东莨菪碱阻断毒蕈碱受体所诱导的选择准确度缺陷可以被多巴胺受体阻断剂氟哌啶醇逆转。特异性DAD1阻断剂SCH23390也有这个作用，而特异性D2受体阻断剂雷氯必利却没有。用D2拮抗剂雷氯必利可见到该效应，而用D1拮抗剂SCH23390则没有。发现选择性D2激动剂LY1771555逆转由美加明引起的选择准确度缺陷，表明D2受体参与烟碱对认知功能的作用之中。这些选择性DA治疗在逆转认知缺陷中的有效性是由于ACH活化不足(Levin等，1990k)。 越来越多的证据表明5-羟色胺可能在哺乳动物大脑的几个区域调节胆碱能功能而且这些5-羟色胺能/胆碱能相互作用影响认知。据推测并非所有由5-羟色胺能和胆碱能系统的并行处理所诱导的往事回忆混乱可以归因于胆碱能系统的5-羟色胺能改变。一个机体的认知能力不但来自几种神经递质间的相互作用，例如在如海马或皮质的大脑结构内的DA，而且来自其它普通功能对记忆的影响，这可能涉及同那些与记忆功能(例如注意力、觉醒知觉准确性等)经典相关的底物不同的大脑底物(Cassel等，1995k)。 此外，已经确定海马θ的外在调节有赖于胆碱能和GABA能中层隔区输入的共活化。胆碱能投射为海马θ-开细胞提供传入性兴奋动力，而隔区GABA能投射通过抑制海马GABA能中间神经元(海马θ-关细胞)来减少抑制的总水平。对于海马θ域和细胞活性的产生必须有这两种活性存在。在胆碱能和GABA能系统间的平衡可能决定是否海马同期性(θ)或不同期性发生(Symthe等，1992)。 其它神经递质如去甲肾上腺素(NE)在学习和记忆中可能也发挥作用。NE的神经调节特性表明蓝斑皮质(LC)NE投射在注意力和记忆过程中发挥重要的作用。例如，在靶感觉系统中所释放NE的门控和调谐作用可以在变化的关键时刻促进对相关刺激的选择性注意(Sara等，1994)。其它研究表明在应激或生理性挑战过程中LC活化的一个结果可能是通过DA和NE的释放来增加或维持觉醒(Page等，1994)。 据报道，在行为大鼠和猴子中NE LC神经元的放电提示LC系统在调节注意力状态或失眠症中的作用(Aston-Jones等，1991k)。其它对于齿状回中NE的研究支持LC在促进对复杂感觉刺激反应的短时程或长时程增强中的作用，并且同LC在记忆以及注意过程中的作用一致(Harley等，1988k)。外源给予或内源释放的NE可以启动齿状回的一个短时程或长时程增强(LTP)。 已进行研究了解神经激肽物质P(SP)和其N-和C-末端片段对于记忆、强化以及大脑代谢的效应。研究显示当外周给予时SP促进记忆并且有强化作用。然而，最重要的是发现这些效应似乎由不同的SP序列编码，因为N-末端的SP1-7增强记忆，而SP的C-七肽和六肽序列被证明以同SP等摩尔的剂量来起强化作用。这些不同的行为效应同DA活性的选择性和位点特异性改变平行，因为SP和其C-末端而非N-末端增加伏核(Nac)中的DA，在新纹状体中则无。这些结果表明外周所给SP的强化作用可能是由其C-末端序列介导的，而且该效应可能同在NAC中的DA活性相关(Huston等，1991k)。 至于多巴胺能活性，以前的研究已经表明溴环肽(bromocriptine)，一种多巴胺受体激动剂，在正常受试人中对于视觉-空间工作记忆功能可以起有益的作用(Kimberg等，1997)。在用猴子进行的损伤和单个单位记录研究及在人类中的神经影象研究中均发现这种记忆形式(其中刺激的一些方面维持了短的时间间隔)还同额前皮质功能紧密相连(Goldman等，1987k；Jonidas等，1993)。还报道了溴环肽在根据多巴胺D2受体基因型的情况降低酒精中毒者中的释放率中具有选择性阳性作用(Lawford等，1995)。此外，已经证实了多巴胺拮抗剂在执行记忆任务的猴子中对于神经元延迟期活性的直接作用(Williams等，1995k)。Phentermine，一种多巴胺释放剂，参与体重减轻(Weintramb等，1992)。 此外，在人类和动物中大脑多巴胺浓度的药理控制影响视觉-空间工作记忆，后一效应定位于额前皮质。然而，多巴胺激动剂对于人类的效应仍所知甚少。据推测溴环肽可能通过其对皮质多巴胺受体以及投射于新皮层的区域中的皮层下受体的效应而对同额前皮层相关的认知机能具有影响(Kimberg等，1997)。他们发现溴环肽对年轻正常受试者的效应有赖于受试者的工作记忆能力。高能力受试者对药物反应差，而低能力者则改善。这些结果证明在人类中多巴胺介导的工作记忆系统和较高的认知功能间的一种经验联系。还表明DRD2 A1等位基因同样也与视觉-空间记忆缺陷相关(Berman等，1995k)。 一个双盲研究证明给予携带A1等位基因(A1/A1和A1/A2基因型)或仅携带A2等位基因(A2/A2)的酒精中毒者一种D2激动剂溴环肽或一种安慰剂，在用溴环肽治疗的A1携带者中降低了渴望和焦虑。损耗率在用安慰剂治疗的A1携带者中为最高。溴环肽对A1携带者的作用在其经过六星期的治疗时强烈得多。多巴胺D2激动剂溴环肽可以改善高等级认知机能。 在动物中利用高级技术，包括微量透析检测，已经证实了在负载前体氨基酸后神经递质输出的改变(Hernandez等，1988)。此外，系统性或直接中枢神经系统给予前体氨基酸后在动物中证实了行为的改变(Blum等，1972)。虽然某些L-氨基酸是神经递质和神经调节物的前体，但它们的外消旋物、D-氨基酸也具有生物学活性。特别是，D-苯丙氨酸、D-亮氨酸、其他D-氨基酸以及某些代谢物(例如氢化肉桂酸)降低对于心境和行为的调节关键的阿片肽的降解(Blum等，1977；Della Bella等，1980)。 在一些个体中，科学家已经描述了一种苯丙氨酸缺陷(PHD)(Lou，1994k)。在这点上，苯丙氨酸和酪氨酸组成多巴胺生物合成中的两个启始步骤，而多巴胺是NE的代谢前体。在PHD中细胞外苯丙氨酸浓度通过降低多巴胺合成来影响大脑机能。已经表明其诱导EEG减慢并延长神经心理学测试的进行时间。CNS中酪氨酸浓度在PHD中降低，这可能提示由于竞争抑制，例如通过血脑屏障，而用于儿茶酚胺合成的酪氨酸的底物不足。在实验研究中，已经表明多巴胺的合成和释放可以被酪氨酸量的增加所影响。在PHD中三种剂量酪氨酸的额外饮食摄取(160mg/kg/24h)诱导反应时间的缩短并降低可变性，而在一双盲交叉实验中报道了一相似的剂量诱导心理学测试的改善，较低的剂量则无。 具有内啡肽酶抑制活性的前体氨基酸的联合可以用于可卡因依赖的治疗(美国专利5,189,064号)。已知可卡因的急性应用可以改善大脑电生理机能障碍的某些方面(Maurer等，1988k)。慢性可卡因滥用改变注意处理过程(Noldy等，1990k)。已知可卡因的急性应用可以改善大脑电生理机能障碍的某些方面(Jonsson等，1996)。然而，矛盾的是，慢性可卡因滥用改变注意处理过程(Braverman和Blum，1996)。虽然仍然具有争议，但已经表明注意力过程是依赖于生物胺调节的(Lyoo等，1996)。 肥胖症和神经机能通常将肥胖症定义为超过理想体重20％或更多。已经尝试了多种减轻体重的方法，包括低热量平衡饮食、“时尚”饮食、行为调整、药物(即D-phenflouramine、phenteramine等)、外科、完全饥饿、鄂部布线以及这些方法的联合。这些方法大部分是问题的短期解决办法，而且只是短暂有效，有些甚至可能带来严重的危险(Lockwood和Amatruda，1984)。即使在短期内证明了体重减轻，但体重通常在体重减轻方案停顿后重新恢复。虽然大约28％的美国人肥胖，但广泛认为肥胖症是一种食物成瘾，一种美容的而非健康指征的一种自我强加的状态(Kral等，1989；Weintraub和Bray，1989)。 从最近对于肥胖症的一些原因以及治疗该状态的困难性进行的研究产生了一种理解。在比马印第安人中的双胞胎研究中已经证实了肥胖症的强遗传学基础(Bouchard，1989；Stunkard等，1990)。肥胖症是一种病因不一而且很普遍的障碍，其具有遗传学和环境成分。各种食物的宏观挑选和家族性物质利用障碍(SUD)间的关系已经由文献记载，并且神经化学研究已经支持由酒精、尼古丁、可卡因以及碳水化合物通过多巴胺能系统强化的共同性(Nobel，1998；DiChiara，1988)。在这方面，肥胖症和SUD均可被认为是食欲强迫。一些基因例如多巴胺D2受体(DRD2)以及多巴胺转运蛋白(DAT1)基因可能不仅对于肥胖症(Noble等，1994；Comings等，1993；Blum等，1995a)而且对于总的SUD和其它精神心理障碍(Noble等，1994；Smith等，1992；Comings，1994；Blum等，1995b；Comings等，1996；Cook等，1995)是一个危险因子。此外，小鼠ob基因及其人OB类似物的克隆和测序燃起希望，该基因的缺陷可能在人类肥胖症的原因中发挥显著作用，而且瘦素、其基因产物可能在治疗中有用(Zhang等，1994；Peileymounter等，1995)。虽然遗传学效应可以单独起作用，但在大部分病例中遗传学情况仅仅设定提供遗传-环境相互作用机会的状态(即在增加摄食时伴随体重的明显增加)。对于具有这种遗传学危险状况的人，肥胖症是终生的状态，与其它慢性疾病一样需要进行长期治疗。 对酒精、药物和食物(特别是碳水化合物)的不可控摄入行为的特定原因还未完全了解。然而，清楚的是，这些食欲强迫行为是遗传素质和环境损伤因素的产物。大量的研究已经表明阿片类物质、阿片样肽、CCK-8、糖原、DA和胰岛素在葡萄糖利用和碳水化合物的选择性摄取中的相互作用(Morley和Levine，1988；Moore等，1982；Morley等，1985；Riviere和Bueno，1987)。在参与饮食行为的主要神经递质包括单胺类的多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(EPI)和5-羟色胺(5-HT)；抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)；以及多种神经肽例如胰多肽、阿片样肽、激素释放因子和各种肠脑肽(综述见Cooper等，1988；Gosnell，1987；Bouchard，1994)。对于许多大脑单胺化合物和神经肽在中央边缘报偿系统中协调作用控制正常摄食行为的广泛证据(Leibowitz和Hor，1982)。在人类和动物中脑脊液的分析提示同异常摄食模式相关的大脑神经化学功能的特定紊乱(Kaye等，1985；Kaye等，1984)。 对过食者的一项研究证实摄入含有氨基酸前体的一种膳食补充剂PHENCALTM变体的受试者在90天内平均减轻27lbs，而在对照组中仅减轻10lbs(Blum，1990)。发现PHENCALTM或其它相似的神经营养剂有利于酒精中毒者、多药物滥用者、海洛因滥用者和可卡因依赖个体的康复(Blum等，1988c；Blum和Trachtenberg，1988；Cold，1996)，进而提示一种对于这些多种物质成瘾的共同治疗方式(Blum等，1996；Blum等，1997)。 烟碱的作用烟碱也释放多巴胺，而且还发现烟碱在大鼠、猴子和人的多种测试中改善记忆(DiChiara等，1988)。烟碱以一种剂量依赖的方式降低在大鼠辨别行为中的不正确反应(Geller等，1970)。该效应同利眠宁相似，但不能被刺激剂咖啡因模拟(Geller等，1970)。已经证明树胶或皮肤贴形式的烟碱对于一些患有抽动-秽语综合征的受试者中抽动的治疗是有效的，而且已经报道吸烟提高注意力、觉醒、学习以及记忆(Wesnes和Warburton，1984；Warburton，1992；Balfour和Fagerstrom，1996)并改善ADHD的症状(Coger等，1996；Conners等，1996；Levin等，1996)。 已经报道了一个安慰剂对照的双盲研究来确定利用烟碱在患ADHD的成人的治疗中的效果(Levime等，1996；Conners等，1996)。17位受试者中，6位是吸烟者而11位是不吸烟者。所有均符合成人ADHD的DSM-IV标准。利用经皮的药贴将药物以对吸烟者为7mg/天而不吸烟者为21mg/天的剂量给予。以平衡的顺序给予有活性和安慰剂药贴大约1周。烟碱引起临床总体印象(CGI)评分的显著总体改善。该效应甚至在只考虑非吸烟者时也是显著的，这提示并非仅仅由于规律性吸烟戒断的缓解。烟碱引起如由情绪状态表(POMS)测试所测定的活力显著增加以及在持续行为测试上反应时间的总体显著缩短。在无注意力(inattention)指数上也有显著的降低。烟碱提高时间估计的精确性而降低时间估计反应曲线的变化性。由于在患有ADHD的成人中吸烟明显比那些无ADHD的成人更普遍(Conners等，1996)。 烟碱系统同多巴胺系统的相互作用对该效应可能是重要的。利用在放射臂迷宫中进行获胜转移(win-shift)工作记忆任务的大鼠进行了烟碱激动剂和拮抗剂同多巴胺系统相互作用的一系列研究(Levin和Rose，1995k)。由烟碱拮抗剂美加明引起的工作记忆缺陷被D1/D1DA拮抗剂氟哌啶醇以及特异性D2拮抗剂雷氯必利所加强。相反，美加明诱导的缺陷被D2/D3激动剂喹吡罗的共给予所逆转。关于在放射臂迷宫中的工作记忆行为，烟碱还同多巴胺药物具有明显的相互作用。多巴胺激动剂培高利特并不通过其本身改善放射臂选择精确性。烟碱在逆转该缺陷中是有效的。相对于单用其中一种药物，当同烟碱共同给予时，D2/D3激动剂喹吡罗改善RAM选择精确性。美加明向中脑多巴胺核的急性局部输注有效削弱在放射臂中的工作记忆机能(Noble等，1998)。 铬盐(CrP和CrN)的作用三价铬时一种对正常胰岛素功能关键的无机物(Jeejeehboy等，1977；Schwartz等，1959)。一些而并非所有以前的研究表明补充铬可能有利地改变冠状动脉疾病(CAD)以及非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的危险因素(Abraham等，1992；Anderson等，1991；Donaldson等，1985；Glinsmann等，1966；Kaats等，1991；Levine等，1968；Page等，1991；Press等，1990；Roeback等，1991)。铬被认为是通过其对胰岛素的强化效应来引起这些改变的(Offenbacher等，1988)。 动物研究支持CrP可以降低胰岛素抗性并改善机体组成的论点(Liarn等，1993)，一个人体研究发现进行CrP补充时机体组成的阳性改变(Hasten等，1992)，另一个报道了阳性结果，虽然机体组成没有统计学上显著的改变(Hallmark等，1993)，而第三个没有发现任何进行CrP补充时机体组成的阳性变化(Clancey等，1994)。已经表明CrP补充改善机体组成，特别是减少多余的机体脂肪(Page等，1992)。然而，以前观察同时补充铬和进行体育训练的工作已经被局限于对体重和组成的效果，结果互相矛盾(Clancy等，1994；Evans等，1993；Hallmark等，1996；Hasten等，1992)。 虽然关于铬盐(吡啶甲酸盐和烟酸盐)对机体组成和总体重减轻上的效果仍是有争议的(Abraham等，1992；Anderson，1995；Hallmark等，1993；Clancey等，1994；Bulbulian等，1996)，但一些报道似乎支持在人体中机体组成的阳性变化(Kaats等，1996)。相反，(Grant等，1997；Bulbulian等，1996)报道了在人体中有或无锻炼情况下用吡啶甲酸铬而体重增加，而在相同的群体中对于烟酸盐则表现出阳性效果(Kaats等，1992)。 吡啶甲酸铬(CrP)是使用、研究和促进力度最大的铬化合物，但体外研究表明烟酸铬在减轻体重和改变机体组成的领域中也可能是可行的。以前的研究已经表明吡啶甲酸铬的补充降低脂肪质量而增加无脂肪质量(Kaats等，1991；Page等，1991)。以前的锻炼研究同样已表明无脂肪质量的增加(Stefanick，1993)。虽然对年轻男性(Evans，1989)和女性(Hasten等，1992)的研究表明，联合锻炼和吡啶甲酸铬补充提高进行锻炼时发生的机体组成的改变，但该发现还未被证实(Clancy等，1994；Hallmark等，1996)。据报道，烟酸盐(CrN)可能甚至比吡啶甲酸盐更重要(Grant等，1997)。 在行为障碍治疗中的营养补充 神经递质作用的纹乱可能构成多种精神和行为障碍的基础(Blum等，1996e；Peisico和Uhl，1997；Noble等，1991)。特别是，多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、γ氨基丁酸(GABA)、谷氨酰胺和阿片样肽的异常调节被认为在成瘾性障碍中、特别是那些涉及酒精和可卡因滥用中发挥关键性作用(Pohjalainen等，1996)。因而，这些观察已经为选择性营养物的摄入可以影响情绪进而影响行为这种构思提供了契机。虽然营养策略在过去已经使用(Grandy等，1989)，但有效性的证实受到很大限制。已经表明联合氨基酸前体和内啡肽酶抑制剂对于从某些包括酒精、可卡因和暴食的RDS行为的康复具有明显的效果(Noble等，1993；Noble等，1994；Blum等，1994；Balldin等，1993；Duffy等，1994；美国精神病联合会任务组，1991，美国专利5,189,064号)。 精神病相关基因的多基因分析以及其它多基因性状 据推测，精神病行为具有相同的基因，而且一旦多巴胺-5-羟色胺和其他神经递质的平衡被打乱，结果大脑功能障碍可以导致广泛的不同行为(Comings，1990a；Comings和Comings，1991a；Winokur等，1970；Comings，1994b；Comings，1995b)。其他人支持人格性状可能具有不同的由在多巴胺以及其它神经递质转运中的遗传学可变性所介导的神经化学和遗传学基质这样的推测(Cloninger，1983；Benjamin等，1996；Epstein等，1996；Cloninger，1991)。DRD2、DβH、DAT的分子遗传学研究(Comings等，1996a)和临床遗传学研究(Comings，1994b；Comings，1994c；Comings，1995b；Biederman等，1991；Comings和Comings，1987)表明ADHD、抽动-秽语综合征、行为障碍、ODD、诵读困难、学习障碍、口吃、药物依赖以及酒精中毒是病因学上相关的谱系障碍，具有男性优势。 在过去的二十年中，这些障碍的大部分基因均已被鉴定、定位、克隆以及测序。由于仍有待鉴定的此类基因的数目已经降低，所以对更常见的多基因障碍存在越来越多的兴趣。通常认为鉴定参与这些障碍的基因将困难得多。这种困难由精神障碍充分展示。虽然对躁狂抑郁障碍、精神分裂症、抽动-秽语综合征、恐怖障碍、孤僻及其它(双相障碍可能例外)有许多连锁研究(Risch和Botstein，1996)，但几乎没有重复的发现。许多对于发现复杂障碍中基因的努力只是通过利用优势对数评分分析(lod score analysis)、其它基于家族的连锁分析形式或单倍型相对风险技术来试图将单基因单病模型用于为多基因障碍服务(Falk和Rubinstein，1987)。目前，用于鉴定复杂障碍中基因的最常用的方法由罹患同胞对的全基因组筛选组成。分析连锁的非参数方法(Weeks和Lane，1988)较适于复杂的遗传(但见Greenberg等，1996)。然而，当一给定的基因解释不到8％的变异时，必须检测大量的亲-子对或同胞对(Carey和Williamson，1991)。 已经越来越多地认识到，只有相关研究可能具有鉴定对一给定多基因性状变异的百分比贡献较小的基因的能力(Risch和Merikangas，1996；Collins等，1997)。相关研究通过比较在严重罹患的先证者中和完全无关的人种相配的无病对照间突变体候选基因的频率可以鉴别这些小的效应(Weeks和Lathrop，1995；Comings，1996；Owen和McGuffin，1993)。已检测了DRD2、DβH和DAT基因(Comings等，1996j)、DRD1和DRD2基因(Comings等，1997a)、OB和DRD2基因(Comings等，1996d)、以及其它基因联合基因在TS、ADHD、行为障碍、口吃和相关行为中的加和效应。在TS综合征中，已发现鉴定三个多巴胺基因(DRD2、DβH和DAT1)的作用是通过对相当大量的TS受试者、他们的亲属以及对照的检测而最明确决定的，这表明TS和相关的障碍是多基因遗传的，而且每个基因仅负责任何行为评分改变中的一小部分(Comings等，1996a；Comings，1996b；Comings等，1996d；Comings，1996c)。 大部分精神障碍是多基因的(Comings，1996b)而且每个基因负责不到10％、通常不到5％的给定行为变量的改变。在两者的研究中，通过检测一个以上基因的加和效应增加了相关性的强度。相关性研究广泛应用的主要阻碍之一是在已经克隆并测序的许多候选基因处或附近缺少可用的合适多态性(Comings，1994)。然而，即使在使用该技术或经典的连锁技术时，来自一组调查者的阳性发现通常在随后的研究中不能被重复(Egeland等，1987；Kelsoe等，1989；Blum等，1990；Bolos等，1990)。由于群体分层，该技术还能产生假阳性，然而通过对大量的受试者利用单倍型相对风险步骤(Falk和Rubinstein，1987)可以将其降至最小。这些效应的小规模以及在重复中的困难已导致一种关于鉴别参与多基因障碍的基因是否可能的悲观情绪(Moldin，1997)。发明概述仅在美国便有一千八百万的酒精中毒者、二千八百万酒精中毒者的孩子、六百万可卡因成瘾者、一千四百九十万滥用其它物质者、二千五百万尼古丁成瘾者、五千四百万至少超重20％的人、三百五十万患有ADHD或抽动-秽语综合征的学龄儿童以及大约三百七十万的强迫性赌博者。本发明的发明者们相信测定人DRD2基因以及本发明中同心理学障碍相关的其它基因的等位基因的基因型，实际上是朝着对社会中破坏性问题合理治疗的第一步。 本发明首先提供一种用于在受试者中治疗报偿缺陷综合征(RDS)的组合物。在某些方面，该组合物包括至少下述成分的一种：阿片破坏抑制量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶促降解的物质，其为氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；一种神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，其为一种多巴胺前体如L-Tyr、L-Phe和L-多巴、一种5-羟色胺前体如L-Trp和5-羟色氨酸、或者一种γ氨基丁酸(GABA)前体如L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷氨酸盐；一种色氨酸浓度提高量的吡啶甲酸铬(chromium picolinate)或烟酸铬(chromium nicotinate)；一种释放内啡肽的化合物，其为，但并不限于，一种肽，优选一种含有D-氨基酸的肽；或者一种阿片拮抗量的至少一种在δ、μ、κ、σ或ε受体处阻断阿片效应的化合物。除了上面特别列出的外，在本申请中进一步描述了内啡肽酶抑制剂、神经递质前体、阿片破坏抑制物、阿片拮抗剂、和/或铬化合物的类型，并包涵在本发明中。在本发明某些优选的方面中，组合物被用于预防或降低受试者不需要的体重。在本发明的某些其它方面，组合物优选被用于注意缺陷障碍、注意力过程或记忆的治疗中。在本实施方案中，对于注意缺陷障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)注意力过程或记忆，组合物更优选包括神经递质合成促进量的至少一种选自Rhodila或石杉碱(hubazine)的神经递质合成促进物质。此中所用的“衍生物”可指一种化学修饰的化合物，而“类似物”指一种与被比较的化合物具有相似特性或结构的不同化合物。 在本发明的某些方面，该组合物可以用于此中所公布的所有RDS相关行为的治疗。RDS行为是那些同化学失衡相关的行为，这种化学失衡表现为一种或多种与个体对焦虑、愤怒或对一种物质渴望有幸福感相关的行为障碍。RDS行为包括酒精中毒、SUD、吸烟、BMI或肥胖、病理性赌博、碳水化合物暴食、轴11诊断、SAB、ADD/ADHD、CD、TS、SUD的家族史、以及肥胖症，此中进行了描述。 本发明还提供一种治疗受试者的RDS行为的方法，这些RDS行为包括但不限于SUD、肥胖症、吸烟、抽动-秽语综合征、ADHD、精神分裂症/回避行为、攻击、创伤后应激综合征、PMS或烟草滥用。RDS行为并非特别局限于这些障碍，许多类型的亚障碍也被这些条件所涵盖。例如，注意缺陷多动障碍(ADHD)可表现为酒精、药物、强迫强制行为、学习障碍、阅读问题、赌博、躁狂症状、恐怖症、恐惧发作、对立挑战行为、品行障碍、小学中的学习问题、吸烟、性行为、分裂样、躯体化、抑郁、睡眠障碍、广泛焦虑、口吃、以及抽动障碍。作为本发明的一部分，所有这些行为，以及此中所描述的与RDS行为相关或与参与RDS相关神经通路的基因相关的其它行为均被包括在RDS行为中。此外，此中所用的对于作为RDS障碍的多种特定障碍的许多临床术语在《DSM-IVTM的诊断标准的快速参考》(Quick Referenceto the Diagnostic Criteria From DSM-IVTM)美国精神病协会，华盛顿特区，1994，358页中可查到。在该参考文献中可以找到定义的特定障碍，以及它们在DSM-IVTM中的编号包括：焦虑障碍，包括不伴广场恐怖的惊恐障碍300.01、伴广场恐怖的惊恐障碍300.21、无惊恐障碍史的广场恐怖300.22、特殊恐怖症300.29、社交恐怖症300.23、强迫症300.3、创伤后应激障碍309.81、急性应激障碍308.3、广泛性焦虑障碍300.02、儿童期过度焦虑障碍300.02、躯体情况(注明)所致焦虑障碍293.89、物质引致焦虑障碍293.89、焦虑障碍(未注明)300.00；注意缺陷和破坏行为障碍，包括注意缺陷/多动障碍突出无注意力型314.00、注意缺陷/多动障碍突出多动-冲动型314.01、注意缺陷/多动障碍混合型314.01、注意缺陷/多动障碍(未注明)314.9、品行障碍312.8、违抗性障碍313.81、破坏性行为障碍(未注明)312.9；双相障碍，包括双相I型障碍296.0x、296.40、296.4x、296.6x、296.5x和296.7、双相II型障碍296.89、环性情绪障碍301.13、双相障碍(未注明)296.80；抑郁障碍，包括反复发作的重性抑郁障碍296.3、心境恶劣障碍300.4、抑郁障碍(未注明)311、单次发作的重性抑郁障碍296.2；进食障碍，包括神经性贪食307.51、神经性厌食307.1、进食障碍(未注明)307.50；冲动控制障碍，包括间歇性暴发障碍312.34、偷窃狂312.32、纵火狂312.33、病理性赌博312.31、拔毛癖312.39、冲动控制障碍(未注明)312.30；人格障碍，包括反社会型人格障碍301.7、回避型人格障碍301.82、强迫型人格障碍301.4、分裂样人格障碍301.20；精神分裂症，包括偏执型295.30、紊乱型295.10、紧张型295.20、未分型295.90、残留型295.60、分裂情感性精神障碍295.70、分裂样精神障碍295.40；睡眠障碍，包括原发睡眠障碍，例如包括原发失眠307.42、原发过度睡眠307.44、发作性睡病347、睡眠的昼夜节律障碍307.45、睡眠障碍(未注明)307.47的睡眠异常，包括恶梦障碍307.47、睡惊障碍307.46、睡行症307.46、睡眠有关问题的异常(未注明)307.47的睡眠有关问题的异常，与其他精神障碍相关的睡眠障碍-其包括与[轴I或轴II障碍]相关的失眠307.42、与[轴I或轴II障碍]相关的过度睡眠307.44，包括躯体情况(注明)引致的睡眠障碍780.xx、物质引致的睡眠障碍780.xx的其它睡眠障碍；物质滥用障碍，包括酒精相关障碍例如伴妄想的酒精所致精神病性障碍291.5、酒精滥用305.00、酒精中毒303.00、酒精戒断291.8、酒精中毒谵妄291.0、酒精戒断谵妄291.0、酒精所致持久性痴呆291.2、酒精所致持久性遗忘障碍291.1、酒精依赖303.90、伴幻觉的酒精所致精神病性障碍291.3、酒精所致情感障碍291.8、酒精所致焦虑障碍291.8、酒精所致性功能障碍291.8、酒精所致睡眠障碍291.8、酒精相关障碍(未注明)291.9、酒精中毒303.00、酒精戒断291.8；尼古丁相关障碍，其包括尼古丁依赖305.10、尼古丁戒断292.0、尼古丁相关障碍(未注明)292.9；苯丙胺相关障碍，其包括苯丙胺依赖304.40、苯丙胺滥用305.70、苯丙胺中毒292.89、苯丙胺戒断292.0、苯丙胺中毒谵妄292.81、伴妄想的苯丙胺所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的苯丙胺所致精神病性障碍292.12、苯丙胺所致情感障碍292.84、苯丙胺所致焦虑障碍292.89、苯丙胺所致性功能障碍292.89、苯丙胺所致睡眠障碍292.89、苯丙胺相关障碍(未注明)292.9、苯丙胺中毒292.89、苯丙胺戒断292.0；大麻相关障碍，其包括大麻依赖304.30、大麻滥用305.20、大麻中毒292.89、大麻中毒谵妄292.81、伴妄想的大麻所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的大麻所致精神病性障碍292.12、大麻所致焦虑障碍292.89、大麻相关障碍(未注明)292.9、大麻中毒292.89；可卡因相关障碍，其包括可卡因依赖304.20、可卡因滥用305.60、可卡因中毒292.89、可卡因戒断292.0、可卡因中毒谵妄292.81、伴妄想的可卡因所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的可卡因所致精神病性障碍292.12、可卡因所致情感障碍292.84、可卡因所致焦虑障碍292.89、可卡因所致性功能障碍292.89、可卡因所致睡眠障碍292.89、可卡因相关障碍(未注明)292.9、可卡因中毒292.89、可卡因戒断292.0；致幻剂滥用障碍，其包括致幻剂依赖304.50、致幻剂滥用305.30、致幻剂中毒292.89、致幻剂戒断292.0、致幻剂中毒谵妄292.81、伴妄想的致幻剂所致精神障碍292.11、伴幻觉的致幻剂所致精神障碍292.12、致幻剂所致情感障碍292.84、致幻剂所致焦虑障碍292.89、致幻剂所致性功能障碍292.89、致幻剂所致睡眠障碍292.89、致幻剂相关障碍(未注明)292.9、致幻剂中毒292.89、致幻剂持久性感觉障碍(幻觉重现)292.89；吸入物相关障碍，其包括吸入物依赖304.60、吸入物滥用305.90、吸入物中毒292.89、吸入物中毒谵妄292.81、伴妄想的吸入物所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的吸入物所致精神病性障碍292.12、吸入物所致焦虑障碍292.89、吸入物相关障碍(未注明)292.9、吸入物中毒292.89；阿片类物质相关障碍，其包括阿片类物质依赖304.00、阿片类物质滥用305.50、阿片类物质中毒292.89、阿片类物质中毒谵妄292.81、伴妄想的阿片类物质所致精神病性障碍292.11、伴幻觉的阿片类物质所致精神病性障碍292.12、阿片类物质所致焦虑障碍292.89、阿片类物质相关障碍(未注明)292.9、阿片类物质中毒292.89、阿片类物质戒断292.0；多物质相关障碍，其包括多物质依赖304.80；抽动障碍，其包括Tourette障碍307.23、慢性运动或发声抽动障碍307.22、一过性抽动障碍307.21、抽动障碍(未注明)307.20，口吃307.0，孤独性障碍299.00以及躯体症状化障碍300.81。此外，其他RDS障碍被定义为将由本领域的技术人员所知的那些，例如新奇追求，定义于(Clonigen等，1993)。如果此中未特别定义，其它障碍同由本领域技术人员所共知的相同，包括通用的缩写。 在本发明的某些方面中，每日所给用于RDS行为或障碍治疗的各种上面所提化合物的量可以是大约1、大约2、大约4、大约5、大约6、大约7、大约8、大约9、大约10、大约11、大约12、大约13、大约14、大约15、大约16、大约17、大约18、大约19、大约20、大约21、大约22、大约23、大约24、大约25、大约26、大约27、大约28、大约29、大约30、大约31、大约32、大约33、大约34、大约35、大约36、大约37、大约38、大约39、大约40、大约41、大约42、大约43、大约44、大约45、大约46、大约47、大约48、大约49、大约50、大约55、大约60、大约65、大约70、大约80、大约90、大约100、大约110、大约120、大约130、大约140、大约150、大约160、大约170、大约180、大约190、大约200、大约220、大约240、大约260、大约280、大约300、大约325、大约350、大约375、大约400、大约425、大约450、大约475、大约500、大约550、大约600、大约650、大约700、大约725、大约750、大约775、大约800、大约825、大约850、大约875、大约900、大约925、大约950、大约975、大约1,000、大约1,100、大约1,200、大约1,300、大约1,400、大约1,500、大约1,600、大约1,700、大约1,800、大约1,900、大约2,000、大约2,100、大约2,200、大约2,300、大约2,400、大约2,500、大约2,600、大约2,700、大约2,800、大约2,900、大约3,000、大约3,250、大约3,500、大约3,750、大约4,000、大约4,250、大约4,500、大约4,750、大约5,000、大约5,250、大约5,500、大约5,750、大约6,000、大约6,250、大约6,500、大约6,750、大约7,000、大约7,250、大约7,500、大约7,750、大约8,000、大约8,250、大约8,500、大约8,750、大约9,000、大约9,250、大约9,500、大约9,750、大约10,000、大约11,000、大约12,000、大约13,000、大约14,000、大约15,000、大约16,000、大约17,000、大约18,000、大约19,000、大约20,000、大约21,000、大约22,000、大约23,000、大约24,000、大约25,000、大约26,000、大约27,000、大约28,000、大约29,000、大约30,000mg或更多。此外，虽然没有特别列出，但在上面特定范围内的所有量均可以使用而且由本发明所涵盖。例如，大约4,751、大约4,752、大约4,753mg等，虽然在前面的句子中没有特别列出，但在本发明中可以使用。 在本发明的某些实施方案中，其中RDS行为是肥胖症，组合物的优选范围及成分是每日给予460mg DL-苯丙氨酸、25mg L-色氨酸、25mg L-谷氨酰胺、以及5mg吡哆醛-5’-磷酸。在该实施方案其它优选的方面中，利用此中公布的或本领域技术人员已知的方法来测试受试者以确定是否受试者具有化学物依赖的家族史，其中该家族史提示成功治疗的可能性高。在该实施方案的其它方面中，这一治疗抑制暴食。在本发明的其它方面中，这一治疗抑制成瘾。在优选的方面中，组合物含有铬盐。 如此中所描述的，利用一种分子生物学检测来测试受试者检测一种同RDS或心理学行为相关的等位基因是本发明的一部分，这样一种诊断性等位基因的存在是受试者更可能对此中所公布的用于治疗的组合物发生阳性反应的指示物。在该实施方案优选的方面中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测下列等位基因中至少一种的存在：D2TaqI A1、B1、C1或外显子6-7单倍型、HTR2A-C等位基因纯合、0B-1875二核苷酸重复多态性的＜208BP等位基因的纯合性、人2号染色体微卫星多态性、APO-D-TaqI 2.2或2.7BP、或0B基因D7S1875，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能性提高。在该实施方案其它优选的方面中，组合物包括有效数量的烟酸铬，而且检测受试者DRD2 A1等位基因的存在，其中DRD2 A1等位基因的存在提示对治疗反应的可能性提高。在该实施方案其它优选的方面中，组合物包括有效数量的吡啶甲酸铬，而且检测受试者DRD2A2等位基因的存在，其中DRD2 A1等位基因的存在提示对治疗反应的可能性提高。 在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为是烟草滥用，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D1(Dde A1的纯合)、D2(Taq A1)、D4(VNTR2)、D5(二核苷酸13等位基因，范围135-159BP)、DAT1 VNTR(10/10)、DβH(TaqI B1等位基因)，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗的成功反应的可能性提高。 在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为进一步包括孤僻症、抽动-秽语综合征或ADHD，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D1(Dde A1的纯合)、D2(Taq A1)、D4(VNTR2)、D5(二核苷酸13等位基因，范围135-159BP)、DAT1 VNTR(10/10)、DβH(TaqI B1等位基因)、MAOA(X)，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能性提高。在该实施方案的某些优选的方面中，组合物包括Rhodila或石杉碱。 在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为是病理性赌博，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D1(Dde A1的纯合)、D2(Taq A1、B1、C1)，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能性提高。 在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为进一步包括病理性暴力、分裂样/回避(SAB)、攻击、发怒、敌视或创伤后应激障碍，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测下面等位基因中至少一种的存在：D2(TaqA1、B1、C1、外显子6-7)、DAT1(VNTR 10/10)、mNOSIa-≤201BP纯合，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能性提高。 在本发明的一个实施方案中，其中RDS行为是PMS，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DAT1(VNTR 10/10)、D2TaqI A1、B1、C1、外显子6- 7单倍型等位基因或DRD1、DRD2、DRD4、HTT、HTRIA、TDO2、DβH、MAO、COMT、GABRAB、GABRB3、PENk、ADRA2A或ADRA2C基因的等位基因中至少一种的存在，其中检测到上面所提到的等位基因提示对治疗成功反应的可能提高性。 本发明进而提供一种确定受试者对至少一种RDS行为的遗传学素质的方法，其通过检测来自包括但不限于DRD1、DRD2、DRD3、DRD4、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A或PS1基因中至少一个等位基因来进行，其中该等位基因对于一种RDS行为是诊断性的。在本发明的一个实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测至少一个MAOA等位基因VNTR多态性的存在，其中该等位基因的存在对于包括躁狂、OCD、性、睡眠、小学行为、赌博、学习、无注意力、ADHD、ADDR、冲动、MDE、CD、多动、恐怖症、分裂样行为、广泛焦虑、躯体症状化、药物、静脉药物、阅读、ODD、抽动、酒精或烟草滥用的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测至少一个DRD2基因A1等位基因、DAT1基因、VNTR 10/10等位基因、或DβH基因B1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括分裂样或回避的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测在CNR1基因中增加数量的(AAT)n三联体重复的存在，其中该等位基因的存在对于包括药物滥用的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测在OB基因中增加数量的D7S1873、D7S1875、D7S514或D7S680二核苷酸重复的存在，其中该等位基因的存在对于包括肥胖症、焦虑、抑郁、精神病、敌视、偏执狂样想象、强迫、症状总和、一般症状指数、新奇追求、整体总和、神经过敏、以及谨慎的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。在该实施方案中，优选等位基因为长度大于225bp的D7S1875二核苷酸重复，而且该等位基因在CNR1基因的两个拷贝中均存在。在该实施方案中，还优选所检测的另一等位基因为DRD2基因的D2A1等位基因。在该实施方案中，还优选RDS行为是肥胖症。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD2基因的D2A1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括抽动-秽语综合征、躁狂症状、违抗、性、ADHD-R、分裂样、ADHD、抽动、重性抑郁、品行、口吃、强迫、躯体化症状、酒精滥用、学习和睡眠问题的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DβH基因的Taq A1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括抽动-秽语综合征、ADHD、吸烟、学习、小学、ADHD-R、违抗、抽动、躁狂、酒精、阅读、药物滥用、睡眠、口吃、强迫、躯体症状化、以及重性抑郁的RDS行为遗传素质的受试者是诊断性的。在该实施方案中，优选等位基因为DβH基因的Taq B1等位基因和Taq A1等位基因，而且RDS行为是抽动-秽语综合征。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DAT1基因的10等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于抽动-秽语综合征、孤独症、躯体症状化、酒精、ADHD-R、重性抑郁、惊恐、强迫、广泛焦虑、躁狂、违抗、性、阅读以及ADHD的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DAT1基因的10等位基因、DβH基因的Taq A1等位基因或DRD2基因的D2A1等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于ADHD、口吃、ADHD-R、违抗、抽动、品行、强迫、躁狂、酒精、广泛焦虑、惊恐、分裂样、睡眠、性、药物以及重性抑郁的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基因的DdeI等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于酒精、吸烟、强迫进食、抽动、赌博、药物、阅读、购物、违抗、重性抑郁发作、分裂样、ADHD、品行障碍、强迫以及躁狂的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD2基因的TaqI A1和TaqI A2等位基因的存在，其中那些等位基因的存在对于违抗、品行障碍、暴食、吸烟、赌博、ADHD、强迫、躁狂以及酒精的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基因的11或22基因型的存在，其中该等位基因的存在对于抽动-秽语综合征、吸烟以及赌博的遗传素质的受试者是诊断性的。在该实施方案中，优选所检测的等位基因为两个拷贝/基因组DRD1基因Dde1等位基因。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基因的11基因型的存在，其中该等位基因的存在对于违抗行为、品行障碍、强迫进食、吸烟、赌博、ADHD、躁狂、口吃、强迫以及分裂样的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基因的DdeI等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于赌博、吸烟、强迫进食、违抗、重性抑郁发作、ADHD、品行障碍、分裂样、强迫、躁狂以及酒精的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD1基因的11或22基因型的存在，其中该等位基因的存在对于酒精、吸烟、强迫进食、抽动、赌博、药物、阅读、购物、赌博以及小学问题的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测色氨酸2，3二氧化酶的内含子6G→A多态性的存在，其中该等位基因的存在对于抽动-秽语综合征的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测色氨酸2，3二氧化酶的内含子6G→T多态性的存在，其中该等位基因的存在对于ADHD、酒精依赖、药物依赖、病理性赌博的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测色氨酸2，3二氧化酶的内含子6DGGE多态性的存在，其中该等位基因的存在对于ADHD、酒精依赖、药物依赖、病理性赌博以及抑郁的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测ADRA2C二核苷酸重复多态性的低碱基对等位基因(＜181bp)多态性的存在，其中该等位基因的存在对于药物滥用的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测ADRA2C二核苷酸重复多态性的两个≥183bp的高碱基对等位基因多态性的存在，其中该等位基因的存在对于包括酒精滥用的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测早衰素-1(presenilin-1)(PS-1)多态性的两个同源等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括酒精和烟草滥用的遗传素质的受试者是诊断性的。在该实施方案中，优选所检测的等位基因为PENK基因的大于80bp的CA二核苷酸重复多态性的两个同源等位基因。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测AR基因的短GGC等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括CD、ODD或多动的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明的另一实施方案中，利用此中所公布的方法对受试者进行遗传学测试，或者通过一种分子生物学检测进行测试，检测DRD2等位基因的存在，其中该等位基因的存在对于包括酒精中毒的B型行为、可卡因成瘾或RDS先证的遗传素质的受试者是诊断性的。 在本发明进而提供一种确定对多基因性状的遗传素质的方法，包括检测来自DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A、或PS1基因中的至少一个相关等位基因。在本发明的一个实施方案中，多基因性状为ADHD，而且等位基因同DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR或CRF基因相关。在另一实施方案中，多基因性状为ADHD易感性的缺乏，而且等位基因同DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A、或PS1基因相关。 在本发明的另一实施方案中，多基因性状为OOD，而且等位基因同DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因相关。 在本发明的另一实施方案中，多基因性状为抽动，而且等位基因同DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因相关。 在本发明的另一实施方案中，多基因性状为LD，而且等位基因同DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C、MAOA、CNR1或CNRA4基因相关。 在本发明的另一实施方案中，多基因性状为LDL，而且等位基因同HTT、OXYR、DRD2或PS1基因相关。 在本发明的另一实施方案中，多基因性状为长寿，而且等位基因同PS1、OXYR或APOE基因相关。 本发明此外提供一种建立诊断性的多基因检测法的方法，包括鉴定待研究性状、建立待研究性状严重成度的量度；选择至少一种可能对所述性状有贡献的候选基因，鉴定至少一种与候选基因相关的多态性，将多态性的等位基因模式与所述量度相关联，并比较等位基因模式对候选基因与性状相关性的相关性。将与性状正相关的等位基因模式加在一起，形成一种对受试者的多基因性状易感性有诊断意义的多基因检测法。将与性状负相关的等位基因模式相加形成一种对受试者缺乏多基因性状易感性的诊断性多基因检测法，这也是本发明的一部分。 在本发明的一个实施方案中，候选基因包括但并不限于DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A、或PS1基因。 在本发明的另一实施方案中，多基因性状包括但并不限于ADHD、ADHD缺乏、ODD、CD、LD、抽动、药物滥用/依赖、吸烟、骨关节炎、胆固醇水平升高、LDL水平升高或长寿。 在本发明的一个实施方案中，对于ADHD的多基因检测为检测至少一个与DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、BABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR或CRF基因相关的等位基因。 在本发明的另一实施方案中，对于ADHD缺乏的多基因检测包括检测至少一个与DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ干扰素、CD8A、或PS1基因相关的等位基因。 在本发明的一个实施方案中，对于OOD的多基因检测包括检测至少一个与DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因相关的等位基因。 在本发明的另一实施方案中，对于抽动的多基因检测包括检测至少一个与DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因相关的等位基因。 在本发明的一个实施方案中，对于LD的多基因检测包括检测至少一个与DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C、MAOA、CNR1或CNRA4基因相关的等位基因。 在本发明的另一实施方案中，对于LDL水平升高的多基因检测包括检测至少一个与HTT、OXYR、DRD2或PS1基因相关的等位基因。 在本发明的一个实施方案中，对于长寿的多基因检测包括检测至少一个与PS1、OXYR或APOE基因相关的等位基因。 在本发明的另一实施方案中，对于骨关节炎的多基因检测还包括检测至少一个与COL2A1、COL2A1、COL2A1、COL9A1、COL9A1、AGC1、IGF1、IGF1、IGF1R、IGF1R、IGF2、IGF2R、TGFB1、TGFB2、IL1A、IL1B、IL1R1、IL1RN、MMP9、TIMP1或维生素D3基因相关的等位基因。 在本文中应用时，“一种”或者“一个”或者“个”应当理解为可能意味着一种或者一种以上。附图简述下列附图构成本说明书的一部分并用于进一步说明本发明的特定方面。本发明可以通过参照一副或者多副附图和对本文中对特定实施方案的详细描述得以更好的理解。 图1.“超级对照(正常)”和严重“RDS”先证者的DRD2基因。用于比较所示各组的线性趋势分析中p＜0.000001。计算机分选组别：组I(C1)：对酒精中毒，物质滥用障碍，多物质依赖，化学依赖和肥胖家族史，尼古丁依赖(吸烟)BMI超过25，碳水化合物暴食，孤独症，抽动-秽语，ADHD，Axis II，病理性赌博和创伤后应激障碍仔细评价。发明者利用DSMIV准则来评价物质滥用障碍。(N＝11) 组II(C2)：除了Axis II以外组I的相同排除标准包括在内。(N＝6)组III(C3)：除了物质滥用障碍和肥胖阳性家族史以外组I和II的相同排除标准包括在内。(N＝20)组IV(C4)：除了吸烟行为(尼古丁依赖)以外组I，II，III的相同排除标准包括在内。(N＝21)组V(C5)：除了苯并二氮杂滥用/依赖以外组I，II，III，IV的相同排除标准包括在内。(N＝31)组VI(C6)：除了物质滥用障碍(即酒精和可卡因)以外组I，II，III，IV，V的相同排除标准包括在内。(N＝74)组VII(C7)：除了BMI超过25的以外组I，II，III，IV，V，VI的相同排除标准包括在内。(N＝140)组VIII(C8)：除了共生物质滥用障碍(滥用酒精和可卡因)的BMI超过25的以外组I，II，III，IV，V，VI，VII的相同排除标准包括在内。(N＝31)组IX(C9)：除了共生多物质依赖(即酒精和可卡因)的BMI超过25的以外组I，II，III，IV，V，VI，VII，VIII的相同排除标准包括在内。(N＝11)另外，为了进行统计学比较，本发明也包括了按文献预先基因分型有18.5％的D2A1流行率(Blum等，1990，Blum等，1991，Noble等，1993，Parsian等，1991，Comings等，1991，Smith等，1992，Amedeo等，1993)的总数为286(N＝286)的健康白人(L1)男子和女子(仅用于筛选酒精和毒品滥用者及在一些情况下筛选尼古丁滥用者)。此外，本发明包括了总数714(N＝714)的受试者(L2)，他们按文献仅用于筛选酒精或多物质依赖(Blum等，1990，Parsian等，1991，Comings等，1993，Noble等，1994，Amedeo等，1993，Comings等，1994，Noble等，1993，Schwab等，1991，Uhl等，1992，O’Hara等，1993，Uhl等，1992)，D2A1流行率为25.9。另外，本发明也包括了总数980(N＝980)的受试者(L3)，按文献(Bolo等，1990，Grandy等，1989，Gelernter等，Uhl 1992，Goldman等，Finns 1994，Nothen等，Noble等，1994，Jonsson等，1993，Hedebrand等，1993，O’Hara等，1993)他们有32.9的D2A1流行率(未知情况的对照)。 图2.PhencalTM对体重降低的效应。该图说明在两年期以后PHENCALTM和非PHENCALTM组的体重比较。在两年研究的最后，与不使用PHENCALTM的对照组(n＝117)的52.8％相比，使用PHENCALTM的受试者(n＝130)平均超重23.5％(p＜0.0001)。 图3.MAOA VNTR等位基因多态性分布(等位基因总数＝768)。 图4.逐渐增加累加性基因变体的数目对ADHD评分的累加性效应。它表明了一种从只有4或者5个变体基因的1.0到有15个变体基因的25.0的进行性增加趋势。ADHD评分进行性增加的线性卡方检验的p值＜10-8。 图5.所有29个基因对ADHD评分的累加性和减性效应，以及只有累加性基因的累加性效应。底部的空心正方形代表指定随机评分的每个基因的r2值，它与观察的评分频率相配合。r2值的进行性累加性效应由空的正方形来表示，只使用阳性相关的累加性效应通过有一个x的正方形来代表。线上的点由x来标记的是累加性基因，线上的点由一个实心点来标记的是累加性和减性基因。同时使用累加性和减性基因的最终r2是.0001。只使用累加性随机基因的最终r2是.0004。没有一个是显著的。此外，虽然在随机PENK基因中替代性r2高达.008，但当最后的随机累加性基因(CD8A)加入后它降回到.0004。 图6.所有29个基因在分成两半的样品中(n＝166)的累加性和减性效应。一些基因在两组中既是累加性又是减性的，一些基因在一组中是累加性的而在另一组中是减性的。实心点代表组I的数据，实心正方形代表组II数据。 图7.没有DSM-IV ADHD症状的受试者与那些ADHD的DSM-IV标准的受试者相比的变体基因数量分布。 图8.四个基因HTT，OXYR，DRD2和PS1对胆固醇和LDL血液水平的累加性效应。该图说明MAA技术鉴定出四个基因，与154个受试者结合时，给出p＝2.0×10-4的显著结果。实心圆是胆固醇的数据，空心圆是低密度脂蛋白的数据。说明性实施方案的描述用于RDS和其他多基因性状诊断的多基因本发明者相信许多心理学障碍是通过共同的生物学底物相联系的，脑中的“硬线”系统在报偿某些行为的过程中提供乐趣。本发明者在本发明中提出，改变伏核或者别的边缘报偿区细胞间信号传导的先天性化学不平衡可能以焦虑、愤怒或者是以对能够缓和消极情绪的对物质(如酒精)的嗜欲来代替个体的幸福感觉。这种化学不平衡表现为已创造的词汇“报偿缺陷综合症”下的一种或多种行为障碍(Blum等，1996a)。 在报偿缺陷综合症或者RDS中，报偿途径的遗传学缺陷最好理解为多基因障碍，遗传学检测需要检测多个基因。本发明鉴定了RDS的易感性与包括但不局限于以下基因的相关性：多巴胺能基因DRD1，DRD2，DRD3，DRD4，DRD5，多巴胺转运蛋白基因(DAT1)；5-羟色胺基因HTT，HTRA，HTRDb，HTRA，HTRC，色氨酸2，3-羟化酶(TD02)；去甲肾上腺素基因，DβH，ADRAA，ADRAC，NT，儿茶酚胺代谢基因，MAOA，COMT，GAGA基因，GABRAA，GABRAB，大麻酯受体基因，CNR，烟碱胆碱能，CHRNA；NMDA受体基因，NMDAR，脑啡肽基因，PENK；雄激素受体基因，AR，γ干扰素基因，INFG，CDA；早衰素-，PS-；CRF基因，CRF，肥胖基因(OB)，瘦素受体基因；5-羟色胺HTR1A受体基因，5-羟色胺受体(5HT2R)基因，儿茶酚(catachol)-O甲基-转移酶(COMT)基因，神经元氧化氮合成酶基因(nNOS1a)，载脂蛋白-D(APO-D)以及解偶联蛋白(UCP1和UCP2)。 非常复杂的RDS和相关行为的性质以及许多环境因素的重要性，消除了一个特定基因或者环境因素实际上起100％决定作用的可能性。虽然相信总体上“报偿级联模式”在受到损害时导致RDS行为，本发明者谨慎地指出，虽不止一个基因可能对在一种RDS亚性状总变异的一定比例负责，它可能与另一个相关RDS行为极少或没有关系。 改进的基因分型技术已经使得在普通人类疾病的病因学中应用遗传学方法绘制基因图在商业上变为可能。许多疾病基因通过连锁分析方法进行了鉴定，该方法用随机标志位点在疾病性状的家庭成员中的共分离进行检测。它们中的大部分属于具有简单遗传方式的单基因孟德尔疾病基因(Weeks和Lathrop)。现在，人类遗传学家正在开始研究多因素疾病的遗传学例如高血压，糖尿病，心脏病，多发性硬化，关节炎和RDS行为如肥胖。多因素疾病是由相互作用并与环境因素相互作用的多个基因引致，产生对疾病遗传素质的梯度。上位的程度和类型或者这些基因的相互作用强烈影响应用连锁分析方法检测基因的机会。即使没有上位，如果保持遗传学异质性，几个不同位点独立地引起性状，成功的机会可能会降低。对于复杂的疾病如RDS，传统LOD评分分析是不会非常有效的，因为它假定存在能解释大部分遗传变异的单一主要疾病位点(有特异的遗传模式)，现在已知对RDS来说不是这样的，因此相关研究将更有效并将是更好的方法。 现有技术在试图发现例如酒精中毒本身或者象TS和ADHD的RDS行为的基因时，一个重要误区是大部分工作者包括本发明人，都集中在单个基因方法，因此只能够鉴定所有变异的一小部分，如DRD2等位基因。例如对于TS，主要工作也是运用带有减低外显率的常染色体显性遗传模式的连锁研究，但不是相关研究，目前虽然排除了几乎百分之百的基因组，这种方法不是有效的。本发明者已经说明RDS是来自双亲基因的多基因系列障碍。当在一实际的多基因障碍中使用Lod评分连锁研究时，在标记中会造成许多错误，以致于即使对于实际上参与表型限定的基因，也会得到负的lod评分。另外，当障碍是多基因遗传时，关于通过连锁分析已经排除特定基因作用的论点，如在DRD2基因中，不再有效(Devor等，1994；Gelernter等，1990)。 本发明中，有时将多基因群的一个单个基因称作为一个多基因。在过去的十年中，发明者已经检查了许多行为和神经病学表型的数十个基因的潜在作用。基于相关系数的计算，发明者发现，不考虑显著性的水平，特定的多态性解释QTV变异的百分比在0.5％到2.5％之间。由于特定等位基因对性状如此低的效应水平，相关研究可能是鉴定多基因作用的唯一有效方法。因为一个多基因解释表型的百分比降低，鉴定该效应的困难增加并且必须研究的受试者的数量也增加。对相关研究的一个批评是，如果对照是来自于不同的种族或人种的话，在这些群体中基因频率的出现或者差别能产生错误的结果。这在理论上能够通过单倍型相对风险技术消除，对二倍型(diabolic)标志来说，当等位基因频率在0.1到0.2之间变化时，以及研究的基因只引起低于20％的变异时，这项技术的能力受到严重限制。最后，相关研究方法拥护者(尤其对于DRD2研究)的一个反驳理由是，仔细筛选对照以排除许多已经相关的RDS行为(SUD，TS，ADHD，CD，SAB，及其它)的失败以及检查的条件能够导致得到不相关的错误假设(Blum等，1995；Blum等，1997)。 然而，现有数据的几个中位分析已经说明这种相关是强的(Cloinger，1991；Gorwood等，1994；Noble an Blum K，1993；Pato等，1993；Cook和Gurling，1994；Uhl等，1993；Blum等，1995；Blum等，1997)。研究DRD2A1等位基因与酒精中毒(它也适用其它RDS行为)相关的一个重要因素是使用比较对照类型。对以前使用过的对照的结合分析已经说明A1等位基因在没有评定的对照中有比在进行过酒精中毒和另外的有关因素评定的对照中显著高的流行率(Uhl等，1993；Noble等，1994a)。这个结果在最近的研究中更突出，Neiswanger等，1995以及Hill和Nyswander，1997，他们通过使用“超级正常”对照，发现A1等位基因与酒精中毒之间的强关联性。该研究组断定，如此评定的对照组对以前观察到的偏斜结果可能是比抽样错误或者群体分层更重要的解释。 超级对照。发明者在Priceton，New Jersey神经精神病学和医学诊所评价了184个先证者，他们谨慎地接近对照，因此每一个体都排除了许多RDS行为(包括酒精中毒，SUD，吸烟，BMI或者肥胖，病理性赌博，碳水化合物暴食，axis 11诊断，SAB，ADD/ADHD，CD，TS，SUD家族史，以及肥胖症)，然后进行TaqID2A1基因分型，发现与32.9％的携带DRD2A1等位基因的未筛选白人组不同，在符合标准的三十人之中只有一个携带DRD2A1等位基因或者只有3.3％(见图1.)。实际上当所有的组都进行比较时，他们发现，与已经很好评价的对照相比，共生多物质依赖组(严重)A1+等位基因流行率的渐进性百分比(％)增加明显要高。(X2＝78.7，df＝1，p＜0.000001)。 本申请的一个重要实施方案包括单独或者联合检测一些基因变体的方法，基于它们各自对所诊断RDS行为的作用进行。发明者相信通过利用基因的联合以及检测上述的特定多态性或者实际突变，将能够更准确地鉴定风险个体，即比如以前公布的专利建议的多巴胺受体基因的DNA检测那样只有一个基因被检测时准确度更高。为了更清楚地说明这种潜力，推测一些基因参与报偿路径。尽管这里说明神经递质参与报偿路径，但在物质滥用和其他冲动、成瘾行为中有已报道的多态性和遗传缺陷的理论效应的相关基因，发明者建议这些基因和许多其他未鉴定的基因将组成完整的RDS异态图(allomorphic map)。它作为一种基础，可以认为随着时间和更多研究的进行，影响其他神经递质的基因将加入到该多基因群中，以及其他多基因的精神病学障碍(尤其对于本发明的“报偿”和系列行为)应用本技术也将是可破译的。实际上存在这样一种可能性，许多染色体位点和特定的标记或者基因将在不久的将来被发现，但是本发明的目的是发展用于检测与发明者定义为报偿缺陷综合症的冲动-强迫-成瘾行为以及其他多基因性状相关的许多已关联基因的MULTIPLEX GENESCANTM。另外，本发明者已开发了包括RDS的多基因性状的诊断方法，被称为多累加关联(MAA)技术。 多重累加性关联(MAA)技术的步骤。特定的实施例说明MAA技术在构建RDS相关障碍诊断分析中的应用。然而，发明者提出的一些实施例是与精神病学障碍无关的并说明MAA技术可推广到所有的多基因障碍和多基因性状。因此，发明者设想MAA技术成为对所有多基因障碍的方法。多基因障碍被认为是由于许多基因的累加效应，每个基因独自只能引起表型变异的一小部分。在全部个体中它们呈现不同的程度。多基因障碍比单基因障碍要普遍的多，影响了人口的1％到20％。部分实例是高血压，肥胖，大多数精神病学障碍，多发性硬化，红斑狼疮，骨质疏松，冠状动脉疾病，类风湿性关节炎，骨关节炎，体重，身高，血压，年龄(寿命)，心理学性状和任何其他在某种程度上由超过一个基因或等位基因决定的性状。下面讲授MAA技术如何施行。 本MAA技术具有以下独特的额外特征。首先，它显著地扩大能够检测的基因数量到数千。它通过应用相关系数(r)、变异比例(r2)代替了性状本身把所有数量性状或二歧性状置于同一量度。它引入这样的概念，当单个基因加入时，它们可能是累加性的(r和r2升高)或是减性的(r和r2降低)。它利用这种升高和降低来鉴定在障碍或者性状中起作用的那些基因，因为它们是累加性的，和在障碍或者性状中不起作用的那些基因，因为它们是减性的。只利用累加性基因评估由鉴定的累加性基因引起的变异的总百分比r2来进行再分析。通过评估多个基因的累加性效应而不是以一次一个基因的方式评估基因，MAA技术在鉴定参与多基因障碍的基因时比单个地评估基因的方法例如lod评分、血亲对、单倍型相关风险(Falk和Rubinstein，1987)、以及遗传不平衡检验(Spielman和Ewens，1996)更加有效。MAA技术显示一次一个基因的相关研究中的p值与一个基因是否参与多基因障碍或性状很少有关。MAA技术可以描述为具有以下步骤，一些步骤是该技术特有的。 步骤1.第一步是鉴定要研究的多基因障碍或性状，如注意缺陷多动障碍(ADHD)，抑郁，胆固醇水平，体重，身高，寿命，血压，多发性硬化，或者任何其他多基因性或推测是多基因的障碍或性状。除非另有说明，采用已有的诊断会面方法如DIS(诊断会面程序)(Robins等，1991)或SCID(Williams等，1992)应用DSM标准，进行已知或推测是多基因的心理学性状个体的精神病学诊断。发明者设想最新DSM版本可以用于进行这样的诊断，但旧的版本仍可以使用。 步骤2.第二步是建立评估多基因障碍严重性的量度。这可能是数量性状或者是二歧变量(QT或DV)。例如，研究血压时数量量度可能是舒张期血压，研究身高时可以使用英尺或厘米表示的身高，研究肥胖时量度可能是体重或BMI，研究抑郁时量度可能是抑郁的阳性DSM-IV标准数量，等等。二歧性状也可以应用。例如，如果研究200个对照和200个多发性硬化的受试者，对照评分可能是0而多发性硬化的评分是1。对性状、表型或者QTV的评分指性状的数量大小。例如，如果我体重200Ibs，我的体重评分将是200。如果我有水平为250的胆固醇，我的胆固醇评分将是250，等等。对基因进行评分依照哪种基因型与最低、中等或最高的表型效应相关，将评分0、1或者2指定给基因型。 步骤3.第三步是鉴定要检测的候选基因。作为实例，本申请为ADHD、违抗障碍、品行障碍、学习障碍、酒精问题选择了29个候选基因，它们是对包括多巴胺，5-羟色胺，去甲肾上腺素，GABA，以及其它的神经递质的调节起作用的基因。本领域的普通技术人员将能够认识到可能潜在地对多基因性状起作用的基因。首先选择那些可能与评估的性状有代谢或生理学关系的基因，有助于选择在MAA技术中应用的一个候选基因或一组基因。在公共图书馆可得到的科学文献或者从国家生物技术信息中心的基因库(Genebank)那样的计算机化数据库中描述或发现的基因或等位基因，都期待作为候选基因用于MAA技术对特定性状进行诊断或预后分析。本领域技术人员将能够认识到有另外的遗传学信息资源，包括个人的知识或者未发表或不能公开得到的知识，它们能够用作鉴定大部分多基因性状和障碍的候选基因，并且这样的资源可以用于MAA方法的实践。 涉及如身高或骨质疏松易感性这样的多基因性状的候选基因的一个例子是涉及骨和/或形成、生长和/或调节的基因。另外一个能够评价的性状是肥胖，候选基因将包括这些基因加上OB基因、OB受体基因、神经肽Y基因和神经肽Y受体基因。对于如血压这样的性状，合理的候选基因将是那些涉及去甲肾上腺素、肾上腺素、类固醇和血管紧张肽原酶代谢的基因。 在本发明的实施例中，选择了许多推测涉及多基因性状的基因。特别重要的是推测涉及RDS行为的基因。选择基因的标准包括文献报道它们参与一个或多个RDS行为或者另外的目的多基因性状，和/或发明者的实验数据(这会在下文中描述)。发明者期待基因或多态性与一定性状的相关性可以用于该性状的诊断分析中，并对于某基因和/或其特异多态性是否适用于目的多基因性状的MAA诊断分析提供指导。对于该基因或多态性，性状不一定与RDS关联。 DRD1基因。这个特定基因在发明者的初步研究中和对照相比与严重酗酒先证者没有关联，这样，对更大样本的附加发现是另人吃惊的。研究表明对DRD1和DRD2两个多巴胺受体基因的检查发现它们比任何一个单独基因解释系列行为变异的更大比例(Comings等，1997)。D1受体基因多态性可能与多物质滥用比与严重酗酒更相关。 多巴胺能基因，暴力和分裂样/回避行为。另外的发现支持在复杂人格障碍如“病理性暴力”和分裂样/回避行为(SAB)中有多基因遗传的概念。发明者发现在DRD2A1等位基因和在青少年先证者中的“病理性暴力”之间有强相关，也发现多巴胺转运蛋白基因(DAT1)的10等位基因相似的相关性。发现了DRD2A1等位基因与SAB的强相关，但DβH基因没有发现相关，虽然发现DAT1基因与SAB有较弱的相关性(Blum等，1997)。 DβH等位基因的检查可能是评估DβH基因在人类行为障碍中潜在作用的最精确方法。这是支持DRD2TaqIA1等位基因与SAB和PV强相关的首次研究。当这些复杂性状没有显示简单的孟得尔遗传方式时，将不能预期由单个基因引起简单的遗传学答案。多巴胺基因与病理性暴力的关系将在具体实施例17中作进一步描述。 多巴胺D2受体基因。在与多态性标记的连锁失衡中保持的位于基因3’和5’非编码区的推定突变，可能影响DRD2的转录和/或mRNA的稳定性并且因此影响DRD2受体的数量。这是基于以下的实事：发现与位于侧翼区而不是外显子点突变的标记有更强的相关性；已报道在“A1标记的”DRD2等位基因外显子(外显子8除外)中无突变；以及已报道在没有Kd改变而有A1标记时DRD2 Bmax降低(Noble等人，1991)。这可能帮助解释与多态性TaqID2缺乏相关性。与TaqID2缺乏相关性与群体遗传学分析相符，后者说明尽管TaqI A和B彼此有着强烈的连锁不平衡，A1的3’侧翼标记呈现与TaqI D较少的不平衡，可能因此预期它与兴奋剂喜好的弱相关性(Suarez等人，1994)。 对于更复杂的问题，对于一些研究中失败的解释可能是由于Comings(共同发明人)提出的分子杂种优势。这发生在当遗传多态性是杂合的受试者比两个等位基因之一是纯合的受试者在数量性状变数(QTV)上有着明显更高的(阳性杂种优势)或者更低的(阴性杂种优势)平均数时。 阳电子发射X线断层照相机(PET)研究已说明了在解毒的酗酒者和滥用可卡因者的脑区葡萄糖代谢下降。在本研究中，使用18F-脱氧葡萄糖，在具有A1+和A1-等位基因的健康的非酒精/非毒品滥用的受试者中测定了区域性葡萄糖代谢。在许多脑区域中包括豆状核、伏核、额回和颞回以及额叶前部内侧、枕-颞和眶皮质，平均的相对葡萄糖代谢率(GMR)在A1+组中比A1-组中明显要低。在A1+组的相对GMR下降也发现于运动言语区、前脑岛、海马以及物质黑质。然而在A1+组中部分脑区域呈现增加的相对GMR。 有几条说明多巴胺代谢缺陷在应激反应障碍病因学中作用的证据。在A1等位基因携带者的脑中，较少数量的多巴胺D2受体可能在脑涉及报偿的部分转化为较低水平的多巴胺能活性。A1携带者可能不会从A2携带者发现满足感的刺激得到充足的报偿。这可能转化为A1携带者持续的嗜欲或者寻求刺激的行为。由于已知多巴胺能减少应激或嗜欲，A1携带者可能转向另外的物质或活动来释放更多数量的多巴胺以得到暂时的缓解。酒精、可卡因、大麻、尼古丁以及碳水化合物(如巧克力)都能引起脑中多巴胺的释放并带来对嗜欲的暂时缓解。这些物质能够单独使用，联合使用或可互换地使用。相应的，DRD2基因与吸烟的相关性已在我们的(Comings等人，1996b)和别人的(Noble等人，1994；Lerman等人，1997)研究中得到证明。 多巴胺-β-羟化酶。由于DβH位于交感神经末端并在去甲肾上腺素的释放过程中被释放进入循环，因此控制它的基因可能位于染色体位点上而不是DβH本身。因此，在DβH位点的遗传学标记和ADHD，CD，酒精中毒以及另外的RDS相关行为的相关性研究可能是阴性的。另一方面，如果DβH的血清水平是由于一系列环境因素共同确立的，与DβH遗传学标记的相关性研究可能比血液水平对DβH基因在这些障碍中的作用提供更精确的评价。 这些发现和另外的发现一起说明DβH基因的多态性可能只在特定的RDS行为中起作用，通过以前关于DβH或它的活性产物(多巴胺或去甲肾上腺素)的血液水平来预测遗传学结果是困难的。 在药物滥用和其他性状中的多巴胺-β-羟化酶。DβH活性的抑制导致与多动、攻击、自我刺激和刻板运动相关的多巴胺的过度产生(Randrup和Scheel-Kruger，1996)。这表明DβH在人类攻击行为、ADHD和品行障碍(CD)中的可能作用。在低血浆DβH水平的情感障碍男孩中CD诊断频率增加已有报道(O’Connel等人，1992；Rogeness等人，1984；Rogeness等人，1986；Rogeness等人，1988；Rogeness等人，1987)。一些研究已表明在低DβH水平和某些人格性状如在Eysenck人格调查表中的外翻评分(Roy和Brockington，1987)和感觉寻找(Ballenger等人，1983；Umberkoman-Wita等人，1981)间的关系，而在一项研究中，血浆DβH水平与感觉寻找评分间有正相关性(Folatein和Rutter，1977)。 本发明的另一方面涉及多巴胺-β-羟化酶的相关性研究并表明DβH二核苷酸重复多态性与药物滥用模式之间的首次相关性(Comings等人，1996a)。 发现DβH二核苷酸重复多态性在175bp以上或以下有双模式的等位基因分布。将受试者基因分型为低的(≤174bp)或高的(≤176bp)纯合，或者杂合。通常，发现带有高碱基纯合的病人于ASI以前有更大量药物使用、更长的可卡因应用史、更高频率的安非他明静脉注射、更高频率的静脉药物使用。这些受试者报告了更经常的父母酒精中毒和儿童时期的性虐待史。高bp基因型的病人与“自我接受，启蒙第二特性，和自我指导”(Self-Acceptance，Enlighted SecondNature，and Self-Derectiveness)的低评分相关。 象DRD2 A1等位基因一样，DβH B1等位基因与变量ADHD，强迫症，躁狂，违抗以及睡眠是最相关的。不同之处包括DRD2 A1等位基因与精神分裂症、性、品行和口吃变量的相关性更大，而DβH B1等位基因与学习、阅读和学校问题有更强的相关性。与在倾向于列在底部的DRD2研究相反，与学校行为如阅读、学习和小学相关的变量在DβH研究中等级高的趋势是特别引人注目的。这可能与DβH在记忆中的作用有关。 抽动-秽语综合症(TS)可能是RDS最复杂的可辨认形式中的一种。由于所有的与DβH活性抑制相关的行为在抽动-秽语综合症(TS)病人中是常见的(Comings和Comings，1984；Comings和Comings，1987b；Knell和Comings，1993；Comings，1990)，可能在DβH Taq B多态性(d’Amato等人，1989)与TS、举止障碍、注意缺陷多动障碍(ADHD)之间存在相关性。 DAT1基因在病态肥胖中的排除。DRD2 A1等位基因的存在指示不仅对于肥胖也对于另外的成瘾行为来说风险增加，而且BMI超过25本身(没有宏观选择[碳水化合物暴食]或者共生SUD的特征)对于与DRD2A1等位基因的相关性不是充足的标准(Blum等人，1996)。 既评价DRD2 A1也评价DAT1基因的病态肥胖领域的工作表明在女子中34％或更多的身体脂肪以及在男子中28％或更多的身体脂肪仅与DRD2A1等位基因(p＜O.0001)相关而与DAT1基因无关。最高的体重出现在具有DRD2A1/A1-DAT1-10/10单倍型的个体中，说明在病态肥胖中两个基因的分布中D2受体基因有着大得多的分布。 大麻酯受体基因。静脉内药物(IV)药物使用的倾向性可能受到遗传学和环境因素的影响。为了探索这些基因-文化病因学因素，对77个男性非西班牙白人物质滥用者和70个种族相配的对照作了评估。病人按成瘾严重性指数用药；所有先证者按“家庭环境量表”和“儿童期体验调查表”用药，并且对多巴胺能、大麻和GABA能基因举行基因分型。本发明者发现基因型仅含有CB1(大麻)受体基因的高分子量等位基因和GABRB3基因的低分子量等位基因的受试者中静脉药物利用的流行率更高。CB1基因一个三核苷酸重复序列，有至少9种等位基因，本发明者发现证据表明，其对表型的效应不能从等位基因的相对重量进行直线预测，它们与静脉药物利用间的相互作用要复杂得多。几种环境变量(包括家庭环境量表中的一种)在去除与遗传变量相关的变异后与静脉药物利用的易感性相关，尽管这些环境变量本身可能处于未鉴定基因的影响之下。 电生理学异常和物质使用障碍(SUD)：与多巴胺D2受体和大麻酯受体基因的关联。相应于“超级对照”和许多文献对照，严重物质使用障碍(SUD)与DRD2A1等位基因之间的明显相关性已经被观察到(Blum等人，1997；Hill等人，1997)。唤醒相关电位(ERP)的P300波的幅度下降和潜伏期已与酒精和药物依赖相关联(Braverman，R.等人，1990)。P300潜伏期的明显延长与三个风险因素相关(1)双亲的SUD；(2)化学依赖(如可卡因依赖)以及(3)碳水化合物暴食。P300幅度下降与酒精中毒和SUD的家族史有关联，但与DRD2A1等位基因没有关联。 在本申请中，发明者提供了在额叶P300幅度下降与大麻酯受体基因(CB1)≥5重复等位基因纯合性间明显相关的证据。为了评估是否同样的基因型与酒精或药物依赖相关，对来自于ATU的98个受试者和69个对照进行CB1重复等位基因的基因分型。所有受试者都是非西班牙白人。应用“成瘾严重性指数”、诊断会面计划”、和MAST-R对ATU受试者进行评估。只运用MAST-R从对照中排除药物和酒精滥用/依赖。结果表明5重复等位基因的纯合与许多不同类型的药物依赖(可卡因，安非他明，大麻)，与致幻觉剂、吸入物、海洛因、安非他明、可卡因以及巴比妥酸使用的年限，与静脉药物使用和药物过量，以及与药物滥用相关的法律问题(毒品指控、毒品定罪、驾车违章和武器、攻击及故意破坏行为指控)有明显的相关性。相比之下，与和酒精依赖有关的变量没有明显的相关性。这可能是由于对照和/或严重酒精中毒的鉴定不足，特别是对于完全的RDS表型。然而，这些结果与说明大麻酯受体在报偿路径和调整多巴胺代谢中起作用的研究是一致的。 本发明鉴定了脑电活动图(BEAM)异常和与DRD2基因型相关性之间的明显关系。发明者相信这作为诊断遗传诱导的RDS行为倾向的重要验证试验具有商业价值。建议涉及上述人多巴胺受体基因A1等位基因和大麻酯受体基因(CNR1)检测的方法伴随标准的脑图(即Nicolett(TN))。 此外，加权的线性趋势揭示了与DRD2A2基因型和大麻SUD相比，DRD2A1等位基因存在下事件关联电位明显的恶化效果(p＜0.0001)。Duncan’s Range检验说明与DRD2A2对照相比，带或不带DRD2A1等位基因的SUD明显地恶化了EP’S。这些结果表明DRD2A1等位基因在涉及脑功能和潜在成瘾倾向的非行为性病理生理表型中的作用。 5-羟色胺基因。5-羟色胺代谢的缺陷，以及血液5-羟色胺和色氨酸水平异常，已经在许多精神病学障碍中有报道。5-羟色胺2，3-二氧化酶(TDO2)是分解5-羟色胺为N-甲酰基犬尿氨酸的限速酶。发明者试图确定5-羟色胺HTR1A基因的遗传变体是否与TS或其共生行为的表型表达相关。在较少见等位基因(更短的和更长的等位基因)与ADHD、CD、违抗障碍(ODD)、抽动、性和其他行为评分间有明显的相关性。对这些评分的贡献是少量的，只引起2-4％的变异。HTR1A和DRD2基因的效果是加和性的，共同引起ADHD、CD和ODD评分5.1％到5.4％的变异。这些结果与这些是多基因障碍的提法是一致的，部分是由于影响5-羟色胺和多巴胺代谢的基因变体的几率会聚，以及环境因素。重复序列本身可能在多基因遗传中重要的功能性等位多态性变体的产生中起作用。 运用“Axis II人格障碍结构会面”和“成瘾严重性指数”(ASI)以及“Buss-Durkey敌意量表”(BHDS)对5HT-2受体基因的T/C多态性的可能相关性作了评估。病人样本中，22基因型与边界人格障碍(p＜0.05)和抑郁(p＜0.05)相关。这个标记在ASI中与花费在药物上的钱的数量(p＜0.05)和强奸史(p＜0.05)以及入店行窃/对艺术的破坏(p＜0.05)相关。在BHDS中，男子对照中22基因型与袭击(p＜0.01)和非直接敌意(p＜0.05)分量表升高的评分相关。在女子对照中，5HT-2R基因与非直接敌意(p＜0.05)、抗拒症(p＜0.05)、口头敌意(p＜0.005)和负疚感(p＜0.05)、以及总的敌意评分(p＜0.01)是相关的，但相关的极性现象被逆转了(在所有评分中11基因型与更高值相关)。基因型相关性的性别逆转表明它是与性激素相互作用的复杂基因。 雌激素受体、芳香族酶位点和精氨酸加压素基因以及品行障碍。由于雌激素受体基因敲除小鼠表现进攻性行为(Ogawa等人，1996)，对该基因二核苷酸重复的研究可能与品行障碍有关。两个另外的相关基因是在芳香族酶(CYP19)位点(Polymeropoulos等人，1991)和精胺酸加压素(AVP)基因(Summar，1992)。 尼古丁(烟碱)受体基因。额叶前部皮质的尼古丁受体参与延迟的反应任务，蕈毒碱受体更多的参与在总体工作记忆中(Granon等人，1995)。许多研究已经表明了在尼古丁和多巴胺之间的紧密相互作用。在与别的成瘾药物一起时，尼古丁与其他成瘾性药物一样能引起中间边缘和伏核神经元多巴胺释放的增加(Dichiara和Imperato，1988；Corrigall等人，1994；Pontiefi等人，1996)和强烈的自我服药(Corrigall和Coen，1989；Corrigall和Coen，1991)。然而耐药量随着重复服药迅速增加(Lapin等人，1989)。尼古丁抑制多巴胺的摄入不象大部分的多巴胺摄入抑制剂那样，它只有50％的抑制(Irenwasser等人，1991)。对多巴胺摄入抑制剂以及尼古丁受体激动剂和抑制剂的研究表明对多巴胺摄入的影响是通过烟碱乙酰胆碱受体介导的(Irenwasser等人，1991)。 神经元一氧化氮合成酶(NOS)基因。一氧化氮合成酶基因最近发现与小鼠的攻击性行为有关。相对于非ob/ob的同窝小鼠，对ob/ob小鼠的研究说明了一氧化氮合成酶水平的增加。对NOS基因敲除小鼠的研究使一氧化氮在攻击以及性行为中的作用更加突出。ob/ob小鼠在脑室旁核与外侧下丘脑有明显的去甲肾上腺素水平增加并在弓型漏斗有明显的多巴胺水平下降(Oltman，1983)。 检查了神经元一氧化氮合成酶基因(nNOS1a)二核苷酸重复多态性的相关性。对67个男性非西班牙白人物质滥用者和68个年龄种族相符的对照的敌视程度、诊断特征以及人格性状进行了评估。病人样本用AXIS-II人格障碍结构会面、成瘾严重性指数(ASI)以及Cloniger脾气和性格调查(TCI)进行评估。病人和对照的等位基因分布勉强不同(p＝0.056)，有高分子量等位基因纯合的病人。在AXIS-II会面中，高分子量等位基因纯合的病人更经常符合精神分裂症(p＜0.05)和边界(p＜0.05)人格障碍的诊断标准。在ASI中，该基因型与下列评分的增加相关：在过去的30天里表现过暴力行为(p＜0.005)，伪造史(p＜0.05)，盗窃史(p＜0.005)，在过去的30天里使用酒精(p＜0.005)，吸入物使用年限(p＜0.0075)，药物解毒(detoxes)次数(p＜0.05)，在上个月经历酒精(p＜0.005)和药物(p＜0.005)问题的天数。该基因型也与具有更少数量的朋友相关(p＜0.04)，与它们的朋友具有更少的友情相关(p＜0.0005)，与结婚次数更多相关(p＜0.05)。在TCI中，该基因型与下列相关：冲动增加(p＜0.01)，依恋评分降低(p＜0.05)，依赖(p＜0.02)，报偿依赖(p＜0.05)。目的性(p＜0.01)，自我指导(p＜0.05)，感情移入(p＜0.05)，帮助(p＜0.02)，真诚的良心(p＜0.02)，以及协同(p＜0.05)。 单胺氧化酶基因(MAO)。MAO是负责脑突触神经递质降解的一个主要的酶。能够通过使用抑制MAO活性的药物来获得情绪和其他行为的明显改善。许多研究已表明了MAO水平与下列关联：酒精中毒(Wiberg等人，1977；Gottfries等人，1975；Devor等人，1994；09)；精神分裂症(Wyatt等人，1979)；抑郁(Sherif等人，1991；Pandey等人，1992)；躁狂抑郁障碍(Pandey等人，1980)；自杀(Gottfries等人，1975；Sherif等人，1991；Buchsbaum等人，1976；Buchsbaum等人，1977；Meltzer和Arora，1986)；ADHD，又名ADDH(Skekim等人，1982)；以及冒险，寻求感觉或外在化的人格性状(Vonknorring等人，1991；Buchsbaum等人，1976；Schooler等人，1978；Skekim等人，1989；Vonknorring等人，1984)。然而另外的研究却没能够发现与这些性状中的一个或多个的相关(Mann和Stanley，1984；Propping等人，1981；Tabakoff等人，1988)。运用酶水平(Wiberg等人，1977；Gottfries等人，1975；Devor等人，1994；Vonknorring等人，1991)和遗传学变异(Vanyukov等人，1993)的以前的研究显示了MAOA基因在物质滥用中的作用。 除了多巴胺能系统和大麻酯受体以外，已证明单胺氧化酶(MAO)也在RDS中起显著的作用。本发明也提供了单胺氧化酶基因在抽动-秽语综合症中的首次关联。X染色体连锁的MAOA或MAOB等位基因的遗传缺陷可解释ADHA、TS及有关障碍在男性中的突出。三个重复多态性的等位基因，MAOA的两个及MAOB基因的一个，在351个Ts病人、亲属和对照中作了评估。每个受试者都完成了一张结构性调查表，对与行为、学习和学校问题有关的23个不同数量性状进行评价。MAOVNTR和MAOB多态性的较长碱基对等位基因和MAO CA-1多态性的较短碱基对等位基因有显著的趋势与ADHD、口吃、躁狂、抑郁、品行和学习问题的高评分相关。最显著的结果是MAOA基因的CA-1重复对于ADHD(p＝0.005)、重性抑郁(p＝0.005)和口吃(p＝0.007)。而七种行为的回归系数是显著的＜0.01，性连锁的MAOA基因的R2或变异的百分比对一系列行为有贡献，涉及的程度不足以解释TS、ADHD或CD的男性突出的程度。结果与TS系列障碍的多基因遗传机理以及小卫星本身可能在基因调节中起作用的假设是相一致的。 肥胖中的OB、人第2染色体、解偶联蛋白2及APO-D基因。群体研究表明女性比男性有更高程度的肥胖遗传负担，并存在这样的可能：遗传学因素在年轻人中比在大于50岁的老年人更有可能参与肥胖，在大于50岁的老年人中肥胖的发生率增加，占人群的很大比例，并且获得性因素如更长的静坐生活方式可能更重要(Stunkard等人，1986)。 涉及肥胖的一个重要蛋白产物是血清蛋白瘦素。它的合成由OB基因控制并被认为在身体脂肪的调节方面起作用(Maffei等人，1995)。已发现人体瘦素水平与个人的总肥胖性高度关联(Considine等人，1996)。微卫星多态性，D2S1788，被发现位于由lod评分显示与血清瘦素明显连锁的染色体22p21上(Comuzzie等人，1997)。该基因座造成了47％的血清瘦素水平变异，并含有几个肥胖候选基因，包括葡萄糖激酶调节蛋白(GCKR)和阿片皮质素原(POMC)(Comuzzie等人，1997)。关于POMC基因的一个潜在的机理是它是促肾上腺皮质激素(ACTH)的前体，促肾上腺皮质激素作用于肾上腺皮质导致糖皮质激素的产生。然而有可能推论出POMC基因也作为阿片肽的前体起作用。 名为解偶联蛋白(UCP1)的线粒体蛋白在产热和转变热量方面起重要作用(Nicholls和Locke，1984)。该路径与体温、躯体组成和葡萄糖代谢有关(Himms-Hagen，1990)。然而含有UCP1的褐色脂肪组织并不参与居住于热中性环境的人类体重调节。UCP-2，与UCP-1有59％的氨基酸相同，具有与在糖尿病和肥胖中的作用相一致的特性(Fleury等人，REFERENCE)。当在酵母获得表达时，UCP-2对线粒体膜电位比UCP-1有着更强的作用。UCP-2广泛表达于成年人体组织中，包括在巨噬细胞丰富的组织中，并对脂肪食用反应而在白色脂肪中被上调。 本发明结合了对所有这些具有许多不同生理学机理的肥胖基因的多基因分析。这些区别可能考虑到累加性效应而不是协同作用，导致更精确的基于DNA的预诊断试验。在一个样本中结合DRD2、OB、第2染色体、UCP-2和APO-D基因是优选的实施方案，而不是使用任何单个的基因。另外，发明确定病态肥胖的先证者不是根据BMI，而是根据身体脂肪的百分比决定：女性34％，男性28％。 SUD的多基因方法。评估同组受试者的许多不同基因的等位基因的独特优点是每个基因的相对效应能够通过不同的数量变量进行比较。另外，基因型的鉴定给环境作用的分析更大的精致性和精确性，因为基因的效应能够与环境的原因分离。 Moos’家庭环境量表(FES)的十个量表的评分被用作受检测者童年和成年阶段家庭环境的指标。运用SPSS(SPSS，Inc)的“相关性和部分相关性软件”分析数据。 对每种药物变量的分析开始于运用作为预报指标的七个基因座的标记基因型进行的逐步回归分析。把变量代入乘积方程时要求p值低于0.05。每次回归分析后，排除与最小可预见性基因相关的变量。结果在表1中，显示了不同基因和环境因素的相应相关系数。 表1对不同药物和酒精滥用变量，特定基因型预测效应的逐步多元回归分析 步骤4.第四步是鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。这些可能是单碱基对限制性片段长度多态性(RFLPs)，或二核苷酸、三核苷酸或其他重复多态性，如可变的串联重复，或基因座的任何其他标记。除了本文公开的多态性以外，如先前在上文中关于鉴定候选基因的方法的描述，这种多态性和检测方法可以很容易地在以前发表或未发表的工作中得到。此外，如果怀疑一个基因在目的多基因性状中起作用，但是在查阅文献和遗传数据库后目前没有可在MAA技术中应用的多态性，就可以采用遗传学分析以确定可以应用于MAA技术的基因的多态性。除了本文描述的技术以外，这种分析在文献中常常运用和描述。依照具体条件，可以运用精确检测基因组DNA、cDNA或RNA样本中之突变的筛选法。 本发明涉及RDS疾病的检测、诊断、预后和治疗，以及运用MAA技术对多基因性状的检测、诊断、预后和治疗。还公开了对多基因性状起累加性或减性作用的等位基因标记，其呈从个体中分离出来的核酸序列形式，和鉴定及检测用于MAA分析的新标记的方法。这些标记是所分析多基因性状的指标，也是一个个体呈现特定性状潜在可能性的诊断指标。 本领域技术人员将认识到本文中公开的核酸序列、及在公共数据库中可得到的(例如在国家生物技术信息中心发现的)、从发表的科学文献可得到的核酸序列都可以在MAA技术中应用，这样它们将用于RDS或别的多基因性状的检测、诊断、预后和治疗的许多应用中。在本发明范围内这些应用的实例包括，运用特异的引物扩增多基因性状的一个或多个标记，检测多基因性状的标记，如用寡核苷酸或核酸探针进行杂交，将分离的核酸插入载体中，来自于载体的RNA进行表达。 检验行为障碍和其他多基因性状的多个基因是可行的而且并不需要新的技术。涉及的多态性和变体有两种类型，1)单个碱基变化引起限制性片段长度多态性(RFLP)，和2)短的串联重复多态性(STR)[特别是二和三核苷酸重复]。对这些进行大量检验的方法每种类型各不相同。 RELP.Applied Biosystem(应用生物系统)，Perkin-Elmer公司的一个分部，已经发展了一种新的技术和仪器，用于进行单个碱基RFLP类型遗传多态性的PCRTM快速检测。该仪器，即应用生物系统Prism 7200序列检测系统(TaqMan)可以进行多基因检测。该方法运用标准引物电泳含限制性内切酶多态性位点的DNA部分。该技术的独特方面是设计两个短的寡核苷酸引物，一个与等位基因中的一个相配，另一个与另一等位基因相配。荧光染料连接到每个引物的一个末端，淬灭性染料连接到另一端。如果引物配合正确，当DNA聚合酶到达寡核苷酸引物位置时，聚合酶通过的同时引物会被降解为核苷酸。淬灭剂和染料的释放发出最强的荧光。然而，如果寡核苷酸引物不相配，它会从位点上脱落并且淬灭持续而不是核酸酶降解。对板的双波长阅读可以区别11、12、22基因型。阅读96个样品结果的全过程需要时间低于15分钟，结果被输入计算机进行分析和保存。该技术，在计算机化的工作站帮助下建立的PCRTM反应，可以在一天里检测数百个不同的RFLP。 STR.用与上文中应用的同样工作站建立STR的PCRTM反应。区别是STR引物本身是由不同的荧光染料标记的。可以对样品标记第二种染料的应用生物系统373DNA测序仪可以精确地鉴定只有两个碱基区别的等位基因。每一个都通过在不同的波长进行激光扫描来检测。例如，一条PCRTM引物由荧光HEX Amidite(应用生物系统，Foster城，CA)或别的荧光染料标记。2μl 10倍稀释的PCRTM产物中加入2.5μl去离子甲酰胺和0.5μl的ROX 500标准，92℃变性2分钟，然后加入到AB 373 DNA测序仪的6％的变性聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在恒定的25W下电泳5小时。应用每一泳道的内部ROX 500标准对凝胶进行激光扫描和分析。由Genotyper(1.1版本)基于碱基对长度决定的彩色片段对峰值进行识别。 历史上，许多不同的方法用于检测点突变，包括变性梯度凝胶电泳(“DGGE”)，限制酶多态性分析，化学和酶切方法，及其它方法。目前应用的更普通的方法包括直接对PCRTM扩增的目的片段测序(见下文)和单链构象多态性分析(“SSCP”)。 另一筛选点突变的方法是基于RNA酶对RNA/DNA和RNA/RNA异二聚体错配碱基对的酶切。在本文中运用的时候，词汇“错配”定义为双链RNA/RNA、RNA/DNA或DNA/DNA分子中一个或多个不配对或错误配对的核苷酸。这样该定义包括由插入/缺失突变，以及单个和多个碱基点突变引起的错配。 美国专利No.4,946,773描述了一种RNA酶A错配的酶切分析，包括单链DNA或RNA试验样品与RNA探针退火，以及随后用RNA酶A对核酸二聚体进行处理。在RNA酶的酶切反应后，RNA酶通过蛋白水解作用降解和有机提取而失活，酶切产物加热变性并在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分析。根据分子大小电泳分离的RNA酶A处理过的单链产物，与相同处理的对照二聚体相比较以检测错配。含有对照中没有的更小片段(酶切产物)的样品为阳性。 目前可用的RNA酶错配酶切分析，包括那些根据美国专利No.4,946,773实施的分析，需要运用放射性标记的RNA探针。Myers和Maniatis在美国专利No.4,946,773描述了用RNA酶A对碱基对错配的检测。别的研究者已经描述了一种大肠杆菌酶(RNA酶I)在错配分析中的应用。由于RNA酶I比RNA酶A有更宽的酶切特异性，如果能发现减低非特异性酶切增加对错配的酶切的成分，RNA酶I是应用于碱基对错配检测理想的酶。用于错配检测的RNA酶I在Promega Biotech的文献中有描述。Promega在市场上出售一种含RNA酶I的试剂盒，它们的文献表明，如果该酶的水平够高的话，它能够酶切四个已知的错配中的三个。 RNA酶保护分析首次应用于检测和显示溶液中特异mRNA的末端。该分析依赖于能容易地通过体外转录产生与目的mRNA互补的高比活性的放射性标记RNA探针。最初，体外转录的摸板是含有噬菌体启动子的重组质粒。探针与总细胞RNA混合以杂交它们互补的片段，然后用RNA酶处理来分解过剩的未杂交的RNA探针。同样的，与最初预期的一样，使用的RNA酶是对单链RNA特异的，因此已杂交的双链探针可以受到保护而不降解。在RNA酶灭活除掉以后，回收保护的探针(在数量上与目的mRNA的数量成比例)并在聚丙烯酰胺凝胶上分析。 RNA酶保护分析也适合单个碱基突变的检测。在该类型的RNA酶A错配酶切分析中，野生型序列体外转录得到的放射标记的RNA探针与来自于检验样品的互补靶片段杂交。虽然偶尔会用到靶RNA(内源性mRNA)，但检测的目标通常包含DNA(既有基因组DNA也有通过在质粒上克隆扩增的DNA或PCRTM扩增的DNA)。如果在杂交的探针和把靶片段之间有单个核苷酸(或更多)序列上的不同，导致在该位置(“错配”)Watson-Crick氢键的断开，这能够被识别并且在一些情况下被单链特异性核糖核酸酶切开。迄今为止，RNA酶A几乎是唯一的用于单碱基错配酶切的酶，虽然RNA酶I最近也发现对错配的酶切有效。最近也有关于用MutS蛋白和别的DNA修复酶检测单碱基错配的报道。检测核酸和突变的另一些方法在本文中描述。 核酸.如同本文中描述的，本发明的一个方面是29个已知的基因，它们的等位基因多态性是多基因性状的标志，包括象ADHD、违抗障碍、品行障碍、学习障碍、酒精、胆固醇和LDL这样的多基因性状的标志。 在一具体的实施方案中，本文中揭示的核酸序列将可作为杂交探针或扩增引物。例如，这些核酸可能用于组织样品的诊断评估，或克隆与之相应的全长cDNA或基因组克隆。在特定的实施方案中，这些探针和引物为寡核苷酸片段。这些片段应该足够长以用于对RNA或DNA组织样品进行特异的杂交。典型的序列将是10-20个核苷酸，但也可能更长。更长的序列，如40，50，100，500，直至全长对特定的实施方案是更好的选择。 选自任何可用于本发明诊断和治疗方法的基因具有大约10，15，17，20，30，40，50，60，75或100或500个连续核苷酸的核酸分子都可以使用。与上述序列互补的分子以及在高度严格条件下结合这些序列的分子也是可以的。这些探针在许多杂交方案中是有用的，例如DNA分子杂交和RNA分子杂交。在一些例子中，探针可以用于与多个靶序列杂交而不影响它们有效诊断多基因性状的能力。 可以围绕所公开的核酸序列或者用作标记的多态性周围的序列设计各种探针和引物，只要是本文公开的基因或者后来加入到本文描述的29个基因这一组中的基因。预期可以用另外的基因创立新的组群用于评估不同多基因性状，在MAA技术中使用任何另外的基因或优选地基因多态性也是本发明的一部分。引物可以是任何长度的，典型的是长10-20个碱基。通过设定序列的数值，例如，第一个残基为1，第二个为2，等等，可以定义所有引物的算法为：n到n+yn是从1到序列的最后数字的整数，y是引物的长度减去一(9到19)，n+y不能超过序列的最后数字。因此，对于10碱基的，探针相对于碱基1到10，2到11，3到12…等等。对于15碱基的，探针相对于碱基1到15，2到16，3到17…等等。对于20碱基的，探针相对于碱基1到20，2到21，3到22…等等。 在某些的实施方案中，希望运用多个探针用于单个样品的杂交。运用长度为14到100个核苷酸的探针可以形成稳定的选择性的双链分子。互补序列的长度超过20个碱基的分子通常是优选的，以便增加杂交的稳定性和选择性，并且因此提高获得的特殊杂交分子的质量和程度。人们通常更喜欢设计20到30个核苷酸的核酸分子，或者在需要的时候更长。这种片段很容易的制备，例如直接由化学方法合成或者将选择的序列插入重组质粒中进行重组生产。 相应地，本发明的核酸序列可以根据它们的性质用于选择性地与基因或RNA的互补部分形成双链分子或者提供扩增组织来源的DNA或RNA的引物。依照预期的用法，将应用不同的杂交条件以获得探针对靶序列不同程度的选择性。 当需要较高的选择性时，可以采取相对严格的条件，即选择相对低的盐和/或高的温度条件，例如从约50℃到70℃同时约0.02M到约0.10M的NaCl。这样的高度严格条件几乎不允许(如果有的话)在探针与摸板或目的链之间的错配，并特别适合分离特异的基因或检测特异的mRNA转录。通常认为，条件可以通过加入增加数量的甲酰胺而控制得更为严格。 对于特定的用法，例如，通过定位突变进行氨基酸替换，认为需要较低程度的严格条件。在这些条件下，即使探针序列与靶链并非正确地互补，杂交也可以发生，但是在一个或多个位点错配。通过增加盐浓度和降低温度可以使条件更不严格。例如，中等程度的严格条件可以是从约37℃到55℃的温度同时约0.1M到约0.25M的NaCl，而较低程度的严格条件可以是温度从约20℃到55℃之间变化同时约0.15M到约0.9M的盐。因此，杂交条件可以很容易地控制，并且通常是依照想要的结果进行选择的。 在另外的实施方案中，杂交可以在如下条件中得到：50mMTris-HCl(pH 8.3)，75mM KCl，3mM MgCl2，10mM二硫苏糖醇，在大约20℃到约37℃的温度条件下。运用的另一杂交条件将包括大约10mM Tris-HCl(pH 8.3)，50mM KCl，1.5μM MgCl2，在从大约20℃到约37℃变化的温度条件下。 在某些实施方案中，本发明的核酸序列最好结合适当的工具来使用，比如检测杂交的标记物。许多适当的指示工具在文献中是已知的，包括荧光、放射性、酶、或者别的配基如亲合素/生物素，它们能够被检测到。在优选的实施方案中，可以使用荧光标记或酶标记如尿素酶、碱性磷酸酶或过氧化物酶代替放射性或别的对环境不利的试剂。在应用酶标记时，比色指示底物是已知的，能够用来提供人眼可见的或分光光度计可观测的检测方法，以鉴定与含互补核酸的样品的特异杂交。 总体上，可预期本文描述的杂交探针既可以用作液体杂交的试剂，如在PCRTM中检测相应基因的表达，也可以用于使用固相的方案中。在涉及固相的方案中，试验DNA(RNA)被吸附或固定于选择的基质或表面上。固定的单链核酸然后与所选的探针在要求的条件下进行杂交。条件的选择依照特定的情况基于所需要的特定标准(例如，依照G+C的含量，靶核酸的类型，核酸的来源，杂交探针的大小，等等)。在对杂交表面洗涤除去非特异性结合的探针分子后，通过标记检测杂交，甚至定量。 扩增和PCRTM。扩增用的核酸模板根据标准的方法学从生物学样品的细胞中分离(Sambrook等人，1989)。核酸可以是基因组DNA或一小部分或全部细胞RNA。当使用RNA时，可能希望将RNA转变为互补DNA。在一实施方案中，RNA是全部细胞RNA并直接用作扩增的模板。 与多基因性状中的基因相应的核酸选择性杂交的成对引物在选择性杂交的条件下与分离的核酸接触。在本文中定义的词“引物”意味着能够以模板依赖的方式启动新生核酸合成的任何核酸。典型地，引物是长十到二十或三十个碱基对的寡核苷酸，但是更长的序列也可以应用。引物可以是双链或单链的形式，虽然单链的形式更好。 一旦杂交以后，核酸-引物复合体与一种或多种酶接触以利于模板依赖的核酸合成。进行多轮的扩增，也被称作循环，直到产生足够数量的扩增产物。 下一步是扩增产物的检测。在特定的用法中，检测可以是肉眼可见的方式。另外，检测可以是产物的非直接鉴定，通过化学发光、所掺入的放射性标记的放射性闪烁或荧光标记或者运用电子或热脉冲信号的系统(Affymax技术)。 许多模板依赖的方法可以用于扩增一定样品中的标志序列。最为人们所知的方法之一是聚合酶链式反应(称为PCRTM)，它在美国专利No.4,683,195，4,683,202和4,800,159中有详细描述，每一个都整体引入本文作为参考。 简单来说，在PCRTM中，制备两条引物，与标志序列两个反向互补链的区域互补。在反应混合物中加入过量的三磷酸脱氧核糖核酸核、DNA聚合酶如Taq聚合酶。如果样品中有标志序列，引物将结合到标志上，聚合酶通过加上新的核苷酸沿着标志序列延伸引物。通过提高或降低反应混合物的温度，延伸的引物将从标志上分离以形成新的反应产物，过量的引物将结合到标志上和反应产物上，该过程得以重复。 反转录酶PCRTM扩增方法用于对扩增的mRNA的数量进行定量。反转录RNA到cDNA的方法是众所周知的并在Sambrook等人，1989中有描述。反转录的替代方法利用热稳定的RNA依赖性的DNA聚合酶。这些方法在WO90/07641中有描述，1990年12月21日申请，引入本文作为参考。聚合酶链式反应方法学在文献中是众所周知的。 扩增的另一方法是连接酶链式反应(“LCR”)，其在EPA No.320 308中公开，后者全文引入本文作为参考。在LCR中，制备两个互补的探针对，在有靶序列的时候，每对将结合到目标的反向互补链上，因此它们互相毗邻。在有连接酶时，两个探针对将连接形成单一的单位。通过温度的循环，象在PCRTM中一样，紧密连接的单位从靶序列上分离然后作为“靶序列”用于过量探针对的连接。美国专利4,883,750描述了与LCR相似的结合探针对到靶序列的方法。 在PCT申请No.PCT/US87/00880(引入本文作为参考)中描述的Qbeta复制酶也可以用作本发明中的另一扩增方法。在该方法中，靶序列有互补区的复制性RNA序列在有RNA聚合酶的情况下加入到样品中。聚合酶将复制该复制性序列，其随后被检测。 一种恒温的扩增方法，其中限制性内切酶和连接酶用于扩增在限制性位点的一条链上含有核苷酸5’-[α-硫]-三磷酸的靶分子，也可以用于本发明中的核酸扩增。 链置换扩增(SDA)是另一恒温扩增核酸的方法，它包括多个循环的链置换与合成，即缺口平移。一个相似的方法，叫做修复链反应(RCR)，包括数条探针在用于扩增的区域中退火，然后是修复反应，其中四个碱基只出现两个。另外两个碱基可作为生物素衍生物加入以便于检测。相似的方法在SDA中运用。目的特异性序列也可以用循环探针反应(CPR)检测。在CPR中，具有非特异DNA的3’和5’序列和特异RNA的中间序列的探针与样品中的DNA杂交。杂交后，反应物用RNA酶H处理，作为区别性产物的探针产物在酶切后释放。最初的模板与另一循环探针退火并重复该反应。 还有另外的扩增方法在GB申请NO.2 202 328和在PCT申请No.PCT/US89/01025中得以描述，每一文献都引入本文作为参考，它们也可以用于本发明。在前一个申请中，“修饰的”引物可以用于PCRTM样、模板和酶依赖的合成。引物可以通过俘获基团(如生物素)和/或检测基团(如酶)标记进行修饰。在后一申请中，样品中加入过量的标记探针。在存在靶序列时，探针结合并被催化分解。在分解以后，靶序列得以完整释放并被过量的探针结合。标记探针的分解指示靶序列的存在。 另外的核酸扩增方法包括基于转录的扩增系统(TAS)，它包括基于核酸序列的扩增(NASBA)和3SR(Gingeras等人，PCT申请WO88/10315，全文引入本文作为参考)。在NASBA中，可以通过标准的酚/氯仿抽提、临床样品的热变性、用裂解缓冲液和微量离心柱处理以分离DNA和RNA或经盐酸胍提取RNA制备核酸用于扩增。这些扩增技术包括含有靶特异序列引物的退火。聚合作用后，DNA/RNA杂合体被RNA酶H分解，同时双链DNA分子再次热变性。在每种情况中，单链DNA通过第二个靶特异引物的加入而成为完全的双链，然后进行聚合作用。双链DNA分子随后经由RNA聚合酶如T7或SP6被多倍转录。在恒温循环反应中，RNA被反转录为单链DNA，然后转变为双链DNA，随后在如T7或SP6这样的RNA聚合酶的作用下多次转录。得到的产物，不管是不完全的还是完全的，都显示了靶特异性序列。 Davey等人，EPA No.329 822(全文引入本文作为参考)公开了一种核酸扩增方法，包括循环性地合成单链RNA(”ssRNA”)、ssDNA和双链DNA(dsDNA)，该方法可用于本发明。ssRNA是第一条寡核苷酸引物的模板，它可以由反转录酶(RNA依赖的DNA聚合酶)延长。然后RNA通过RNA酶H(RNA酶H，特异针对RNA与DNA或RNA形成的双链)的作用从形成的DNA：RNA双链中除去。得到的ssDNA是第二条引物的模板，它包括与模板同源序列5’的RNA聚合酶启动子(例如T7RNA聚合酶)的序列。该引物在DNA聚合酶(例如大肠杆菌聚合酶I的大“Klenow”片段)的作用下延伸，产生了双链DNA(”dsDNA”)分子，其具有与两条引物之间的最初RNA相同的序列，另外在一端有启动子序列。通过适当的RNA聚合酶，该启动子可以用于制备DNA的许多RNA拷贝。这些拷贝可以重新进入循环进行快速的扩增。选择适当的酶，该扩增可以在恒温下进行而无需在每个循环加酶。由于该方法的循环特点，开始的序列既可以是DNA也可以是RNA。 Miller等人，PCT申情WO89/06700(全文引入本文作为参考)发现一种核酸扩增方案，其基于启动子/引物序列与目的单链DNA(”ssDNA”)的杂交，随后转录该序列的许多RNA拷贝。该方案不是循环性的，即并不从得到的RNA转录体中产生新的模板。别的扩增方法包括“RACE”和“单向PCRTM”(Frohman，1990，引入本文作为参考)。 基于在含有产生的“二-寡核苷酸”序列的核酸存在时两段(或更多)寡核苷酸连接，并从而扩增该二-寡核苷酸的方法，也可以用于本发明的扩增步骤中。 在任何扩增以后，都应该将扩增产物从模板和过量的引物中分离出来以评估是否发生了特异的扩增。在一实施方案中，扩增产物用标准的方法通过琼脂糖、琼脂糖-丙烯酰胺或聚丙烯酰胺进行分离(Sambrook等人，1989)。 另外，层析技术也可以用来进行分离。有许多种层析法可以用于本发明：吸附、分配、离子交换和分子筛，以及许多专门化的技术包括柱、纸、薄层和气相层析。 扩增的产物必须进行显色以断定标志序列的扩增。一个典型的显色方法包括用溴化乙锭对胶进行染色并在紫外线下观察。另外，如果扩增产物用放射性或荧光标记的核苷酸完整地标记，扩增产物可以暴光X光片或者分离后在适当的激发光下观察。 在一实施方案中可以间接的显色。扩增产物分离后，标记的核酸探针与扩增的标志序列接触。探针优选与发色团结合但也可以进行放射性标记。在另一实施方案中，探针与结合伴侣连接，如抗体或生物素，结合对的另一成员带有可检测基团。 在一实施方案中，检测是通过DNA分子杂交和与标记探针的杂交进行的。DNA分子杂交的技术对本领域技术人员来说是众所周知的，可以在许多标准的分子操作工具书中找到。见Sambrook等人，1989。扩增产物可以通过凝胶电泳简单地分离。然后凝胶与膜接触，如硝酸纤维素膜，进行核酸的转移和非共价结合。随后膜与连有发色团的并能与目的扩增产物杂交的探针孵育。通过用膜暴光X光片或用离子发射检测装置进行检测。 前述方法的一个实施方案在美国专利No.5,279,721中进行了描述(将其引入本文作为参考)，它公开了一种自动化的核酸电泳与转移装置及方法。该装置无需外部对凝胶的操作就可进行电泳和杂交，它是本发明理想的实施方法。 检测生物学样品中一个或多个多基因性状之基因标志必需的所有物质和试剂，可以一起装配在一个试剂盒中。这通常包括预先选好的特异性标志的引物。还可以包括适于扩增核酸的不同聚合酶(RT，Taq，等等)、脱氧核糖核酸和缓冲液，以提供扩增必需的反应体系。 这种试剂盒一般以适当的方式包含盛有每种试剂和酶及每种标志的引物对的不同容器。扩增核酸的优选引物对被选出来用于扩增在下文中列出的序列：SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ IDNO：8，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11，SEQ IDNO：12，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ IDNO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19，SEQ IDNO：20，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ IDNO：24，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27，SEQ IDNO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31，SEQ IDNO：32，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。 在另一实施方案中，这种试剂盒包含涉及多基因性状之基因的特异杂交探针，相应于下文种列出的序列：SEQ ID NO：1，SEQ IDNO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ IDNO：l1，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ IDNO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18，SEQ IDNO：19，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：22，SEQ IDNO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ IDNO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ IDNO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。发明者预期已知能与多态性等位基因有效杂交的任何引物可以用于该试剂盒，怀疑该多态性等位基因在本发明方法中有诊断意义，特别是在MAA技术中。这种试剂盒通常以适当的方式包含盛有每种试剂和酶以及每种标志杂交所用探针的不同容器。 编码特异基因的DNA片段可以导入重组宿主细胞中用以表达特定结构蛋白或调节蛋白。另外，通过应用遗传工程技术，所选基因的部分或衍生物也可以应用。包含调节区域如启动子区的上游区域可以被分离并用于表达所选的基因。 应当理解，本发明并非仅限于本文中公开的具体探针，特别预期至少包括与所公开序列杂交的核酸序列或者这些序列的功能性相似序列。例如，一段不完全的序列可以用于鉴定结构相关的基因或其来源全长基因组DNA或cDNA克隆。本领域技术人员清楚建立可以用作上述探针之目标的cDNA和基因组文库的方法(Sambrook等人，1989)。 对于本发明核酸片段插入载体如质粒、粘粒或病毒中的应用，这些片段可以与别的DNA序列结合，例如启动子、多聚腺苷酸信号、限制性酶切位点、多克隆位点、别的编码序列以及相似的序列，这样它们的全长可以有相当大的变化。预期几乎任何长度的核酸片段都可以应用，但为了制备和DNA重组操作中的使用简单，全长优选受到限制。 在一个DNA样品中检测多个基因的新方法学 由于预计许多基因和它们的多态性位点需要用于诊断RDS和相关行为，发明者提出了多基因筛选的方法(GENESCREENTM)。这可能用到新的DNA技术，如Affymetrix发展的基因芯片。概括地说，就是用光敏化合物包被玻璃嵌片。这些化学物质含有防止DNA碱基与芯片以及互相之间结合的光敏保护基团。然而当光线照射这些化学物质时，保护基团被灭活并发生化学结合反应。通过使用可以让光线照射芯片的特定区域而不是其它区域的“面罩”，DNA碱基可以结合到芯片的所选区域。加入的每个新的碱基都有结合的保护基团，因此该方法可以重复地将一个碱基连接到另一个上。用该方法，大量的不同序列DNA探针可以在一个1/2英寸的芯片上同时合成。 构建任何一组长20个DNA碱基的400,000条探针只需要80个化学步骤。在适当的时间里利用传统的DNA合成仪合成不同的序列相同数目的探针是不可能的。这些仪器以连续的方式合成探针而不是以Affymetrix所用的大规模平行方式合成。在这种快速的DNA分析中，样品DNA首先用荧光标签标记然后加入到芯片上的探针阵列中。如果样品在芯片上找到互补的探针，它将结合上去。如果没有互补链，它将从芯片上洗脱(有互补碱基的DNA片段是说它们是互补的：例如，片段ATTTGCGC(SEQ ID NO：1)将结合含有以下序列的互补片段TAAACGCG(SEQ ID NO：2))。每个探针的序列和位置是已知的，因此扫描仪能判断样品结合了哪一个探针。由于芯片上探针的序列是已知的，样品DNA的序列也就是已知的，因为它们的序列是互补的。使用基因芯片不需要将信使RNA转变为cDNA并能大量地检测信使RNA和cDNA。 然而，对于本发明中提议的分析，依赖于DNA仪器的其他方法可能足以进行商业化。例如，预期使用质谱法进行基因分型。作为使用基因芯片技术同时对许多基因分型的替代技术，Sequenom(SanDiego，CA)已经采用基质辅助的激光解吸附作用/离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF)进行单个碱基对和短的串联重复多态性的大量基因分型(Little等人，1997；Braun，Little，Koster，1997；Braun等人，1997)。它通过以下步骤完成。首先，用生物素标记引物中的一条，PCRTM扩增多态性区域(Jurinke等人，1997)。第二步，将扩增的DNA固定到链亲合素珠上(Jurinke等人，1997)。第三步，进行邻近多态性位点的一条引物的杂交(Braun，Little，Koster，1997)。第四步，在有dNTP和不以脱氧形式出现的ddNTP存在时，用DNA聚合酶延伸经过多态性位点。当依照序列合理设计时，这只能导致少量额外碱基的加入(Braun，Little，Koster，1997)。第五步，DNA然后进行加工以除去未使用的核苷酸和盐。第六步，通过变性将短的引物+多态性位点移走并利用电压移液管转移到硅胶上(O’Donnell等人，1997)。第七步，短的引物+多态性位点的质量通过延迟提取MALDI-TOF质谱法进行测定(Li等人，1996；Tang等人，1995)。序列中的单个碱基对和串联重复变异通过它们的质量很容易判断。这最后的步骤是很快的，每个分析只需5秒钟。所有这些步骤都是机器自动化的。该技术具有每天进行20,000个基因分型的潜力。 该技术是快速的极其精确的，并适用于任何多态性。相对于基因芯片技术，它的显著优点是它更精确，既能够鉴定单个碱基对也能够鉴定短的串联重复多态性，并以极小的花费在几秒钟内加入或除去检验的多态性。 多基因试剂盒-基因筛选试剂盒 根据本申请提出的不同基因，表2详细说明了基于GENECHIPTM概念的可能的基因障碍试剂盒。 表2障碍 基因酒精中毒 D1，D2，D4，DAT1，TDO2，nNOS1a药物滥用(包括静脉药物使用) D1，D2，D4，CNR1，GABAB3，TDO2，HT-2R，MAOA(X)，COMT，nNOS1a，DOMC，前内啡肽兴奋剂戒断抑郁 D2物质滥用障碍(SUD) D1，CNR1SUD亚类：酒精中毒 D2，GABAB3SUD亚类：多物质滥用 D4，HT-2RSUD亚类：静脉药物滥用 DAT1，MAOA(X)SUD亚类：兴奋剂戒断 COMT，nNoslaSUD亚类：兴奋剂戒断： TDO2抑郁严重性SUD亚类：酒精戒断 DAT1(9/9等位基因)强迫 D1，TDO2强迫亚类：病理性赌博 D1，D1，TDO2强迫亚类：性强迫肥胖 D2，OB，DAT1，APOD，UCP2，CHROME-2肥胖亚类：女性身体 APOD，CHROME-2脂肪(＞34％)肥胖亚类：男性身体 DAT1，OB脂肪(＞28％)肥胖亚类：BMI＞25肥胖亚类：碳水化合物暴食表2(续)障碍 基因注意力缺陷 5HT-转运蛋白注意力缺陷亚类：孤独症 D1，DAT1注意力缺陷亚类：抽动-秽语 D1，D2，TDO2，DβH，MAOA(X)，HTR1A综合症注意力缺陷亚类：ADHD HTR1A，D2，DAT1，DβH，TDO2注意力缺陷亚类：ADD MAOA(X)吸烟行为 D1，D2吸烟行为亚类：每天吸烟的包数吸烟行为亚类：开始吸烟行为亚类：吸烟年限吸烟行为亚类：复发人格障碍 DAT1，D2人格障碍亚类：病理性暴力 D2，DAT1，D4，CNR1人格障碍亚类：分裂样回避 D2，DAT1人格障碍亚类：P300 D2，CNR1人格障碍亚类：AER/VER D2人格障碍亚类：创伤后应激 D2人格障碍亚类：低新奇寻找 D2人格障碍亚类：高新奇寻找 D4人格障碍亚类：防卫型 D2发明者建议，为了安全地鉴定RDS的高风险人群，所有的这些基因必须检验。当发现别的基因时，期望对它们也进行检验。由于只有几个基因构成检验名单，检验的最初计划包括PCRTM技术。。当这些另外的基因发现时，期望它们也加入到GENECHIPTM(Affirmatrix，Santa Clara，CA)。 步骤5.第五步，基于说明哪种基因型与最高数量评分相关哪种基因型与最低数量评分相关的独立研究，给基因型确定一个评分。给基因确定评分是基于应用ANOVA，评估每种多态性中的每个基因型其平均Kellgren评分的高度。这些研究在一组受试者中进行，与MAA中的受试者无关。例如，对于多巴胺D2受体基因的Taq I A1/A2多态性，DRD2，所有研究已表明1等位基因与一系列冲动、强迫、成瘾行为相关，并且一些研究说明杂合基因型12，与最高评分相关，11和22基因型与最低评分相关。因此，通过运用Taq I A1/A2多态性，DRD2基因中基因型22或11的评分＝0，基因型12的评分＝2。如果独立研究表明22基因型与数量性状中的最低评分相关，12与数量性状中的中等评分相关，11与最高评分相关，评分应该是22＝0，12＝1和11＝2。 当应用二核苷酸和三核苷酸多态性时，即使有许多等位基因，也有可能将等位基因分为较短的和较长的等位基因。如果较长的等位基因与最大的表型效应相关，评分应该是SS＝0，SL＝1和LL＝2，其中S是较短的等位基因，L是较长的等基因。 步骤6.通过不断加入每个基因的评分，建立虚构的多基因或PG变量。例如，如果在实例1中第一个基因的评分是2，第二个基因的评分是1，则PG评分变量是3。1至n实例对于数量性状变量评分的相关系数r将通过回归分析进行评估。更优选的是运用off-the-self统计程序。变异的百分比是r2。然后，对于1至n实例，加入第三个基因的基因评分并重复该过程。绘出最终的结果。 步骤7.进行PG对QT或DV的单变量回归分析。下面是一个可以推广到任何数量性状或二歧变量的实例。在分析开始以前，基因评分的假设变量(PG)设定＝0。然后加入每个另外基因的评分，进行回归分析，加入第二个基因的评分，重复回归分析。继续该过程直到所有的检验基因都已加入。例如，PG最初设定为0。如果基因1的评分等于2，PG值则加上2，或PG＝PG+2。然后进行PG对QT或DV的回归。如果基因2的评分等于1，PG值则加上1，或PG＝PG+1。或者，如果基因2的评分等于2，PG值则加上2，或PG＝PG+2。在基因2的评分加入后，再次进行PG对PG对QT或DV的回归分析。 一个分析数据的优选方法是将所有的数据输入统计软件包如SPSS。利用在上面第五步中描述的DRD2基因的值，SPSS程序的句法文件将打开并建立下列示例算法。Compute PG＝0.If(DRD1 eq2)PG＝PG+2.If(DRD2 eq2)PG＝PG+2.If(DRD3 eq2)PG＝PG+2.If(DRD4 eq2)PG＝PG+2.If(DRD5 eq1)PG＝PG+1.If(DRD5 eq2)PG＝PG+2.If(DAT1 eq1)PG＝PG+1.If(DAT1 eq2)PG＝PG+2.回归变量＝ADHD PG/依赖＝ADHD/方法＝输入PGPG变量被设定为0。由于DRD1、DRD2、DRD3、DRD4基因被计为0或2分，如果受试者携带DRD1 DdeI 11基因型、和/或DRD2TaqI 12基因型、和/或DRD3 MscI 11或22基因型、和/或DRD446、47或77基因型，它们仅需要PG单线增长2分。相反，DRD5和DAT1基因被计为1或2分，它们就需要双线代码。当加入每个基因时，进行对PG计分对QTV(ADHD评分)的回归分析。 步骤8.绘制结果。结果被绘制成图，进行性累加的基因位于X轴，r2位于Y轴。如图5中的线条所示：它表示对ADHD的累加性和减性基因。 步骤9.只使用累加性的基因重复这个过程。结果如图6所示，它表示累加性的基因。 RDS相关行为的治疗某些抗成瘾物质通过增强内源性或外源性神经多肽或神经递质的功能，如多巴胺在伏核中的释放，而抑制对欣快感的渴望，从而明显减少异常的成瘾性行为，又称“RDS”行为。能够引起欣快感的物质包括酒精、可卡因、鸦片制剂、尼古丁、葡萄糖或其它碳水化合物，以及性行为、赌博、攻击、暴力等，但并不仅限于此。RDS行为存在共同的遗传基础，并与中-边缘系统内神经递质的足量供应有关。最终的报偿途径包括受体部位多巴胺能的激活(D1，D2，D3，D4，D5和各种亚型)，而这些受体的密度由它们各自的基因以及负责多巴胺合成、贮存、释放和代谢的基因决定。 本发明建议通过联合使用脑啡肽酶抑制剂和一种脑啡肽释放剂如京都酚(酪氨酸-精氨酸)或其稳定的类似物酪氨酸-D-精氨酸以促进D2受体的长期占据，使之有可能发生增生或正调节(Fitz等，1994)，从而增强突触多巴胺的释放。 本发明在部分程度上涉及多基因遗传的观点并提出了以多个基因部位作为鉴别RDS高发人群决定因素的概念。在遗传特性完全不同的各品系小鼠中的数量性状座位研究中未发现单基因机制的依据。检测15种小鼠对酒精、吗啡、去氧麻黄碱的反应，发现各品系对上述3种物质的反应不同，提示由不同基因决定对不同成瘾物质的易感性。这些发现进一步提示受基因影响的对酒精的敏感性并不是独立现象，相反，它对所研究的反应变量具有特异性(Crabbe等，1994)。 因此本发明的一个方面是把上述的特定基因以及怀疑和RDS行为或其他多基因特征有关的其它基因分型，获取对定向治疗RDS相关性行为或其他多基因特征比较重要的单倍型信息。当某一特定遗传变量被发现和某种行为障碍有关时，发明者可利用这一知识帮助临床医生采用药物进行遗传定向治疗。本发明采用基因分型和氨基酸前体引入、抑制脑啡肽酶、诱导脑啡肽释放、麻醉拮抗和吡啶甲酸铬或烟酸铬等作为抗成瘾的成份，增加多巴胺在伏核中的有利释放。 在本发明中，发明者提出涉及报偿级联回路(可能多达100个以上)中各种分子表达的任何一个基因改变都可使个体发生RDS和相关行为，甚至ADHD和暴力。尽管上述可能是事实，但目前很难预测具体涉及到哪一个基因，直到本发明提出采用MAA技术。然而，至少D2多巴胺受体基因的作用证据是充分的，并且发明者认为D2多巴胺受体基因代表了在RDS和相关行为上起重要作用的主要“报偿基因”。本发明的优选方案把TaqA1 DRD2等位基因(A1，B1，C1，外显子6-7之间的单倍型多态性)和定向治疗的后果联系起来(注意力集中，防止体重回升，停止吸烟，减少碳水化合物暴食，减少AMA次数，防止多物质依赖，减少暴力行为及其它)。发明者还将提供一些针对上述特定基因的基因分型例子，它们能够对某类药物产生最佳反应。 在神经递质报偿级联模型上，下丘脑5一羟色胺能神经元支配并激活甲硫氨酸脑啡肽能神经元，后者抑制γ-氨基丁酸(GABA)神经元，后者随后激活大脑脚盖腹侧的DA神经元。DA神经元随后投射到Acb和海马的Cluster A1(CA1)细胞簇，在那里DA神经递质作为主要的报偿基质(Stein和Beluzzi，1978)。 伏核和脑啡肽在这一复杂的回路中起重要作用(Heidreder等，1988)。局部用脑啡肽酶抑制剂后可以诱导DA在纹状体的释放，提示这一调节是通过刺激δ受体进行的(Chesselet等，1981)。事实上，京都酚还可能保护缩胆囊素-8(CCK-8)不被脑肽酶降解。这一重要的控制欲望神经多肽和DA一起存在于伏核中，并且与CCK-8、DA和内源性阿片类多肽之间有密切的联系(Koob，1992)。 5一羟色胺(5-HT)、DA、去甲肾上腺素(NE)和脑啡肽等神经递质被证明可减少甜食物的摄取。因此特别设计本发明的组合物，通过给以氨基酸前体，包括1-色氨酸(5-HT前体)，1-苯丙氨酸(DA和NE前体)以及脑啡肽酶抑制剂d-苯丙氨酸以增加这些食物抑制性神经递质(Blum等，1986)。 发明者正在对Lewis大鼠进行研究以确立这些试剂类别的效果。Lewis大鼠似乎具有多物质滥用的倾向，并用做RDS行为研究的重要动物模型。在这一点上我们采用3种试剂(D-苯丙氨酸[DPA]，纳曲酮[NTX]，酪氨酸-D-精氨酸[TA])的不同剂量和组合来治疗对酒精，可卡因，尼古丁，大麻或碳水化合物的自行选择。与任何2种试剂的组合相比，三种试剂组合在一起是最有效的(见表3)。 表3抗RDS试剂的联合及独立功效，从最高到最低DPA+NTX+TA+铬盐DPA+NTX+铬盐DPA+TA+铬盐NTX+TA+铬盐DPA+铬盐NTX+铬盐TA+铬盐铬盐DPA＝D-苯丙氨酸；NTX＝纳曲酮；TA＝酪氨酸-D-精氨酸治疗RDS的组合物：尽管各种障碍可以归类于RDS并侵犯多胺能系统，一种药物不可能类似地治疗患RDS的所有病人。大量其它系统也可受到侵犯，因此为取得全面满意的疗效必须同时对其进行治疗。涉及药物或物质滥用的病症尤其需要个别治疗。因此尽管一个总的治疗方案包括给病人有效剂量的脑啡肽酶抑制剂、脑啡肽释放剂和多巴胺能系统的氨基酸前体，还需采用其它成份以增强总的治疗效果。 某些治疗试剂被“D2基因受体缺陷理论”所推崇。已经证实DRD2A1携带者DRD2受体的水平很低。在紧张压力下病人需要完全依靠这些受体来对付今天的社会。本发明的一个重要方案是提供治疗剂量(单独或组合)的某些氨基酸前体、微量金属如吡啶甲酸铬和/或烟酸铬、脑啡肽酶抑制剂、麻醉拮抗剂和脑啡肽释放剂，最终引起多巴胺的自然释放以诱导D2增生，尤其在D2A1携带者中。这一总的观点早已在可卡因成瘾中得到检验。由第一发明人研制的称做TROPAMINETM的制剂已在病人中研究和采用。经与其它药疗法相比，TROPAMINETM具有解毒和保持戒断的主要优点(Halikas等，1993)。见表4。 表4一般用于治疗可卡因滥用的药物治疗效力的排序解毒作用 戒断维持解毒药 患者数 内科医生人数 效力 维持药 患者数 内科医生人数 效果Tropamine 190 17 4.00 Tropamine 150 17 3.50Buspiran 11 2 4.00 可乐定 15 2 3.00去甲替林 100 3 4.00 去甲丙咪嗪 8,824 306 2.84苯巴比妥 2,250 10 4.00 丙咪嗪 2,940 129 2.64苯并二氮类 155 3 3.33 氟西汀 2,386 145 2.61可乐定 412 15 3.33 L-酪氨酸 350 9 2.60利眼宁 510 14 3.25 卡马西平 1,384 86 2.57安定 2,710 18 3.23 溴隐亭 5,256 132 2.56L-酪氨酸 510 9 3.13 金刚烷胺 6,527 119 2.39溴隐亭 15,511 262 2.95 L-色氨酸 6,247 110 2.20金刚烷胺 19,189 225 2.69 Neuroieptics 1,494 54 2.19去甲丙咪嗪 10,352 287 2.65 纳曲酮 1,255 40 2.15 解毒作用 戒断维持解毒药 患者数 内科医生人数 效果 维持药 患者数 内科医生人数 效果丙咪嗪 2,885 122 2.48 苯巴比妥 100 3 NRL-色氨酸 15,112 198 2.33 “其他药物” 853 47 2.64的混合物氟西汀 1,527 111 2.25Bupranorphine 148 19 2.00纳屈酮 817 31 1.68马吲哚 11 2 1.00“其他药物” 8,007 119 3.11的混合物总数 79,760 468 2.43 总数 37,166 381 2.57 该方案的一个组成部分是先把病人按基因分型，然后按他/她的基因型提供适当的鸡尾酒治疗。对于D2异常，发明者研制了一个适当的鸡尾酒方案，并在文中有描述。表5总结了对特定基因型已证实有效的本发明各种组合物的应用，表6-16列出了对治疗各种障碍有效的这些组合物的优选成分，表17-19显示了某些元件如何影响刺激物(可卡因等)、阿片类和镇静催眠剂诱导的报偿。 表5多基因诊断和抗成瘾组合物：定向预防和治疗选择的治疗组合物 接受治疗的RDS行为 疗效 研究类型 与改善的反应有关的目的基因(SI)/等位基因AlcotrolTM物质滥用障碍 抗成瘾，焦虑降低，复发 DBPC-住院病人 DI(A1等位基因的Dde纯合性的特别侧重镇静-安眠剂滥 降低，对抗医生劝告率 频率增加)用(如酒精、阿片类物质、 (AMA)降低，身体状况和 D2(Taq A1，B1，外显子6-7单倍巴比妥类) BESS得分有改善 型，C1)DBPC-门诊病人 DATI VNTR(10/10)CNRI(VNTR＜5bp重复纯合)MOAA(x)-VNTR＜335bp*nNOSIa-≤201BP等位基因纯合DBH-TaqI B1等位基因COMT-108缬氨酸等位基因TDO2内含子6(G→A)和/或(G→T)D4VNTR 2或7选择的治疗组合物 接受治疗的RDS行为 疗效 研究类型 与改善的反应有关的目的基因(SI)/等位基因CocotrolTM物质滥用障碍，特别侧重 与AlcotrolTM相同，外加 DBPC-住院病人 D2TaqI A1，B1，C1或外显子6-7精神兴奋剂滥用 可卡因渴望降低 单倍型，D1(A1等位基因的Dde(可卡因，去氧麻黄碱) 纯合性的频率增加)DBPC-门诊病人 Comt-108-缬氨酸等位基因，D3Alcotox2镇静-安眠剂戒断(包括酒 苯并二氮杂类需求降低 住院病人OT DAT1 VNTR(9/9)精、阿片类物质、巴比妥 戒断震颤减轻，抑郁减轻 与标准解毒药比较 D2 TaqI A1，B1，C1或外显子6-7类) 单倍型PHENCALTM肥胖(碳水化合物暴食， 体重减轻，暴食事件减少 DBPC-门诊病人 D2TaqI A1，B1，C1或外显子6-7厌食，食欲过盛) 身体组成的积极改变，防 单倍型止减肥后体重反弹 HTR2A-C等位基因纯合OB-1875二核苷酸重复多态性的＜208BP等位基因纯合人2号染色体微卫星多态性，D2S1788UCP-2(多态性待定)APO-D-TaqI2.2或2.7BP瘦素受体(多态性未知)选择的治疗组合物 接受治疗的RDS行为 疗效 研究类型 与改善的反应有关的目的基因(SI)/等位基因NicarestTM吸烟行为 吸烟停止，容易放弃(吸 DBPC-门诊病人 D1(Dde A1纯合)烟)，防止重吸 D2(TaqI A1)D4(VNTR 2)D5(二核苷酸13等位基因，范围135-159BP)DAT1 VNTR(10/10)DβH(TaqI B1等位基因)HyperGenTM孤独症，抽动-秽语，ADHD 作业任务的能力增强，TOVA DBPC-门诊病人 D1(Dde A1纯合)得分改善，Cull/Blum ADHD D2(TaqI A1)得分改善，多动性降低 D4(VNTR 2)D5(二核苷酸13等位基因，范围135-159BP)DAT1 VNTR(10/10)DβH(TaqI B1等位基因)MAOA(X)选择的治疗组合物 接受治疗的RDS行为 疗效 研究类型 与改善的反应有关的目的基因(SI)/等位基因GambotrolTM病理性赌博 花钱减少，打赌频率降低， OT门诊病人 D1(Dde A1纯合)容易戒除 D2(TaqI A1，B1，C1)Tempaminc 病理性暴力行为，分裂样/ 暴力行为爆发减少，敌意 OT门诊病人 D2(TaqI A1，B1，C1，外显子6-7)回避症(SAB)，攻击性， 降低，防卫类型正常化， DAT1(VNTR 10/10)发怒，敌意，创伤后应激 焦虑降低，SAB降低 mNOSIa-≤201BP等位基因纯合障碍PMXTMPMS 疼痛和痛性痉挛减少，头 OT门诊病人 与AlcotrolTM和CocotrolTM的痛减少，整个心境改善 相同POMC-前内啡肽/强啡肽/Orphan阿片受体δ，σ，孤独，μ，κ，ε1配方见表6到17所述2替代成分限定如下：D-苯丙氨酸500mg/胶囊，每天6粒；酪氨酸-D-精氨酸，每胶囊1mg，每天6粒；纳曲酮，每胶囊50mg，每天1到3粒。*GABRB3-二核苷酸重复≥185bp纯合HTR1A-TC多态性 HTR2A-C等位基因(纯合)缩写：ADHD＝注意缺陷多动障碍 DPBC＝双盲、安慰剂对照 PMS＝月经前综合症 POME＝Propiomelancortin OT＝开放试验表6KantrollTM成分 基本或核心胶囊mg/胶囊 核心或″靶向″胶囊生物素 0.050 核心钙 35.000 核心铬烟酸铬 0.033 核心吡啶甲酸铬 0.033 核心铜 0.033 核心5-羟色氨酸 ＞.5 核心DL-苯丙氨酸 460.000 核心叶酸 0.030 核心碘 0.025 核心铁 1.000 核心L-谷氨酰胺 25.000 核心镁 2.500 核心甲硫氨酸 50.000 核心烟酸(未变红) 10.000 核心泛酸 0.330 核心硒 0.012 核心维生素A IU 277.710 核心维生素B-2 0.800 核心维生素B-1 0.375 核心维生素B-6 1.000 核心(P-5磷酸)维生素B-12 0.005 核心维生素C 100.000 核心维生素E IU 5.000 核心锌 1.500 核心L-肉毒碱 10.000 肥胖Ginko B 25.000 肥胖，焦点L-酪氨酸 150.000 赌博，激动.焦虑，烟碱，可卡因，肥胖鸟氨酸门冬氨酸盐 10.000 肥胖可乐果(咖啡因) 20.000 肥胖L-精氨酸 10.000 肥胖焦谷氨酸盐春黄菊* 25.000 烟碱牛磺酸* 25.000 激动，焦虑缬草* 10.000 烟碱柳树皮提取物* 60.00 PMS 症状注：对于在各种症状中共有的基本报偿缺陷综合症行为，发明者推荐服用″核心″神经药物(Neutraceutical)，每天三次(餐前)。如果患者具有一系列顽固的成瘾/冲动/强迫行为，或明显严重的成瘾/冲动/强迫行为，发明者推荐服用“核心”神经药物，加上每天适当次数服用适当的附加神经药物。 对于肥胖，患者在医生指导下服用“核心”神经时应服用白色胶囊，在早餐前应服用橙色胶囊。 对于尼古丁依赖，患者应在就寝时服用蓝色胶囊。 表7PHENCALTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 500.000L-谷氨酰胺 15.000L-酪氨酸 25.0005-羟色氨酸 2.5mg可乐果(咖啡因) 20.000L-肉毒碱 10.000吡啶甲酸铬或 0.033烟酸铬钙 35.000铁 1.000镁 2.500锌 2.500生物素 0.050泛酸 0.330碘 0.025铜 0.333硒 0.012维生素C 13.300维生素B-1 0.330 表7(续)PHENCALTM成分 每胶囊(以毫克计)维生素B-2 0.500烟酸(未变红) 3.330维生素E IU 5.000维生素B-6(P-5磷酸) 0.330叶酸 0.066维生素B-12 0.001Ginko B 25.000表8TropagenTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 250.000L-谷氨酰胺 50.000L-酪氨酸 150.0005-羟色氨酸 2.5mg吡啶甲酸铬或烟酸铬 0.020钙 25.000铁 1.500甲硫氨酸 50.000镁 2.500锌 5.000泛酸 1.500维生素C 100.000维生素B-1 1.670维生素B-2 2.500烟酸(未变红) 16.700维生素B-6(P-5磷酸) 3.330叶酸 0.670维生素B-12 0.670 表9AlcotrolTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 480.000L-谷氨酰胺 25.0005-羟色氨酸 2.5mg吡啶甲酸铬或烟酸铬 0.020钙 25.000铁 1.500镁 2.500锌 1.500生物素 0.050泛酸 15.000维生素A I.U.333.300铜 0.3330.013维生素C 13.300维生素B-1 2.417维生素B-2 0.850烟酸(未变红) 3.300维生素E I.U.5.000维生素B-6(P-5磷酸) 3.000叶酸 0.670维生素B-12 0.670 表10NicarestTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 500.000L-谷氨酰胺 50.0005-羟色氨酸 2.5mgL-酪氨酸 125.000吡啶甲酸铬 0.033钙 50.000铁 1.000镁 2.500锌 2.500生物素 0.050泛酸 0.330碘 0.025铜 0.333维生素C 100.00维生素B-1 2.417维生素B-2 0.850烟酸(未变红) 3.330维生素B-6(P-5磷酸) 3.000叶酸 0.670维生素B-12 0.005春黄菊 25.000*缬草根 10.000**就寝时表11PMXTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 375.000L-谷氨酰胺 50.0005-羟色氨酸 2.5mg吡啶甲酸铬 0.020钙 50.000镁 25.000铁 1.500锌 1.500生物素 0.050泛酸 1.250维生素A I.U.277.710维生素C 30.000维生素B-1 0.375维生素B-2 0.800烟酸(未变红) 10.000维生素B-6(P-5磷酸) 1.000叶酸 0.030维生素B-12 0.005春黄菊 25.00柳树皮提取物 25.00 表12HyperGenTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 400.000L-谷氨酰胺 25.000L-酪氨酸 150.0005-羟色氨酸 3.5mg甲硫氨酸 50.000吡啶甲酸铬 0.020钙 25.000铁 1.000镁 3.500生物素 0.050泛酸 15.000维生素C 13.300维生素B-1 0.375维生素B-2 0.800烟酸(未变红) 10.000维生素B-6(P-5磷酸) 3.330叶酸 0.030维生素B-12 0.001哈马灵(pharmaline) 50石杉碱(huberzine) 150ugGinko B 40.000 表13Stress-XTM成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 400.000维生素C 100.000L-谷氨酰 35.0005-羟色氨酸 3.5mg钙 25.000泛酸 15.000烟酸(未变红) 3.300维生素B-6(P-5磷酸) 3.000镁 2.500维生素B-1 2.417铁 1.500锌 1.500维生素B-2 0.850叶酸 0.670生物素 0.050吡啶甲酸铬 0.020维生素B-12 0.005维生素A I.U.333.300维生素E 5.000I.U.牛磺酸 0.005缬草根 25.000 表14TempamineTM成分 每胶囊(以毫克计)生物素 0.050钙 25.000吡啶甲酸铬 0.020DL-苯丙氨酸 400.000叶酸 0.670铁 1.500L-谷氨酰胺 35.0005-羟色氨酸 2.5000L-酪氨酸 100.000镁 2.500烟酸(未变红) 3.300泛酸 15.000维生素A I.U.333.300维生素B-1 2.417维生素B-2 0.850维生素B-6(P-5磷酸) 3.000维生素B-12 0.005维生素C 100.000维生素E I.U.5.000锌 1.500 表15Aggression成分 每胶囊(以毫克计)DL-苯丙氨酸 460.000L-谷氨酰 25.000L-酪氨酸 100.0005-羟色氨酸 2.5mg吡啶甲酸铬 0.020钙 25.000铁 1.500镁 2.500锌 1.500生物素 0.050泛酸 15.000维生素A I.U.333.300维生素C 100.000维生素B-1 2.417维生素B-2 0.850烟酸(未变红) 3.300维生素E I.U.5.000维生素B-6(P-5磷酸) 3.000叶酸 0.670维生素B-12 0.005 表16GambotrolTM成分 每胶囊(以毫克计)钙 25.000吡啶甲酸铬 0.020DL-苯丙氨酸 400.000叶酸 0.670铁 1.500L-谷氨酰胺 35.000L-酪氨酸 100.0005-羟色氨酸 2.5mg镁 2.500甲硫氨酸 50.000烟酸(未变红) 6.700泛酸 1.500维生素B-1 1.670维生素B-2 2.500维生素B-6(P-5磷酸) 3.330维生素B-12 0.005维生素C 100.000锌 2.500 表17可卡因和安非他明报偿例子 对报偿的影响颅内自我电刺激下丘脑外侧 助长脚盖区腹侧 助长颅内自给药前额皮质中部(可卡因) 助长伏核(安非他明) 助长静脉自给药去甲肾上腺素受体拮抗剂 无改变5-HT受体拮抗剂 助长M-阿片受体拮抗剂 无改变D1和D2多巴胺受体拮抗剂 抑制去甲肾上腺素去神经支配(6-羟基多巴胺) 无改变5-HT去神经支配(5，7-双羟色胺) 助长多巴胺去神经支配(6-羟基多巴胺)伏核 抑制脚盖区腹侧 抑制前额皮质中部 无改变表18阿片类报偿例子 报偿效果颅内自我电刺激下丘脑外侧 助长颅内自给药伏核 助长下丘脑外侧 助长脚盖区腹侧 助长静脉内自给药阿片受体拮抗剂M-受体拮抗剂 抑制Δ-受体拮抗剂 无改变K-受体拮抗剂 无改变多巴胺受体拮抗剂 混合结果多巴胺去神经支配(6-羟基多巴胺)伏核 无改变表19镇静剂/催眠剂报偿例子 报偿效果颅内自我电刺激下丘脑外侧 助长颅内自给药脚腹盖腹侧 助长经口自给药GABAA受体拮抗剂 抑制GABAA受体激动剂 助长阿片受体拮抗剂 抑制多巴胺受体拮抗剂 抑制6-HT受体激动剂 抑制去甲肾上腺素合成抑制剂 抑制治疗方法：在本发明治疗制剂中包含D-苯丙氨酸，D-亮氨酸和任何含有氢化肉桂酸的D-氨基酸(见表6-16)。另外该制剂还包括脑啡酶抑制剂，如某些蛋白合成抑制剂，如杆菌肽，贝他定和嘌呤霉素；多肽氨基酸如D型游离单氨基酸，D型必需氨基酸的二肽或三肽；巯基苄基氨基酸(2-[巯基-3-苯基-丙酰基]-L-亮氨酸)；羧基烷基甲基酯(N-[(R，S)-2-乙氧羰基-3-苯丙醇]-L-亮氨酸)；以及大量其它的结构上不相关的化合物如司可巴比妥(速可眠)，焦磷酸盐，O-菲咯啉，磷酰胺(phosphamidon)，Z-亮氨酸-NHOH和Z-甘氨酸-NHOH。 此外，发明者认为通过进一步提供脑啡肽释放剂，它们可以非常显著地改善病人对治疗的反应。因此脑啡肽释放剂酪氨酸-精氨酸和酪氨酸-D-精氨酸也包括到治疗制剂中。 大量的等位基因与多种冲动性、强迫性和成瘾性障碍的关联提示存在一个受精神兴奋剂刺激物和非精神兴奋剂刺激物影响的机制，可引起多巴胺(DA)优先释放到伏核(Acb)中部。这一机制的遗传基础至少包括含有多巴胺能基因和各种调节酶(D1-D5，DAT1，DβH，MAOA，COMT)的多态性；因此，改变报偿级联中的神经递质(包括5-羟色胺，脑啡肽，GABA，DA)的成份对物质和行动障碍应有有益的效果。物质滥用和行为障碍包括：酒精，可卡因，尼古丁，葡萄糖，大麻，阿片类和阿片衍生物，赌博，性强迫，多动，长期暴力行为和应激障碍，以及与月经前综合症(PMS)有关的症状。 为了在伏核处诱导多巴胺的释放，最终还涉及了阿片能活性。因此希望联合使用防止脑啡肽降解的脑啡肽酶抑制剂和脑啡肽释放剂以最大限度地增强阿片能活性。 这一方案的重要部分是先把基因分型，并根据他/她的基因型提供适当的鸡尾酒治疗。关于D2异常发明者研制了适当的鸡尾酒疗法，并在文中有述。 合成激动剂并不是理想的治疗试剂。某一特定激动剂可作用于几个受体，或不同细胞上的相似受体，而不仅仅是我们希望的某一受体或细胞。就象对药物可以产生耐受性一样(通过受体数目和对药物亲和力的改变)，对拮抗剂也照样可产生而耐受性。比较特殊的如溴环肽(bromocryptine)或去氧麻黄碱，它本身可以产生药物依赖。大家知道溴环肽可被恒河猴自行给药(Woolverton等，1984)。 与之相反，D-苯丙氨酸(DPA)没有耐受性。根据S.Ehrenpreis的研究，在小鼠长期按500mg/kg/天的剂量给药并没有产生耐受性和依赖性(芝加哥医学院)。 这种组合的合理性还在于促释放剂只有存在可释放对象时才起作用，它们并不能治疗多巴缺乏，事实上，发明者担心促释放剂能加重多巴胺的长期缺乏，从这一点来说，前体采用的是比较自然的调节途径，只有需要时前体才转化为神经递质，然后有机体根据需要分配其产品。 现有技术采用过DPA对酒精和可卡因依赖者进行抗成瘾治疗。Blum等的资料表明：在一个关于体重降低的90天开放试验中，他们提出了DPA与1-色氨酸，1-谷氨酰胺，吡哆醛-5‘磷酸联合使用。在这一研究中，与对照者仅降低10磅相比，补充治疗组平均降低了26磅。另外，试验组仅18.2％的降低不超过15磅，而对照组为81.82％，这些结果显示，使用这一产品的超重个体体重降低是未用者的2.7倍。 发明者发现在247名门诊病人2年的低卡路里节食程序中，补充摄入DPA、其它氨基酸和微量金属的组与服用核心维生素组相比，显示：1)包括男性和女性在内，在超重百分比上都有2倍的降低。2)女性成瘾性降低70％，男性降低63％。3)女性暴食行为降低66％。男姓降低41％。在节食研究组，体重仅回升了他们在节食其间失去的体重的14.7％，对照组则恢复了41.7％。5)对数回归模型显示，补充治疗、女性、病态肥胖和肥胖家族史是2年后体重增加的重要预示变量。 这些资料显示，单独使用DPA或和其它氨基酸前体、微量金属如吡啶甲酸铬或烟酸铬联合使用，在2年期间，特殊在预防体重增加或根除体重复升方面可以产生戏剧性效果，直到今天，发明者还未在市场上发现有此类产品可以自称有如此重大的发现，包括与Redux(Interneuron，剑桥，质量)或Fastin(Smith/Kline Beacham，费城，宾夕法尼亚)。 另外，还进行了一些关于肥胖者很难降低体重和中断减肥后保持减轻后的体重的原理研究，这些研究证实机体是如何“捍卫”一个特定的体重，通常称作“调定点”，面对减肥计划中的能量消耗降低，机体通过增加饥饿感、减少耗氧、胃肠系统更有效地吸收营养、甲状腺激素分泌来保持“调定点”，这一点已经有过描述(Keesey，1989)。此外，体重已降低，保健或药物治疗等调节的影响消失，导致体重稳定或许多节食者描述为“平台”的现象，甚至体重回升，从这一点上用补充疗法，不仅可防止发生体重回升，似乎还可以克服平台效应。 单用芬氟拉明和联合使用芬特明与PHENCALTM的比较：使用d-芬氟拉明的结果是可保持的体重降低，尽管食物自由摄入恢复到正常水平。直到今天在人和动物的试验都没有证明给药后代谢率会增加。而用芬氟拉明时，每当能量消耗时，它似乎都能增强能量消耗，该药物对人和动物都能增强食物的热效应。对它增强能量消耗的能力不会产生耐受性，而对它在厌食症方面的作用则不同(Levitsky和Troiano，1992)。 对于一个新型的减肥产品，最重要的治疗效应是能够防止降低的体重回升，事实上，Turner建议持久的体重降低是减肥策略的目的，而根据目前有关方面的证据，d-芬氟拉明似乎在长达一年的时间里都能起到降低体重的效应而不产生耐受性，耐受性是制约使用其他药物进行长疗程治疗该病的问题。尽管d-芬氟拉明通过5-羟色胺能系统促使那些对其他降低体重的策略没有满意反应的病人降低体重，随后进行的对d-芬氟拉明的最长时间的随访研究提示，对严重的肥胖病人，要想保持体重降低应持续治疗。就防止体重的回升而言，d-芬氟拉明似乎是通过减少每日能量摄取的13-25％而起作用，它还可降低对肥腻食物的渴望。本发明观点是：用PHENCALTM配方可以达到的效果，远超过d-芬氟拉明和其它兴奋剂等已经达到的治疗效果，甚至优于由食品与药品管理局批准的第一个用于减轻体重的药物所应该达到的治疗效果。发明者相信，采用氨基酸前体引入和脑啡肽酶抑制，是到目前为止最先进的预防体重回升的治疗方法。 优选治疗方案：治疗RDS的基本方案至少应包括以下的一种物质，单独使用或联合使用。本表包括以药物或神经药物为名用于治疗的主要成分(具体配方见表6-16)： 表20治疗组合物的成分 考虑的有效剂量范围D-苯丙氨酸 16到5000mgD1-苯丙氨酸 32到10,000mg纳曲酮 1到1000mg酪氨酸-精氨酸 15ug到IS mg或酪氨酸-D-精氨酸(在同样剂量范围)吡啶甲酸铬 10ug到10000ug铬烟酸铬 10ug到10000ugL-肉毒碱 1到200mgL-酪氨酸 9到90,000mgL-谷氨酰胺 3到30,000mgL-酪氨酸 5到5,000mg5-羟基-酪氨酸 0.5到500mgL-精氨酸焦谷氨酸盐 1到1000mg鸟氨酸天冬氨酸盐 1到1000mgD-亮氨酸 16到5000mgDL-亮氨酸 32到10,000mg羟基肉桂酸 1到100mg茶氨酸(Taiyo Intl) 1到1000mg石杉碱 1.5到1500ug维生素B6(吡哆醇HCI) 1到1000mgRhodioia rosea提取物 5到500mg(Pharmline)预期其它脑啡肽酶抑制剂在这些治疗方法中也是有用的(见以前的专利，美国专利第5,189,064号，第4,761,429号，加拿大专利第1,321,146号。这里被作为参考文献而引用)。 碳水化合物暴食行为或抗肥胖化合物：在这一点上，前面叙述过的氨基酸引入和脑啡肽抑制可以影响许多与体重有关的重要问题，最重要的是预防2年后体重回升。 抗SUD的详细方案：AlcotrolTM和CocotrolTM根据基因分型的使用。用在原始专利基础上改进的制剂，在一个开放试验中，评价了氨基酸前体引入和脑啡肽酶抑制在防止酒精和可卡因依赖先证者复发的效果。该研究在2年之间观察了280例病人，复发的标准是根据具有资格的专家的评价：先证者是否恢复定期使用酒精和可卡因。病人分为2组：组A＝仅仅one-A-Day维生素，组B＝对酒精成瘾用AlcotrolTM的一种，对可卡因成瘾用CocotrolTM的一种。 2年后，本研究中对照组共有78人复发，复发率86％，用氨基酸组189个病人无1例复发，复发率为0。结果提示在防止SUD病人复发上有非常积极的效果，实质上这一效果增加了典型治疗在病人身上所得到的结果，他们接受传统的12个步骤，接近康复。 酒精中毒和可卡因滥用者的分类：先证者基因分型为A型和B型。研究者已经验证了将酒精中毒者分为A型和B型的概念，并且现在发现这一概念对研究可卡因滥用同样有效。亚型是指将具有1个或多个共同特征的个体进一步分类和研究的系统。对酒精中毒者的亚型分类能更好地理解基因、性格和环境等危险因素在导致酒精中毒上的复杂的相互作用，以及受这些危险因素影响而发生的反弹。 酒精滥用在B型酒精中毒者比A型更严重。B型酒精中毒者似乎有几个特征：它较A型者更与遗传因素有关；更常发生在男性；B型更具冲动性并且倾向有严重的酒精滥用家族史；它们有更多的儿童时期品行障碍，更严重的酒精依赖性、多药物滥用和精神障碍，尤其是反社会人格。 对可卡因滥用者而言，某种伤害因素，如酒精中毒或药物滥用家族史、追求感觉行为和儿童期品行障碍等更倾向于导致其更严重的B型可卡因依赖。因此，其它没有上述特征的可卡因滥用者(A型)，可能主要受社会、环境的影响而不是遗传、心境或精神影响而产生依赖性。 在B型可卡因滥用者身上可以发现3种主要的特征的重要方面，如病前危险因素(物质滥用家族史，儿童期品行障碍和ADHD，追求感觉的行为和开始滥用药物的年龄)；物质滥用的变量(如可卡因使用的次数，大量使用可卡因的时间，可卡因依赖的症状，酒精依赖的症状，多药物使用，医学和社会性后果)和精神问题(如抑郁症状和反社会的人格障碍以及上述精神问题的严重性(Ball等，1995)。 另外，在追求感觉、攻击、犯罪、暴力和社会适应能力减弱等方面的计分上，B型者分数高于A型。前者使用可卡因的量、次数和持续时间也高于A型可卡因使用者。B型者还更易出现使用药物的副作用，如失去知觉、暴力(及其它)，并且在他们中使用更多药物以减轻戒断痛苦的比例更高。第1次使用、第1次过量使用、第1次定期使用、第1次每天使用、第一次出现成瘾症状的B型可卡因滥用者的年龄已经更加年轻。 两种亚型在第1次使用可卡因和第1次出现依赖症状的时间跨度上；使用途径如鼻嗅、吸烟或注射；控制使用的策略数目；以前戒除违禁药物或酒精的持续时间等方面没有明显差异。有趣的是，大部分参加试验者被分为B型，但在住院治疗病人中，A型和B型的数量几乎相等。在门诊病人和未参加治疗的试验者中，75％是A型。 本发明的一个方面是把新的分子基因诊断技术和以前确立的B型行为判定标志结合起来，更准确地为酒精和可卡因滥用者分型。新的遗传学发现令人惊奇地与B型相关的参数相吻合(Ball等，1995)。椐Ball等1995年的报道，绝大部分B型参数与DRD2型基因有关，证据来自一些有关非西班牙白人多巴胺D2受体基因基因分型的多态性研究(见表20-A)。 表20-A可卡因滥用者的基因型分类B类 DRD2A1 参考文献滥用问题的原因 多基因 53％ Noble等，1993性别 男性更多 p＜0.05病前风险因素 家族史(至少父母 p＜0.016 Noble等，1993之一是酗酒者)ADHD p＜0.0001 Comings等，1991儿童期因素 第一次有规律使用可卡因 p＜0.030 Noble等，1993之前的越轨行为(CD)具有3个风险因素：FH+ p＜0.007 Noble等，1993强可卡因使用，CD物质滥用变量 强可卡因的使用 p＜0.015(静脉注射的平均％时间，游离碱，和克赖克)从第一次使用可卡因到 p＜0.033 Noble等，1993下次使用的平均间隔周数表20-A(续)B类 DRD2A1 参考文献物质滥用的 多次用药(每周每种药品 p＜0.0005 Comings等，1994严重性 花费超过25美元)在所有药品(包括可卡因和其它兴奋剂，除阿片类以外)上都花费更多钱 p＜0.01 Comings等，1994起始年龄 A1携带者＝23.2岁 p＜0.026 Comings等，1994A2携带者＝26.7岁精神病理学 严重程度较高，更具有反社会性 Comings等，1994儿童期暴力 p＜0.002青年期暴力 p＜0.0001 Blum等，1996暴力犯罪 p＜0.011 Comings等，1994人格 高冲动性，寻求感觉(病理性赌博) p＜1×10-8Comings等，1994分裂样/回避症 p＜0.006 Blum等，1997(冷漠和分离)ADHD ADHD先证者的主要问题在于不能集中注意力。发明者近来的研究显示其中的一个叫做KantrollTM的配方影响一系列的电生理结果(见表6A)据发明者所知，这是首例有关人每天食入一种特殊的氨基酸混合物影响与认知表现有关的事件相关能力(ERP)的报道。认知ER在正常的青年志愿者试验中由两种计算机化的视觉注意项目产生，立体定位项目(SOT)和偶然的持续性表现项目(CCPT)。每个受试摄入氨基酸前体28-30天前和后在完全受本人控制的情况下进行检测。在2种项目混合后，ERP成分P300振幅出现统计学上显著的增强(p＜.009)以及认知过程速度的加快(p＜.015)。在本研究中所观察到的正常对照中神经功能的增强与RDS患者(如物质使用障碍，注意缺陷障碍，碳水化合物暴食)在补充氨基酸后的促进康复是一致的。 这一工作在ADHD先证者中还未完成。但是随着一系列ADHD病例在补充氨基酸后多动的减轻和学习能力的改善的报道，其合理性也是明显的。发明者有资料表明，正如本文前边所指出的那样，DRD2A1等位基因和P300及AER和VER异常也有关联。还可见Comings关于大麻对P300波长影响的工作。所有这些使采用特殊配方(HyperGenTM)和至少是脑啡肽酶抑制剂(dl-苯丙氨酸)治疗成为必要。利用这一原理发明者还将得到有关DRD2A等位基因和称作TOVA的标准计算机化ADHD试验之间关系的资料。 注意力集中障碍。本发明的一个方面是治疗注意力集中障碍和其它RDS相关综合征。发明者依据注意力集中过程是受神经递质控制、和对正常脑认知功能负责的某种特殊神经递质可以通过特定的氨基酸前体调节的事实来进行治疗。对脑的电生理功能的理解应归因于涉及注意力集中的化学调节物质的生物起源方面。 最近关心的一个问题是酒精中毒儿童的认知能力损害(通过P300波长检测)和ADD/ADHD病人的注意力集中能力降低。关于这一点，有证据支持这样一个概念，即许多破坏性的儿期和青春期行为障碍-包括ADHD，抽动-秽语综合症，学习障碍，物质滥用，违抗障碍和品行障碍是相互关联行为-的一部分，它有很强的遗传成分，是多基因遗传性的，共享一系列影响多巴胺与5-羟色胺和其它神经递质的基因，并且来自父母双方。集中有关注意缺陷多动障碍的观察提示：其最好是按行为划分为一种自身调节或执行功能的障碍。解剖学上的神经成象研究发现，相关的调节回路包括前额皮质和基底神经节，它们通过来自中脑的多巴胺能神经支配来调节，并通过激动活性或多巴胺释放来激活多巴胺受体的刺激剂调节。 本发明提供了能够增强神经递质控制作用，引起多巴胺的自然释放，克服PHD以及通过突触多巴胺占据多巴胺D2受体而刺激其增生的组合物(包括使用苯丙氨酸)。 5-羟色胺前体5-羟色胺(5-HTP)是一个CNS递质，它存在于肠嗜铬系统和血小板中。这一神经化学物质的生物合成是通过先将L-色氨酸羟基化成5-羟色胺酸，然后将后者脱羧基而成5-羟色胺的。羟基化(限速步骤)是通过色氨酸羟化酶完成的。脱羧基是通过普遍存在的L-芳香酸脱羧酶完成的，该酶需要磷酸吡哆醛共同参与。 5-羟色胺通过单胺氧化酶代谢成5-羟基吲哚乙酸。这一代谢物随后通过尿排泄。脑中枢5-羟色胺机制在控制心情、行为、运动活性、进食以及下丘脑的控制饥饿、体温调节、睡眠、幻觉状态的某些神经内分泌机制中起重要作用。 长期使用可卡因可降低5-羟色胺及其代谢产物的浓度。可卡因明显减少5-羟色胺前体色氨酸的摄入，因此减少5-羟色胺的合成。可卡因还减少色氨酸羟化酶的活性从而降低5-羟色胺能活性(Reith等，1985)。 用消耗5-羟色胺的药物处理大鼠(芬氟拉明，PCPA或5-7-DHT)在下丘脑而不是大脑内同时增加了脑啡肽和内啡肽含量。因为没有mRNA和脑啡肽原前体(PE)或popiomelanocortin含量改变，提示5-羟色胺能传导调节阿片类多肽的利用而不是影响其合成。 这一发现支持如下假说，即脑啡肽的释放减少导致多巴胺活性降低，表现为抑郁状态。在剧烈活动之后，某些行为障碍如疼痛、抑郁、睡眠紊乱会发生。用L-色氨酸补充5-羟色胺能传导有助于恢复积极的心境。已经发现在饮食中提供色氨酸，如补充前体对脑5-羟色胺和相关化合物的代谢存在确切的影响(Moir和Eccleston，1968)。大脑5-羟色胺的含量取决于血浆色氨酸的水平(Fernstrom和Wurtman，1971)。喂以缺乏色氨酸食物，小鼠的脑5-羟色胺水平很低，而L-色氨酸可使其恢复。如果将L-色氨酸注射到血中，大脑色氨酸和5-羟色胺水平可分别升高9倍和2倍。向同时有抑郁和失眠的神经科病人输以色氨酸，可以使皮质色氨酸水平升高6倍(Gillman等，1981)。 对8个健康男性进行色氨酸(50mg/kg)、酪氨酸(100mg/kg)或安慰剂的双盲交叉研究(Lieberman等，1983)，色氨酸而不是酪氨酸可明显减轻疼痛。其它研究显示色氨酸能减轻临床疼痛(Seltzer等，1983)、预防偏头痛(Poloni等，1974)和逆转止痛药的耐受性(Hosobuchi等，1980)。色氨酸通过5-羟色胺能的激活而增强多巴胺的释放从而达到止痛。 不同于酪氨酸羟化酶，在正常生理状况下，色氨酸羟化酶并不是饱和的，也就是说并没有发挥出最大作用。因此，色氨酸羟化酶的活性明显地受L-色氨酸的影响。可供使用的自由L-色氨酸的数量由许多因素决定，包括血浆中循环L-色氨酸的浓度和其脑和突触前终端的摄取速率。发明者预期采用L-色氨酸或5-HTP可以恢复被可卡因破坏的5-羟色胺能系统。 5HTP并不是有效的治疗试剂。L-色氨酸进入脑的速率取决于血浆中自由的和结合的色氨酸的比率，该比率受血中神经氨基酸、胰岛素和药物的浓度影响，这些物质竞争血浆中的蛋白结合位点以及色氨酸摄入位点。另外，5HTP不仅仅被5HT神经元还被其他神经元摄取。因此5HT合成增加并不仅限于5-羟色胺神经元。 5-HT合成酶抑制剂包括不可逆的色氨酸羟化酶抑制剂(DL-对氯苯丙氨酸，6-氟色胺酸，L-propyldoracetamide)和5HTP脱羧酶抑制剂(卡比多巴和1-甲基-5HTP)。5-羟色胺在动作电位和药物的影响下以胞外分泌的方式释放到突触间隙。可卡因、(+)-安非他明、去氧麻黄碱、芬氟拉明、对氯安非他明、氯米帕明和阿密曲替林可促进5HTP的释放。 目前提出的有3种5HT受体类型(5HT-1，-2，-3)。5HT受体激动剂包括LSD、喹哌嗪、N，N-二甲基-色胺(DMT)。5HT受体的拮抗剂包括赛庚定、美西麦角、LSD、2-溴-CDS(BOL)、酮色林、托西米定、辛那色林和1-(-)-可卡因。5HT的失活涉及高亲和力的能量依赖的主动转运机制用来将突触间隙的5HT送回到突触前神经元。 抑制神经元摄取5HT的物质包括三环抗抑制药(丙咪嗪，地昔帕明(desimipramine)，阿米替林，氯米帕明，氟伏沙明，芬氟拉明(一种厌食药))和可卡因。任何非贮存形式的5HT都将被MAO转化成代谢产物，然而如果MAO被抑制，5-羟色胺将通过O-甲基-转移酶(COMT)代谢成N-甲基或N-N-二甲基产物。 阿片类多肽的增强剂/释放剂阿片类多肽的增强剂和释放剂。本发明的一个方面是使用抑制阿片类神经多肽降解的物质。这些阿片类物质促进多巴胺的合成和释放。给动物阿片类物质可以增加纹状体DA生物合成和代谢的速率，该作用受位于黑纹状体的多巴胺能未端上的特殊阿片受体调节(Clouet等，1970；Biggio等，1978；Regiawi，1990)。长期给予B-内啡肽和脑啡肽可以产生多巴胺能耐受性(Iwatsubo等，1975；Arden等，1972)。在产生耐受性的动物中突触后DA受体异常敏感(Schwartz等，1978)。 可卡因也影响阿片能神经活性。当大鼠长期接触可卡因后，可以观察到剂量依赖性的纳洛酮结合的改变。阿片受体的密度在几种脑结构上明显减少，但在下丘脑外侧增加，这表明阿片类的结合特别受“报偿中枢”而不是其它区域的影响(Hammer等，1978)。此外在另一个研究中，纳洛酮有效地阻断了脑报偿中枢降低可卡因作用的域值(Bain和Korwetsky，1987)。另外可卡因似乎影响某些阿片类制剂的止痛作用(Misra等，1987)。发明者相信可卡因的强化作用可以部分地通过脑报偿中枢的阿片系统调节，后者通过长期接触可卡因而改变。 人们发现麻醉药可用于各种“阿片受体”。脑和其它神经组织含有内源性阿片(EO)。在脑中还发现相关的五肽、蛋氨酸和亮氨酸-脑啡肽(Hughes等，1975)。脑啡肽激活δ和μ受体，而β内啡肽激活ε受体。内分泌学家显示已被认做脑垂体激素的一种B-促脂解激素(B-LPH)含有5个氨基酸的MET-脑啡肽序列并被水解成有活性的阿片类物质B-内啡肽(Li等，1976)。 目前发明者已知至少有3种不同来源、不同功能的EO化学家族，尽管所有多肽在N端都含有酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-X的序列。内啡肽家族包括大的前体，阿片激素原(pro-opiocortin)，B-LPH和B-内啡肽，第二个EO家族是脑啡肽家族。蛋氨酸脑啡肽和亮氨酸脑啡肽都来自包含2种序列的大的多肽前体。各有1个或2个碱性氨基酸连接到脑啡肽羧基端的六肽和七肽和一种七肽：[Met]脑啡肽-Arg-Phe似乎是自然存在的中间体(Hexum等，1980)。第三个家族是κ激动剂如强啡肽1-13和1-17。这些CNS成分拮抗吗啡的作用。强啡肽可能作为亮氨酸-脑啡肽的前体、构成N端，转变为亚内啡肽形式(E5)可以导致受体亲和力的改变(κ到δ)，说明调节配体表达的酶类可能存在新的调节作用。 来自每个家族的多肽似乎都既作为神经递质又作为神经激素。5肽脑啡肽位于神经未梢，受刺激后从神经元释放。亮氨酸和蛋氨酸脑啡肽从肾上腺髓质释放到血液中，用做神经激素。β-内啡肽从脑垂体释放到血液中，作为脑不同区域的神经递质(Bloom等，1978)。内啡肽和脑啡肽都产生生化或药物理反应，包括耐受性、依赖性和禁欲，与人和动物给以EO后麻醉止痛剂所引起的反应相似。内源性阿片类物质和麻醉药一样是“阿片”家族的成员。降解脑啡肽(E5)的酶统称为“脑啡肽酶”。 目前已知组织中含有多种使五肽脑啡肽(E5)代谢的肽酶。作用类似脑啡肽酶的酶类包括可溶的和颗粒状结合的氨基肽酶(Hersh，1981)，其它作用于甘氨酸3-苯丙氨酸-4部位的如肽基二肽酶或金属内切肽酶(Benuck等，1982；Schwartz等，1980)。金属羧肽酶A使脑啡肽裂解为酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-C和蛋氨酸-苯丙氨酸或亮氨酸-苯丙氨酸末端二肽。和在靶位点主要由单一酶类负责使其失活的生物胺不同，脑啡肽的降解需要多种酶类，尽管金属内切肽酶似乎是主要的脑啡肽酶。以下的方案表明与E5降解有关的酶类作用部位。 防止E5降解的一个策略是提供其替代物。为阻止各种组织酶对脑啡肽的降解，须进行几种化学修饰，这些包括：a)N端酪氨酸修饰，使蛋氨酸的酪氨酸修饰类似物能防止降解(Coy和Kastin，1980)；b)在位置2引入1个D-氨基酸以阻断氨基肽酶的作用；和/或c)在位置3-5修饰或引入1个D-氨基酸以阻断肽基二肽酶或其它作用于甘氨酸3-苯丙氨酸4键的酶的作用。其它类似物包括D-丙氨酸-脑啡肽酶酰胺或FK33-824，作为μ激动剂，脑啡肽-精氨酸-苯丙氨酸作为δ激动剂，和强啡肽1-13或1-17作为κ激动剂(Wisler等，1981)。 到目前还不清楚这些侯选的E5激动剂在临床使用时是否会有潜在的成瘾倾向、耐受性和其它毒理学方面的问题，许多这些修饰过的、对抗酶的替代物成瘾的可能性，大大减少了它们的临床应用。 第二种也是优选的在体内增加脑啡肽或脑啡肽活性的策略是使用特定的酶抑制剂，某些脑啡肽片断(甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-蛋氨酸或甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸，苯丙氨酸-蛋氨酸，苯丙氨酸-亮氨酸)，可以作为脑啡肽的抑制剂，并且可能较大的脑啡肽形式本身就具有抑制性。 在本发明中，“脑啡肽酶抑制剂”包括但并不仅限于D-苯丙氨酸(DPA)，DL-苯丙氨酸(DLPA)，氢化肉桂酸和D-氨基酸如D-亮氨酸，预期其它脑啡肽抑制剂也有特别的意义，它们选自某些蛋白合成抑制剂(杆菌肽，贝他定，和嘌呤霉素)，多肽氨基酸(游离的D-型单氨基酸，D-型必需氨基酸的二肽和三肽，巯基苄基氨基酸(如2-{巯基-3-苯丙酰基}-L-亮氨酸)，羧基烷基甲基酯(如N-{(R，S)-2-乙氧羰基-3-{苯基-丙醇}-l-亮氨酸}，苯并吗吩烷-脑啡肽，以及其它结构上不相关的化合物如司可巴比妥，焦磷酸盐，O-菲咯啉，磷酰胺，Z-亮氨酸-NHOH，Z-甘氨酸-NHOH。二肽如D-苯丙氨酸-D-亮氨酸和D-苯丙氨酸-D-蛋氨酸，和多肽如L-酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-D-苯丙氨酸-D-亮氨酸，和L-酪氨酸-甘氨酸-甘氨酸-D-苯丙氨酸-D-蛋氨酸，以及D-苯丙氨酸，D-亮氨酸和氢化肉桂酸。 已经证明D-苯丙氨酸可抑制羟肽酶A(Hartruck和Lipscomb，1971)，并且近来证明它还具有止痛(Ehrenpreis等，1978；Della Bella等，1979)和抗抑郁作用(Beckmann等，1977)。 为评价D-苯丙氨酸作为脑啡肽酶抑制剂的效力，经试验证明它在小鼠肠粘膜上可以明显减少寡肽(D-丙氨酸2-D-亮氨酸)脑啡肽(DAPLA)和酪氨酸-D-丙氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸(TAAGP)的降解(Gail等，1983)。然而，D-苯丙氨酸在体外试验中抑制来自牛脑的脑啡肽酶A和B的活性很低(Amsterdam等，1983)，有趣的是，在仅加入1个氨基酸形成二肽D-苯丙氨酸-酪氨酸后，就可以显著地增加抑制效力。 D-苯丙氨酸可以抑制脑啡肽和B-内啡肽的降解，它对于催化脑啡肽分解的酶的作用强于催化B-脑啡肽的酶。它的活性还是组织特异性的，在下丘脑，80％的脑啡肽酶被抑制，而内啡肽酶为5％；在皮质，脑啡肽酶为60％，内啡肽酶仅为18％；在纹状体，脑啡酶为78％，内啡肽酶为10％；在脊髓，脑啡肽酶为84％，内啡肽酶为40％(Ehrenpreis等，1981)。其它研究表明注射DPA后90分钟后，蛋氨酸一脑啡肽在CNS实际增加了三倍，并且在6天后还维持在较高水平(Balagot等，1983)，小鼠脑蛋氨酸-脑啡肽的增加类似地可见于注射氢化肉桂酸后，它是一种已知的D-苯丙氨酸代谢物。 本发明的另一方面是把脑啡肽酶抑制剂和脑啡肽释放剂结合起来，这样做的理论基础在于发明者可明显增强脑啡肽在各自的阿片受体部位的效果(如δ或μ)。为达到这一目的，发明者优选使用酪氨酸-精氨酸二肽(京都酚)和它的稳定的类似物酪氨酸-D-精氨酸，后者具有止痛作用，并且在鼠脑纹状体部位的突触小体中增加细胞内钙。这些物质似乎是蛋氨酸-脑啡肽释放剂，其作用方式未知(Ueda等，1986)。 为了既抑制脑啡肽酶又增加神经元脑啡肽的释放，称作京都酚的物质(酪氨酸-精氨酸)每日的用量应在15ug-15mg之间。每天用剂量在15ug-15mg之间的更为稳定的类似物(酪氨酸-D-精氨酸)可以代替它作为脑啡肽释放剂(Tajima等，1980；Ueda等，1986)。因此，一种脑啡肽释放剂可以和脑啡酶抑制剂结合，在突触中达到高水平的脑啡肽神经能活性，以进一步增加神经元多巴胺的释放。这可以作为“置换治疗”的一种方式，减少对可卡因的″成瘾″以及其它这里所描述的RDS行为。这一治疗在可卡因去毒后的12月中将最为有效。 γ-氨基丁酸(GABA)的前体。GABA是控制多巴胺释放的一种抑制性神经递质(Gessa等，1985)。它似乎减少酒精脱瘾后的癫痫发作。合成γ-氨基丁酸(GABA)的主要途径是通过谷氨酸脱羧酶(GAD)将L-谷氨酸脱羧。和其它的氨基酸脱羧酶一样，该酶需要维生素B6(磷酸吡哆醛)作为辅助因子。GAD仅存在于突触GABA神经末端的细胞浆内。控制GABA合成的关键是GAD，它也是GABA合成的限速步骤。GABA通过终产物抑制影响GAD的活性。在突触前神经元L-谷氨酸的浓度处于饱和，因此，增加的物质浓度并不能影响GABA的合成速度，所以，外源性给以L-谷氨酸并不能明显增加神经递质GABA，除非L-谷氨酸的水平异常低下。有试验表明，持续10天通过饮水给不同酒精诱导的成年白化病小鼠服用谷氨酰胺(500ng/kg，每天)可以显著增加脑中谷氨酸盐、GABA和牛磺酸的含量。谷氨酰胺是将氨运输出脑的有效的中间物，因此可大大影响神经组织中不同氨基酸的分解代谢。在脱氨基后，谷氨酰胺可成为谷氨酸盐的前体，因而是是GABA的前体(Thawki等，1983)。 至少有2种GABA受体：GABA-A受体对荷包牡丹硷和木防已苦毒素或木防已苦毒宁的竞争性阻滞作用很敏感，这些受体位于突触后结构上，调节典型的GABA抑制作用。而GABA-B受体位于突触前末端，对荷包牡丹硷的阻滞作用不敏感。GABA-B受体不仅可调节GABA在CNS的释放，而且可调节NE从交感神经系统的某些部位的释放。 已经有人提出某些临床上的功能障碍如运动障碍、Huntington氏舞蹈病、癫病、酒精中毒等可能与GABA系统有关。GABA受体对GABA的亲和力、苯并二氮杂的苯并二氮杂结合位点和巴比妥酸的巴比妥酸结合位点的改变，都受一种叫“GABA调节素”的蛋白调节。与腺苷酸环化酶相关受体有关的GTP调节蛋白一样，GABA调节素的活性由磷酸化作用决定。 GABA通常与下丘脑、海马、脑基底神经节、脊髓后角和视网膜处的胶状质的抑制性神经元有关。CNS内的某些长的轴突通路经认定也与GABA能活性有关。 GABA激动剂包括乙酸咪唑、磺酸3-氨基丙烷、和THIP(4，5，6，7-四氢-异噁唑并-[415-C]-吡啶-3-醇和在捕蝇蕈中发现的蝇蕈醇(3-羟基-5-氨基-甲基异噁唑)。GABA拮抗剂包括荷包牡丹硷、木防已苦毒素、木防已苦毒宁和苄青霉素。 在突触前的GABA神经末梢和神经胶质成份中存在一个高亲和性的钠依赖性的摄入系统，将释放的GABA从细胞外间隙除去从而使其灭活。GABA摄入的抑制剂包括：神经元摄入型：如二氨基丁酸和顺-2，3-氨基环已烷羧酸；神经胶质摄入型：如B-丙氨酸；其它摄入型：3-哌啶甲酸、苯并二氮杂类和、neuroleptics和三环抗抑郁药。 GABA在释放和与受体相互作用后可以重新回到突触前神经元，因此是一个可再利用的神经递质。GABA在神经末梢和神经胶质组织通过酶进行代谢和转换，如在A-氧络谷氨酸的存在下由线粒体GABA氨基转移酶(GABA-T)作用变成琥珀酸半醛。形成的琥珀酸进入三羧酸(Krebs)循环。GABA-T需要磷酸吡哆醛作为辅因子。琥珀酸半醛迅速被琥珀酸半醛脱氢酶氧化成为琥珀酸，琥珀酸脱氢酶也要用NAD和NADH作为辅因子。考虑到这一点，发明者在配方中加入吡哆醛-5-磷酸作为氧化-还原通路的促进剂。 从这一点来说，在动物和人，给以下的GABA-T抑制剂可以增加GABA浓度，如乙醇胺-P-磷酸，γ乙炔基GABA，γ乙烯基GABA，gabcuculline，肼基丙酸，二-N-丙基乙酸钠(valproate钠)，氨基羟乙酸(维生素B6抑制剂)，L-谷氨酰胺(Bloom，1985)。 儿茶酚胺(多巴胺、去甲肾上腺素)的前体儿茶酚胺类多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和肾上腺素(E)都是神经递质。儿茶酚胺是在苯环上具有2个相邻的羟基(OH)的化合物。在体内，这类物质是通过酪氨酸羟化酶将芳香族氨基酸L-酪氨酸羟基化为L-3、4二羟基苯丙氨酸(L-多巴)而合成的。L-酪氨酸被有效地摄入去肾上腺素能神经末梢。L-苯丙氨酸是L-酪氨酸的前体(Blum和Kozlowski，1990；Schwartz等，1992)。 酪氨酸羟化酶位于去甲腺素能神经元的细胞浆，是NE合成的限速酶。大量研究表明还原型喋啶辅因子、分子氧和亚铁离子对活性是必需的。在胞浆中，L-多巴通过以磷酸吡哆醛(维生素B6)作为辅因子的L一芳香族氨基酸脱羧酶脱羧为DA。多巴胺被主动摄入到颗粒状的贮存囊泡中，在多巴-B羟化酶的作用下将DA羟基化形成去甲肾上腺素(NE)。该酶需要铜、分子氧和抗坏血酸作为辅因子。在CNS的某些神经元中，NE进一步通过苯乙醇胺N甲基转移酶转变成肾上腺素(E)。 酪氨酸羟化酶的活性受下列因素影响：“终产物”抑制，由神经末梢内NE浓度增加引起，L-酪氨酸转化为L-多巴的速率降低；CNS内交感神经活性的增加，从而增加NE的合成；血管紧张素II介导的NE合成的增加；肾上腺受体的激动剂(如可乐定)和阻滞剂(如酚妥拉明)通过位于突触前神经末梢的肾上腺素能受体改变NE的释放速率。 NE合成酶的抑制剂包括：甲基-P-酪氨酸(抑制酪氨酸羟化酶)，卡比多巴(抑制在CNS外的组织中的芳香族氨基酸脱羧酶)，和二硫代碳酸二乙酯，FAI63和解酒硫(多巴胺-B-羟化酶的抑制剂) NE以多种贮存复合物的形式贮存在神经末梢的多个解剖部位。一种NE贮存类型是颗粒状复合物，位于去甲肾上腺素能神经末梢的囊泡内。颗粒状复合物由结合到ATP上的NE和被统称做嗜铬粒蛋白的几种蛋白组成，包括多巴胺-B-羟化酶和Mg++，Zn++和Cu++。 将DA和NE摄入贮存囊泡中是一个主动转运过程，需要ATP提供能量和Mg++激活Mg++依赖性的ATP酶，这一Mg++依赖性的将DA和NE摄入贮存囊泡的过程与DA和NE穿过神经细胞膜进入神经元的过程是相互独立的不同的，后者是Na+/K+-ATP酶依赖性的。 NE-ATP-蛋白-离子贮存复合物的稳定性，可以被某些作为Mg++鳌合剂的化合物所破坏。长期可卡因滥用者有时出现的镁缺乏可能与此有关。就这一点而言，长期给以可卡因可以增加NE的回复。 NE从神经末梢的释放是通过一个钙依赖性的细胞排粒作用完成的。囊泡膜与原生质膜融合，由NE，ATP，多巴胺-B羟化酶和嗜铬粒蛋白组成的囊泡内容物释放到突触间隙。一个已知控制NE到突触后受体的可利用度的机制需要依靠位于释放NE的神经末梢的突触前受体。位于突触前神经末梢的一个摄入系统可以使NE离开突触间隙，从而使NE在突触间隙的作用被终止。有两种神经元性NE摄入方式：方式I，方式II。 方式I是能量依赖性的，需要被钠依赖性的ATP酶降解的ATP。这是一个高亲和性的过程，也就是说可以有效地清除突触间隙的低浓度NE。神经元摄入系统将NE运输到神经末梢，在此大多数NE被贮存在囊泡中，这一过程的抑制剂包括可卡因、三环抗抑郁剂、安非他明和酪胺。 方式II涉及NE在非神经元组织中的聚集。由于肾上腺髓质的刺激或静脉注射儿茶酚胺引起的NE血浆高水平，可以被非神经组织如肝、肌肉、结缔组织所摄取。NE或其它儿茶酚胺物质可以重新扩散到循环系统，而更多的是在细胞内被单胺氧化酶(MAO)和儿茶酚胺-O-甲基转移酶(COMT)所破坏。 MAO存在于所有含线粒体的组织中，并且结合在外膜上。肝、脑、神经、肌肉、和所有代谢活跃组织中都有MAO，它将NE氧化脱氨为c，4-二羟扁桃酸，后者随后被O-甲基化(被COMT)为3-甲氧基-4-羟扁桃酸。MAO实际上是一组具有不同组织分布、底物、抑制剂和物理特性的异构酶。例如，MAO A喜欢以NE和5-HT为底物，可被氯吉兰选择性抑制。MAO B喜欢以olopamine和苯乙胺为底物，可被deprenyl(司来吉兰)选择性抑制。其它熟知的MAO抑制剂包括：异丙烟肼，烟肼酰胺，tranclypromine，和苯乙肼。 人们发现肝细胞中存在大量的COMT，在CNS中，COMT作用于未被神经元重新摄入而失活的E和NE。抑制剂焦性没食子酸通过阻滞COMT依赖性的甲基转移过程而起作用，该转移涉及将来自S-腺苷-L-蛋氨酸的一个甲基转移到NE，E和DA的儿茶酚环3’羟基位置上。多巴胺是E和NE的前体，并且在CNS和自主神经系统的一些神经节中起重要作用。 神经元内高浓度的DA通过终产物抑制作用抑制酪氨酸羟化酶，从而减少DA的合成。此外，DA合成的限速步骤是酪氨酸羟化酶作下的酪氨酸到L-多巴的转化。在正常情况下，酪氨酸羟化酶已完全被L-酪氨酸饱和，因此，增加循环中酪氨酸水平并不能加快DA合成的速率。然而，当DA量减少和酪氨酸羟化酶例如受可卡因的影响而遭到破坏时，这一事实将发生改变。 L-多巴被主动摄入CNS神经元并在此转变为DA。用L-多巴治疗后，DA合成和贮存的量明显增加。与多巴胺能系统相比，用L-多巴治疗后，NE合成仅有少量增加。 多巴胺贮存在贮存颗粒中，在此儿茶酚胺和嗜铬粒蛋白、二价金属离子和ATP复合在一起。DA被认为通过细胞排粒作用释放到突触间隙。如同NE，这是一个钙依赖性的过程，并且在对到达神经末梢的动作电位或药物发生反应时产生。下列物质可增加DA释放：可卡因、(+)-安菲他明、去氧麻黄碱、酪胺、金刚胺、m-芬美曲嗪、芬特明和诺米芬新。除了引起DA释放，这些化合物还不同程度地抑制神经元对DA的重摄取。 DA被释放到突触间隙后，其作用被神经元的重摄取系统所终止，该系统是一个高亲和性、能量依赖性、主动转运过程，与曾经描述过的NE系统相类似。MAO和COMT分别对DA转化为3-4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA，3-甲氧基-4-羟-苯乙酸)负责。可卡因通过对将DA重新摄入突触前神经末梢的阻滞而延长DA在突触间隙的作用。 脑酪氨酸水平的升高导致脑L-多巴合成的增加，L-多巴随后代谢为多巴胺。给以酪氨酸后，多巴胺的合成和释放增加。食物中的酪氨酸可增加多巴胺和去甲肾上腺素的回复和释放，但并不增加儿茶酚胺水平。压力、寒冷和某些药物可导致神经消耗增加从而使神经末梢的儿茶酚胺的水平降低。 L-苯丙氨酸是一个必需氨基酸，它也是多巴胺和去甲肾上腺素神经递质合成的前体。通过检测这些神经递质的代谢产物HVA、DOPAC和MHPH，发现它们在剧烈活动和身体疲劳时明显改变。L-苯丙氨酸可以在可卡因滥用导致多巴胺耗竭后用以代替，或与L-酪氨酪或L-多巴一起恢复多巴胺贮存。 采用这些前体可以作为以多巴胺能释放剂、阻滞剂、激动剂或拮抗剂或影响多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素重新摄入或降解的试剂治疗的各个阶段的适当补充。然而，更重要的是包括合成和释放的全部多巴胺能活性在某些程度上受某些阿片类多肽的调节(如脑啡肽和内啡肽)。中枢性给以阿片类多肽在人和动物均可引起血浆儿茶酚胺水平的升高(Clouet，1982)。实际上，阻滞突触前多巴胺能受体可以增强B-内啡肽的释放，显示一个独特的互动关系。可以作为前体的化合物包括L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、pharmaline。 Rhodiola Rhosea提取物(pharmaline).Rhodiola Rhosea或金根是景天科的一种多年生草本植物，生长在北极和阿尔卑斯山地区。在阿尔泰山脉、东西伯利亚、Tien-sdhein和远东地区，人们已成功掌握Rhodiola Rhosea的栽培技术。即可以从种子又可以从植物繁殖(Polozhy等，1985；Saratikov和Krasnov，1987)。其根茎含有酚化合物，其中最重要的是p-对羟苯基乙醇(tyrasol)和它的糖苷红景天苷(salidroside)，其决定了Rhodiola Rhosea制剂的生物活性(Saratikav等，1968)。Rhodiola具有刺激和致适应性质，它被认为可以改善从事体力劳动的能力，减轻疲劳，缩短肌肉超负荷后的恢复时间，使心血管动能正常化。在高强度肌肉工作过程中，通过优化氧化磷酸化过程防止脑和肌肉中micurgic磷酸的丢失，稳定脂类在肌肉中的活性，增强骨骼肌代谢的指标(激活对aminacyl-t-RNA-合成酶)，增加RNA的含量，增加肌肉尤其是脑的供血(Saratikov等，1968；Saratikov，1974)。Rhodiola能增强注意力范围、记忆、改善脑力劳动和体力劳动。与这一活性有关的大脑区域为丘脑皮质和下丘脑后部(Marina等，1973)。Rhodiola还与其他多种作用有关：防止高血糖和低血糖、白细胞增多和减少、红细胞增多和减少、低氧，减少应激并起到保护心脏的作用。Rhodiola的应激调节效应与它使垂体-肾上腺系统和阿片能系统正常化的作用有关。人们还发现Rhodiola能增强机体的抗肿瘤耐受能力，明显抑制实验性肿瘤的生长，降低肿瘤转移的频率，延长肿瘤复发动物的生存期，减少自发性肿瘤的后果(Dementyeva和Yaremenko，1983)。还有证据表明Rhodiola可以减轻神经官能症，对抗疲劳(Saratikov，1977)。 红景天苷(一种Rhodiola提取物)30mg/kg的红景天苷(SAL)可以防止解酒硫诱导的动物脑NE降低。红景天苷通过抑制COMT和MAO的活性而影响脑NE，红景天苷并不降低儿茶酚胺和5-羟色胺前体透过血脑屏障(BBB)的能力，这一特性使其对本发明组合物，尤其是治疗注意力障碍的方案非常有用。在无伤的小鼠中给以0.2mg/kgrhodosine(含有红景天苷，糖苷配基对羟苯基乙醇，rosavin)，可以增加脑新皮质中DOPA、多巴胺(DA)和5-HT的浓度，减少尾状核中NE水平。另有人证明皮下注射红景天苷30分钟后，肾上腺素(EPI)和DOPA水平并无改变。在给予30mg/kg剂量时，NE含量减少26％，5-HT含量减少15％；在给予100mg/kg的剂量时，NE、DA、5-HT的浓度分别减少20％、28％、23％。在给小鼠服用L-多巴(50mg/kg)和5-HTP(100mg/kg)的试验中表明，与盐水-多巴-5-HT对照相比，服用红景天苷(30mg/kg)分别可使动物外源性DOPA和5-羟色胺升高26％和13％。这些资料揭示该制剂增加了血脑屏障对儿茶酚胺前体的通透性。此外，Petkov(1981)的研究表明，红景天苷降低了MAO的活性，抑制了COMT的活性，因此减慢儿茶酚胺以O-甲基化和氧化脱氨基方式灭活。进一步有试验表明：红景天苷并不改变5-HTP脱羧酶的活性，因此，它并不影响由5-HTP到5-羟色胺的合成，但通过轻度抑制MAO，减缓胺的生物转化。显然，涉及联合给予5-HTP和红景天苷的研究中脑中5-羟色胺的增加，是由红景天苷增强血脑屏障对5-HTP的通透性而控制的。 文献显示了Rhodiola和神经递质动力学之间的一些相互作用，归纳起来已经报道的有：多巴胺在伏核中的减少，在海马中NE的增加，在下丘脑5-HT的增加，以及胆碱能受体的激动剂样活性。在神经科学中有关各种神经递质在认知问题上起不同作用的某些机制已被接受。胆硷能神经机制是记忆痕迹固定的基础。脑去甲肾上腺素能系统增强正性强化作用，5-羟色胺能机制更多地涉及记忆的巩固过程。 有人通过使用几种带有负性和正性强化作用的积极逃避方法研究Rhodiola对大鼠的效果(Petkov等，1986)。采用带有负性(惩罚性)强化的迷宫方法，发现给每只大鼠Rhodiola提取物0.1ml后可以改善学习和记忆。在记忆试验中使用同样剂量连续治疗10天，可以明显提高长期记忆。采用带有正性强化(食物)的“楼梯”方法，给每只大鼠0.1ml Rhodiola提取物，也在训练过程中取得了有利的效果。相反，采用其它方法，给每只大鼠0.01ml Rhodiola提取物并没有对学习和记忆产生实际的效果，证明这种酒精-水提物的不一致性。 白化病大鼠被用来研究甲氯芬酯和Rhodiola对惊厥性电休克记忆损害的效果(Lazatova等，1986)。以100mg/kg体重的剂量腹膜内注射甲氯芬酯5天，在训练后的第3、第24小时，经保持试验证明：它可预防惊厥性电休克所引起的逆行性遗忘症。相反，尽管Rhodiola提取物在其它实验中可改善学习和记忆，经口连续10天给每只大鼠服用Rhodiola提取物0.10ml，并没有产生作用。 石杉碱石杉碱是属于乙酰胆碱酯酶抑制剂的一种化合物，它可抑制破坏乙酰胆硷的酶类，乙酰胆硷是一种重要的神经递质或脑化学物质，据信对学习和记忆十分重要。石杉碱是天然存在的化合物，最早从石松Huperzine Serrala中分离到。被用做中药，最近作为治疗与年龄有关的记忆障碍的药物已经在中国进行了有限的临床试验。结果提示在某些病人中可改善学习和记忆。然而这暗示性的结果并未被临床试验证实。这一天然物质被考虑用于本专利中所要求的组合物中以影响注意力集中过程。用于增强人的记忆的推荐使用剂量为150ug/天(治疗性用药范围是1.50到1500mcg/天)。 石杉碱甲对由莨菪胺诱发的记忆损伤的效果与E2020和他克林(tacrine)的效果在体外进行了比较，使用的是辐射状的迷宫作业和胆碱酯酶抑制方法。莨菪胺(0.2mg/kg)在大鼠中明显地损伤了空间记忆。石杉碱甲(口服0.1-0.4mg/kg)和E2020(0.5-1.0mg/kg口服)和他克林(1.0-2.0mg/kg口服)能把这些莨菪胺诱发的记忆缺乏逆转。由比色法确定的石杉碱甲、E2020和他克林对丁酰胆碱酯酶：乙酰胆碱酯酶的比率分别是884.57、489.05和0.80。结果证明了石杉碱甲是最具有选择性的乙酰胆碱酯酶抑制剂，并且，比E2020或他克林更明显地改善了由莨菪胺诱发的记忆缺乏，这表明它可能是一种可用于阿耳茨海默氏症患者的认知损伤临床疗法的有希望的药剂(Cheng等，1996)。 石杉碱甲是一种新的有效的可逆的选择性乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂，人们期望它比目前在阿耳茨海默氏症患者中用于记忆缺乏的治疗的其他乙酰胆碱酯酶抑制剂更优秀。已经测定了石杉碱甲对被AF64A-处理的大鼠在辐射状迷宫中表现的影响(Zhi等人，1995)。AF64A(每边2nmol，i.c.v.)对老鼠执行空间工作记忆作业的能力造成了明显的损伤。这种行为的损伤与胆碱乙酰转移酶(ChAT)在海马中活性的显著减少有关联。石杉碱甲(0.4-0.5mg/kg，腹腔注射)明显地改善了由AF64A引起的记忆缺乏。这些结果暗示AF64A是一种通过改变海马胆碱能功能而破坏工作记忆过程的有用的试剂，并且，这样的损伤能被石杉碱甲有效地改善(Zhi等..1995)。 HuperazonTM的主要的组成部分是石松Huperzia serrata的专有提取物，用于治疗阿耳茨海默氏症。在中国进行的研究显示：这种提取物的活性物质石杉碱甲是用于阿耳茨海默氏症的有希望的新治疗法。其他的研究显示石杉碱甲是一种很好的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchE)，具有通往CNS的出色的渗透力和值得注意的体内半衰期。在中国进行的双盲临床试验证明：石杉碱甲是安全的，而且对阿耳茨海默氏痴呆的长期治疗来说是有效的。除了具有乙酰胆碱酯酶抑制剂活性，最近的发现显示石杉碱甲还有其他的神经保护性功能：石杉碱甲在大鼠的新生海马和小脑神经元的培养物中，能抑制由谷氨酸诱导的细胞毒性；石杉碱甲促进神经元培养物中的树突的分枝。 阿耳茨海默氏症的特点是神经元的异常和退化，这些神经元正常活动和生存能力是依靠乙酰胆碱和乙酰胆碱酯酶的。这些位于前脑基底部的神经细胞也与如帕金森病的其他神经疾病有关。石杉碱甲是在活性上比Cognex和E2020更出色的乙酰胆碱酯酶的有效抑制剂，Cogex是在美国第一个被批准用于治疗阿耳茨海默氏症的药物，E2020是最近被Eisai Pharmaceuticals许可的的药物。另外。石杉碱甲已经表现出在组织培养中可以保护神经元免于由兴奋性氨基酸谷氨酸导致的死亡。由于石杉碱甲具有双重的药理学活性，HuperazonTM就为注意缺陷和老年记忆缺乏的治疗提供了一种独特而重要的活性。石杉碱甲的毒理学和功效的研究表明，即使给予人治疗剂量50-100倍的剂量，它也不具有毒性。提取物在剂量为2ug/kg时，可以起效6小时而没有值得注意的副作用。 在阿耳茨海默氏症中，使用Weschler量表进行测量，160个以上患者的双盲对照研究结果表明：仅仅每天两次150ug的剂量(3-5ug/kg)就可以使患者获得显著的改善。在由其看管人进行的患者评估中，把石杉碱甲和安慰剂进行比较，使用安慰剂的11个患者报告了在头脑清楚方面有改善，而26个使用石杉碱甲患者报告有这种改善，8个使用安慰剂的患者被证明改善了记忆，而16个使用石杉碱甲的患者改善了记忆，并且，1个使用安慰剂的患者被证明具有语言上的进步，而8个使用石杉碱甲的患者有这种进步。 在使用石杉碱甲的患者与使用吡拉西坦的患者之间进行的记忆改善的比较中，已经证实：50％的使用吡拉西坦的患者和85％的使用石杉碱甲的患者改善了记忆，也证实了明显地改善了记忆的患者在使用吡拉西坦患者中有30％，在使用石杉碱甲患者中有70％，并且，仅有15％的使用石杉碱甲的患者被证明没有记忆的改善，使用吡拉西坦的患者有50％被证明没有改善。 石杉碱甲有2个重要的特征可以用于区别于Cognex和E2020以及其他研究中的实验化合物。石杉碱甲对脑乙酰胆碱酯酶(AChE)而不是在身体别处的乙酰胆碱酯酶具有非常高的特异性。人们认为这种选择性与提取物的比较低的毒性有关系。另外，与被批准用于治疗阿耳茨海默氏症的2种药物Cognex和E2020不同，石杉碱甲已经被证明缺乏对存在于CNS中的受体如毒蕈碱受体M1和M2的结合，这种结合会引起副作用。 石杉碱甲活性的持续时间(3小时)比Cognex(2小时)和毒扁豆碱(30分钟)要长。在动物中进行的关于学习和记忆强化的行为研究中，对记忆和学习来说有效的提取物剂量与非毒性效果剂量(来自毒性研究)之间的差异是30-100倍。这些数据有力地暗示了石杉碱甲能有效治疗阿耳茨海默氏症而只有最低限度的副作用。 铬盐(如吡啶甲酸盐、烟酸盐等)食物中的铬是人体必需的营养物，其在人体营养方面的价值已经有定论。对铬的兴趣来自一种看法，即因为铬是一种必需的微量矿物以及胰岛素的辅因子，所以，通过对胰岛素作用的加强效果，它能在葡萄糖、脂类和氨基酸新陈代谢中起作用。这种议论的支持依据是人们观察到铬缺乏结果是造成葡萄糖耐量的损害、胰岛素抵抗、血葡萄糖升高和II型糖尿病的症候；另外，适量的生理学活性的铬能减少人体中胰岛素的需求(Kaats等.1996)。 国立科学院已经把铬分类作为微量矿物质，并推荐每天摄入50～200ug。不过，最可靠的研究报道：在美国人中(对其他的国家来说也类似)，该摄入量是次佳剂量-仅仅是女子的最低需要量的40％，男子的60％。25个以上的人体研究指出：补充铬对居家生活的人具有有益的效果，包括改善葡萄糖、胰岛素和脂类水平，改善受损伤的葡萄糖耐量；降低成年人已经升高的胆固醇水平；改善胰岛素和低血糖患者的状况(Mertz，1992)。 为了增加铬的生物利用度，几个研究已经提议使用吡啶甲酸，它是色氨酸自然代谢产生的派生物。吡啶甲酸看来能与微量金属离子在肠和血液中结合，促进微量矿物质的收集和利用(Evens和Bowman，1992)。 因为身体的脂肪沉积看来部分是由胰岛素进行调节，胰岛素利用情况的改善应该导致脂肪沉积的减少。因为胰岛素指导氨基酸进入肌肉细胞，所以，改善胰岛素的效果能对肌肉组织有确定的影响；一旦氨基酸进入肌肉细胞，它们通过胰岛素对细胞遗传物质DNA和核糖核酸的影响而组装成为蛋白质。铬的这种效果对本发明很重要，因为这样可以降低某些氨基酸如缬氨酸和亮氨酸的竞争，从而使色氨酸的量增加(Wurtman，1982)。胰岛素也使身体蛋白质的崩解或分解作用变慢，并通过网络效果，增加可以用于建造组织的蛋白质的量。铬能潜在性地促使无脂肪质(FFM)得以维持或增加。已经有人建议：如果CrP能降低胰岛素耐受，它就能改善身体构成，因为胰岛素耐受或缺乏导致通往肌肉细胞的葡萄糖和氨基酸的通道损伤，增加了肌肉蛋白质的分解，以及增强了胰岛素缺乏所具有的加速脂类沉积(Kaates等人，1996)的潜力。其他的文献显示：胰岛素耐受有利于肥胖患者稳定身体脂肪，即处于肥胖水平上；起“调定点”作用，预防体重更进一步的增加(Eckel，1992)。一般来说，尽管动物研究已经支持了这个主张(Liarn等..1993)，一个人体研究发现了补充CrP在身体组成上造成的确定的变化(Hasten等人，1992)；另一报告也是肯定的，尽管从统计学角度看，身体的组成没有显著改变(Hallmark等人，1993)；而第3个报告没能发现CrP补充作用在身体组成方面能够产生任何确定的变化(Clancey等人，1994)。这些报告引起争论的本质在于：绝大多数人体研究使用的受试对象样本量很小，并且，受试对象经常随后就进入运动或者调节程序，从而增加了铬的需求量，数量上超过了这些研究中所能提供的量。 先前的观察铬补充作用和运动训练的共同作用的工作被限制在对身体重量和构成上效果的观察上，结果是互相矛盾的(Clancy等人，1994；Evans等人，1989；Evans等人，1993；Hallmark等，1996.Hasten等1992)。 铬的吡啶甲酸盐是使用、研究、和推广最多的铬化合物，但是，体外研究工作建议烟酸铬可能在减轻体重和身体构成的变化方面是有活力的。关于这一点，发明者非常近期的工作揭示烟酸盐可能比吡啶甲酸盐更重要(Grant等..1997)。这里提出的这个数据作为烟酸铬的有用性的例证，并在本专利申请的具体实施方案中被加入基本组合物中。 药物组合物 本发明的水性组合物包含本发明公开的用于治疗RDS有关障碍的有效量的各种化合物，这些障碍包括肥胖、ADHD、抽动-秽语综合症、PMS、吸烟和在此中阐述的其它行为，这些化合物溶解或分散在药学上可接受的载体或水介质中。短语“药学或药理学上可接受的”是指这样的分子实体和成分，即当给动物或人适当给药的时它不生产不利的、过敏性的或者其他不希望的反应。 在此使用的“药学上可接受的载体”包括任意一种和所有溶剂、分散介质、包衣物、抗细菌及抗真菌剂、等渗剂或延迟吸收制剂等等。这样的介质和试剂对药物活性物质的使用方法已经为本领域技术人员所周知。除非与药物活性成分不相容，传统介质或试剂都可用于治疗组合物中。补充性的活性成分也可以混合于药物组合物中。在给人服用时，该制剂必须符合食品和药物管理局生物制剂标准中关于无菌性、热原、一般安全性和纯化的标准。 生物学材料需要经过大面积透析以除掉不需要的小分子量分子，和/或按需要进行冷冻干燥以随时准备配制在想要的载体中。活性化合物一般被制成非肠道给药的剂型，例如通过经静脉内、肌肉内、皮下、局部甚至腹腔内的注射途径给药。根据本发明的披露，含有活性成分的水性组合物的制备已经为本领域技术人员众所周知。典型地，这样的组合物可以被制成液体的溶液或悬浊液形式的注射剂；也可以制备成在注射之前加入有关液体中制备溶液或悬浊液的合适的固体形式；另外，制剂也可以是乳化液。 适合于注射使用的药物形式包括：无菌水溶液或分散体；包含芝麻油、花生油或丙二醇水溶液的制剂；用于当场配制可注射无菌溶液或分散体的无菌粉剂。在全部例子中，剂型必须无菌，必须是流体以易于通过注射器针头。它必须在制造和储存条件之下保持稳定，必须保存在避免类似细菌和真菌等微生物污染的条件下。 作为游离碱或药理学上可接受的盐形式的活性化合物，可以在水中与表面活性剂例如羟丙基纤维素适当地混合在一起而制成溶液。另外，也可以在甘油、液体聚乙二醇和它们的混合物和油中制备分散体。在通常的储存和使用条件下，这些制剂中包括防腐剂以防止微生物的成长。 本发明的用于治疗RDS相关障碍的化合物可以被制成中性形式或盐形式的成分。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基基团形成)，与无机酸例如盐酸或磷酸，或者与有机酸如醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等等所形成的盐。另外，由游离羧基基团所形成的盐也可以来自无机碱，例如：氢氧化钠、钾、铵、钙或氢氧化铁，和有机碱如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等等。以肽治疗剂作为活性成分，作为参考文献这里引用4,608,251；4,599,230；4,596,792和4,578,770号美国专利，其技术都可以使用。 载体可以是一种溶剂或分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油，丙二醇，和液体的聚乙二醇等等)以及它们的适当混合物和植物油。适当的流动性用下列方法得以保持，例如通过使用包衣物如卵磷脂；通过维持分散相中的颗粒的大小以及通过使用表面活性剂。对微生物活动的预防可以使用各种抗细菌和抗真菌制剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等等。在很多情况下，优选含有等渗制剂如糖或氯化钠。可注射组合物的吸收延迟作用可通过在该组合物中使用延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶而产生。 无菌可注射溶液的制备过程是：将活性化合物加入到所需量的适当溶剂中，与上面列举的各种需要的成分混合，继而过滤杀菌。一般来说，分散体的制备过程是，把各种经过杀菌处理的活性成分加入到包含基本分散介质和上述列举的那些其他所需成分无菌载体中。对于用来制备无菌可注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，产生活性成分加来自上述过滤灭菌溶液的其它所需成分的粉末。还预期制备用于直接注射的更浓的溶液，预想把DMSO作为溶媒使用，可以造成极快的渗透，将高浓度的活性剂输送到一个较小的区域。 至于药物的配制，溶液将以与剂型相符的形式给药，给药量在治疗上应是有效的。药物被配制成各种剂型以便于给药：例如可以是上面阐述的可注射的溶液形式，但也可以是药物释放胶囊等等。 至于水溶液的胃肠外给药方面，例如，溶液应该在必要的情况下被适当缓冲，并且，稀释液首先要用充足的葡萄糖或生理盐水达到等渗。这些特别的水溶液尤其适用于静脉内、肌肉内、皮下和腹腔内给药。关于这一点，将要用到的无菌水介质根据本发明的公开对本领域技术人员是众所周知的。例如：某个剂量的药物可以分散在1ml的等渗的NaCI溶液中，或者被加入到1000ml的皮下注射用液体里，或者在指定的注射部位被注射(参见“雷明顿药物科学”第15版，1035-1038页和1570-1580页)。根据接受治疗的受试对象的条件，在给药上会发生一些必要的变化。在任何情况下，负责治疗的人将决定个人的合适剂量。 在此被阐述的活性成分可能被配制在治疗用的混合物中，含量为大约0.0001～1.0毫克，或大约0.001～0.1毫克，或者约0.1～1.0毫克甚至大约10毫克/剂量。另外，也可以服用多个剂量。 除了将化合物配制成用于胃肠外给药形式，如静脉内或肌肉内注射的剂型以外，其他的药剂学可接受的形式包括：例如：口服给药的片剂或其他的固体形式；脂质体形式；按时间释放的胶囊形式；以及任何其它当前使用的形式，包括软膏形式。 另外，在本发明中，也可以使用经鼻吸入的溶液或喷雾剂、烟雾剂或吸入剂。经鼻吸入的溶液通常是水溶液，是准备经鼻道滴入或喷雾给药的。经鼻吸入的溶液被制备得在很多方面与鼻子的分泌相似，这样，正常的纤毛活动得以维持。因而，经鼻吸入的水溶液通常是等渗的，并且被轻度缓冲，以维持5.5～6.5的pH值。另外，如果需要的话，类似于在眼制剂中使用的那些抗微生物的防腐剂、和适当的药物稳定剂也包括在内。各种的商用的鼻制剂已经为人所知，包括例如抗生素和用于预防哮喘的抗组胺药。 适于其他给药方式的其它剂型包括阴道栓剂和子宫托。另外，直肠托或栓剂也可以被使用。栓剂是各种重量和形状的固体剂型，通常加入药物后插入直肠、阴道或尿道。插入后，栓剂柔软起来、融化或者溶解于腔内流体之中。一般来说，对于栓剂，传统性的粘合剂和载体可以包括：例如聚亚烷基二醇或甘油三脂；这样的栓剂可以由含有0.5％-10％的活性成分的混合物所形成，较好的是含有1％-2％的活性成分。 口服制剂中包括常用的赋形剂，例如，药用级甘露醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素，碳酸镁等等。这些组合物采用溶液，悬浊液，片剂，丸剂，胶囊，持续释放剂型，或者粉末的形式。在某些特定的实施方案中，口服药物组合物将包含一种惰性的稀释剂或者可吸收的食用性载体，或者，它们可被包在硬的或软的明胶胶囊内，或者，它们可被压成片剂，或者，它们可被直接掺入到日常饮食的食物之中。对口服治疗药物的给药，活性化合物可以与赋形剂整合在一起，以可食用的片剂，口含片剂，锭剂，胶囊，酏剂，混悬液，糖浆，糯米纸囊剂等形式被使用。这样的组合物和制剂应该包括至少0.1％的活性化合物。当然，成分和制剂的百分比可以被改变，较方便地是从单位重量的2％到大约75％，或者更合适的是在25-60％之间。在这种有治疗组合物中的活性化合物的适当量应能获得适当的剂量。 片剂、锭剂、丸剂、胶囊等可以包括以下成分：粘合剂如西黄蓍胶、金合欢胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等等；润滑剂如硬脂酸镁；和甜味剂，象蔗糖、乳糖或糖精；或者调味剂如薄荷、鹿蹄草油或樱桃调味香料，它们都可以被加入。当剂量单位形式是胶囊的时候，它不但可以包括上述类型的材料，还可以包括一种液相的载体。各种其他的材料也可作为包衣物、或者为了改变剂量单位的物理形式而存在。例如：片剂、丸剂或胶囊可被虫胶、糖或者这两者所包被。酏剂糖浆可以包括活性化合物，并用蔗糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯和丙酯作为防腐剂，还包括染料和调味剂，如樱桃和橘子香料。 试剂盒 本发明的治疗试剂盒包含一种或多种用于治疗RDS和有关行为的上述试剂或化合物。这样的试剂盒一般将在适当的容器中包含：一种药学上可接受的配制形式或前述的任何一种药学上可接受的配制形式。试剂盒可以有单一的容器(包装)，或者，它可以对每个化合物有各自不同的容器(包装)。 当试剂盒的组份是以一种或多种液体溶液的形式被提供的时候，液体溶液将是一种水溶液，尤其优选无菌水溶液。另外，用于RDS相关障碍的治疗化合物(们)也可以被配制成为可注射的组合物。在这种情况下，容器本身可能就是注射器、吸移管或类似器械，配制好的成分可以通过它而应用到身体的某个部分，注入动物体内，或者和试剂盒的其他的组成部分混合应用。 不过，试剂盒的组份也可以作为干粉而被提供。当试剂或成分作为干粉被提供的时候，干粉可以通过加入适当的溶媒而重构。另外，可以想象：溶媒也可以以另一种包装手段被提供。 下列实施例是为了证明本发明的优选实施方案而提供的。本领域技术人员可以认识到在下列实施例中揭示的技术代表由发明者发现的、在本发明的实践中运作良好的那些技术，并且可以认为这是该技术实践的优选方式。不过，根据本发明的披露，本领域技术人员应该认识到：在不脱离本发明的精神实质和范围的情况下，还可以对已经被披露的具体实施方案进行许多改动依然获得类似或相近结果。 实施例1对家族性摄食过量患者加载氨基酸并抑制脑啡肽酶介绍本发明人认为RSD是对一种或多种神经递质缺乏所产生的反应。通过药物-受体激活而试图减轻神经递质的失衡将仅仅是对报偿(奖赏)缺乏的替代，并将只产生暂时的安宁感。出于这个考虑，本发明人已经表明：通过服用前体氨基酸和脑啡肽酶抑制剂，使用神经营养物质来修复脑化学物质缺乏，对于某些无法控制的摄食行为(如SUD)的痊愈是有重要的促进作用的(Blum等，1988a；Blum等，1988b；Brown等，1990)。本发明人决定对加载前体氨基酸和抑制脑啡肽是否会对门诊病人的体重减轻的维持有增强作用这个问题进行评估，期限为两年。方法：受试对象的选择和程序：本研究的受试对象是在加利福尼亚州萨格拉门托市的行为医学组诊所(Behavioral Medicine Group Clinicin Sacramento，California)进行一种极低卡路里补充禁食程序治疗的247名门诊病人。受试对象们使用Optifast作为营养性禁食产品，直到他们的体重减至与目标体重相差15％的范围内，或者直到患者选择不再继续禁食时为止。本发明人认为：在内科医生的关照下开出的其他饮食量食谱可以代替Optifast而同样有效。标准都市居民人寿保险(Standard Metropolitan Life Insurance)身高/体重表格被用来决定理想体重。所有受试对象在整个研究期间都服用核心维生素(Centrum vitamins)。每个受试对象都在被充分告知后表示同意参加研究，依据一个肥胖研究协议，本草案也得到“行为医学医生组织临床学会审查委员会”和“位于圣安东尼奥的德克萨斯大学健康科学中心学会审查委员会”的批准。 关于患者是否要服用PHENCALTMTM的决定在患者禁食结束后作出。那些抱怨得到最高暴食得分的患者和那些主诉在抵御某些碳水化合物，如糖果(甜食)、面包、柑橘、意大利面食等食物的诱惑时感到最为困难的患者，以及那些在减体重方面或实际达到目标体重方面有困难的患者，被认为是更难治疗的。抱怨最多的患者或不能控制进食的患者被挑选出来服用PHENCALTM(研究组；N＝130)。如果维持治疗表现得很容易，对这样的患者就不提供PHENCALTM(对照组；N＝117)。对于被挑选出来的受试对象，PHENCALTM疗法于禁食的结束时开始并在维持治疗期间持续进行，直到两年的研究的结束。PHENCALTM是一种氨基酸和维生素的补充剂，也是特定的PHENCALTM的前身，由1899有限责任公司(圣安东尼奥，德克萨斯)发展和生产，由Weider营养品集团(盐湖城，犹他州)销售。挑选出的受试对象每天服用六个PHENCATM胶囊，每个胶囊含有460毫克DL-苯丙氨酸、25毫克L-色氨酸、25毫克L-谷氨酰、5毫克吡哆醛-5’-磷酸酯、33微克吡啶甲酸铬和10毫克L-肉毒碱。 患者们在参加一个教育课程之前和之后要每周称量体重。每个患者都要参加该课程的学习，由本计划的医学主管和一名注册营养师承担教学，课程结构包括如下知识：关于肥胖病和它的社会流行，它的潜在可能性的预防，它对个人健康和福利的影响，它的治疗，家庭的责任，遗传性障碍的可能性，营养性补充剂的用法，合适的营养品在饮食中的作用，高蛋白、低脂肪和极低或无碳水化合物饮食的概念，运动的作用，等等。另外，每周还要对患者们的心理学状况和医学状况进行监测。心理学状况的监测是按照患者对食物的成瘾性、情绪的稳定性和暴食的程度分等级计分。食瘾量表上的5分表示完全无法控制和即使感到不适也要进食。1分表示有内疚感的进食愿望，即他/她知道自己是得到满足的，而且不应该在生理上对食物成瘾。情绪的稳定性被用类似的计分方法记录，5分表示是情绪非常不稳定，而1分表示最低限度的情绪不稳。暴食指标记录的是每周进食超过饱食点的次数。实验室血液分析和尿样分析隔周进行，以提供有关医学信息。血样分析检测的是血中的化学物质和SMAC-全血细胞计数，另一方面，尿样分析主要是检测酮和/或葡萄糖。教育课程是每周进行一小时，课程强调的是营养、运动、行为的变化和如何处理精神压力的原则，以支持减轻体重和长时期维持治疗。 受试对象人口学特征：247名受试对象，84％为女人。全部受试对象都是白种人，平均年龄是40岁。在进入本程序治疗时，受试对象平均超重74％。 服用PHENCALTM的130名研究受试对象与117名对照受试对象在年龄、理想体重、开始体重、超重百分比、食物成瘾性、情绪波动、暴食或肥胖的家族史(见表20-B)方面没有显著差别。不过他们在化学药物品依赖(CD+)的家族史方面则有区别。研究组里的受试对象中的65％有化学药物品依赖(CD+)的家族史，而对照受试对象中则只有30％。(p＜0.005)。因为只有那些抱怨更多或者在体重维持期间的体重有些失去控制的受试对象才会被选入研究组，所以这些资料暗示那些CD+的受试对象会有较多抱怨，而且在整个体重维持治疗期间会表现得更为艰难。 表20-B受试对象序号 年龄(岁) 女性％ 理想体重％ 超重％ OB％ CD％总数 247 39.8 84.2 130.2 74.3 68.1 52.3分组人数PhenCal组 130 38.9 83.8 129.1 74.4 64.5 65.4非PhenCal组 117 40.7 84.6 131.4 74.3 71.8 39.3受试对象特征：各数字代表平均值。％超重＝[开始时体重-理想体重]/理想体重；％OB＝报告有肥胖家族史组的百分比。％CD＝报告有化学药物品依赖家族史组的百分比。PhencalTM是位于得克萨斯州圣安东尼奥的1899责任有限公司和犹他州盐湖城的Weider营养品公司的产品。 性别差异。在本研究中，208个女人开始时平均超重76％，而39个男人平均超重66％。标准都市居民人寿保险高度/体重表被用来决定理想的体重。大约四分之三(73％)的女人是病态肥胖，(即至少超重50％或更多)，与之相比，男人的病态肥胖人数比例约为一半(49％)。本计划中女人与男人人数的比例超过5比1。计划开始时进行的面谈中，有超过90％的女人报告了渴求食物，另一方面，男人中有略少于80％的人报告了这种渴望。在暴食方面，男人和女人之间也有相当明显的差异。80％的女人报告了暴食，而在男人中仅有64％的人有此种表现。 患者的家族史方面。在进入本计划时，每个受试对象都被询问了有关化学药物品依赖和肥胖的家族史。略多于70％的女人和56％的男人报告了具有肥胖家族史。在这些有肥胖家族史的病人中，有肥胖母亲的人数(占73％)大约是有肥胖父亲的人数(占38％)的两倍，有肥胖家族史的那些人中有11％的人报告其父母均肥胖。女人和男人中几乎各有半数的人都报告有化学药物品依赖的家族史。不过在这种情况下，主要是其父亲具有这一特征。有化学药物品依赖家族史的受试对象中，整整有86％的人报告他们的父亲是化学药物品成瘾者，而只有31％的人的母亲是化学药物品成瘾者。大约三分之二(63％)的病态肥胖(至少超重50％)的受试对象报告说有肥胖的母亲，并且有60％的病态肥胖者报告他们的父亲是某种形式的化学药物品成瘾者。由于男人仅仅占总人数的16％，所以任何有关家族史亚群的陈述最多只能是初步的。结果体重减轻的维持。247受试对象在经过平均20.0星期的禁食后体重平均减轻了68.4磅。研究组在禁食的最后，以及在开始服用PHENCALTM之前与对照组有所不同，但是差异并不显著。研究组在禁食结束时超重22％，对照组超重32％。如果不考虑这种差异，统计分析证明禁食结束时的体重在2年内对减轻体重没有影响。在2年研究结束时，服用PHENCALTM的受试对象平均超重23.5％，未服用PHENCALTM的对照组平均超重52.8％，(p＜0.0001)[见图2]。2年之后研究组里的受试对象仅恢复了他们失去的体重的14.7％，与之相比，对照受试对象恢复了他们失去体重的41.7％(p＜0.0001)。 遗传上的影响：根据家族史来分组比较受试对象和对照人群(OB+/CD+，OB+/CD-，OB-/CD+，和OB-/CD-组)，发现所有服用PHENCALTM的受试对象在2年之后比任何对照亚组都更少超重(p＜0.0001)。就这个例子来说，OB不是指基因，而是指肥胖家族史。所有有OB+家族史的患者组在2年之后都比有OB-家族史的患者组超重更多(p＜0.05)。但有化学药物品依赖家族史的受试对象在对PHENCALTM的良好应答方面与其他人没有统计学上的显著性差异。 遗传与性别：从整体上看，所有有家族史的男性组与女性组相比，其体重的恢复程度都显著地轻(p＜0.0001)。在情况最好的组(OB-/CD+)中，在两年的研究结束后，男人实际上完全没有恢复在禁食期间减掉的体重。因为本研究中女人与男人人数的比例超过5比1，并且，女人在几个特征方面和男人有所不同，发明者决定进一步鉴定女人的特点。70％的女人报告了OB+的家族史，54％的女人报告有CD+的家族史。仅仅12％的女人报告既没有CD-的家族史也没有OB-的家族史。有OB+和CD+家族史的女人平均比OB-/CD-家族史的女人重58％。而且，OB+/CD+的女人是超重最多的；超重位居其次的是OB+/CD-的女人，随后是OB-/CD+的女人，最少的是OB-/CD-女人。类似的情形出现在渴望食物、暴食、进食和情绪的稳定性计分上，据报告OB+/CD+女人在食物成瘾、暴食和喜怒无常方面表现得最为突出。 对食物成瘾和暴食：患者的心理学状态和医学状况被跟踪监视。心理学状态根据临床上对食物成瘾、情绪稳定性和暴食的等级划分量表被定性地监测记录。食瘾记录上的5分表示完全无法控制和即使感到不适也要进食。1分表示有内疚感的进食愿望，即他/她知道自己是已经得到满足的，而且不应该在生理上对食物成瘾。情绪的稳定性被用类似的计分方法记录，5分表示是情绪非常不稳定，而1分表示最低限度的情绪不稳。暴食指标记录的是每周进食超过饱食点的次数。患者对这个实验性的食物疗法的依从性是通过询问来进行评估的。 在研究结束时，服用PHENCALTM的受试对象与对照组相比较，前者的食瘾减低至三分之一(至少p＜0.0001)。在对照人群中，食瘾完全没有减少。与不服用PHENCALTM的对照人群相比，暴食事件的次数在服用PNENCALTM的受试对象中是明显地减少了。在本研究开始时，受试对象每周报告10.9次暴食事件，而在本研究结束时，受试对象每周仅报告2.9次暴食事件。与此相比，在本研究的开始时，未服用PHENCALTM的对照组每周报告8.3次暴食事件，在本研究结束时，对照组同样每周报告8.3次暴食事件，这表明没有发生显著变化。2年之后，在对食物的成瘾性和暴食事件方面，服用PHENCALTM组与对照组相比，前者减少至三分之一。 多元回归和方差分析 逐步多元回归被用来检验在治疗程序的开始以后的两年来体重回增百分比的预示变量的显著性。该预示变量被分为阴性(0)或阳性(1)，从而显示患者是否是病态肥胖，是否在经受暴食和食瘾之苦，是否有化学药物品依赖的家族史，是否有肥胖的家族史，是否是女性，是否服用PHENCALTM。逐步选择程序(SPSS，版本6.13(SPSS公司，芝加哥，伊利诺斯州)选择使用过PHENCALTM治疗、女性、病态肥胖和肥胖家族史作为2年之后体重增加的显著性预示变量。暴食行为、成瘾行为和化学药物品依赖的家族史不是是统计学上显著性的预示变量。选择出的预示变量的整体模型是显著性的(p＜0.0001)，由这些预示变量解释了两年内体重增加变异度的39.8％。在这个预示变量组中最有影响力的预示变量是PHENCALTM，接着是病态肥胖、女性和肥胖家族史(见表20-C)。进一步的分析比较了在服用PHENCALTM组与对照核心组之间在2年实验期间前后的暴食得分。还应用了一种双因素方差分析方法，一个因素是PHENCALTM治疗的组间因素，另一个是关于在2年的治疗期前后的暴食得分之间的重复测度因素，分析发现其间有显著的的相互作用(p＜0.001)。也使用了成对t-检验分别对服用PHENCALTM组和对照组的暴食得分的变化进行了检查。从统计学角度看，对照组没有可检测出的变化。而服用PHENCALTM组在暴食得分上则有明显的降低。 表20-C变量 斜率(B) B的标准误 β权数 T P病态肥胖 0.111 0.050 0.130 2.4 0.180暴食得分 0.023 0.003 0.420 7.70 ＜0.001使用PhenCal(是) 0.327 0.003 0.426 -7.80 ＜0.001(常数) 0.151 0.045 3.34 ＜0.001讨论在这里展示的2年期开放试验研究的研究数据表明：神经营养物质PHENCALTM可以在已知的碳水化合物暴食者中抑制异常的进食行为，并防止恢复已经减轻的体重。发明者认为PHENCALTM的明显有益的效果可以被解释为是前体氨基酸和脑啡肽酶抑制作用共同作用于中央边缘系统的报偿回路的结果。发明者此时还不能为这种神经营养物质混合物的作用提供一个准确的机制，也不能准确指出哪一种成分或成分的组合能本发明者的研究中最有效地抑制对碳水化合物的暴食行为。 神经递质5-HT、DA、NE和脑啡肽已经被证明可以减少甜食的摄入(Leibowitz，1985；Leibowitz等，1982；Kaye等，1984；Riviere等，1987；Blum等，1990)。因而，PHENCALTM被特别设计为通过加载前体氨基酸，包括1-色氨酸(5-HT前体)、1-苯丙氨酸(DA和NE前体)，从而增加这些食物中的抑制性神经递质，以及增加脑啡肽酶抑制剂d-苯丙氨酸，以使脑啡肽升高(Blum等，1986)。在这些研究中观察到的PHENCALTM效果的一个可肯定的机制包括对某些不足的单胺如5-MT、NE、EPI的恢复作用和对神经肽甲硫氨酸-脑啡肽和CCK-8的恢复作用。所有这些被认为是受到葡萄糖或遗传学的影响的进食(碳水化合物)性物质(Frohman，1983；Fullerton等，1985；Matsumura等，1984)。 与有相同家族史的男人相比较，PHENCALTM对有OB+和CD+家族史的女人可以诱发最好的效果，这一点很值得注目。这种差异也许与最近Comings等(1996b)的发现有关系，他们注意到：仅在女性中，人类肥胖病(OB)的遗传变体和人类多巴胺D2(DRD2)基因的遗传变体占身体质量指数(BMI)变异的高达22.8％。在肥胖病人中的OB和DRD2基因之间的相互作用，可能涉及瘦素与OB受体的结合，这种结合激活了一种中间神经递质或神经肽，从而对行为以及食欲和新陈代谢产生影响。关于这一点已经知道Ob/ob老鼠在弓形漏斗中也表现出多巴胺水平的明显减少(Oltmans，1983)。根据这项工作，发明者认为：如同以前被提到的那样，葡萄糖结合与其他的化学药物品依赖(例如：可卡因，酒精，海洛因)是相似的。 在2年时间里，服用PHENCALTM的氨基酸摄入组与未摄入PHENCALTM的核心维生素组相比，显示出：1)前者组中不论男人和女人，其超重百分比都减少两倍；2)女人的成瘾性减少70％，而男人成瘾性减少63％；3)女人的暴食行为减少66％，而男人暴食行为减少41％；实施例2VNTR等位基因与抽动-秽语综合症和药物滥用的关联抽动-秽语综合征是神经精神性障碍的综合征，其特征是慢性的运动和发音抽动，以及范围广泛的某些相关行为，包括酒精和药物的滥用、抑郁和强迫、注意缺陷多动障碍、品行、睡眠、学习、性和焦虑障碍(Comings，1987c；Comings，1990，Comings和Comings1993；Comings 1995d)。抽动-秽语综合征通常被假定是作为一种常染色体显性遗传性状即Gts而遗传下来(Comings等，1984，Pauls和Leckman，1986)，连锁研究实际上已经排查了整个基因组，但没有发现Gts基因的存在(Fog，1985；Tsui，1994)。然而，最近已经证明在品行和违抗障碍患者中的Gts和ADHD基因的遗传负荷有非常显著的增加(Comings，1995a)。一项关于抽动-秽语综合症的遗传学家系研究显示：这种病症可能涉及多个基因，除非一生中罹患这种病症的危险低于千分之十二(Comings等，1984)。学龄男孩中发生抽动-秽语综合征的频率占全部抽动-秽语综合征的九十分之一，可能的抽动-秽语综合征占四十分之一(Comings等，1990)。类似的结果在其他的研究中也能见到(Kurlan等.1994)，而以色列士兵中抽动-秽语综合征或慢性抽动症的频率被确定为2.6％(Zohar等，1992)。在更近的家系研究中发现：当与抽动-秽语综合征相关的全部行为谱(Comings，1990，Comings，1995d)都被包括在研究范围内的时候，很多家庭提供的证据显示这些基因是自父母双方遗传的，这支持抽动-秽语综合征是多基因障碍(Comings，1990；Comings，Comings，1993；Comings，1994b；Comings，1995b；Kurlan等，1994)。 考虑到抽动-秽语综合征相关障碍的宽范围以及Gts基因是自父母双方遗传的证据(Kurlan等，1994；Comings，1990)，这提示抽动-秽语综合征是一种多基因疾病，并且这些基因(MAOACX，DBH，DRD2，DATI等等)涉及到多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素和其他的神经递质的代谢，每个基因提供的变异仅仅占总变异的1％到10％(Comings，1996b；Comings，1995a；Comings，1995b；Comings，1996a)。方法组I：抽动-秽语综合征组。 研究对象中包括了57名对照者，229名抽动-秽语综合征先证者，后者中的大多数人都患有多种有关的行为障碍(Comings1990)，以及90个患病和未患病的抽动-秽语综合征先证者的家属。全部受试对象都是非西班牙系的白种人。平均年龄、诊断分型(抽动-秽语综合征或慢性运动抽动)和研究对象的其他的方面特征已经在别处被描述过(Comings等，1996a)。 行为得分。每个抽动-秽语综合征对照者、先证者、或家属都被要求填写一张基于诊断会面程序表(Robins等，1981)或DSM-III-R(1987)标准的调查问卷。这提供了一个对宽泛范围内的精神病学症状的框架性回顾。这些症状被分成27个不同的行为组别，包括ADHD、物质滥用、心境、焦虑、学校表现、口吃、抽动以及其他类。关于如何给这些行为计分的问题已经在其他文章中被详细描述过了(Comings 1995a；Comings 1994a；Comings 1994b：Comings1995b；Comings等，1996a：Robins等，1981：Comings 1995c)。两种行为计分方法被用来对ADHD进行评估。第一种叫做ADHD，它是依据DSM-III和DSM-III-R标准的一个系列22种ADHD变量中最少一半的变量是否存在来进行评估的。第二种叫做ADHD-R，它是根据DSM-III-R诊断标准进行评估的。三种以前未使用的QTV是无注意力、冲动和活动过度。它们是三种可以通过累积而产生ADHD计分的小分。QTV缩写包括：品行障碍(CD)，违抗障碍(ODD)(Comings 1995a)和重性抑郁发作(MDE)(1995 c Comings)症状。 核查共发病行为的理由是：以前曾经观察到某些基因可能与抽动-秽语综合征中存在的某些特定的病态行为的关系更为密切，而不是与诊断本身更为密切(Comings等.1996a)。这份调查问卷并不意味着提供DSM-III-R或DSM-IV诊断，而是提供一产生不同行为领域的QTV的非常结构化的方法。连续性状的优点是它们可以对病情的严重性提供更宽的诊断范围，而不是进行非此即彼的诊断。其他一些同行(Gadow和Sprafkin，1994；Grayson和Carlson 1991)已经把这样的问卷的使用情况与用于面谈治疗的同样结构化的问卷的使用情况进行了比较，证明了这份以对症状评价的途径为基础的问卷的准确性、实用性和敏感性。对好几百名使用过这份调查问卷的受试对象的回顾已经显示出它们正确地反映了以往要通过个人面谈才能得到的信息。 组II：物质滥用组。 患者群由120个非西班牙系的白种男人构成。 评估。全部受试对象都用“密歇根酒精中毒严重性试验”(Davis等1987)(一个24项目的自我管理调查问卷，经过修订后包括了药物物滥用(MAST-R))、由临床医生管理的“诊断面谈程序(DSM-III-R版本)(Robins等，1981)”(用于物质依赖性障碍是否存在的诊断)，和由临床医生管理的“成瘾严重性指数第5版(Hodgins，和Guebaly，1992)(ASI)”(用于酒精和药物物使用变量的评估)进行了评估。 本发明人利用了ASI的“药物物/酒精滥用”和“合法地位”部分。对特定的物质的使用进行了评估，询问了有关下列物质的终生(多年来)使用情况的问题，如：达到醉酒的酒精使用，海洛因、其他鸦片药物/止痛剂、巴比妥酸、其他镇静/安眠/镇定剂、可卡因、安非他明、大麻、迷幻剂和吸入剂的使用。对上述每种物质，相关时受试对象要被问到有关服用途径的问题。可选择的途径有口服、经鼻、吸入烟雾和静脉注射。#静脉注射用药的连续变量是通过把经静脉注射(IV)的不同药物的全部数字累加起来而加以计算的。静脉注射用药的变量是一种二分变量，0代表没有用过静脉注射药物，使用过一种或一种以上静脉注射用药物则记为≤1。受试者被问到的与药物有关的问题包括：“你有过多少次酒精性DT？过量用药呢？”“在过去的30天你有多少天遇到了酒精问题？药物问题呢？”“你在过去的30天1里在酒精上花了多少钱？在药物上呢？”另外，关于药物和酒精滥用的各种法律方面的问题也被问到了：“在你的一生中有多少次被指控为酒后驾车？”“在你的一生中有多少次因为药物指控而被逮捕和被起诉？“这些指控最终有多少次被定罪？”。当回答可能用从0到任何数字表示时，“0”就被计为“0”分，任何别的数字被计为“1”分。那些与酒精使用有关的问题被合计起来计算总的酒精得分，而那些与药物使用有关的问题被合计起来计算总的药物得分。面谈者根据对问题的严重性的评估来判定患者是否需要对酒精和/或药物滥用进行治疗，评定范围从0(不需要治疗)到9(需要治疗以处理危及生命的情境)。 物质滥用对照组。物质滥用组的对照者是独立于抽动-秽语综合征患者的对照的。他们由两个小组组成。第一组是来自位于圣贝纳迪诺的加利福尼亚州立大学的45名年龄较大的男性非西班牙系的白种学生(平均年龄30.1岁)。那些有显著物质滥用问题的人基于MAST-R试验被排除。第二组由来自明尼苏达的孪生子家庭研究项目的孪生子的父亲组成。因为这些人仅仅是根据他们有11岁或17岁的孪生子这个共同点而被从全州人口中查明确定下来的，他们与大学生相比，更能代表全部的社会经济群体和教育群体的一种随机的组合。尽管全部对照者在物质滥用变量上的计分都是阴性，但因为物质滥用评估的结果对孪生子(父亲)对照者并不可用，某些人的计分实际上可能是阳性。不过，因为这是一个农业占主导地位的州的随机交叉区域，所以发明者假定这个组中假阴性数字很小。 PCRTM多态性。实验中利用了MAOA VNTR多态性(Hinds等，1992)。这种复杂的多态性由一种直接相邻于一种不完整双链新23-bp VNTR基序的GT微卫星所构成，其等位基因在二核苷酸重复和VNTR重复的数字上不同。用标准程序从全血中提取DNA。目的DNA经PCRTM扩增(Mullis等，1986)。为了标记PCRTM产物，在反应中使用了荧光HEX或FAM Amidite(应用生物系统公司，福斯特城，加利福尼亚州)标记的每种引物各0.1uM(见表20-D)。2ul经10倍稀释的PCRTM产物被加入到2.5ul的去离子化甲酰胺和0.5ul标准ROX 500(应用生物系统公司，福斯特城，加利福尼亚州)中，在92℃变性2分钟，加载于应用生物系统373型DNA测序仪中的6％聚丙烯酰胺凝胶上。凝胶在1100伏电压和恒定功率30W的条件下电泳5小时。凝胶经激光扫描，用内部的ROX 500标准进行分析。根据由碱基对长度决定的彩色片段，用Genotyper(版本1.1)(应用生物系统公司)识别峰值。从每个凝胶文件中得到的每个样品的完整信息都被打印出来，并且汇编的数据也被提交分析。 等位基因组。为了核查MAOA等位基因的长度可能和表型的效果相关的假说，等位基因被分成了4组(见结果)。它们被标记为1到4，即从最短到最长，形成了MAOA基因型变量。仅仅在抽动-秽语综合征组中才有女性参与。只有那些给定等位基因组的纯合子才被包括在分析内。 统计分析。对于抽动-秽语综合症组，方差分析被用来检验每个QTV对4个不同的等位基因组的相关程度。线性方差分析用于检查4个等位基因组之间的显著性累进平均增加量。使用了SPSS(SPSS公司，芝加哥，伊利诺斯州)的统计软件包。对于线性方差分析，子命令多项式被设为1。多元方差分析被用来确定当全部变量都同时被核查的时候，任何一个QTV是否有显著意义。多元线形回归分析被用来作为第二途径，确定当全部变量都同时被核查的时候，任何一个QTV是否有显著意义。MAOA基因型被设置为从属变量，27个QTV是作为独立的变量被逐步输入的。 卡方。上述的研究显示：最长等位基因组对大多数QTV的来说有最高的均数。在抽动-秽语综合征的4组之间，比较了≤335bp等位基因组频度的潜在累进性减少量，这4个组的症状逐步减少：ADMD的抽动-秽语综合征先证者，没有ADHD的抽动-秽语综合征先证者，有抽动-秽语综合征的亲属和没有抽动-秽语综合征的亲属。 多元方差分析。对物质滥用组，多元方差分析被用来确定在4个MAOA等位基因组与2个概括变量之间是否存在显著的关联，这两个变量是酒精和药物得分。方差分析被用来检验4等位基因组的酒精和药物得分的均数。 线性卡方检验。线性卡方检验被用来检验在3组之间≤335bp组频度的潜在累进增加量。这三组是：对照组，无行为的(无ATU)物质滥用者组，和有行为(有ATU)的物质滥用者组。无ATU组之所以被包括在内是为了排除一种可能性：即由于某个不同行为的共同发病，这个等位基因组在物质滥用者中的频度可能会增加。为了有助于排除这个因素，这个等位基因组中的具有某种行为的物质滥用者中的频度至少要比在没有这种行为的物质滥用者高20％。由于已经假定：在这3组中这些等位基因的频率将逐渐地增加，故而使用线性卡方检验统计方法。 回归分析。为了确定能用MAOA基因加以说明的、与药物有关的变量的方差的最大百分比，本发明人运用了回归分析方法，其中那些携带≤335bp等位基因的受试对象被计为1分，那些携带≤335bp等位基因的受试对象被计为2分。因为这是与MAOA基因联系最紧密的卡方变量，它就被作为药物依赖变量(对照＝1，无ATU行为者计为2，有ATU行为者计为3)。结果等位基因组。两个组的等位基因的分布用图3表示。因为这是复杂的VNTR，等位基因没有落入奇数或偶数碱基对的一个清晰的模型中。结果是由基因分型(Genotyper)程序产生的形式。在bp 316和323bp之间没有等位基因，这样产生了＜320和＞320bp的2个清楚的主组。不过为了允许对表型的效果可能与碱基长度有关的假说进行检查，较大的323-339bp组等位基因被分为三个亚组，分别是：短于主峰的320-333的等位基因亚组，334bp的主峰等位基因亚组，长于主峰的≤335bp等位基因亚组。抽动-秽语综合征组里有219个男人和156个女人，合计有375名受试对象。在女人中，88人是异合子。当她们被扣除掉以后，本研究中剩下了287受试对象，其中36名是对照者。在这个最终的组中，在4个等位基因组的频率分布上，女人与男人没有显著的差异。 抽动-秽语综合征组。4个等位基因组的每个QTV的方差分析结果如表20-D所示。常规方差分析结果在F-比和p值下面显示。线性方差分析的F-比率在F2列下面显示，上标1表示这些值是有＜0.05的显著性的。在F2列中，QTV根据递减的F-比率有规律地排列起来。由α值设定为≤0.05的Tukey试验确定的，均数显著低于≤335bp组的那些等位基因组用星号表示。对于除了口吃、购物和惊恐(被给予最低的F-比率)之外剩下的24个QTVs说，那些携带≤335等位基因的受试对象的均数是最高的。 统计分析。全部27个QTV的多元方差分析的结果对性别(p＝0.012)、学习问题(p＝0.023、赌博(p＝0.025)和躁狂(p＝0.025)来说都有显著性。全部27个QTV都同时用逐步多元回归分析进行了检查，变量小学问题(p＝0.012)和赌博(p＝0.038)是具有显著性的。根据r2值，MAOA基因仅仅说明了这些QTV变异的3.9％。使用卡方分析可以发现：携带有≤335等位基因的受试对象的百分比有显著的累进性减少，即从有ADHD的抽动-秽语综合征先证者(24％，n＝125)；到没有ADHD的抽动-秽语综合征的先证者(20.0％，n＝50)；到有抽动-秽语综合征的先证者家属(12.5％，n＝16)；到无抽动-秽语综合征的先证者家属(5.6％，n＝56)(p＝0.003)。 物质滥用组。对照者比照ATU受试对象。对于160名合并的对照者，4个等位基因组的分布如下：＜320-34.4％，320-333-38.1％，334-335-21.3％，≤335-6.3％。对于120名ATU受试对象，频率如下：＜320-39.2％，320-333-18.3％，334-20.8％，≤335-21.7％。存在显著性差异，x2＝22.17，p＝0.00006；≤335bp组的频率与两个对照组有可比性，San Bemardino组是8.9％，孪生子的父母组是5.2％(x2＝0.744，p＝0.38)。 多元方差分析。酒精和药物得分的多元方差分析指出：当这两者都与MAOA基因和VNTR(变数串联重复)有显著性关联的时候，与酒精得分相比(p＝0.012)，药物得分的显著性更大(p＝0.001)(表21)。另外，合并的多元方差分析的结果也是显著的(p＝0.007)。257人这个数字(N)比160名对照者+120名ATU行为者的合计或280人的数目小，因为仅仅97名有ATU行为的受试对象完成了ASI。相反，所有120名有ATU行为的人都为酒精和/或药物依赖的DSM诊断的确认完成了DIS。 方差分析。显示每个等位基因组均数的两项计分的方差分析都用表22表示。至于抽动-秽语综合征组，最高的均数存在于≤335bp等位基因组中。对于药物得分来说，根据Tukey试验，3个其他的等位基因组明显比≤335bp组低。 卡方：为了确定MAO基因是否与某种类型的物质滥用有优势关联，对14个与这种物质的使用有关的变量进行了核查。对照者中的≤335bp等位基因组的频率与无行为的ATU(无ATU行为)受试对象中的频率和有行为的ATU(有ATU行为)受试对象的频率的对比用表23表示。由于有14类物质滥用变量被核查，只有那些用Bonferroni校正法得出p值小于0.0036(0.05/14)的变量被认为是显著的。这里只显示那些p＜0.01的变量。仅有酒精依赖是个例外。展示的资料说明了这样的事实，即：仅仅在与那些药物依赖的受试对象或酒精与药物双重依赖的受试对象相比时，在酒精依赖的受试对象中的≤335bp等位基因在频度上才几乎没有增加。相反，仅仅药物依赖一个变量给出了最高值(x2＝17.4，p＝0.00003)。 回归分析。等位基因组(＜335对≤335)对药物依赖诊断的回归分析结果给出了下列结果：r＝0.25，r2＝0.0625，T＝4.305，p＜0.0001。 物质滥用。使用酶水平(Wiberg等，1977；Gottfries等，1975；Devor等，1994；Vonknorring等，1991)和遗传变体(Vanyukov等，1993)的先前研究暗示了MAOA基因在物质滥用中的作用。现在的结果与那些结论一致，尤其是对药物依赖而言更是如此。多元方差分析显示了MAOA等位基因与酒精和药物得分之间的显著关联，有许多由这两种形式的物质滥用引起的共发病。如表23所示，当药物依赖和酒精依赖分开地被检查时，药物依赖与等位基因的关联比酒精依赖的关联要大得多。 男性优势。ADHD、抽动-秽语综合症、品行障碍、违抗障碍、诵读困难、学习障碍、口吃、药物依赖和酒精中毒，所有这些都显示出男性优势。男性优势可能要部分归罪于激素和环境的因素，另外，X连锁基因可能也是一个因素。在抽动-秽语综合征组，作为回归系数，对r2的判定显示出：对不同的QTV，MAOA基因最多能够说明任何一个QTV变异的2.5％或更少，这表明X连锁的MAOA基因不能说明与抽动-秽语综合征、ADHD或有关障碍有关的男性优势。相反，药物依赖的诊断与≤335bp等位基因的存在与否是否有关联的r2值显示：最高可达6.2％的变异可能是由MAOA基因引起的。它能在药物依赖的男性优势中起到了一定的作用。 更长的小卫星等位基因与抽动-秽语综合症组里的特定的QTV的关联小，如表21所示，在全部QTV间的趋势上有令人注目的均一性程度。因为这可能是一种偶然的、随机的关联，发明者试图确定这些结果是否能在另一个完全独立的受试对象和对照者组中得以重复。这个组(物质滥用组)的资料显示出：与在抽动-秽语综合征组中观察到的情况相比，更长的MAOA VNTR等位基因，尤其是≤335bp的等位基因，与物质滥用之间存在着更紧密的关联。这两组的模式引人注目地相似，≤335bp等位基因都获得了最高得分，最小的等位基因(＜320)获得次高的得分给予，334-335bp等位基因获得了中间分。这种重复等位基因的大小与表型的相互关联与小卫星等位基因自身在MAO基因的调节中起一定作用的可能性是一致的。 表20-DMAOA VNTR多态性：对不同的等位基因组由方差分析进行的不同行为得分的比较由碱基对长度划分的等位基因组行为 ＜320 320-333 334 ≤335 F-比 p F2N 82 43 110 52躁狂 1.43*1.8 1.36*1.9 1.59*2.27 2.59 2.8 3.59 0.014 6.391OCD 2.18 2.8 2.18 2.4 2.80 2.8 3.31 3.2 2.16 0.093 5.891性 0.62*1.1 0.47*0.9 0.66*1.2 1.25 1.6 3.91 0.009 5.821睡眠 0.36 0.7 0.38 0.8 0.49 0.9 0.76 1.1 2.31 0.075 5.561小学 2.60 1.7 2.90 2.0 2.98 2.1 3.46 2.1 1.89 0.131 5.141赌博 0.13*0.9 0.27 0.8 0.22 0.8 0.61 1.6 2.49 0.060 4.821口吃 0.13 0.3 0.11 0.3 0.25 0.4 0.23 0.4 2.23 0.084 4.411学习 0.52*0.9 0.65 1.0 0.54*0.9 1.00 1.1 3.32 0.020 4.371无注意力 6.69 5.2 7.37 4.9 7.67 4.7 8.48 5.3 1.42 0.235 4.151ADHD 19.43 14.9 20.95 13.5 21.18 13.9 24.80 15.3 1.53 0.206 3.741ADDR 4.63 4.9 4.84 4.6 5.18 4.7 6.42 5.2 1.57 0.196 3.741冲动 5.74 4.9 6.30 4.8 6.49 4.7 7.46 5.0 1.35 0.257 3.681购物 0.58 1.3 1.00 2.2 1.32 2.8 1.09 2.4 1.61 0.186 3.231 由bp表示的大小划分的等位基因组行为 ＜320 320-333 334 ≤335 F-比 p F2N 82 43 110 52MDE 3.00 2.8 3.29 3.1 3.45 3.1 3.92 3.1 1.01 0.385 2.90CD 2.78 2.4 2.90 2.1 2.97 2.2 3.54 2.6 1.15 0.328 2.54多动 6.91 5.6 7.27 5.2 7.00 5.4 8.86 5.9 1.59 0.190 2.29恐怖 2.00 2.7 2.15 3.0 2.45 2.7 2.65 3.3 0.71 0.548 2.10分裂样 1.31 2.3 0.68*1.3 1.34 2.2 1.84 2.3 2.26 0.081 1.92广泛性焦虑 0.21 0.4 0.18 0.3 0.28 0.4 0.29 0.4 0.85 0.463 1.60躯体化 2.13 3.0 1.58 2.4 2.17 3.0 2.90 3.7 1.16 0.325 1.34药物 0.36 1.2 0.45 1.6 0.40 1.3 0.75 2.0 0.81 0.489 1.28阅读 1.86 1.9 1.36 1.8 1.78 2.1 2.34 2.5 1.75 0.156 1.27ODD 3.07 3.3 3.02 2.7 3.16 3.1 3.73 3.4 0.57 0.633 1.02抽动 2.81 3.7 3.04 3.4 2.84 3.5 3.57 4.1 0.55 0.642 0.73酒精 0.51 2.3 0.81 2.9 0.31 1.8 1.11 3.2 1.41 0.241 0.45惊恐 2.91 2.0 3.09 2.1 3.18 2.2 2.98 2.2 0.27 0.845 0.20吸烟 0.07 0.3 0.11 0.3 0.05 0.2 0.77 0.3 0.53 0.662 0.101显著性，＜0.05，F2＝线性方差分析的F-比*显著小于≥335，α＝0.05(Tukey检验)(给出均数和标准误)(n＝287) 表21物质滥用组的酒精和药物得分对MAOA等位基因组的多元方差分析(N＝257名男性)变量 F-比 P酒精得分 3.72 .012药物得分 5.85 .001总数(Wilks) 2.99 .007表22物质滥用组酒精和药物得分对MAOA等位基因组的方差分析等位基因组 N 均数 标准差 F-比 p酒精得分＜320 94 2.27 3.1320-333 81 1.49* 3.0334-335 56 1.94 2.7≤335 26 3.73 3.52 3.72 0.012药物得分＜320 94 3.59* 5.2320-333 81 1.94* 3.8334-335 56 3.34* 4.9≤335 26 6.42 6.2 5.85 0.0007*显著低于≥335等位基因组均数，Tukey检验中α＝0.05。 表23对照组对无行为的ATU受试对象对有行为的ATU受试对象中携带≤335bp等位基因的受试对象人数线性卡方分析对照 无ATU 有ATU行为 N ％ N ％ N ％ 卡方 P仅有药物依赖 160 6.3 58 15.5 62 27.4 17.4 .00003静脉注射药物 160 6.3 56 14.3 27 29.6 13.65 .00022的使用超剂量 160 6.3 71 12.7 25 28.0 11.00 .0009巴比妥酸盐 160 6.3 61 13.1 32 25.0 10.56 .0011的使用DUI 160 6.3 34 8.8 62 21.0 9.92 .0016安非他明的使用 160 6.3 19 5.3 77 19.5 9.37 .0022OSH*的使用 160 6.3 67 14.9 26 23.1 8.96 .0027可卡因的使用 160 6.3 25 12.0 67 19.4 8.86 .003大麻的使用 160 6.3 14 7.1 82 18.3 8.35 .004海洛因的使用 160 6.3 68 14.7 28 21.4 8.05 .004阿片样物质 160 6.3 58 15.5 38 18.4 6.88 .009的使用仅有酒精依赖 160 6.3 98 24.5 22 9.1 非线性*OSH＝其他鸦片剂(除海洛因或美沙酮外)，镇静剂和催眠剂实施例3多巴胺D2受体多态性与分裂样/回避障碍行为的关联受试对象的选择和试验管理。征募到白种自愿者。有58个男人和71个女人，平均年龄分别是40.9±1.8岁和47.1+1.5岁(平均值±标准差)。事先都进行了“米龙氏临床多向性调查”第二版(MCMI-II)的计算机化试验的检查，自愿者经静脉穿刺献出15毫升血。值得注意的是：由于考虑到种族和人种分层，血是从非西班牙系的北欧和西欧的白种人身上采集的，也有一些例外，因为关于对照者的最广泛的数据是来自于这个组。为了进行本研究，总共129名有或没有共发的药物或酒精滥用的精神疾病患者被挑选出来，进行基因分型，并用米龙氏临床多向性调查(MCMI-II)计算机化试验进行评估。本组由以下成员构成：精神抑郁者(22.1％)，广泛性焦虑障碍者(8.4％)，单相障碍者(24.5％)，双相障碍者(12.9％)，精神分裂症患者(5.2％)，注意力缺乏障碍者(21.9％)和物质滥用障碍者(18.1％)。 米龙氏临床多向性调查(MCMI-II)被用来在每个受试对象中评估11项已知的人格障碍，包括分裂样/回避障碍群。这项试验包括175个项目，并且大部分人能用20～30分钟的时间完成它。源于人格和精神病理学理论构建了22个临床量表作为症状的可操作性测量尺度。这些临床定向量表是与官方的诊断系统和它的综合征分类(DSM-IV)直接配合的。根据DSM-IV模型构建了另外的量表，以区别急性临床障碍(Axis I)和患者的更持久的人格特点(Axis II)。保险统计的基础估价数据，而不是经过分析的标准得分转换资料，被用用于量表项目的计算和定量。基础估价为60就暗示着存在某种障碍。在75和83之间就表示有某种慢性的或者一定严重程度的障碍，而超过或者达到84就表示存在无法控制的病理性障碍。在本研究中，发明者选择通过在受试对象中使用米龙氏分裂样/回避障碍群来确定研究组，在这特别的群体达到84或更高的基础估价的百分法分级。发明者根据受试对象的MCMI-II得分把他们分类，根据下列分类法，按基础估价值不同把先证者分成4个小组：(1)得分在60以下；(2)得分从最低等于60到最高等于73；(3)得分从最低等于74到最高等于83；和(4)得分最低等于84到最高等于100。全体受试对象的人口统计学资料如表24所示。 表24用于实施例3中的精神病群体的诊断特征诊断种类 受试对象百分比精神抑郁症 27.1广泛的焦虑障碍 8.4单相 24.5双相 12.9精神分裂症 5.2注意力缺乏障碍 21.9物质滥用障碍 18.1MCMI-II试验评分在不同的住院患者群体中得到了证实，即把104名患者与明尼苏达多相位人格调查表(MMPI)的人格障碍量表进行比较。守恒显著性水平被用来保证结论的有效性。分裂样、回避、依赖、表现欲和自恋的量表显著相关，被动-攻击、分裂型和临界量表与对应的MCMI-II量表没有相关性，这样就验证了这项试验可用于令人信赖地测定反常人格性状(Shuler等，1994；Zimmernman等，1994)，例如象分裂样和回避行为。 本研究中的30个“超级”对照受试对象被筛选，以排除一些报偿缺乏行为，这些行为包括酒精中毒、多种物质依赖、吸烟行为、碳水化合物暴食行为、BMI＞25、物质滥用障碍的家族史、ADHD、病理性赌博和一种Axis II诊断(包括SAB)，并进行DRD2A1和A2等位基因的基因分型。另一些对照来自3个来源的自愿者：A)抽动-秽语病患者的收养父母、抚育父母或继父母；B)来自内分泌诊所的，患有甲状腺癌或非胰岛素依赖性糖尿病的受试者；和C)医院内部人员，包括专业人员、技师和维修工人。总共142名对照都被筛选，排除ADHD、酒精、药物和烟草的滥用。发明者把这些对照中的91人按基因分型分为DAT19和10等位基因，另51人被分为DβHB1和B2等位基因。需要考虑的一个重要的警示是：为了评价多巴胺能等位基因与SAB的关联，受试对象应该加以选择。发明者已经认识到：共发的RDS行为的受试对象(即在这个群体中有18.1％的人存在物质滥用障碍)可能在资料的统计学处理方面造成混淆。发明者同时还已经认识到：在存在SAB的患者中排除所有RDS行为将是非常困难的。因此，发明者必须等候将来的补充性研究才能解决这一问题。 基因分型。在本研究中，总共271受试对象的基因分型属于一种或多种多巴胺能基因，全部受试对象都各用一个中立的标识号进行基因分型和读出结果，而不知道是哪一个被分型。 DRD2多态性。如下列文章(Blum等，1990a：Comings等，1995)所述，D2A1、D2A2的基因分型使用的是Southern Blot杂交法。另外，相当数量样品是使用PCRTM技术(Noble等，1994d)进行基因分型的。 DβH多态性d’Amato和同事(d’Amato等，1989)报道了两种被称为A和B的TaqI DβH多态性的存在。使用了DβH cDNA克隆AII(Lamouroux等，1987；Lamouroux等1993)，含有一个2.7kb在EcoRI位点的插入片段。为了改进标记，载体被BamHI和SalI酶消化，产生5条带。一个3.5kb片段被标记以用于检测β多态性。用TaqI限制性核酸内切酶消化后，在琼脂糖凝胶中电泳，Southern法转移到尼龙膜上，与32P标记的探针杂交，再进行放射自显影，确定2.8kb(B1)和1.4kb(B2)片段。 DAT1重复多态性。在3’UTR的等位基因用PCRTM方法确定，寡核苷酸PCRTM条件由Vandenberg等报道(1992b)。经PCR扩增后的产物在8％丙烯酰胺凝胶中与一组用于表明片段长度大小的标志物一起电泳。 统计。使用皮尔逊(Person)卡方和菲希尔(Fisher)准确检验进行2X2表的比例分析。更大的表，如2X3表，则使用皮尔逊卡方和线性趋势Mantel Hensel检验进行统计学检验。均数之间的差异使用学生t-检验法进行检验。多元逻辑回归被用来分析一个或几个变量的贡献，以预测在分裂样/回避障碍方面获得高分的可能性。该逻辑模型使用Hosmer-Lemeshow拟合优度检验、代表接收者操作特性(ROC)曲线下面积的c统计和由SAS计算机程序Proc Logistic显示的r-方或方差的存在进行评估。另外，在任何逻辑回归分析法中，用于预示变量的优势率也经计算机处理(Dunn和Clark，1995)。 结果。对于分裂样/回避障碍，利用了卡方法进行了数据集分析，限制多巴胺能等位基因与超过84分的MCMI-II分裂样障碍和MCMI-II回避障碍的可能关联，以保证准备关联的表型的严格性。研究中发现在50％的患有分裂样障碍(11/22)和44％的患有回避障碍(12/27)的受试对象中可以发现DRD2A1位基因；在72％的分裂样障碍的受试对象(13/18)和62％回避障碍受试对象(13/21)中可以找到DAT1480bp(VNTR 10/10等位基因)；在81.3％的分裂样障碍的受试对象(13/16)和82.4％的回避障碍的受试对象(14/17)中找到了DβHB1等位基因。根据卡方，与DRD2A2等位基因相比，DRD2A1等位基因与分裂样/回避障碍群(MCMI-II得分≥84)的患者之间存在更为显著的关联(x2＝7.6，df＝1，p＜0.006)。DRD2A1等位基因的纯合子显示出：其在SAB群体(＞84)的受试对象中占最高的百分比。在SAB群体中，杂合子占有的百分比大约是纯合子组的受试对象的一半。可是仅有DRD2A2等位基因表达的组则显示：其在SAB群体中占有最低的百分比(线性趋势分析：p＜0.005，A1/A1＝83％，A1/A2＝41％ A2/A2＝23％)。 不过，与DRD2A1等位基因数据不同，卡方分析没能展现DβHB1等位基因和DAT110/10等位基因与分裂样/回避障碍行为的关联。利用多个变量与对分的SAB得分进行关联，使用逻辑回归法测验其与DRD2等位基因、年龄和性别的显著性关系，DRD2A1等位基因和性别都是SAB严重性的显著预示变量。发明者发现Hosmer-Lemeshow拟合优度在p＝0.78时。DRD2A1与SAB的优势率为2.79(p＝0.018)，与性别的优势率为3.6(p＝0.0031)。在30名筛选的超级对照者中(排除酒精中毒，多种物质依赖，身体质量指标在25以下，吸烟行为，家族史，病理性赌博，ADHD，分裂样/回避障碍行为)，DRD2A1等位基因的流行率是1/30或3.3％。在91名筛选的对照者中，DAT110/10等位基因的流行率是34/91或37.4％。而在51名筛选过的对照者中，DβHB1等位基因的流行率是27/51或53％。 至于DRD2A1等位基因(18/37或48.6％)，当与下面两个对照相比时可以发现显著关联：即文献对照为185/714或26％(x2＝9.2，df`＝1，p＝0.0024；OR＝2.71)，超级对照为18/37或48.6％(x2＝16.8，df＝1，p＝0.00004；OR＝27.5)，并且SAB＞84。加之，当与筛选的对照相比较时，在DAT1480bp(VNTR10/10等位基因)与那些用SAB诊断的个人(18/28或64.3％)之间发现了显著关联(x2＝6.3，df＝1，p＝0.012；OR＝3.0)。在被评估为具有SAB的DβHB1等位基因的携带者(17/23或73.9％)与筛选的对照之间进行的比较也发现了类似的倾向(x2＝2.89，df＝1，p＝0.09；OR＝2.52)。利用被叫做逻辑回归分析的统计技术，比较了MCMI-II得分低于84和MCMI-II得分高于84(严重性计分)的全部情况，DRD2A1等位基因对这个变异度的贡献率为8.3％，这在统计学方面是有显著性的(x2＝7.5，df＝1，p＝0.0059)。与此对照，(DAT110/10等位基因)对该变异度的贡献率为1.6％；DβHB1等位基因对该变异度的贡献率为0.0025％，这不是显著性贡献。 当性别作为单一变量在逻辑回归分析模型中被检验的时候，单独性别因素对总变异度的贡献率是9.9％(x2＝9.4，df＝1，p＝0.0022)。在一个逻辑回归分析模型中，利用DRD2A1等位基因和性别因素作为预示变量，预测在分裂样/回避障碍的MCMI-II计分上超过84分的高分，对于这些预示变量，DRD2A1基因的优势率为2.79，男性的优势率为3.55。Hosmer-Lemeshow拟合优度p值＝0.778，C统计(ROC曲线下面积)等于0.714，并且，它们对变异度的联合贡献率是17.9％。加之，在对67名基因分型属于DRD2A1和A2等位基因的初步研究中，使用在上面被讨论的过程，发明者没发现它们与使用MCMI-II试验进行评估的其他的10种人格性状的任何一个没有关联。 作为结论，发明者已经使用MCMI-II自报告型计算机化试验进行了关联性研究，以揭示3种多巴胺能基因的多态性对称为分裂样/回避障碍群的反常人格性状的贡献。由于它不依赖于种族划分、性别或受试对象的年龄，所以，观察到的关联现象看来不是由于人口的分层因素。加之，基于在一般人群的分裂样/回避障碍行为的频率是1-4％。DAT1和DβHB1(10/10重复等位基因)等位基因对总变异度缺乏显著性贡献由于样本量大小还不能被排除。实际上，在样本量大小仅为44(由于丢失的值)的情况下，这三种基因多态性在多元回归分析中对遗传变异的合并贡献率为大约7.6％，这与该复杂行为障碍中涉及到多个基因和象性别那样的其他的因素的概念是一致的。 实施例4大麻酯受体基因与静脉注射滥用药物的关联方法：受试对象。种族因素是一个容易造成混淆的因素，为了把它减少到最小，全部受试对象都被限定在91名非西班牙系的白种人范围内。对照组由62个年龄较大的学生(SB对照)和52名受试对象(LL对照)构成。后者由40％维修人员，43％秘书和职员和，17％的医学博士或哲学博士们构成。两个组合计共114对照者。 评估。根据单独面谈，存在药物或酒精滥用/依赖的人被排除出LL对照组。全部对照都被用“密歇根酒精中毒严重性试验”(修订包括了药物滥用在内)(MAST-R)的24个项目的自我管理调查问卷进行了评估。所有MAST-R得分超过4分的SB对照者都被排除在外。另外，如同实施例4所描述的那样，全部ATU受试对象都用临床医生管理的诊断会面程序(DSM-III-R版本)进行了评估，以诊断是否存在物质依赖障碍；用临床医生管理的成瘾严重性指标第5版来评估一系列酒精和药物滥用变量。 基因分型。从全血中按标准的过程提取DNA。DNA样品使用下列如Dawsom(1995)所述的引物进行扩增：5’-GCTGCTTCTGTTAACCCTGC-3’(序列编号：第3号)，和5-TACATCTCCGTGTGATGTTCC-3’(序列编号：第4号)。它识别那些有(AAT)n三个碱基一组的重复序列的等位基因。用荧光HEX Amidite(应用生物系统公司，福斯特城，加利福尼亚州)把各0.1uM的每个引物进行标记，以便标记PCRTM产物。如实施例2中描述的VNTR多态性的PCRTM多态性分析那样，2ul10倍稀释的PCRTM产物被上载到6％聚丙烯酰胺凝胶里并进行分析。 等位基因和基因型频率的统计学分析。对不同的等位基因在对照中与在ATU受试对象中的频率进行了检查，使用了由加拿大渥太华Carleton大学的George Carmody编写的RxC程序，使用回归性蒙特卡洛检验发检验显著性差异(Roff，和Bentzen，1989)。这种计算机化方法的优点是：能够以估计的标准误完成卡方模拟，而不将胞腔与小量观察(尤其是零)折叠。不同的基因型的频率是使用卡方分析方法进行比较的。 因素分析。为了解决大数目变量分析的统计问题，进行了一种初步的因素分析，限制条件是只产生两个因素。因素1倾向于联合药物依赖有关的变量，而因素2倾向于联合酒精依赖有关的变量。 等位基因组和基因分型。尽管发明者已经观察了由1和3～10个重复序列构成的9个不同的等位基因，在本研究的对照或ATU受试对象中，没有一个人携带了2等位基因。对照和ATU受试对象中9个等位基因的分布显示出：最常见的等位基因是#4。它存在于36.4％的对照者中，31.7％的ATU受试对象和20.2％的静脉注射滥用药物的ATU受试对象中。发明者的工作假设(Comings，1996b；Comings，1996a)是：小卫星最初通过Z-DNA的形成(Hamada等，1982；Schroth等，1992)可能在基因调节中起到直接的作用，并且作用效果的大小依赖于重复序列的长度。由于主要的等位基因组是4个重复序列，而且很少有1或者3等位基因，这就允许把9个等位基因自然地划分为两个组：较短的(＜5)等位基因组和较长的(≤5)等位基因组。这样就产生了3个基因型：＜5/＜5，杂合子和≤5/≤5。为了消除统计上的复杂化因素，没有核查别的等位基因、基因型或等位基因的组合。 方差分析。为了进一步消除与大数目变量有关的统计学上的复杂化因素，通过方差分析，进行了对用于因素1和因素2对上述三个基因型关系检查的数据的初步试验。这用来确定后来的测验是否能够提出一个初步的回归模型(＜5/＜5对杂合子+≤5/≤，或≤5/≤5对杂合子+＜5/＜5)；或者显性模型(＜5/＜5+杂合子对≤5/≤5，或≤5/≤5+杂合子对＜5/＜5；或者杂种优势(杂合子对≤5/≤+5≤/≤5))。结果对≤5/≤5对杂合子+＜5/＜5方式提出了回归模型。再一次，为了消除统计复杂化因素，别的任何模型都没有被核查。使用回归模型时，如果因素1和因素2其中任何一个产生了显著结果，由因素分析暗示的小分就会被运用方差分析方法进行研究。 卡方分析。具有显著性因素的各个变量被进一步用2×3卡方试验进行评估。×2维度由两个基因型组所组成：≤5/≤5重复等位基因的纯合基因型对余下的其他基因型。×3维度组成如下：(1)对照，(2)在给定变量上计分为0(ATU阴性)的ATU受试对象，和(3)在给定的变量上计分为≥1(ATU阳性)的ATU受试对象。ATU阴性组有必要被加进来的原因是为了排除这种可能性：即在ATU受试对象中≥5/≥5基因型的频率的增加可能实际上是由于它与某个共发障碍或变量的关联，而不是与正在被核查的那个变量有关。发明者预期有3种模型：A.显著—线性。如果≥5/≥5基因型和给定变量有关联，发明者预期在病例百分比方面存在这样一种显著的类似线性的增长，即：≥5/≥5组，从对照到ATU阴性病例(对那个变量呈消极作用)、到ATU阳性病例(对那个变量呈积极作用)逐步增加。这种进行性的增长的显著性使用线性卡方试验(SPSS的统计包的Mantel-Haenzel卡方，SPSS公司，芝加哥，伊利诺斯州)进行了检验。由于≥5/≥5基因型可能与1种以上物质或变量发生关联，发明者要求：在ATU阳性组中≥5/≥5携带者的百分比至少要比在ATU阴性组中高20％。 B.显著-非线性。如果携带≥5/≥5基因型的病例的百分比，在ATU阴性组中比在ATU阳性组中要高，那么，≥5/≥5基因型就被认为是与某种给定物质没有关联，即使p值是显著的。 C.不显著-非线性。另外，如果p值是＞0.05的，≥5/≥5基因型也被认为是与某种给定物质没有关联的。结果受试对象特征。ATU受试对象的平均年龄是39.7岁(标准差为7.0，范围是23～52岁)，对照者平均年龄为38.4岁(标准差为12.6岁，范围是21～71岁)。它们之间没有显著差异(F-比＝0.76，p＝0.38)。全部ATU受试对象都是男人，而有45名(39.5％)对照者是男人，69名对照者(60.5％)是女人。 等位基因频率。通过静脉用药的ATU受试对象被选中的原因是：临床经验显示：它代表的是那些具有与药物依赖有关的最严重问题的受试对象。当进行蒙特卡洛检验的10,000次重述检验时，在对照组对ATU组中，全部等位基因的频率都被进行了比较，它们之间没有显著性差异(x2＝7.09，p＝0.54)。当对照者与静脉注射药物滥用者进行比较的时候，差异是临界值(x2＝14.49，p＝0.065)。 对照中的41人或36.0％是≥5/≥5纯合子，另一方面，ATU受试对象中的43人或46.7％是≥5/≥5纯合子(p＝NS)。在32名静脉注射药物滥用者中，有20人或62.5％是≥5/≥5纯合子(x2＝7.23，p＝0.007)。 尽管在对照组中有女人，在女性对照者(34.8％，n＝69)与男性对照者(37.8％，n＝45)之间，在≥5/≥5基因型的流行上没有显著差异，x2＝0.106，p＝0.74。 因素分析 因素分析被设定为只产生两个因素。因素1倾向于包括与药物滥用有关联的变量。这些变量包括与药物的静脉注射滥用、药费的数字、各种药物的使用年限、药物得分和药物依赖的形式的DSM诊断有关联的变量。因素2倾向于包括例如DUI数、在酒精上消耗掉的钱、酒精严重性计分、进行酒精解毒的次数、酒精得分和DSM酒精依赖诊断等与酒精相关变量。 因素1和2的方差分析结果用表25表示。因素1的平均得分在≥5/≥5等位基因纯合子的受试对象中是最高的(0.198)，比杂合子的受试对象(-0.151)或者对＜5/＜5等位基因纯合子的受试对象(-0.085)都高(F-比＝2.85，p＝0.060)。这意味着存在一个关于≥5的重复等位基因的纯合性对≥5的重复等位基因(其他)的杂合性+纯合性的回归模型。当这个模型用方差分析检验时，因素1的均数对于那些具有≥5/≥5基因型的显著大于那些具有‘其他’基因型的人(p＝0.019)。相反，不论使用3种基因型还是回归模型，因素的2均数都没有显著差异。 这些最初的结果是与CNRI基因的等位基因与药物依赖有关联但与酒精依赖无关的观点一致。为了进一步检验这一点，发明者对于酒精得分、药物得分和静脉注射药物的数字的均数试验了回归模型(表26)。在具有≥5/≥5基因型的那些人中，药物得分的均数比在那些具有其基因型的人中的均数明显更大些(p＝0.038)。另外，在≥5/≥5纯合子的那些人中，通过静脉注射使用药物(#IV)的均数比在那些具有其他基因型的人中的均数明显更大些(p＝0.005)。当Bonferroni校正α值为0.5/3或0.016时，结果还是显著的。相反，≥5纯合子在酒精得分的均数方面与‘其他’基因型相比实质上没有显著差异。为了排除年龄可能是一个解释结果的隐藏的协变量的可能性，年龄已经被当作一个协变量。年龄的p值是0.404，而CNRI的主要效果的p值是0.004，这显示出年龄上的变化不能解释这个结果。 与平均药物得分的关联使得发明者提出CNRI基因是否与某特定的药物之间显示出更密切的关联。4类药物依赖被使用2×3卡方分析法进行了试验(表27)，如方法部分所述。在全部3个组间：可卡因、安非他明和大麻依赖组，3类药物依赖在≥5/≥5基因型的频率上显示有显著的增加。该等位基因与阿片样物质依赖没有显著关联。Bonferroni校正α值为0.05/4或0.0125，这些关联没有一个是显著的。 另外，酒精依赖仅仅为了进行比较目的而被包括进来。携带≥5/≥5基因型的但没有酒精依赖的ATU受试对象(50.7％)与有酒精依赖的受试对象(29.6％)相比，前者具有更高的百分比。 可卡因、安非他明、海洛因的给药途径。表28显示的是这些药物的给药途径的结果。对于可卡因，≥5/≥5基因型的流行在不同的受试对象中是有区别的：在不使用可卡因的那些ATU受试对象和对照者中是36.2％，在那些吸可卡因的人中是32.3％，在那些抽烟吸入可卡因的人中是55.6％，在那些注射可卡因的人中是68.4％(p＝0.006)。在安非他明的给药途径方面也得到了类似的结果：在那些携带≥5/≥5基因型但不使用安非他明的人中的流行度为35.7％，在那些用静脉注射方法使用安非他明的人中则为65.2％(p＝0.007)。已经注意到在那些经静脉注射使用海洛因的人中，存在相同高频率的≥5/≥5基因型。 回归分析。为了得到对可归因于CNRI基因的三种数量计分变异度的评估百分比，发明者进行了一项回归分析：其中那些具有≥5/≥5基因型的被计为2分，其他的基因型被计为1分(表29)。CNRI基因实质上不能说明任何一项酒精得分，它可以说明全部药物得分的2.1％，和静脉注射药物得分的3.8％(p＝0.005)。 结果显示CNRI基因与一些不同类型的药物依赖(可卡因，安非他明，大麻)有显著关联，并且在静脉注射药物滥用方面，它与药物依赖之间存在特别严格形式的关联。现在的结果提供了，特定的基因与经静脉注射滥用药物之间的第一个明确描述的关联。与此相对的是，与酒精滥用/依赖有关的变量与基因之间没有显著关联。 一种对结果的潜在的替代性解释是：如果不考虑两个组的受试对象应该是非西班牙系的白种人这样一种限制，对对于对照者，在ATU受试对象中隐藏的人种分层因素可以说明这个结果。它一直是在关联性研究里需要关心的问题，尽管与有ATU药物滥用行为的受试对象有类似的人口统计学资料，≥5/≥5基因型仅与药物依赖变量存在关联，但是和酒精依赖的变量缺乏关联，与酒精相比，大多数药物都对多巴胺能报偿途径有更大的扰乱，在多巴胺和大麻的代谢之间的紧密的相互作用，这些现象之间是一致的，这使人种的分层因素不太可能对结果进行说明。另外，年龄作为复杂化的变量也被除外了。 表25ATU受试对象和对照中的CNR1基因型对因素1和2的方差分析(n＝205)得分 基因型 N 均数 标准差 F-比 p因素1 ＜5/＜5 32 -0.085 0.97(药物) 杂合子. 91 -0.151 0.65≥5/≥5 83 0.198 1.26 2.85 0.060其他 123 -0.134 0.75≥5/≥5 83 0.198 1.26 5.62 0.019因素2 ＜5/＜5 32 -0.098 0.95(酒精) 杂合子. 91 -0.042 1.00≥5/≥5 83 0.084 1.02 0.52 0.593其他 123 -0.056 .98≥5/≥5 83 0.084 1.02 0.98 0.32表26CNR1基因型对静脉注射药物的次数、药物得分和酒精得分的方差分析，ATU受试对象和对照(n＝206)得分 基因型 N 均数 标准差 F-比 p酒精得分 其他 123 2.52 3.41≥5/≥5 83 2.57 3.02 0.010 0.921药物得分 其他 123 3.37 4.98≥5/≥5 83 4.95 5.81 4.33 0.038#静脉注射药物 其他 123 0.16 0.54≥5/≥5 83 0.48 1.05 8.08 0.005 表27对照者、ATU阴性和ATU阳性受试对象中CNR1基因≥5/≥5纯合性的百分比的方差分析(n＝155)行为 对照 ATU- ATU+N ％ N ％ N ％ 卡方 p可卡因 114 36.0 72 38.9 20 70.1 5.36 0.020安非他明 114 36.0 58 37.9 34 58.8 4.46 0.034大麻 114 36.0 66 39.4 26 61.5 4.41 0.035阿片样物质 114 36.0 82 45.8 10 50.0 3.01 0.155仅有酒精依赖 114 36.0 71 50.7 21 28.6 0.27 0.602表28CNR1基因型和药物的给药途径。8A.可卡因途径 N ％≥5/≥5 卡方*p不使用 138136.2经鼻 31 32.3烟雾 18 55.6静脉注射 19 68.4 7.52 0.006总数 2068B.安非他明途径 N ％≥5/≥5 卡方*P不使用 129235.7口服 11 9.1经鼻/烟雾 43 48.8静脉注射 23 65.2 7.19 0.007总数 2068C.海洛因途径 N ％≥5/≥5 卡方*P不使用 177337.3经鼻 6 33.3烟雾 2 50.0静脉注射 21 66.7 6.42 0.011总数 206*Mantel-Haenzel线性卡方1含有114名对照，其中36.0％是≥5/≥5纯合子， 和24名ATU受试对象，其中37.5％是≥5/≥5纯合子。 2含有114名对照，其中36.0％是≥5/≥5纯合子，和15名ATU受试对象，其中33.3％是≥5/≥5纯合子3含有114名对照，其中36.0％是≥5/≥5纯合子，和64名ATU受试对象，其中40.6％是≥5/≥5纯合子。 表29CNRI基因型(≥5/≥5＝2，其他＝1)对ATU受试对象和对照的静脉注射药物次数、药物得分和酒精得分的回归分析(n＝206)得分 r r2T P酒精得分 0.007 0.0000 00.099 0.921药物得分 0.144 0.0208 20.081 0.038静脉注射药物得分 0.195 0.0381 20.844 0.005实施例5人肥胖(OB)基因的遗传变体与身体质量、精神病学的症候和多巴胺D2受体基因(DRD2)的关联方法和材料健康促进组织中心(CHP)。受试对象由来自健康促进组织中心研究项目的211个非西班牙血统的白种人构成。根据对遗传的多态性与行为变量关联的其他研究的有效性分析，发明者寻找到200～225名受试对象的样本量，他们的年龄从29～75岁，平均年龄54岁，标准差(S.D。)10.2岁。该组中有98个男人和113个女人。每个受试对象都确定了年龄，性别，体重，身高和腰—髋的比率。总身体脂肪通过在水中称体重而确定下来。每个受试对象都被要求提供从16岁到他们的现在年龄的不同年龄间隔中，有关他们的最重体重的数据。为检测血中的葡萄糖、胆固醇和胰岛素，抽取了空腹血样。编号后的样品用于进行分析，分析在健康促进组织中心的数据单盲的情况下进行。 每个受试对象都完成了NEO 5-因素人格检验问卷(Costa和McCrae，1992)以及症候检查一览表-90(SCL-90)。受试对象也答复了下列一套问题：你因为饿才进食吗？暴食吗？在正餐之间吃零食吗？因为心情不好而进食吗？由于感到有压力而进食吗？吃早饭吗？在正餐时吃得过多吗？对甜食成瘾吗？喜欢蔬菜吗？喜欢含脂肪多的或者油煎的食物吗？可能的回答是：1：从不；2：偶尔，3：经常，4：非常频繁，5：总是如此。 遗传研究。发明者用PCRTM方法，扩增了D7S1873、D7S1875、D7S514和D7S680二核苷酸重复序列，如同以前被描述(Green等1995)的那样，它们存在于含有人OB基因的YAC中。这些序列中，D7S1875离OB基因最近。发明者将这段序列称为OB1875。DRD2基因TaqAl等位基因也被用前述(Noble等.1994b)引物进行了检验。 OB1875基因型的统计分析。一个先前的假说是：如果比D7S1875二核苷酸短或长的等位基因重复序列与BMI或其他的变量有关联，具有短(或者长)等位基因的纯合子的个人将得最高的分数，那些杂合子将得中间的分数，而那些具有长(短)等位基因的纯合子将得最低的分数。这样，将不同的等位基因组中的受试对象的行为得分的均数就进行比较，使用的方法是来自SPSS(SPSS公司，芝加哥，伊利诺斯州)公司的方差分析统计程序，其中子命令“多项式”被设为1，以便对进行性线性关系进行检查。当有至少3组的时候，Tukey分析方法用于检测在任何组之间的显著性个体差异，其中α＝0.05。协方差分析(ANACOVA)用来检验OB1875基因型对使用BMI、腰-髋比率、年龄和性别作为协变量的SCL-90焦虑计分方面的影响。另外，对三个OB1875基因型进行了具有二分断点变量的卡方分析。因为先前假定是：在这3个OB1875基因型之间，将存在一种进行性的线性增加或者减少，所以它们用线性卡方检验法进行了检验(SPSS统计软件包中的Mantel-Haenszel卡方试验)。最终，使用回归分析以确定OB与DXD2基因型或等位基因之间的相关性(r)。R2提供了有关的基因或基因的组合给出的对变异度(方差)的部分说明。结果BMI平均值为27.9，标准差(S.D)为7.2，范围是17.7～57.6。在初步研究中，通过把等位基因分成一个长和一个短的组，全部4种多态性的等位基因都被检验了。受试对象被按基因分型分成：那些短等位基因的纯合子，长等位基因的纯合子，和短和长等位基因的杂合子。在3个基因型组中进行的BMI检查显示出D7S1875多态性具有最高的F-比。这样，后来的研究都用这种多态性对其他的变量进行了研究。 OB1875等位基因分布。健康促进组织中心受试对象的OB1875多态性的不同的等位基因，其长度范围为199～225bp。发明者对在精神病学障碍中进行二核苷酸重复序列检查的已有方法(Comings等，1996)是，如果存在双峰分布的自然倾向，就首先要把等位基因分为大致相等的组。OB1875多态性的情况就是这样，分割点定在208bp。产生的基因型分组情况是：＜208bp/＜208bp，＜208bp/≥208bp和≥208bp/≥208bp。 肥胖变量。对于包括男人和女人在内的整个组，仅仅与体重有显著性关联，在3个基因型组间逐步降低(＜208/＜208 n＝47，183.83kg，标准差(S.D)45.39；杂合子n＝95，177.56kb，标准差(S.D)44.00；≥208/≥208 n＝39，161.29kg，标准差(S.D)45.17，F-比＝5.22，p＝0.023)。对于BMI，存在一种累进性的但不是显著的降低，BMI值从＜208/＜208纯合子的28.92，到杂合子的27.96，和≥208/≥208纯合子的26.62。在血浆胰岛素、空腹血葡萄糖、胆固醇和脂肪百分比的均数上，不同基因型造成的差异不显著。当考虑到每个性别时，对男性而言，倾向是相同的。BMI值接近显著(p＝0.053)，而体重明显地不同(p＝0.038)。倾向性也是相同的，没有一个变量仅对女人来说是显著的。 根据年龄的BMI。表30显示在不同年龄的受试对象(包括男人和女人)内，BMI的均数之间由方差分析进行的比较。对26-30岁的受试对象来说，不同基因型造成的差异是显著的，对16-20岁的受试对象来说，差异几乎是显著的。当仅对女性进行检验的时候，同样，仅仅26-30年龄段显示了显著的结果(p＝0.028)。当仅对男性进行检验的时候，任何一个年龄组都不显著。受试对象年龄为26～30岁的时候，他们的BMI被分了为＜25、25～34和≥35的3个组。这3个BMI组间，OB1875＜208/＜208基因型的频率呈累进性增加，即从24％到33％再到56％(线性卡方＝4.46，d.f＝1，p＝0.034。)。 SCL-90。SCL-90的结果如表31所示。＜208/＜208纯合子的分数在焦虑、抑郁、精神病、敌意、偏执观念、强迫症、症状总和、一般症候指数和总体总和方面明显更高。上述计分中的7个，p值＜0.025。 协方差分析。为了检验对于体重问题或肥胖的类型(腰-髀比率)精神病学变量仅居次要地位这种可能性，对SCL-90焦虑计分进行了检验，使用OB1875基因型作为主效应，BMI、腰-髋比率、年龄和性别作为协变量(表32)。结果表明：在这5个变量中，只有OB1875基因型显示与焦虑分数之间存在显著的关联。对抑郁、总的阳性症状和全部症状的SCL-90分数进行的关联也有同样的结果。 DRD2和BMI年龄组。进行了D2A1等位基因存在与否的方差分析，以便确定DRD2基因是否也在特定年龄的BMI中起作用。当受试对象是31-40岁的时候，对于携带A1等位基因的个人来说，其平均BMI值明显更大些(D2A1+n＝54，28.78，标准差(S.D)＝8.56；D2A1-n＝70，25.67，标准差(S.D)5.21，F-比＝6.04，p＝0.015)。与OB基因一样，对更老的年龄组来说F-比率倾向于较低，尽管样本规模也较小。 合并的OB1875＜208/＜208纯合性和D2A1等位基因。为了确定OB和DRD2基因的效果是否有累加作用，通过把受试对象分为OB1875＜208/＜208等位基因纯合的人和/或携带D2A1等位基因的人，进而对他们的BMI进行了检验(表33)。这些结果非常显著。那些既是OB1875＜208等位基因的纯合子并/或携带DXD2 D2A1等位基因的人，当他们的年龄是16-20，21-25，26-30，31-40和41-50岁时，他们具有显著更高的平均BMI值。当这2个基因的效果被合并，并且全套肥胖变量都被进行检查的时候，对腰/髋比率(p＝0.033)、体重(0.013)和胰岛素水平(0.042)来说，差异是显著的。 回归分析。单变量的回归分析允许对由OB基因或OB+DRD2基因说明的、特定年龄的BM1的方差(r2)百分比进行检查(表34)。包括男人和女人都在内，仅对OB基因而言，r和r2仅仅对16-20岁和26-30岁年龄组的BMI来说是显著的。在这里，OB基因对这2个BMI的方差提供了大致3％的贡献。然而，当OB和DRD2基因的效果被合并的时候，在16-20，21-25，26-30和31-40年龄组，它们对这些BMI的方差贡献达到了8.5-9.9％。当仅对女性进行检验的时候，仅就OB基因而言，这种关联仅仅对31～40年龄段来说是显著的(p＝0.029)。当OB和DRD2基因的合并的效果被检验的时候，当受试对象是16-20，21-25，26-30，31-40和41-50岁的时候，这种关联对受试对象来说是显著的。最显著的关联是在26～30岁(p＝0.0004)和31～40岁(p＝0.0005)年龄组。这2个基因在这里说明了BMI方差的22.8％。 N.E.O，对于令人愉快、认真、外向、神经过敏和开放性这5个N.E.O因素，仅有神经过敏提高是显著的。这3种OB1875基因型的得分分别是21.16，17.82和14.86，F-比＝7.29，p＝0.008。认真性降低是临界显著的(32.97，34.67和35.65，F-比＝3.71，p＝0.056)。 进食的原因。在被问到的那些关于进食理由的问题中，仅有2个理由即：由于感到有压力而进食和吃早饭是与OB1875基因型有显著关联的。对于这三个基因型，“由于感到有压力而进食”的得分是2.55，2.32，1.85，F-比＝4.54，p＝0.034。‘吃早饭’的得分是3.50，4.15，4.14.F-比＝4.89，p＝0.028。 当使用基于受试对象现在体重的BMI时，OB1875基因型的表型效果没有什么证据。虽然存在一种倾向，即＜208/＜208的纯合子具有最高的BMI值，杂合子居中，≥208/≥208等位基因纯合子的值较低，但结果不显著。在腰-髋的比率、脂肪百分比、血浆胰岛素和血葡萄糖上的差异不显著，但在体重上的差异显著(p＝0.02)。 当受试对象年龄为16～30岁时，OB1875＜208/＜208纯合性与受试对象的BMI值之间存在有显著性或者几乎显著性关联的倾向。但当他们是41～70岁时，受试对象的BMI值与OB1875＜208/＜208纯合性之间就只有极少或没有关联。而这种倾向性在仅仅把女性性别与OB1875＜208/＜208纯合性进行关联时也是存在的。相反，在仅仅把男性性别与OB1875＜208/＜208纯合性进行关联时，只能见到非显著的倾向(表30)。这些结果暗示了OB基因与年轻人的BMI变异之间存在关联。当年龄在26～30岁的男人和女人的BMI被分为＜25、25到34和＜35组的时候，＜208等位基因纯合受试对象的百分比有显著的和累进性的增加，即从24％到56％。 与基于SCL-90的精神病学变量的关联更显著。2种行为与肥胖之间最经常发生关联—即焦虑和抑郁，它们与OB1875＜208等位基因的纯合性具有显著关联(p＝0.003-0.0005)。对于焦虑，＜208等位基因的纯合的36名受试对象的平均得分(0.85)是那些杂合子(0.277)或≥208/≥208纯合子(0.203)受试对象平均得分的两倍以上。OB1875＜208等位基因与焦虑和抑郁之间存在关联的一个合理解释可能是：这些等位基因导致肥胖，而焦虑和抑郁的作用是次要的。为了核实这一点，发明者用BMI、腰-髋比、年龄和性别作为协变量，OB1875等位基因作为主效应，进行了协方差分析。对于焦虑，分析结果表明：与SCL-90焦虑得分显著相关的唯一变量是OB1875≥208等位基因的存在(表32)，这就表明OB基因对精神病学的症候有主要的影响，并可能对与肥胖有关联的抑郁和焦虑起到直接诱导的作用。 为了在健康促进组织中心受试对象中检验DRD2基因的作用，方差分析被用来在各种年龄的具有D2A1等位基因的受试对象和不携带Al等位基因的受试对象中比较他们的BMI。对OB1875等位基因携带者，更低年龄的组，例如31-40岁年龄组，其RMI与该等位基因有正好显著的关联p＝0.015。 为了检验2个或更多基因的累加效果，发明者对OB1875＜208bp等位基因的纯合子和/或携带D2A1等位基因的受试对象，对不同的特定年龄的BMI组，进行了方差分析。对于男人和女人合并在一起的情况，OB1875＜208/＜208或D2A1等位基因的存在与年龄从16～50岁的所有组的高BMI值之间有显著的关联(表34)。年龄16～40岁的4个组的全部的p值都是＜0.005。当仅仅检验女人的时候，尽管受试对象的人数更少，结果却更显著。16～40岁年龄组的p值范围是从0.0017～0.0004。携带等位基因或基因型中的任意一个或两者都携带的受试对象的腰-髋比率、体重和血浆胰岛素水平都与该等位基因或基因型有显著的关联。 如在先前的研究中(Comings等，1996f；Comings等，1996；Comings等，1997b)，在目前正在讨论的基因型与给定的分数之间的回归系数r的确定，使得可以确定r2或由正在被研究的基因说明的分数变异量的比率。这些特定年龄的BMI值的结果用表34表示。在男人和女人被合并研究的情况下，在16-20和26-30岁年龄组，OB基因分别独自说明了BMI的变异量的3.2和3.0％。当仅有女人被研究的情况下，这些值增加到6.2和4.1％。当OB基因和DRD2基因的效果被累加的时候，在男人和女人被合并研究的情况下，当受试对象是16～40岁的时候，这些基因说明了BMI的变异的8.5～9.9％。当仅仅女人被检验的时候，在16～40岁年龄组，这2个基因说明了受试对象的BMI分数变异量的19.1～22.8％(p＝0.0017～0.0004)。 表30OB1875基因型在CHP受试对象中进行的BMI值的线性方差分析根据年龄的BMI 基因型 N 均数 标准差 F-比 p男性和女性16-20岁 ＜208/＜208 38 24.26 3.95杂合子 63 22.66 3.74≥208/≥208 27 22.50 3.64 3.58 0.06121-25岁 ＜208/＜208 38 25.20 4.96杂合子 65 24.22 4.56≥208/≥208 27 23.54 4.80 2.02 0.13926-30岁 ＜208/＜208 38 26.83 6.44杂合子 65 24.79 4.67≥208/≥208 27 24.22 5.57 4.05 0.04631-40岁 ＜208/＜208 37 27.83 6.11杂合子 65 26.92 6.35≥208/≥208 26 25.79 9.14 1.31 0.27541-50岁 ＜208/＜208 32 28.51 6.50杂合子 60 27.86 8.07≥208/≥208 24 27.38 6.21 0.33 0.56451-60岁 ＜208/＜208 20 30.19 8.24杂合子 43 27.52 6.61≥208/≥208 14 28.40 9.89 0.64 0.42461-70岁 ＜208/＜208 14 29.35 7.32杂合子 23 26.66 3.57≥208/≥208 7 26.61 6.98 1.67 0.202根据年龄的BMI 基因型 N 均数 标准差 F-比 p女性16-20岁 ＜208/＜208 19 24.00 4.09杂合子 35 21.78 3.72≥208/≥208 21 21.83 3.48 3.18 0.07821-25岁 ＜208/＜208 19 25.30 5.73杂合子 37 23.17 4.89≥208/≥208 21 22.86 4.86 2.20 0.14026-30岁 ＜208/＜208 19 28.04 8.00杂合子 37 23.93 5.11≥208/≥208 21 23.60 5.87 4.99 0.02831-40岁 ＜208/＜208 18 28.94 7.28杂合子 37 26.35 7.77≥208/≥208 21 25.46 10.08 1.61 0.20841-50岁 ＜208/＜208 14 28.33 7.00杂合子 34 28.28 8.84≥208/≥208 19 27.51 6.85 0.10 0.75251-60岁 ＜208/＜208 9 30.01 7.90杂合子 20 27.11 5.22≥208/≥208 12 29.07 10.26 0.03 0.85961-70岁 ＜208/＜208 6 26.93 4.55杂合子 10 25.23 4.28≥208/≥208 6 26.69 7.65 0.006 0.939根据年龄的BMI 基因型 N 均数 标准差 F-比 p男性16-20岁 ＜208/＜208 19 24.51 3.89杂合子 28 23.77 3.53≥208/≥208 6 25.27 3.22 0.001 0.97321-25岁 ＜208/＜208 19 25.09 4.19杂合子 28 25.52 3.79≥208/≥208 6 25.90 4.07 0.24 0.626-30岁 ＜208/＜208 19 25.62 4.25杂合子 28 25.94 3.80≥208/≥208 6 26.39 4.01 0.18 0.67131-40岁 ＜208/＜208 19 26.79 4.71杂合子 28 27.67 3.76≥208/≥208 5 27.19 3.38 0.25 0.61941-50岁 ＜208/＜208 18 28.64 6.28杂合子 26 27.31 7.07≥208/≥208 5 26.88 3.74 0.49 0.48851-60岁 ＜208/＜208 11 30.38 8.89杂合子 23 27.88 7.71≥208/≥208 2 24.45 0.15 1.21 0.27861-70岁 ＜208/＜208 8 31.18 3.08杂合子 13 27.74 0.71≥208/≥208 1 26.11 1.98 0.174 表31OB1875多态性和SCL-90得分的线性方差分析SCL-90得分 基因型 N 均数 标准差 F-比 p焦虑 ＜208/＜208 36 0.850 1.36杂合子 65 0.277* 0.33≥208/≥208 29 0.203* 0.29 12.72 0.0005抑郁 ＜208/＜208 33 0.935 0.79杂合子 63 0.552* 0.59≥208/≥208 30 0.453* 0.52 9.14 0.0030精神病 ＜208/＜208 35 0.426 0.60杂合子 65 0.198* 0.28≥208/≥208 30 0.183* 0.24 6.58 0.011敌意 ＜208/＜208 36 0.509 0.66杂合子 66 0.255* 0.36≥208/≥208 30 0.227* 0.38 6.36 0.013偏执观念 ＜208/＜208 37 0.527 0.56杂合子 67 0.335 0.42≥208/≥208 30 0.278 0.38 5.23 0.024强迫 ＜208/＜208 37 0.876 0.69杂合子 64 0.703 1.03≥208/≥208 31 0.443 0.42 4.34 0.035，躯体化 ＜208/＜208 33 0.715 0.72杂合子 65 0.549 0.48≥208/≥208 28 0.467 0.34 3.41 0.067人际敏感性 ＜208/＜208 34 0.732 0.73杂合子 66 0.569 0.84≥208/≥208 30 0.496 0.57 1.55 0.214SCL-90得分 基因型 N 均数 标准差 F-比 p恐怖焦虑 ＜208/＜208 37 0.212 0.46杂合子 66 0.076 0.18≥208/≥208 30 0.138 0.41 1.05 0.305得分＞0 ＜208/＜208 29 33.72 21.48症状总数 杂合子 52 21.23* 15.50≥208/≥208 37 20.85* 18.65 7.33 0.008得分f0 ＜208/＜208 29 62.51 58.86症状总数 杂合子 52 36.42* 33.15≥208/≥208 27 31.44* 29.51 8.24 0.005*Tukey检验结果显著，α＝0.05。 表32SCL-90焦虑变量以OB1875多态性作为主效应，BMI、腰-髋比、年龄和性别作为协变量的协方差分析焦虑 卡方总计 d.f. 卡方均数 F p协变量 1.369 4 0.342 0.518 0.677RMI 0.763 1 0.263 0.447 0.505腰-髋比 0.046 1 0.046 0.078 0.780年龄 0.255 1 0.255 0.433 0.512性别 0.374 1 0.374 0.634 0.427主效应OB18757.855 2 3.928 6.669 0.002可说明的 9.495 6 1.58 2.687 0.012剩余的 71.258 122 0.589总数 81.345 128 0.636 表33在CHP组中OB1875＜208/＜208纯合性和/或DRD2 D2A1等位基因的存在-不同年龄的BMI方差分析年龄有关的BMI 基因型 N 均数 标准差 F-比 p男性和女性16-20岁 OB+和/或D2A1+ 51 24.52 4.15OB和D2A1- 39 22.03 3.24 9.45 0.002821-25岁 OB+和/或D2A1+ 51 26.05 5.31OB和D2A1- 39 23.00 3.49 9.60 0.002626-30岁 OB+和/或D2A1+ 53 27.25 6.36OB和D2A1- 39 23.69 3.46 9.94 0.002231-40岁 OB+和/或D2A1+ 52 29.11 7.26OB和D2A1- 39 25.29 4.48 8.38 0.004841-50岁 OB+和/或D2A1+ 44 29.92 8.18OB和D2A1- 37 26.34 7.08 4.32 0.040851-60岁 OB+和/或D2A1+ 51 30.06 7.39OB和D2A1- 39 26.77 6.97 2.83 0.098461-70岁 OB+和/或D2A1+ 16 28.23 5.42OB和D2A1- 14 36.49 4.22 0.94 0.339女性16-20岁 OB+和/或D2A1+ 25 24.50 4.42OB和D2A1- 24 20.98 2.74 11.07 0.001721-25岁 OB+和/或D2A1+ 25 26.32 6.32OB和D2A1- 24 21.61 2.76 11.24 0.001626-30岁 OB+和/或D2A1+ 27 28.53 7.91OB和D2A1- 24 22.19 2.12 14.45 0.000431-40岁 OB+和/或D2A1+ 26 31.09 8.98OB和D2A1- 24 23.66 4.06 13.97 0.000541-50岁 OB+和/或D2A1+ 20 32.05 10.19OB和D2A1- 23 25.90 5.73 6.08 0.01851-60岁 OB+和/或D2A+ 9 31.10 7.23OB和D2A1- 16 27.01 5.61 2.48 0.12861-70岁 OB+和/或D2A1+ 28.46 4.28OB和D2A1- 7 24.56 4.64 2.19 0.169 表34关于在CHP组不同年龄受试对象中OB1875＜208/＜208纯合性和/或DRD2 D2A1等位基因的存在情况的单一变量回归分析r r2T POB1875＜208/＜208＝1，其他＝0：包括男性和女性16-20岁 0.173 0.030 1.98 0.04921-25岁 0.131 0.017 1.49 0.13726-30岁 0.181 0.032 2.09 0.03831-40岁 0.108 0.012 1.22 0.22241-50岁 0.063 0.004 0.68 0.49851-60岁 0.103 0.010 0.98 0.36661-70岁 0.215 0.046 1.45 0.153OB1875＜208/＜208＝1，其他＝0：女性16-20岁 0.204 0.041 1.77 0.07921-25岁 0.171 0.029 1.49 0.14126-30岁 0.248 0.062 2.22 0.02931-40岁 0.146 0.021 1.28 0.20541-50岁 0.039 0.001 0.32 0.75151-60岁 0.028 0.000 0.18 0.85961-70岁 0.017 0.000 0.08 0.938OB1875＜208/＜208和/或D2A1＝1，其它＝0：男性和女性16-20岁 0.312 0.097 3.07 0.002921-25岁 0.313 0.098 3.09 0.002626-30岁 0.315 0.099 3.15 0.002231-40岁 0.292 0.085 2.89 0.004841-50岁 0.228 0.052 2.08 0.04151-60岁 0.227 0.051 1.68 0.09861-70岁 0.181 0.032 0.97 0.339 r r2T pOB1875＜208/＜208和/或D2A1＝1，其它＝0：女性BMI 16-20 0.436 0.191 3.32 0.0017BMI 21-25 0.439 0.193 3.35 0.0016BMI 26-30 0.477 0.228 3.80 0.0004BMI 31-40 0.472 0.223 3.72 0.0005BMI 41-50 0.359 0.129 2.46 0.018BMI 51-60 0.312 0.097 1.57 0.128BMI 61-70 0.423 0.179 1.48 0.169实施例6同三个多巴胺基因相关的累加效应在本研究中，通过确定是否遗传有所有这三个基因的特定标志的受试者倾向于比那些遗传了不到三个的受试者具有较高(较差)的行为评分来研究这三个影响多巴胺能神经元的重要基因的累加效应。通过确定是否那些没有遗传这些标志的倾向于具有较低(较好)的行为评分来检测减性效应，与累加效应相反的效应。通过确定是否那些遗传有1或2个标志的倾向具有中间的评分来检测这两种效应。这检测了多基因遗传的本质—需要几个基因的累加效应来产生一表型上临床显著的效应。方法受试者 受试者为对TS进行治疗的患者、或患者的亲属。TS、慢性运动抽动障碍或慢性发声抽动障碍的诊断基于DSM-III-R标准(美国精神病联合会，1987)。TS先证者(n＝225)定义为在该诊所寻找医疗照顾的个体。先证者中，82％具有TS而其余的18％具有慢性运动抽动障碍或者慢性发声抽动障碍。在非先证者TS亲属(n＝60)中，54％患有TS，31％患有慢性运动抽动障碍而15％患有慢性发声抽动障碍。非TS亲属(n＝132)中没有人具有慢性运动性或发声抽动。对于所有先证者均个人会见并检查。80％以上的亲属也个人会见。询问每个先证者和他们的亲属关于他们四位祖父母的种族和人种背景。对于DRD2研究，仅包括非西班牙白种人先证者、亲属以及具有北部和西部欧洲背景的对照。所有受试者均超过6岁。 人种分层。在本研究中避免了人种分层。所有受试者均限于北部或西部欧洲世系的非西班牙白种人。由所有四位祖父母确定每个受试者的人种背景。不同世系群的数量介于1至12之间，大部分受试者具有4到6个不同的世系群。对于D2A1等位基因，总共13个不同的研究检测了714个经筛选排除酒精和药物滥用的对照。在这些研究中D2A1等位基因的流行率平均为25.9％，范围为12.5％到34.8％，均低于在432个TS病例中的40.7％。(还见在该申请中前面展示的超级对照研究)。当在D2A1携带者和非携带者中检测平均行为评分时，几个均值在从分析中排除对照时还具有显著性。对于所有三个多巴胺基因的联合检测也是这样。不同受试者倾向于在不同行为评分上评分高。尽管如此，当检测“对照无”、“病例无”及“病例有”三组时仍有许多显著的结果。所有这些结果，实际上作为隐含的人种分层而非通过所检测变量的存在与否分层的结果，其机率似乎很小。利用对照和受试者的相同多基因群，对所有三个被测的多巴胺基因均获得阳性结果。在所有这三个基因中涉及隐含的人种分层的可能性似乎很小。这些阳性结果并非仅仅是由于检测了多个行为变量因此偶然有一些是显著的。发明者总的已经获得了对于所测的几种其它基因的所有行为变量的非显著性结果。 对照。对照(n＝67)来自三个来源：a)TS患者的收养、抚养或继父母，b)来自一内分泌病诊所患有甲状腺癌或非胰岛素依赖型糖尿病的受试者，以及c)医院人员包括专业人员、技术人员和维修工人。由于两种情况均易于治疗，具有高的治愈率且对日常生活产生最小的干扰，在一广泛的年龄范围内存在，以及患者的基础同TS受试者的相同，所以选择内分泌患者作为对照。筛选所有的对照以排除ADHD、酒精、药物以及烟草滥用。 结构化调查表。从1987年起，要求所有患者及可找到的一级亲属填写一个根据诊断性会面程序表(Diagnostic InterviewSchedule)(DIS)(Robins等，1991)设计的详细的31页行为调查表。完整的调查表在别处有提供(Comings，1990a)。除了DIS问题外，还有许多关于人口统计变量、ADHD诊断所需的全部DSM-III和DSMIII-R变量的问题，以及关于运动性和发声抽动的类型、定位、持续时间和严重性问题(美国精神病联合会，1980；美国精神病联合会，1987)。然后将对这些问题的回答输入一SPSS数据库。该工具的使用以及症状群使用的各个方面在别处提供(Comings，1995c；Comings，1994c；Comings，1994a；Comings，1995a)。 血液标本。虽然没有对每个就诊的TS先证者或亲属均采全血标本，但在下面的考虑范围内，选择基本上是随机的。首先，提供血液标本是完全自愿的，而且许多受试者特别是年轻些的选择不抽血。其次，由于关于种族和人种分层的考虑，倾向于从非西班牙的北部和西部欧洲白种人中抽血，因为对照的大部分资料来自这一群体。第三，如果两父母均可提供，则优选从这些家庭而非父母之一不提供的家庭获得血样。 基因分型。对所有的患者均基于一中性身份号进行基因分型，而且在不知被分型个体情况下读片。按照前面所描述的通过DNA分子印迹的杂交来进行D2A1基因分型(Comings等，1991)。有些还按照前文所描述的通过一PCRTM技术进行基因分型(Dawson，1986)。按照在实施例中所描述的进行DβH基因分型。按照在实施例3中所描述的进行DAT1重复多态性基因分型。 共发病的标准。结构化调查表允许系列相关症状的检测。在本研究之前确定了其中每个的标准，包括：酒精滥用(Comings，1994b)、药物滥用(Comings，1994c)、强迫行为(Comings，1994a)、重性抑郁发作(Comings，1995c)、燥狂(Comings，1995b)、躯体化障碍(Comings，1995b)、惊恐发作(Comings，1995b)、恐怖症(Comings，1995b)、品行障碍(Comings，1995a)、违抗障碍(ODD)(Comings，1995a)、性障碍(Comings，1994c)、学习障碍(Comings，1995b)以及抽动严重性(Comings，1995a)。ADHD评分代表所有22个在调查表中所用的ADHD变量的总和，其中无或从不＝0、偶尔＝1而经常＝2。基于前期的研究(Knell和Comings，1993)，将那些具有评分为21或更高的考虑为患有ADHD。由于发明者在ADHD中的特别的兴趣，发明者还利用另一套严格基于DSM-III-R诊断的标准检测它，其中至少需要上面22个变量的14个中的8个(美国精神病联合会，1987)。 一种基于调查表的方法对于症状的准确性、实用性和灵敏性已经被其他人通过比较均用于相同受试者的这样一种工具的使用和一种会面者施用的结构化工具如用于情感障碍和精神分裂症的Kiddie程序表而得到证实(Karp，1994；Grossman等，1994)。 下面是对于一些症状的标准或评分，它们在编写本申请时尚未发表或者可能需要澄清。为评价在学校中的一般表现(小学症状)，发明者问下述问题：“从1到6年级，你的学校表现在a)数学、b)阅读和c)写作中总体表现是低于平均、平均还是高于平均。可能的回答是低于平均(2)，平均(1)，高于平均(0)。结果为三门科目的总和，最差分为6，最好为0。对于两分变量，4分或更多被认为是小学问题阳性。如果他们曾经不得不被置于一个教育不利的、学习不利的、学习障碍或补救班，则这些个体被考虑具有学习障碍的问题(学习障碍症状)。受试者被询问在DIS中关于所有16个恐怖症的存在(恐怖症症状)的问题，而且如果他们在3个或更多项目上有困难，则被认为具有恐怖症的问题。对于一给定的受试者，恐怖症评分为DIS所列恐怖症的总数。如果个体对DIS问题“你曾有过在大部分人不害怕的地方突然感到恐惧、焦虑或非常心神不安的一段时间或发作(并非由于躯体的疾病)吗？”回答是则认为惊恐发作(惊恐发作症状)在某些时候已经存在。对一给定个体，惊恐评分代表DIS惊恐发作症状的总数。为评价阅读问题(阅读问题症状)，个体被询问“你感到在阅读中落后与你同等人的最大年数，如果有，是多少？例如，如果当你在6年级，而你仅仅在4年级的水平阅读，那么你可能落后2年。”那些回答2年或更多的被认为具有阅读问题。口吃(口吃症状)是通过问题“你曾有过口吃的问题吗？”来评价的。对于已被评分为广泛焦虑(广泛焦虑症状)阳性的个体，必须回答下面的两个DIS问题，“你曾有过过度焦虑或担心你生活中各种事情的阶段吗？”以及“如果是，当它们存在的时间多于不存在时，这些感觉持续6个月还是更久？”。如果个体对涉及躯体化症状的DIS问题中的3个或更多回答是则被认为存在躯体化的问题(躯体化症状)。对一给定个体，躯体化症状评分代表DIS躯体化症状的总数。如果下面中的任何一个：夜间入睡问题、夜行症、黑夜恐惧、早醒且无法重新入睡、梦语或恶梦，每天或几乎每天都存在，则被认为具有睡眠问题(睡眠症状)。睡眠评分代表上述每天或几乎每天发生的睡眠评分症状的总数。具有性障碍的个体如果存在下面中的任何一个(Comings，1994a)：1.频繁公开展示、2.性要求大大高于普通人、3.喜欢同性或两种性别、4.在性事物上具有早熟的兴趣、5.作为一名儿童，画肮脏的图片大大多于同龄的其他儿童、6.一直感觉他们被生错了性别、7.象相反的性别一样穿着而并非为了万圣节或化装晚会、8-11.6个月或更长一段时间由物体、或儿童、或受虐或施虐的幻想而被性唤起，则被评分为阳性。在一给定的个体中，性行为评分代表上述性行为问题的总数。具有分裂行为(分裂样行为症状)的个体，如果他们对关于精神分裂症症状的DIS问题中的2个或更多回答是则被评分为阳性。给定个体的分裂样行为评分代表DIS分裂样症状的总数。通过关于8个不同运动抽动以及9个不同发声抽动的存在以及开始的年龄的问题来对受试者进行抽动(抽动症状)检测。将这种抽动的数量相加产生一个抽动评分。于是，多种抽动的存在评分高于较少抽动。上面为卡方分析提供了两分结果，为比较D2A1等位基因携带者和非携带者中的均值提供了评分。 病例分组。上述的信息使得受试者被置于两种不同类型的分组中。第一种是基于慢性运动性和/或发声抽动的存在与否。这些组为TS先证者、具有TS或慢性抽动的TS先证者亲属、没有慢性抽动的TS先证者亲属以及无抽动的对照。第二种分组由a)无药物、酒精或烟草滥用且没有所考虑的行为状况的对照(对照无)、b)没有所考虑的行为状况的TS先证者或他们的亲属(病例无)和c)具有所考虑的行为状况的TS先证者或他们的亲属(病例有)组成。因此，例如，由于对照以及受试者都完成了结构化调查表，对于强迫行为可以在没有物质滥用的且没有强迫行为的对照和没有强迫行为的TS先证者及亲属、和具有强迫行为的TS先证者及亲属间进行比较。在多基因群的TS先证者中仅有3％是轻度，74％为中度，而23％为重度。 统计学。当检测个体行为，例如行为x时，与没有行为x的对照相比在具有行为x的TS先证者中对于某一标志的流行率显著增加有两个可能的原因：a)所标志的基因可能在行为x中起作用，或者b)所标志的基因由于其同本身与行为x相关的行为y相关而可能在频率上增加了。为了区分a)和b)，发明者要求在所有3组间，对照无(无x且极可能无y)、病例无(无x而通常有y)和病例有(有x且通常有y)，该标志的流行率存在一个显著的、渐进的、线性增加。使用了SPSS(SPSS公司，芝加哥，IL)统计学软件包。当在对照无、病例无和病例有的渐进系列间比较两分变量时，利用了对于渐进性线性趋势的SPSS Manrel-Haenzel卡方统计。对于在携带D2A1等位基因(D2A1A1或D2A1A2)和不携带A1等位基因(D2A2A2)的受试者中某一给定行为评分均值的比较利用学生t检验。 为了对每个所研究基因一致，发明者测定了相同组受试者的3个不同基因的基因型。这组称为多基因群。将受试者在测定其DβH或DAT1等位基因的基因型前置于该群中。多基因群的筛选标准要求受试者必须为非西班牙白种人，必须已经填写了结构化调查表，必须已经同意抽血，必须已经制备了足够量的DNA来进行所有三个基因的基因分型，而且必须作为一个对照、一个TS先证者或一先证者的亲属。由于检测了相同的受试者，所以这使得可以对不同的基因比较行为评分的均值。 在多基因群中有319个受试者。此外，对相当数量的受试者测定了其中一个基因而非全部三个的基因型。对于每个基因，这称为总群而且对不同的基因大小不同。在每种情况中，总群包括多基因群加额外的非多基因群病例。为避免丢失数据或力度，对于每个行为还检测总群。然而，为了节约空间，对于总群只在合适的表的最后一列给出p值。对于具有待测等位基因或标志的受试者与不带有该等位基因或标志的那些个体，t检验分析比较不同行为变量的均值。同样，适当时，在各表的最后一列中给出总群的p值。 对于不同行为评分均值的定量检验，发明者预想了两个有些对立的策略。第一个为基于检测的受试者数量越多，II型错误的机会越小的假设，检验尽可能大量的受试者。对于这个策略，检测对照、亲属和TS先证者。第二个策略为仅仅比较极端，即对照和TS先证者，这基于可以比较突变基因具有最小和最大程度表达的个体的假设。对于第一个策略将给出结果，而第二个的结果如果它们比检测较大的群提供更多信息，则将被讨论。在适当的表中给出Bonferroni校正的α值，即对于相互排除分类中受试者的多元比较。 利用线性对比进行ANOVA分析(Dunn和Clark，1995)来确定4组间，其中存在3个标志中的3个、3个标志中的2个、3个标志中的1个以及3个标志中的0个，在许多连续行为的均值中是否存在显著的线性降低。将Tukey检验引入分析中来确定是否各组评分中的任何彼此间是显著不同的，α＝0.05。为了估计由于三个多巴胺能基因引起的变异的百分比，同时对三个基因利用1作为标志存在而0为标志不存在对不同行为评分进行多元线性回归分析。R2给出由于每个基因引起的变异的比例，而R2的和为所有三个基因的贡献。这提供了对每种特异行为，由所有三个基因一起来解释的变异的总比例。 结果对于总群，在四组受试者中受试者的数量、平均年龄以及性别分布示于表35中。预计TS先证者的平均年龄可能低于其它组，而且这是事实。还预计TS先证者和具有TS的亲属的男女性别比可能高于非TS组，而且这也是事实。然而，由于所测试基因均为常染色体的，性别比本身不应被考虑为一个因素。为研究这个，发明者对不同标志的存在或缺乏同性别间进行了卡方分析。这些是不显著的。 DRD2基因的Taq A1等位基因。“对照无”同“病例无”同“病例有”之间。对于多基因群和总群，在TS先证者、有慢性抽动的TS亲属、无慢性抽动的TS亲属和对照的四组中D2A1等位基因的流行率示于表36中。在这两种情况下，A1等位基因的流行率从对照(23.5和26.9％)到TS先证者(41.5和41.7％)通过Mantel-Haenszel线性卡方分析存在显著的累进性增加。 确定D2A1等位基因在“对照无”、“病例无”和“病例有”中流行率的结果以及对总群显著相关的p值示于表37中。最显著的相关性为同燥狂症状，其中同无燥狂症状病例的28.7％、及有症状病例的52.2％相比，21.2％的从未有过燥狂症状的对照携带D2A1等位基因(p＝0.00024)。其它显著的变量依次为违抗、性、ADHD-R、分裂样、ADHD、抽动、重度抑郁以及品行。对于总群，最显著的相关性是同性(p＝0.0007)、口吃(p＝0.0008)、分裂样(p＝0.0016)以及燥狂(p＝0.0017)。 对D2A1携带者和D2A2A2携带者均值的T统计。由于大部分的行为评价涉及连续的评分，因此对所有受试者基于他们携带D2A1等位基因(D2A1A1和D2A1A2)与否(D2A2A2)检验这些评分的均值也是有用的。这些对于受试者在多基因群中的结果按照递降的t检验值列于表38A中。在总群中的显著行为的p值示于最后一列中。显著的变量依次为ADHD、燥狂、ADHD-R、品行、抽动、违抗、分裂样以及性。对于总群，三个额外的变量，口吃、强迫以及躯体化症状也是显著的。当删除对照时，这些中的大部分仍然显著(表38-B)。为了同用于所有三个多巴胺能基因一起的结果相比较，对照和TS先证者对于多基因群的显著结果列于表38-C中。此处品行的级别最高，随后依次为燥狂、ADHD、抽动、分裂样、强迫和违抗。为确定是否D2A1等位基因的纯合性(D2A1/D2A1)给出高于杂合子(D2A1/D2A2)的行为评分，检测这两组所有行为评分的均值。对于除了抽动评分以外的每个变量，对于纯合子的均值低于杂合子。这种显著性仅存在于三个变量中—酒精、小学和阅读。 DβH基因的Taq B1等位基因在各种精神障碍中的Taq B1等位基因。在所测试的148个非西班牙白种人对照中，60.8％携带DβH B1等位基因。在经筛选排除酒精、药物和烟草滥用或依赖的那些中，52.9％携带B1等位基因(表39)。利用α为0.05，B1等位基因的流行率存在显著增加，达352例TS先证者中的70.5％(p＝0.012)。为确定是否TS的严重性发挥作用，将TS先证者按照总体率分为轻度(太轻而无需治疗TS范围中的任何方面)、中度(某些方面需要治疗)和重度(TS范围中的一些方面导致他们生活的严重干扰，Comings和Comings，1985)。B1等位基因的流行率由轻度的54.3％到中度的72.1％到重度的72.7％具有增加。B1等位基因的流行率对于中度病例是显著的p＝0.0071。 B1等位基因的流行率对于具有ADHD的78个受试者为73.1％(p＝0.019)而对104个吸烟者为73.1％(p＝0.012)。B1等位基因的流行率在其它组中比对照中的没有显著性增加。而B1等位基因同TS和吸烟的相关性仅仅在没有Bonferroni校正下是显著的，但有些担心这样一种校正可能不适当地增加了II型错误(Rothman，1990)。在三个等级的TS中的B1/B1纯合性同B1/B2杂合性的hoc后分析中，注意到37.1％的轻度、49％的中度以及62％的重度TS病例为B1/B2杂合子(Mantel-Haenszel线性卡方＝6.25，p＝0.012)。 对照无、病例无、病例有。多基因群中的319个受试者中DβH TaqB1等位基因的流行率的结果示于表40中。ADHD为最显著，B1等位基因流行率对于无物质滥用无ADHD的对照为47.1％，对于无ADHD的病例为70.6％，而对具有ADHD的病例为81.9％(p＝0.0001)。其它显著的行为变量依次为学习、小学、ADHD-R、违抗、抽动、燥狂、酒精、阅读、药物滥用、睡眠、口吃以及强迫。总群的结果相似，也是ADHD最显著。当在总群中仅检测男性时，睡眠为最显著(p＝.00005)，然后为ODD(p＝0.002)和ADHD(p＝0.005)。 对B1携带者同B2B2携带者均值的T统计。表41-A显示当多基因群限于对照和TS先证者时的结果。ADHD再一次位于列表的顶端而且是显著的p＝0.020。唯一的其它显著行为是小学，p＝0.029。总群的显著结果列于表41-B中。违抗行为、睡眠、ADHD和阅读在α＝0.05处是显著的。为确定是否B1等位基因的纯合性(B1/B1)给出高于杂合子(B1/B2)的平均行为评分，对于这两组所有行为评分的均值进行检测。纯合子和杂合子对于任何的行为变量均没有显著的差别。 DAT1基因的10/10基因型。对于所检测的整个群的受试者的不同DAT1等位基因的频率示于表42中。为简化分析，对Tourette综合征和孤僻症以及行为障碍的不同种类将10/10基因型的流行率同10/x或x/x基因型的流行率进行比较。在91个对照者中，37.4％携带10/10基因型。其对于241个TS先证者增至52.3％(p＝0.015)。在轻度、中度和重度TS受试者中没有显著性差别(p＝0.031)。对于TS先证者和TS亲属的结果在经过Bonferroni校正后仍具有显著性。10等位基因频率的检测给出相当的结果(表42中的最后两列)。 对照无、病例无、病例有。对于多基因群的319个受试者的这些结果示于表43中。具有最高卡方值的变量为躯体化症状，21.1％的无躯体化问题的对照携带10/10基因型，无躯体化问题的TS先证者或亲属为46.8％，而具有躯体化问题的TS先证者或亲属为60.3％(p＝0.02)。其它显著的变量依照卡方大小的次序为酒精、ADHD-R、重度抑郁、惊恐、强迫、广泛焦虑以及燥狂。对于357个受试者的适度增大的总群的显著结果示于表43的最后一列中。主要的差别为违抗、性、阅读以及ADHD作为显著变量的加入。 对10/10基因型同非10/10基因型均值的T统计。当检测总群时，那些具有10/10基因型的受试者，躯体化以及重度抑郁变量表现出显著高的均值(表44-A)。对于多基因群的所有受试者没有变量是显著的。对于多基因群，只有对照和TS先证者的结果在表44-B中给出。这是在这三个的累加效应的检验中所用的群。此处下面的变量依次是显著的：广泛焦虑、重度抑郁、ADHD-R、ADHD以及酒精。 所有三个多巴胺能基因的比较。对于所研究的在所有三个基因间的每个行为评分的结果示于表45中。分组由那些遗传所有三个标志的(组1)、3个中的2个(组2)、3个中的1个(组3)、以及3个中无一(组4)所组成。同4个基因组表现出最显著线性相关的共发行为是ADHD(p＝0.0002)。例如，ADHD评分对于那些遗传有3个标志中的3个的为30.03，对于那些遗传有3个中的2个的为24.74，对于3个中1个的为20.42，而3个中0个的为14.07。组4(3个中无一)的均值显著低于组1和2的平均评分，而且组3的均值显著低于组1的。其次最显著的为对口吃的评分—1.17、1.06、0.94和0.46(p＝0.0002)。对于组1到4的违抗行为的评分分别为5.04、3.91、3.38和1.93(p＝0.023)。对于品行障碍的评分分别为4.08、3.05、2.87和1.93(p＝0.023)。其它显著的变量为抽动、强迫、燥狂、酒精以及广泛焦虑。虽然其它的行为是不显著的，但20个中的16个表现出相同的具有较小遗传学负载的渐进性线性降低。使用整个多基因群时结果是相似的，但具有略低的显著性。 为进一步详细检测这些关系，最显著的行为评分ADHD被分为8组，代表这三个基因标志的所有可能组合(表46)。这证实了累加性和减性趋势。抽动评分也给出一个类似的分类。这些结果同那些4个基因种类的相似而且对于相同的变量是显著的。 为检测结果某种程度上可能被对照的一个未知的方面所驱动的可能性，只利用具有TS的受试者(先证者和亲属)重复分析。虽然变窄的评分范围以及由此导致的较高的p值，ADHD、ADHD-R、躯体化和重度抑郁是显著的p＜0.05，而品行、违抗以及燥狂是略微显著p＜0.07。例如，组1到4对于ADHD评分的值分别为29.9、26.1、23.0和22.9(p＝0.01)；对于品行评分为5.1、4.0、3.8和3.2；而对于违抗评分为3.8、3.3、2.9和2.7。对于更显著行为变量的变异比例估计的结果示于表47中。大体上，DRD2基因对变异贡献最大。对于同TS相关的主要行为，3.0到7.6％之间的变异由三个多巴胺基因解释。 在本研究中，曾尝试消除可能是由于人种背景或其它相似障碍的遗传学变异。这涉及下面几点。1.所有的受试者为非西班牙白种人。2.不仅对对照筛选ADHD、药物、酒精和烟草滥用/依赖，而且通过用于TS先证者和亲属的同样的结构化的工具对他们进行评价。这使得具有所研究行为的对照被排除。这样做的巨大效应由以下事实所证实：对于总群，对照的D2A1等位基因流行率中所得的变异为从35.0％到23.8％的范围之间，而在合格对照数目中的变异对于不同行为从67到40。3.检测大量的受试者来避免II型错误。因此，DRD2座位，在总群中研究了484个受试者，而对多基因群为319个。4.基于DIS，对所有受试者给予相同的结构化精神病症状观察。TS为一种复杂谱系障碍(Comings，1995d，Comings，1990)，而且其允许对许多不同行为检测来测试D2A1等位基因可能同一些行为强相关而不与其他行为相关的可能性，而不是依靠单一的两分诊断(TS或非TS)。5.TS先证者、具有和没有TS的TS亲属以及对照的引入为待测的更宽范围的行为评分提供了机会。6.为了消除关于不适当选择对照的担心，还在不包括对照的情况下分析结果。7.由于个体可能具有较大程度的遗传负载，包括而非有意排除具有共发病症的先证者。8.收集更多严重患病的先证者而非集中在用于连锁研究类型的大家族，其中非先证者患者通常更轻度患病。9.检测联合两个或多个基因对表型的效应，在这种情况下为，DRD2基因的Taq A1等位基因、DβH基因的Taq B1等位基因以及DAT1基因的10/10基因型。为完成这一步，在相同群的受试者中检测所有三种基因。 多巴胺D2受体基因在TS先证者对其它组中的D2A1等位基因。如在表36中所示，对于总群，41.7％的TS先证者携带D2A1等位基因，而对于具有TS的亲属为35.0％，对于无TS的亲属为28.8％，对于无物质滥用障碍的对照为26.9％。累进是显著性的，P＝0.0038。使用发明者的对照的结果(26.9％)同在经筛选排除酒精和药物滥用/依赖的总共714个非西班牙对照者中25.9％的D2A1等位基因流行率是没有区别的(Comings等，1996e)。在发明者的TS先证者中的流行率(41.7％)实际上也同由发明者和他人进行基因分型的总共432个TS受试者中的40.7％没有区别。虽然这些结果同DRD2基因在TS中的作用一致，但它们没有确定行为谱中的哪个部分主要受影响。为确定这一点，发明者在“对照无”、“病例无”和“病例有”所研究行为的三个组中检测D2A1等位基因的流行率。 检测了涉及冲动、强制、成瘾、情感、焦虑、睡眠以及学习行为的20个不同的症状群(表37和38)。(21包括ADHD的双重评价)。同D2A1等位基因显著相关的变量为性、口吃、强迫、分裂样、燥狂、ADHD-R、抽动、ADHD、行为、违抗、酒精滥用、学习和睡眠问题。表现出相同趋势的所有其它行为却是不显著的。对于总群，两个最显著的(口吃和性)和最不显著的(恐怖症)行为的结果。对于多基因群的卡方研究，燥狂行为是最显著的，而且在表中级别最高。这同发明者在TS先证者亲属中的行为研究是一致的，其表明燥狂症状代表Gts基因的最高形式的表达(Comings，1995d)。 当只检测TS先证者时，在D2A1等位基因的存在同抽动的严重性之间缺少相关性，这同Devor(1992)和Gelernter等(1994b)的结果一致。然而，当包括对照和非TS亲属时，抽动评分是显著的。此外，当将病例根据其它行为分层时，D2A1等位基因同它们中的许多相关。 多巴胺β羟化酶。DβH Taq B1等位基因的流行率在352个TS先证者中(70.5％)显著高于在148个对照中(60.8％)。表现出显著升高的B1等位基因流行率的受试者的唯一其它组是吸烟者，为73.1％。 对于319个受试者的多基因群，同DβH B1等位基因显著相关的13个变量依次为ADHD、学习、小学、ADHD-R、违抗、抽动、燥狂、酒精、阅读、药物滥用、睡眠、口吃以及强迫。然而，对于它们中的几个，特别是界限显著的那些(酒精、药物滥用、口吃、强迫)，B1等位基因的流行率在无该行为的TS先证者和亲属中高于那些具有该行为的，表明在对照中p值被较低的频率驱动。对于较大的455个受试者的总群除了加入躯体化和重度抑郁以及无显著性的口吃外，结果是相似的。 对于多基因群，B1等位基因的流行率在对照中处于从46.9到56.5％的范围中。当对多基因群和总群的对照和TS先证者的行为评分的均值都进行检测时，ADHD、小学、违抗和睡眠是显著的。发明者的研究证实，违抗行为一贯比品行障碍同B1等位基因更显著相关。 为检测DAT1基因的可能作用，如在DRD2基因和DβH基因的研究中，发明者在对照、TS先证者和TS受试者的亲属中对不同行为比较了10/10基因型的流行率。这显示出同包括躯体化、酒精依赖、ADHD、重度抑郁、强迫、广泛焦虑、燥狂、性和违抗障碍的共发病行为的多个变量具有显著关联。 虽然本结果支持表明一种明显的生理学效应同DAT1基因的40bp重复等位基因相关的Gelernter等(19904a)的那些结果，但发明者的结果还提示精神病是同10等位基因而不是9等位基因相关。这由发现在每个表现出显著效应的行为中9基因型的频率存在一个渐进性的降低而进一步支持。例如，对于躯体化，9等位基因的频率由对照中的0.37降低至无躯体化的亲属中的0.29，至具有躯体化的亲属中的0.20，而10等位基因的频率在相同的组间由0.54增至0.70及0.77。有趣的是，最常见等位基因10的频率在各种群的行为症状存在时似乎仍然进一步增加。一个可能的解释是9等位基因根源上是正常的等位基因，而10等位基因由于其同所列行为的一个或多个相关而通过筛选频率增加了。 所有三个多巴胺能基因。为研究累加性和减性效应，要求发明者从相当数量的相对严重患病的TS先证者、他们的亲属以及对照获得DNA标本，而且需要对同一群受试者对所有基因进行分型。对319个样本这样做了。一个先前的假设是两个策略之一可以提供更多的力度。第一个策略涉及检测整个多基因群，包括大体未受累的亲属，来增加力度。第二个策略是检测仅由对照和TS先证者组成的多基因群的亚群。这可以提供最宽范围的评分以及严重性的更大的两分化。虽然两种技术均给出阳性结果，但后者被证明更有效。结果表明对于除了4个(躯体化、重性抑郁、睡眠和阅读)外的所有所检测行为的评分中均存在一个从携带3个标志中的3的受试者到那些具有3个中2个、3个中1个以及3个中0个的渐进的线性降低。 发明者推测TS和ADHD基本上是相同的遗传学障碍(Comings和Comings，1984；Comings和Comings，1987a；Knell和Comings，1993；Comings和Comings，1993)。当联合这三个多巴胺能基因时最显著的两个行为是ADHD和抽动，这一证明为在分子遗传学水平上证实了这种假设。同其它行为的显著相关性支持它们组成了一个遗传学相互关联的行为谱这样的概念。其它基因的检测可以使表型倾向于较少被多巴胺能基因所影响的方向上。对5-羟色胺水平有影响的色氨酸2，3-二氧化酶基因是一个例子(Comings等，1996d)。没有发现三个基因的线性累加效应以外的证据，即没有上位性的证据。 当通过列出这三个标志的所有可能组合来更详细检测同这三个基因最显著相关的行为ADHD时，这些结果也同累加性和减性效应一致。资料表明，三个基因的负载可以解释从无ADHD的诊断到明确的诊断的一系列临床显著的评分。由于仍有一些受试者具有所有三个标志而无ADHD症状以及一些没有三个标志中的任何一种却有清楚的ADHD，所以很清楚还涉及其它基因。因此，对TS和ADHD的筛选可以包括已经被证明参与这些障碍的其它基因的等位基因变体。 并非所有的行为评分表明同八个置换中每个都有这种程度的相关性。为证明这一点，对于抽动的评分，同种类型二分化的结果示于表46中。虽然在抽动的评分中不同的置换均也有一个大致而显著的线性降低，D2A1等位基因阳性而DβH B1和DAT1 10/10基因型阴性的受试者表现出明显的不连续性，均值为5.0。这是一个由于在每组中相对小量的受试者的统计学异常，或者DRD2等位基因对抽动具有比其它基因强的效应的提示，必须等待进一步的研究。DRD2基因本身的研究表明同抽动严重性的显著性关联。 目前发现口吃本身排级仅低于ADHD而高于抽动，支持口吃是Gts基因的另一个表现这个推测。关于品行和违抗障碍的这些观察同通常认为的这两个行为障碍完全是由于社会心理因素(包括抚养差)的假设是对立的。虽然没有人能够怀疑合格抚养的非常重要的作用，但当抚养形式或环境因素没有毛病时，遗传学因素可能在品行和违抗障碍中发挥重要的作用。 多巴胺基因解释的变异比例。利用多元线性回归分析对相关系数的计算使得可以对由这三个多巴胺能基因所解释的不同行为变异比例进行估计。对于所有三个基因，其说明从ADHD评分7.6％的变异到对口吃1.3％的变异范围(表47)。为获得三个基因的相对重要性的估计，合计所有行为变量的r2值。这表明三个基因的相对重要性为DRD2、DAT1和DβH基因大约的比例分别是3∶2∶1。这个结论由这样的事实所支持：对于DRD2，基因r对八个行为变量(品行、燥狂、分裂样、小学、抽动、OCD、ODD和恐怖症)是显著的，对于DAT1基因，r对三个变量(抑郁、广泛焦虑和酒精滥用)是显著的。虽然对于DβH基因r对任一变量都不是显著的，但具有最高值的三个为ADHD、ODD、品行、阅读和学习障碍。这些结果还为不同基因和基因的组合在表型将如何被表达中发挥作用的认识提供支持(Comings，1995a)。例如，所有三个基因大约均等地参与ADHD和ODD，而在品行障碍中的参与则为DRD2＞DβH＞DAT1。对于学习和阅读，顺序为DβH＞＞DAT＞DRD2。 由于对于慢性抽动在全等双生儿中的一致率低于100％(Price等，1985)，所以一部分变异(大约10到20％)是出于环境的因素。用于DRD2和DβH基因的Taq多态性并不是负责基因功能变化的序列改变，而仅仅是同功能突变的连锁不平衡，这些变异百分比的估计可能被低估了，即如果检测了功能突变本身它们可能会更高。最后，这些估计代表包括所有病例、对照和先证者的平均值，不论他们是否具有所研究的行为。例如，仅有282个病例中的41个或14.5％具有口吃的问题，而43.7％具有品行问题。由实际上具有所研究行为的那些所解释的变异百分比可能高得多。 这些结果同这些障碍的多基因、多因素特性是一致的。虽然对于“对照无”、“病例无”和“对照有”具有显著的相关性，但由这三个基因所解释的变异的相对低的比例说明为什么连锁分析是无结果的，以及这种关联方法对多基因有多敏感。 表35不同受试者组的年龄和性别年龄组 N 平均年龄 S.D.TS先证者 225 16.83 12.11具有TS的亲属 60 27.72 14.73没有TS的亲属 132 38.07 11.95对照 67 42.31 14.86合计 484性别细 N男性 N女性 N总数 ％男性TS先证者 188 37 225 84具有TS的亲属 37 23 60 62没有TS的亲属 51 81 132 39对照 27 40 67 40合计 484表36各种受试者分类中D2A1等位基因的流行率分类 N A1A1 A1A2 A2A2 ％A1 频率 x2*A.多基因群(n＝319)TS先证者 142 9 50 83 41.5 0.24具有TS的亲属 39 0 11 28 28.2 0.14没有TS的亲属 104 4 24 76 26.9 0.15对照 34 1 7 26 23.5 0.14 6.99B.总群(n＝484)TS先证者 225 13 81 131 41.7 0.24具有TS的亲属 60 2 19 39 35.0 0.19没有TS的亲属 132 4 34 94 28.8 0.16对照 67 3 15 49 26.9 0.16 8.35*基于D2A1流行率的Mantel-Haenzel线性卡方表37对多基因群，D2A1等位基因同各种共发病行为的相关性评分 对照 病例 病例无 无 有 x2*p*总群的p*N ％ N ％ N ％躁狂 33 21.2 216 28.7 69 52.2 13.47 0.00024 0.0017违抗 34 23.5 206 29.6 79 46.8 8.31 0.0039 0.0274性 27 25.9 204 28.4 88 46.6 8.19 0.0042 0.0007ADHD-R 34 23.5 210 30.5 75 45.3 6.63 0.010 0.0085分裂样 32 25.0 194 30.4 88 44.3 5.92 0.015 0.0016ADHD 34 23.5 163 30.1 116 41.4 5.42 0.020 0.0110抽动 34 23.5 104 26.9 181 38.7 5.27 0.022 0.0088重性抑郁 25 24.0 176 30.1 109 41.3 4.70 0.030 N.S.品行 26 23.1 161 30.4 124 39.5 3.93 0.047 0.0135强迫 32 21.9 216 32.4 69 40.6 3.59 0.059 0.0013阅读 18 16.7 116 31.0 169 36.7 3.01 0.082 N.S.学习 29 20.7 190 32.6 95 37.9 2.70 0.100 0.041睡眠 28 21.4 202 32.7 83 38.6 2.64 0.103 0.049评分 对照 病例 病例无 无 有 x2*p*总群的p*N ％ N ％ N ％惊恐发作 28 21.4 178 32.6 100 38.0 2.58 0.107 N.S.口吃 33 21.2 241 32.8 41 39.0 2.53 0.111 0.0008酒精滥用 34 23.5 262 33.6 23 43.5 2.53 0.111 0.037恐惧症 23 17.4 182 33.0 103 36.9 2.40 0.120 N.S.药物滥用 34 23.5 258 33.7 27 40.7 2.09 0.147 N.S.躯体化 19 26.3 154 32.5 78 39.7 1.78 0.182 N.S.广泛焦虑 26 15.4 226 35.4 67 32.8 0.98 0.322 N.S.小学 30 23.3 187 34.2 88 34.1 0.60 0.436 N.S. 对照无＝没有酒精或药物或烟草滥用/依赖以及没有所研究行为的对照病例无＝没有所研究行为的TS先证者和TS亲属病例有＝具有所研究行为的TS先证者和TS亲属*Mantel-Haenszel线性卡方或基于Mantel-Haenszel线性卡方的p值。 表38对D2A1携带者和D2A2A2携带者间平均行为评分的比较A.多基因群，对照，TS亲属和TS先证者(N＝319，D2A1＝106，D2A2A2＝213)评分 |-----D2A1-----| |-----D2A2A2-----| t p 总群p*均值 S.D. 均值 S.D.ADHD 20.77 13.22 15.53 13.60 3.28 0.001 0.003躁狂 2.00 2.49 1.16 1.83 3.19 0.002 0.003ADHD-R 4.97 4.42 3.40 4.30 3.02 0.003 0.012品行 3.01 2.39 2.24 1.99 2.87 0.005 N.S.抽动 3.05 3.74 1.92 3.00 2.70 0.008 0.042违抗 3.11 3.22 2.22 2.79 2.44 0.016 N.S.分裂样 1.66 2.19 1.11 1.34 2.41 0.017 0.007性 0.78 1.33 0.46 0.96 2.19 0.030 0.017强迫 2.90 3.05 2.28 2.64 1.79 0.074 0.009药物 0.59 1.68 0.34 1.24 1.34 0.181 N.S.躯体化 2.62 3.31 2.11 2.87 1.24 0.217 0.048学习 0.57 0.89 0.45 0.81 1.17 0.245 N.S.重性抑郁 3.76 3.09 3.35 3.01 1.13 0.260 N.S.评分 |-----D2A1-----| |----D2A2A2---| t p 总群p*均值 S.D. 均值 S.D.口吃 0.16 0.37 0.11 0.32 1.11 0.268 0.002恐惧症 2.61 2.82 2.28 2.74 1.00 0.319 N.S.惊恐 3.17 2.20 2.94 2.07 0.92 0.360 N.S.阅读 1.78 1.93 1.57 1.99 0.91 0.365 N.S.睡眠 0.47 0.79 0.39 0.79 0.77 0.443 N.S.小学 2.75 1.93 2.57 1.95 0.75 0.457 N.S.酒精 0.60 2.27 0.41 1.93 0.72 0.471 N.S.广泛焦虑 0.23 0.43 0.21 0.41 0.40 0.692 N.S. *总群：N＝417，D2A1＝153，D2A2A2＝264B.只有总群、TS亲属和TS先证者(N＝417，D2A1＝153，D2A2A2＝264)评分 |-----D2A1-----| |-----D2A2A2----| t p 总群p*均值 S.D. 均值 S.D.躁狂 2.03 2.48 1.37 1.94 2.83 0.005品行 3.15 2.36 2.50 2.13 2.82 0.005分裂样 1.81 2.24 1.22 1.74 2.80 0.006口吃 0.24 0.43 0.13 0.34 2.69 0.008ADHD 22.26 12.87 18.71 12.94 2.60 0.010强迫 3.24 3.11 2.48 1.69 2.51 0.013躯体化 2.93 3.51 2.01 2.70 2.49 0.014性 0.80 1.29 0.50 1.00 2.44 0.015ADHD-R 5.28 4.46 4.36 4.62 1.99 0.048抽动 3.11 3.54 2.52 3.32 1.67 0.096C.只有多基因群、对照和TS先证者。评分 |-----D2A1-----| |-----D2A2A2-----| t p 总群p*均值 S.D. 均值 S.D.品行 3.65 2.47 2.64 2.10 2.80 0.006狂躁 2.31 2.50 1.40 1.95 2.54 0.012ADHD 25.57 12.16 21.23 14.53 2.12 0.036抽动 4.25 3.88 3.06 3.44 2.06 0.042分裂样 1.91 2.58 1.20 1.53 2.02 0.046强迫 3.40 3.24 2.44 2.80 2.01 0.047违抗 4.31 3.27 3.30 3.17 2.01 0.046 表39在各种精神障碍中DβH Taq B等位基因的普遍性障碍 N 11 12 22 ％1 O.R. freq1 x2*对照 148 21 69 58 60.8 0.37经筛选的对照 51 6 21 24 52.9 0.32TS 352 71 177 104 70.5 1.54 0.45 6.29轻度 35 6 13 16 54.3 0.76 0.36 0.014中度 251 58 123 70 72.1 1.67 0.48 7.24重度 66 7 41 18 72.7 1.72 0.42 4.82ADHD 78 18 39 21 73.1 1.75 0.48 5.46酒精中毒 23 3 13 7 69.6 1.47 0.41 1.77孤僻症 40 6 21 13 67.5 1.34 0.41 1.95抑郁 28 6 8 14 50.0 0.64 0.36 0.06药物滥用 29 2 17 10 65.5 1.22 0.36 1.18赌博者 111 11 56 44 60.4 0.98 0.35 0.78吸烟者 104 29 47 28 73.1 1.75 0.51 6.18合计 913*在筛选的对照(无酒精、药物或烟草滥用/依赖)和所研究障碍间B1等位基因流行率的比较O.R.＝奇比率Bonferroni校正的α＝0.05/8＝0.0065。 表40对多基因群，在对照、TS先证者和亲属中的DβH Taq B1等位基因(11+12基因型)评分 对照无 病例无 病例有 x2*pN ％ N ％ N ％ADHD 34 47.1 163 70.6 116 81.9 15.14 0.00010学习 29 48.3 190 72.6 95 81.1 10.13 0.0014小学 30 46.7 187 72.2 88 79.5 9.48 0.0021ADHD-R 34 47.1 210 74.3 75 78.7 8.52 0.0035违抗 34 47.1 206 74.8 79 77.2 7.21 0.0070抽动 34 47.1 104 75.0 181 75.7 7.17 0.0074躁狂 33 48.5 216 75.0 69 76.8 6.02 0.014酒精 34 47.1 262 76.0 23 69.6 5.92 0.018阅读 18 44.4 116 73.3 169 76.9 5.42 0.019药物滥用 34 47.1 258 76.0 27 70.4 5.33 0.021睡眠 28 53.6 202 74.3 83 78.3 4.63 0.031口吃 33 48.5 241 76.3 41 73.2 4.56 0.032强迫 32 46.9 216 75.9 69 73.9 4.33 0.037分裂样 32 50.0 194 76.8 88 73.9 2.94 0.086评分 对照无 病例无 病例有 x2*pN ％ N ％ N ％躯体化 19 47.4 154 76.0 78 75.6 2.62 0.105惊恐发作 28 50.0 178 76.4 100 74.0 2.43 0.119重性抑郁 25 52.0 176 75.6 109 75.2 2.40 0.121品行 26 50.0 161 77.0 124 73.4 1.61 0.203性 27 55.6 204 74.5 88 72.7 1.12 0.288恐惧症 23 56.5 182 76.4 103 73.8 0.70 0.401广泛焦虑 26 53.8 226 75.2 67 70.1 0.62 0.430 表41DβH Taq B1携带者和B2B2携带者间平均行为评分的比较评分 |-----B1-----| |-----B2B2-----| t p均值 S.D. 均值 S.D.A.多基因群、对照和TS先证者。(N＝176，B1＝124，B2B2＝52)ADHD 24.48 13.57 19.07 12.72 2.37 0.020小学 3.26 1.96 2.55 1.88 2.22 0.029B.总群，对照和TS先证者(N＝292，B1＝207，B2B2＝85)违抗 4.16 3.19 3.08 3.12 2.68 0.008睡眠 0.63 1.03 0.36 0.70 2.60 0.010ADHD 25.17 13.73 20.86 14.66 2.31 0.023阅读 2.14 2.04 1.57 2.09 2.11 0.037 表42不同患者组中DAT1 40bp重复多态性基因型的流行率以及等位基因的频率受试者 N 6/6 8/9 9/9 8/10 9/10 10/10 9/11 10/11 11/12 ％10/10 O.R. f9 f10 x2*p x2**p对照 91 1 0 12 0 40 34 1 3 0 37.4 0.36 0.61Tourette综合症 241 2 1 15 0 92 126 0 4 1 52.3 1.84 0.25 0.72 5.89 0.015 7.93 0.0048轻度 15 0 0 2 0 5 8 0 0 0 55.3 1.92 0.25 0.74 1.37 N.S 1.75 0.184中度 132 0 1 5 0 56 66 0 3 1 50.0 1.92 0.30 0.70 3.47 0.062 4.27 0.039重度 94 2 0 8 0 31 52 0 1 0 53.3 2.08 0.25 0.72 5.99 0.014 5.15 0.023TS亲属 103 0 0 7 0 37 57 0 2 0 55.3 2.08 0.25 0.72 6.27 0.012 5.43 0.019孤僻症 36 0 0 2 1 12 21 0 0 0 58.3 2.35 0.22 0.75 4.62 0.032 4.63 0.031合计 471O.R.＝奇比率*在对照和所研究受试者间10/10基因型流行率比较的卡方***在对照和所研究受试者间10等位基因频率比较的卡方Bonferron；校正的α＝0.05/3＝0.017。 表43多巴胺转运蛋白10/10基因型同各种共发病行为的关联(1＝10/10基因型)评分 对照无 病例无 病例有 x2*p*群的p*N ％1 N ％1 N ％1躯体化 19 21.1 154 46.8 78 60.3 9.51 0.0020 0.0009酒精 34 35.3 262 50.4 23 69.6 6.37 0.011 0.0027ADHD-R 34 35.3 210 49.5 75 58.7 5.02 0.024 0.004重性抑郁 25 24.0 176 50.0 109 55.0 5.39 0.020 0.006惊恐 28 28.6 178 50.0 100 55.0 4.53 0.033 0.010强迫 32 31.3 216 50.5 69 56.5 4.59 0.032 0.010广泛焦虑 26 26.9 226 50.9 67 56.7 4.94 0.026 0.011躁狂 33 33.3 216 50.5 69 56.5 4.07 0.044 0.012违抗 34 35.3 206 50.5 79 55.7 3.32 0.068 N.S.性 27 33.3 204 50.0 88 55.7 3.41 0.064 0.013阅读 18 38.9 116 49.1 169 53.8 1.63 0.201 0.043ADHD 34 35.3 163 51.5 116 53.4 2.29 0.129 0.049睡眠 28 35.7 202 50.5 83 55.4 2.66 0.102 N.S.口吃 33 33.3 241 52.3 41 51.2 1.96 0.164 N.S.评分 对照无 病例无 病例有 x2*p*群的p*N ％1 N ％1 N ％1药物滥用 34 35.3 258 51.9 27 51.9 1.99 0.158 N.S.学习 29 37.9 190 51.1 95 53.7 1.56 0.210 N.S.抽动 34 35.3 104 55.8 181 49.7 0.49 0.482 N.S.分裂样 32 37.5 194 52.6 88 51.1 0.78 0.370 N.S.小学 30 36.7 187 52.4 88 47.7 0.19 0.659 N.S.品行 25 34.6 161 54.0 124 49.2 0.21 0.644 N.S.恐惧症 23 21.7 182 54.9 103 46.6 0.40 0.525 N.S. *Mantel-Haenszel线性卡方或基于Mantel-Haenszel线性卡方的p值。 表44对照和病例中平均行为评分的比较评分 |-----10/10-----| |-----10/x x/x-----| t p均值 S.D. 均值 S.D.A.总群，对照、TS先证者和他们的亲属(N＝357，10/10＝182，10/x，r/x＝175)躯体化 2.69 3.30 1.94 2.68 2.11 0.036重性抑郁 3.87 3.05 3.20 2.98 2.11 0.036B.多基因群，只有对照和TS先证者(N＝176，10/10＝85，10/x，x/x＝91)广泛焦虑 0.33 0.47 0.16 0.37 2.55 0.012重性抑郁 4.00 3.04 2.87 2.83 2.53 0.012ADHD-R 6.60 4.75 4.91 4.45 2.43 0.016ADHD 25.44 13.94 20.42 13.28 2.43 0.016酒精 0.68 2.46 0.09 0.70 2.11 0.037表45对照和TS先证者行为评分均值的比较行为 组 均值 S.D. F比 p**ADHD 1 30.04 10.972 24.74 13.533 20.42*13.774 14.07*# 13.11 14.77 0.0002口吃 1 1.17 0.492 1.06 0.553 0.94 0.624 0.46*# ^0.64 14.61 0.0002ADHD-R 1 7.75 4.182 6.43 4.74行为 组 均值 S.D. F比 p**3 4.82*4.534 3.53*4.12 9.87 0.0020违抗 1 5.04 3.052 3.91 3.203 3.38 3.254 1.93*2.84 9.56 0.0023抽动 1 4.95 4.412 3.71 3.303 3.28 3.654 1.40*2.97 9.56 0.0023品行 1 4.08 2.512 3.05 2.353 2.87 2.234 1.93*1.22 8.61 0.0038强迫 1 3.37 3.512 3.02 3.033 2.75 2.914 1.13 1.99 5.48 0.020躁狂 1 2.29 2.522 2.11 2.223 1.40 2.124 0.87 1.59 5.21 0.024酒精 1 1.21 3.452 0.35 1.703 0.20 1.074 0.00 0.00 4.50 0.035广泛焦虑 1 0.33 0.482 0.29 0.463 0.20 0.404 0.07 0.25 4.39 0.038行为 组 均值 S.D. F比 p**惊恐 1 3.45 2.392 3.37 2.443 2.97 2.154 2.13 1.12 3.79 0.053分裂样 1 1.91 2.882 1.66 2.243 1.26 1.454 0.78 1.42 3.41 0.067睡眠 1 0.83 1.042 0.64 0.863 0.44 0.894 0.46 0.74 2.10 0.149性 1 1.12 1.962 0.62 1.133 0.58 1.164 0.53 0.99 2.01 0.158药物 1 0.87 2.292 0.34 1.323 0.34 1.324 0.20 0.77 1.92 0.168重性抑郁 1 3.83 3.072 2.91 2.103 2.94 2.794 2.80 2.93 1.88 0.173学习 1 0.87 0.992 0.80 0.903 0.78 1.034 0.47 0.74 1.67 0.197惊恐 1 2.83 2.822 2.67 2.81行为 组 均值 S.D. F比 p**3 2.41 2.794 2.00 1.96 1.00 0.318小学 1 3.33 2.002 3.09 1.973 2.97 2.024 2.80 1.74 0.71 0.399躯体化 1 3.09 3.022 2.68 3.743 1.69 2.144 2.69 4.02 0.43 .525阅读 1 2.00 1.882 1.98 1.983 2.10 2.234 1.86 2.41 0.02 .893组1＝D2A1+，DβHB1+，DAT1 10/10+n＝24组2＝3个中的2个+n为67组3＝3个中的1个+n＝70组4＝D2A1-，DβHB1-，DAT1 10/10-n＝15，合计176*通过Tukey检验于α＝0.05处同组1显著不同。 #通过Tukey检验于α＝0.05处同组2显著不同。 ^通过Tukey检验于α＝0.05处同组3显著不同。 _利用ANOVA对4个基因组的线性对比的F-比**基于F-检验的p值表46通过是否DRD2、DβH和DAT1等位基因的所有、一些或无一存在比照一些行为的平均行为评分基因组合 N 均值 S.D. ADHD评分D2+DβH+DAT1+ 24 30.04 10.97D2+DβH+DAT1- 22 25.04 12.72D2-DβH+DAT1+ 34 25.91 14.83D2+DβH-DAT1+ 11 20.54 10.75D2+DβH-DAT1- 10 21.50 12.90D2-DβH+DAT1- 43 19.96 13.20D2-DβH-DAT1+ 16 20.94 16.38D2-DβH-DAT1- 14 14.07 12.10抽动评分D2+DβH+DAT1+ 24 4.95 4.40D2+DβH+DAT1- 22 4.00 3.18D2-DβH+DAT1+ 34 3.91 3.59D2+DβH-DAT1+ 11 2.54 2.54D2+DβH-DAT1- 10 5.00 4.96D2-DβH+DAT1- 44 2.84 3.31D2-DβH-DAT1+ 16 3.43 3.52D2-DβH-DAT1- 15 1.40 2.97表47多元线性回归分析以及由DRD2、DβH和DAT1解释的变异的比例；仅有对照和TS先证者行为评分 DRD21 DβH DAT1 合计r r2r r2r r2％*品行 0.217# 0.047 0.114 0.013 0.030 0.0009 6.0躁狂 0.197# 0.039 0.055 0.0003 0.084 0.0007 5.0行为评分 DRD21 DβH DAT1 合计r r2r r2r r2％*分裂样 0.169# 0.028 0.046 0.0021 0.048 0.0023 3.3小学 0.165# 0.026 -0.025 0.0006 0.0004 0.0000 2.9抽动 0.155# 0.024 0.109 0.0118 0.108 0.0116 4.7OCD 0.153# 0.023 0.040 0.0016 0.066 0.0043 3.0ODD 0.149# 0.022 0.136 0.0184 0.108 0.0117 5.2恐怖症 0.149# 0.022 -0.041 0.0016 0.016 0.0002 2.5性 0.142 0.020 -0.023 0.0005 0.061 0.003 2.6广泛焦虑 0.141 0.020 -0.053 0.0028 0.180# 0.032 5.9ADHD 0.125 0.016 0.166 0.0275 0.186 0.0346 7.6惊恐 0.123 0.015 0.004 0.0000 0.113 0.0128 3.0药物 0.104 0.011 0.047 0.0022 0.024 0.0006 1.4口吃 0.086 0.007 -0.005 0.0000 0.067 0.0045 1.3躯体化 0.080 0.006 0.035 0.0012 0.075 0.0056 1.4酒精 0.073 0.005 0.050 0.0025 0.160# 0.025 3.4抑郁 0.070 0.005 -0.023 0.005 0.183# 0.033 4.1睡眠 0.041 0.002 0.088 0.0077 0.119 0.014 2.3学习 -0.013 0.0002 0.125 0.0156 0.040 0.016 1.7阅读 -0.063 0.004 0.127 0.0161 -0.049 0.002 2.4合计 0.32 0.11 0.20*基于来自所有三个基因的多个r的r2。#p＜0.05 实施例7在成瘾行为中的多巴胺D1受体基因方法所检测的三个组为Tourette综合征(TS)组、戒烟组以及病理性赌博组。所有三个组中的受试者限于非西班牙白种人。 TS组。这组包括无酒精或药物滥用的对照、其中大部分被多种相关的行为障碍严重影响的TS先证者(Comings，1995b；Comings，1990a)以及TS先证者的亲属。所有均符合TS的DSM-IV标准，而且对所有人均进行个人会见。TS组的对照由TS先证者的养父母和继父母、具有非精神障碍的受试者以及职业的和非职业的医院工作人员。TS受试者和对照均在他处被详细描述(Comings等，1996f；Comings，1995b；Comings，1994b；Comings，1994c；Comings，1995a)。 行为评分。每个对照和TS先证者或亲属均要求填写一个基于诊断性会面程序表(Robins等，1981)或一系列障碍的DSM-III-R标准(美国精神病联合会，1987)的调查表。将症状分为23个不同的数量变量，评价同注意缺陷多动障碍(ADHD)(2分)、酒精、药物、强迫行为、学习障碍、阅读问题、赌博、燥狂症状、恐怖症、惊恐发作、违抗行为、品行障碍、小学中的学习问题、吸烟、性行为、分裂样、躯体化、抑郁、睡眠障碍、广泛焦虑、口吃和抽动相关症状的数目。用于这些行为评分的问题已经在他处被详细描述(Comings，1995a；Comings，1994a；Comings，1994b；Comings，1995b；Comings，1996a；Robins等，1981；Comings，1995c)。检测共发病行为的原则同在实施例2中所描述的相同。 尤其同本研究相关的一些症状涉及烟草、酒精和药物滥用、强迫进食以及赌博。酒精评分由对于酒精滥用的MAST测试的8个问题的“不”或“是”回答的总和所组成(Comings，1994b；Comings，1990a)。药物评分基于对9个关于药物滥用/依赖的诊断性会面程序表(Robins等，1981；Comings，1994c)的问题的“不”或“是”的回答。吸烟变量基于如下问题，“你曾每天吸香烟、雪茄或烟斗超过一个月或更多吗？”其中“是”评分为1而“否”评分为0。对于购物变量的评分基于对下列问题的回答的总和：“你曾买过多于你真正需要买来满足你需要的东西吗？你曾由于买超出你能负担的东西而陷入经济困难吗？你曾加起在你所有信用卡上的总余额而大于你每月净收入吗？你曾购物来填补一种空虚感吗？你曾购物来获得一种快乐的感觉吗？你曾拿东西而未付款吗？”。“无”的回答评分为0，“偶尔”的回答为1，而“经常”的回答为2。赌博评分来自同在前面如“赌博评分”所描述的赌博严重性相关的九个“是”或“不”问题(Comings等，1996e)。强迫进食的评价是基于对问题“你曾认为你自己是一个强迫进食者吗？”的“是”或“不”的回答。 戒烟组。第二组由到戒烟诊所的个体组成。这些受试者以及他们自身独立的对照群在以前的一个DRD2基因在吸烟中作用的研究中已经被更详细地描述(Comings等，1996a)。此处对于吸烟评价的变量为每天所吸香烟的平均包数。筛选对照来排除包括酒精、烟草和其它药物的所有类型的物质滥用。 病理性赌博。第三组由来自以前的一个关于DRD2基因在病理性赌博中作用的研究的病理性赌博者组成。患者确证和评价的细节已经在他处被详细描述(Comings等，1996e)。 基因分型。为检测DRD1基因，发明者利用由在5’UTR中的A到G改变组成的、通过如前所述的PCRTM步骤检测的DdeI多态性(Cichon等，1994a)。对于DRD2基因的标志是TaqI A1/A2多态性(Grandy等，1989)。 统计学分析。在TS组中，利用SPSS统计学软件包(SPSS公司，芝加哥，伊利诺尹州)的ANOVA统计学程序对具有不同基因型的受试者的行为评分均值进行比较。当检测两个组以上时，用Turkey分析测试在任何各组间显著的个体差异。在预期在不同基因型间不同评分的均值中有渐进性增加的情况下，通过在SPSS统计学软件包中设置子命令多项式＝1来进行线性ANOVA。基于ANOVA分析的结果，进行卡方分析来比较在下面的三个不同组中同最高平均行为评分相关的基因型的频率。第一个由没有被测行为的对照组成。由于对照也需要填写一个或多个调查表，所以确定是否在对照中存在或缺少特定行为是可能的。对于TS组，如在前面的研究中所描述的(Comings，1995b)，在对照和受试者中某种行为的存在或缺少是基于两分断点的。没有给定行为的对照被称为“对照无”。相同的两分断点使得TS先证者和他们的亲属被分成两组，没有被测的特定行为的那些和具有那种行为的那些。这些组被称为“病例无”和“病例有”，并形成第二和第三组。已有的假设为如果在一给定基因型和所研究行为间有显著的相关性，那么该基因型的频率在这三组中应有一个渐进性的增加。“病例无”和“病例有”组的利用控制了那种基因型的频率在TS受试者中可能由于与所检查行为以外的某一行为相关而增加的可能性。由于发明者推测在这三组中基因型的频率可能有渐进性的增加，所以使用了线性卡方检验(在SPSS统计学软件包中的Mantel-Haenszel检验)。为确定结果在三组中部分符合线性的增加，发明者还要求被测基因型的频率在“病例有”中比在“病例无”组中至少高20％。如在TS中的多巴胺能基因研究中一样(Comings等，1996f)，发现回归分析在确定由一特定基因解释的不同行为评分的变异百分比中是有帮助的。这提供了r，而r2提供由那个基因解释的一给定数量性状的变异分数。 多元分析的校正。由于在TS组中检测了23个不同的行为，所以在显著性的水平中进行调整是需要的。虽然0.05的α值可能是太自由了，但0.05/23或0.002的α值被认为太保守。因此选择一个中间的0.05/10或0.005的α值。由于利用先前假设的戒烟组的研究基于在TS组中的结果，并且要检查单一变量：每天抽烟的包数，所以利用了0.05的α值。最后，由于病理性赌博者的检测只涉及基因型频率的比较，所以利用了0.05的α值。结果TS组。对于对照(n＝61)，DdeI多态性的等位基因频率对1等位基因为0.34，而对于2等位基因为0.66。对于TS先证者(n＝227)，等位基因的频率对1等位基因为0.37，而对于2等位基因为0.63。这些没有显著性差别，x2＝0.43，d.f.＝1，p＝0.51。对于对照和TS组，DdeI多态性的基因型分布示于表48-A中。11基因型存在于4.9％的对照以及17.5％的TS组中，x2＝3.75，d.f.＝1，p＝0.053。在携带11或者22基因型的那些中百分比的差别为在对照中的41.3％以及TS先证者中的57.3％。这是显著的，x2＝5.08，d.f.＝1，p＝0.024。 在前面DRD2基因的TaqI A1/A2等位基因的研究中，已经观察到很大范围的定量评分对12杂合子表现出最高的评分，对22纯合子为中等的评分，而对11纯合子则为最低评分。基于这些研究，检测在三个受试者组中12杂合子的百分比。这些对于TS组的结果示于表48-B中。73个对照者中，19.2％为12杂合子，而345个TS先证者中则35.3％为杂合子，x2＝7.19，d.f.＝1，p＝0.073。 通过检测DRD1 DdeI 11或22等位基因纯合的以及DRD2 TaqI A1/A2等位基因杂合的受试者的百分比来测试在DRD1和DRD2基因间的相互作用。各自的数值为对照17.9％而TS先证者为33.2％，x2＝5.71，d.f.＝1，p＝0.016。 通过ANOVA检测在DdeI基因型和23个数量性状变量间的相关性(表49)。虽然在α＝0.005处无一是显著的，但对于酒精评分的p值为0.0096。在p值＜0.20的七个评分中，五个同成瘾行为—酒精滥用、吸烟、强迫进食、赌博和购物相关。那些具有11基因型的具有最高评分。例如，对于酒精滥用变量，那些具有11基因型的具有1.30的平均评分，与之相比，那些具有12基因型的为0.23，那些具有22基因型的为0.42。在总共23个变量中，那些携带有11基因型的除了学习障碍和躯体化外所有的变量具有最高的均值。 以这些结果为基础，发明者然后检测了在“对照无”、“病例无”和“病例有”的三个组间对于不同行为11基因型的频率是否存在渐进性增加(表50)。有三种行为在α≥0.005处线性增加是显著的，而且其中11基因型的频率在“病例有”中比在“病例无”组中高至少20％。依照显著性的顺序，这些是赌博、酒精滥用和强迫购物。例如，对于赌博评分，11基因型的流行率由无赌博问题的对照的4.6％增加至无赌博问题的病例的15.5％，至有赌博问题的病例的33.3％(p＝0.00095)。当用α≥0.005时，三个额外的变量—药物滥用、强迫进食和吸烟均同成瘾行为相关。 对于两种行为—赌博和酒精滥用，单变量回归分析(表51-A)于p≥0.005处是显著的。α≥0.05，另外四个变量为强迫进食、吸烟、抽动和阅读。其次最显著的行为是购物。基于对DdeI多态性的r2，DRD1基因贡献赌博评分的3.6％，酒精评分的2.8％，强迫进食评分的1.9％以及吸烟评分的1.6％。 通过多变量回归分析检测DRD1和DRD2基因潜在的相互作用之前，发明者基于TaqI A1/A2多态性，利用单变量回归分析首先检测了DRD2基因的效应。携带有DRD2 11和22纯合子的受试者评分为1，而12杂合子评分为2。于α＝≥0.005处，DRD2基因同违抗行为、品行障碍、强迫进食、吸烟、赌博和ADHD显著相关(表51-B)。于α≥0.05处，额外的变量为燥狂、口吃、强迫以及分裂样行为。基于r2值，Taq A1等位基因的杂合性负责违抗评分变异的4.2％，品行障碍评分变异的3.8％，进食评分的4.1％，吸烟评分的3.3％以及赌博评分的2.9％。 多变量回归分析表明DRD1和DRD2基因对于赌博、强迫进食和吸烟r值均是显著的(表51-C)。对于这些中的每个，结果是累加性的，当联合时，DRD1和DRD2基因负责这些评分变异的百分之5.9到4.8。将酒精评分包括在内以表明DRD1基因的11基因型具有显著的效应，而在该组中DRD2 A1等位基因的效应是不显著的。 利用单变量回归分析还检测了DRD1和DRD2基因的累加性效应，其中DRD1 DdeI 11和DRD2 Taq A12基因型的被评分为3，具有其中一种的那些评分为2，而两种基因型均没有的评分为1(表51D)。那些在α≥0.005处显著的变量依次为赌博、吸烟、强制进食、违抗、ADHD、品行障碍、强迫、燥狂和酒精滥用。 还利用对DRD1 DdeI 12或22和DRD2 TaqI 11或22(均无)；DdeI11或DRD2 TaqI 12(其一)；或DRD1 Dde 11和DRD2 Taq12(均有)三组的线性ANOVA对DRD1和DRD2基因的累加效应进行了检测。于α≥0.005处，对于强制进食、吸烟、违抗、ADHD、品行障碍、强迫、燥狂以及酒精行为变量，其表现出平均评分从均无、到其一、到均有组的显著的渐进性增加。 还利用对DRD1 Dde 11基因型、或DRD2 Taq A12基因型或者两者均有的存在频率的线性卡方来检测DRD1和DRD2基因的累加效应(表53)。那些在α≥0.005处显著而且对于“病例有”组的均值比“病例无”组的高至少20％的变量依次为燥狂、酒精、强迫、品行障碍、分裂样、性、强制进食和重性抑郁发作。对于变量酒精滥用、强制进食和燥狂的结果。 由于在携带DRD1 DdeI11或22基因型的受试者的百分比方面对照和TS先证者间存在显著的差别，所以发明者还检测了“对照无”、“病例无”和“病例有”三组携带11或22基因型受试者的百分比。于α≥0.05处下面的变量是显著的，并且均值“病例有”组比对“病例无”组高至少20％—赌博、酒精滥用以及小学问题。 戒烟组。在61个吸烟的对照中DdeI 1等位基因的频率为0.35，而在177个吸烟者中其为0.34(表48A)。在对照中，4.9％携带11基因型，对应吸烟者为17.5％，x2＝5.88，d.f.＝1，p＝0.015。在对照中，39.3％携带11或22等位基因，对应于66.1％的吸烟者，x2＝13.45，d.f.＝1，p＝0.0002。 对于DRD2基因，在对照中26.2％携带12基因型，对应于42.8％的吸烟者，x2＝5.69，d.f.＝1，p＝0.017。对于对照，24.1％的同时携带DRD1 11或22基因型和DRD2 12基因型，对应于45.5％的吸烟者，x2＝8.25，d.f.＝1，p＝0.0041。 在戒烟组中所检测的变量为每日所吸包数。由于所有的对照均完成了行为调查表，其包括在TS组中所用的关于吸烟的相同问题，因此排除那些曾经吸过香烟、雪茄或烟斗等的以及那些具有药物或酒精滥用的对照是可能的。这些个体组成每天0包组。在戒烟组中的受试者被分成那些每天吸1到1 1/2和2到2 1/2包的。(由于仅有那些每天至少吸1包的允许参与研究，所以没有每天吸低于1包的受试者。)对于DRD1基因的结果示于表54中。携带11基因型的受试者百分比在这三组间由4.9％增加到16.4％到18.0％，x2＝5.14，p＝0.023。携带或者11或者22基因型的受试者的百分比在这三组间由39.3％增至61.8％到68.0％，x2＝12.87，p＝0.00033。DRD2 TaqI A1/A2多态性杂合的受试者的百分比在这三组间由26.2％增至34.5％到46.3％，x2＝7.99，p＝0.0047。对于同时有纯合的DRD1 11或22和杂合的DRD2 TaqIA1/A2等位基因的受试者的百分比在这三组间由24.1％增至34.5％到50.4％，x2＝23.48，p＝0.0001。 利用多变量线性回归分析还检测了DRD1和DRD2基因对于吸烟的相互作用(表55)。这表明，DRD1和DRD2基因，如由这些多态性所标志的，每个贡献均等。它们的联合负责每天包数变量变异的百分之10.5。 病理性赌博。同TS和戒烟组不同，病理性赌博组没有其自己的对照组。因此，为了比较的目的，将TS和戒烟对照结合起来形成总的对照组，而且将其用于病理性赌博者。对于赌博者，14.1％为DRD1 DdeI1等位基因纯合的，x2＝5.39，p＝0.020，而55.8％为11或22基因型纯合的，x2＝6.75，p＝0.009。对于DRD2基因，45.7％的赌博者携带TaqI12组，x2＝1 8.61，p＜0.0001。赌博者中23.3％为携带DRD1 11或22基因型和DRD2 TaqI 12基因型的。 尽管许多研究提示在许多精神障碍中多巴胺D1和D2受体间的相互作用，但仍缺少检测在DRD1基因的遗传学变体和行为之间的潜在相关性或者DRD1和DRD2基因的遗传学变体间的潜在相关性的研究。发明者对DRD1基因的变体或DRD1和DRD2基因的累加效应可能在这些行为中也发挥作用这种可能性感兴趣。发明者选择DRD1 DdeI多态性(Cichon等，1994a)，因为其为一种基于PCRTM的测试，而且该微效等位基因在一般人群中是普遍的。由于前面DRD2基因的研究已经表明一个以上基因相互作用检测的价值，检测了在单独DRD1基因遗传学变体和DRD2基因的TaqI A多态性的潜在累加效应之间的相关性。为了将人种的效应最小化，仅研究了非西班牙白种人。为将偶然性的效应最小化，发明者试图通过检测三个不同组的受试者，其中两个具有它们自己的对照组，来交叉重复任何发现。 等位基因和基因型频率。等位基因和基因型频率的结果示于表48A中。对于DRD1变体，DdeI等位基因的频率在对照和受试者中几乎是相同的。对于TS先证者、吸烟者和赌博者三组，1等位基因的频率分别为0.37、0.34和0.35。对于TS和吸烟者对照组，频率分别为0.34和0.35。许多在精神障碍关联性研究的报道将他们自己限制于在对照和具有一特定障碍的受试者间的基因频率的比较。一个相似的限制将会表明DRD1基因在这些障碍的任何一种中均不发挥作用。然而，由于基因型的分布可能是不同的，所以尽管有基因频率的相似性，但发明者仍检测了基因型频率。研究表明在吸烟者和赌博者中11基因型的流行率显著增加，而且在TS先证者中为界值显著性(p＝0.053)增加。对于所有四组，每个等位基因的纯合性存在显著的增加，TS先证者、吸烟者、赌博者和总体分别具有0.024、0.0002、0.009和0.0001的p值。如果利用＜0.5/4或0.0125的Bonferroni校正的α值，后三组仍是显著的。 DRD2基因的Taq A1等位基因的等位基因和基因型的频率示于表48B中。基于这些结果，在本研究中发明者检测了A1/A2的百分比。在TS先证者、吸烟者、赌博者和总体的受试者组中，结果分别为百分之35.3、42.8、45.7和40.0。对于TS、吸烟者和总体对照，结果分别为百分之19.2、26.2和22.4。在所有四组中，A1/A2杂合子的流行率在受试者中显著高于对照中的，具有0.0073、0.017、＜0.0001和0.0001的p值。在四组的三个中，按照Bonferroni校正的α≥0.05/4或0.0125，结果仍然显著。 上面的结果表明同DRD1等位基因的杂合性的显著性负相关，以及同DRD2等位基因杂合性的显著性正相关。为检测DRD1和DRD2基因的潜在的相互作用，发明者将病例分为DRD1等位基因非杂合性的(即为11或22纯合子)和DRD2等位基因杂合性的那些。由于对两种基因均优化了这些基因型，这一组被称为“均有”。第二组，称为“其一”，由那些或者DRD1 11或22纯合子或者DRD2杂合子的那些组成。第三组，称为“均无”，为DRD1等位基因杂合的，而且对于DRD2等位基因11或22纯合子。这些结果示于表48-C中。在“均有”组中的受试者的百分比对于TS先证者(33.2)显著高于TS对照(17.9)，p＝0.016；对于吸烟者(45.5)显著高于吸烟者对照(24.1)，p＝0.0041，而且对于总体受试者(34.3)显著高于总体对照(20.8)，p＝0.0033。在“均有”组中受试者的百分比对于赌博者(23.3)没有显著的增加。 TS组。由于对TS组进行了DRD1基因在行为中潜在作用的初步的探索性研究，而且由于研究了一个以上的行为，所以将更详细地展示这些结果。发明者首先利用ANOVA在不同DRD1基因型中比较了23个不同行为组的均值，所给出的低于0.2的p值的七个行为中，五个为成瘾行为—酒精滥用、吸烟、强制进食、赌博和购物。虽然酒精滥用变量为最显著(p＝0.0096)，但在α≥0.05处无一是显著的(见方法)。在表49中所示的所有的数量性状以及其余16个变量中的14个对于11纯合子具有最高的均值。虽然在22纯合子中的平均评分通常高于12杂合子，但对于11和22杂合子，评分的相对大小表明在受试者的TS组中11等位基因的纯合性表现出同升高的评分的相关性高于22等位基因的纯合性。 基于ANOVA的结果，发明者检测了在“对照无”、“病例无”和“病例有”组间携带11基因型的受试者的百分比(表50)。于α＜0.005处，三种行为，赌博、酒精滥用和购物均是显著的。对于赌博，这个百分比从百分之4.5增加至15.2到35.2(p＝0.00095)。所有于α+＜0.05显著的六个性状均为成瘾行为。 利用单变量回归分析获得了相似的结果，其中那些DRD1 DdeI 1等位基因纯合的评分为2，而那些具有12或22基因型的评分为1。赌博和酒精滥用变量在α＜0.005处是显著的(表51)。对于DRD2基因的单变量回归分析，其中A1/A2杂合子评分为2，而纯合子为1，七个不同的性状于α＜0.005处是显著的(表51B)。这些包括三个成瘾行为，强制进食、赌博和吸烟。 通过多变量回归分析，仅仅对于三个性状DRD1和DRD2基因均给出显著结果，即赌博、强制进食和吸烟(表51C)。利用单变量回归分析获得了相同的结果，其中在“均有”组的那些评分为3，在“其一”组的那些为2，而在“均无”组的那些为1(表51D)。此处，对于赌博、吸烟和强制进食的p值为＜0.0001。 为评价评分的大小，发明者通过ANOVA对在“均无”、“其一”或“均有”组中的那些检测了均值(表52)。此处，包括强制进食、吸烟和酒精滥用的八个性状在α＜0.005处是显著的。在“均有”组中均值始终最高。最后的检验是在“对照无”、“病例无”和“病例有”组间DRD1 11纯合子、或者DRD1 A1/A2杂合子、或者皆有的受试者百分比的检测(表53)。酒精滥用和强制进食是在八个性状中于α≥0.05处是显著的。对于酒精滥用，在三组间百分比从23.9增至46.9到70.6，p＝0.00005。 联合的结果同DRD1基因在许多成瘾和其它行为中的作用以及在DRD1和DRD2基因处遗传学变体的累加效应是一致的。虽然在TS组中，对于DRD1和2等位基因的纯合性均给出高于12杂合性的评分，但对于1等位基因的纯合性给出同许多性状的最强的相关性。 戒烟组。为确定在另一完全不同的受试者组中发明者是否能够重复这些发现中的任何一个，发明者利用来自DRD2基因在吸烟者中作用的前期研究的个体(Comings等，1996a)。在该组中的所有受试者每天吸至少一包香烟，而且曾不成功地试图停止吸烟。如上面所讨论的，当作为一组时，吸烟者表现出DRD1 DdeI 11基因型和11或22基因型流行率的显著增加。为更详细探讨在DRD1基因和吸烟间的相关性，发明者检测了每天所吸包数这一数量性状(表54和55)。在每天吸0包的对照和每天吸1-1 1/2包的吸烟者以及每天吸2至2 1/2包的吸烟者三组间，具有DRD1 11基因型的受试者的百分比存在百分之4.9到16.4到18.0的渐进性的显著增加，p＝0.023。同TS组相反，对于吸烟者，11或22纯合子组给出更显著的结果。因此，纯合受试者的百分比从每天0包的对照的39.3增加到每天吸1-1 1/2包的吸烟者的61.8，到每天吸2-2 1/2包的吸烟者的68.0，p＝0.00033。DRD2 A1/A2等位基因杂合的受试者的百分比在三组间从百分之26.2增至34.5至46.3，p＝0.047。如同TS组，DRD1和DRD2基因的效应是累加的。因此，在“均有”组中受试者的百分比在这三组间由24.1增至34.5至50.4，p＝0.0001。为进一步检测DRD1和DRD2基因在吸烟者中的累加效应，发明者利用多变量回归分析检测了每天包数变量。两基因存在相当的效应，而联合它们则负责每天包数变量的变异的百分之10.5。 赌博者。如上面所讨论的，与总体对照相比，在赌博者中DRD1 11纯合子、或者11或22纯合子的受试者的百分比显著增加，而且DRD2A1/A2杂合子的受试者的百分比也显著增加。同TS和吸烟者组不同，这些效应在赌博者中不是累加性的，因为在“均有”组中受试者的百分比没有比总体对照增高。 杂合性。发明者对许多不同受试者组中的多种行为平均评分的观察表明，DRD1和DRD2基因的遗传学变体可能也表现出杂种优势。两个基因中效应是对立的，这一点很有意义。因此，DRD2基因TaqI A1/A2杂合子对大多数变量具有更多异常的评分，而DRD1基因杂合子具有更多正常的评分。发明者推测两种多态性都是同影响DRD1和DRD2基因功能的其它突变连锁不平衡的(Comings等，1991)。这种明显的杂合优点/缺点的作用机制是未知的。是否两个基因中的对立效应是由于它们对环AMP具有对立的效应的事实，或简单地因为通过连锁不平衡而同它们相关的其它突变类型中的偶然变异也是未知的。本结果表明在成瘾行为中DRD1加DRD2基因的多基因遗传的作用。虽然多基因遗传的重要部分是基因联合的关键作用，但该研究还证实等位基因联合的关键作用。 受试者确证的重要性。能够在三个独立的受试者群间证实DRD1基因的作用，以及在两个独立的受试者群中DRD1和DRD2基因累加效应的重要性吗？发明者对因首次诊断为酒精中毒或药物成瘾而确证的受试者的前期研究支持DRD1基因的作用，以及DRD1和DRD2基因在一些而并非所有的物质滥用中的累加效应。这对于多基因遗传并不是出人预料的。由于DRD1和DRD2基因各自负责一给定性状不到百分之6的变异，而且联合后负责一性状不到百分之11的变异，所以这些中度效应可以很容易地被受试者确证中的差异所超过。例如，很可能许多受体的异常参与多种类型的物质滥用，包括多巴胺、5-羟色胺、大麻酯、一氧化氮、烟碱蝇蕈碱、GABA以及其它。Tourette综合征的诊断依赖运动抽动的存在，而多巴胺在肌肉运动调节中发挥重要的作用。因此，可以预料在TS中的共发的物质滥用或其它成瘾行为应该比在基于任何类型的物质滥用而确证的受试者组中更可能涉及多巴胺受体的遗传学缺陷。 在症状水平而非诊断水平测试的重要性。这些以及以前的研究(Comings和Comings，1987b)表明单独两分诊断分类可能太广，而导致在相关研究中力度显著降低。例如，TS受试者可能在从具有略微温和的抽动且无其它问题的个体到具有破坏性联合抽动、口吃、ADHD、强迫、品行、焦虑、情绪、物质滥用和学习障碍的个体之间变化。如果一给定基因对TS有作用但特别同口吃相关，而且口吃在仅仅20％的病例中存在，则在对照和所有TS先证者的比较中那个基因的作用可能被忽略，但在无口吃的对照和口吃TS先证者的比较中可能被检测到。这个概念在本研究中特别重要。在TS组中，同DRD1基因显著相关的行为变量是涉及成瘾行为的那些。这不可能是一个偶然发现，因为动物研究也表明DRD1基因在成瘾性状中的作用，而且因为在三个不同的受试者组中重复了该发现。 关于本研究有几个说明。由于DRD1 DdeI多态性是一个中性碱基改变，所以发明者推测其同在影响多巴胺D1受体密度的DRD1位点或附近区域中的突变连锁不平衡。关联研究的一个常见的担心是结果可能是由于隐藏的人种或种族分层而不是基因本身的可能性。虽然发明者试图通过局限于对非西班牙白种人的研究并通过在三个独立的受试者组中重复该发现来将其最小化，但其仍是一个可能的解释。另一个潜在的问题，特别是在TS组中，是23个不同数量性状的检测。通过利用一个非常保守的≥0.05的α来对其进行补偿。当检测DRD1和DRD2基因的联合效应时，许多p值不到0.001，低于0.05/23或0.0022的完全Bonferroni校正。此外，围绕成瘾行为(酒精中毒、强制进食、赌博、购物和吸烟)显著性结果的分群提供了一些内部一致性。最后一个说明是DRD1 11等位基因的纯合性在TS组的表中强调了，而11或22纯合性在吸烟组的表中强调了。然而，如在表48中所示，11或22纯合性在所有三个组间是显著的。所有三个组共同具有的特点是对于DRD112杂合子平均评分的降低以及对于DRD2 A1/A2杂合子平均评分的增加。上面讨论的确证偏倚可能也在决定为什么1等位基因的纯合性可能在一个受试者组中更重要而1和2等位基因的纯合性可能在另一个组中更重要中发挥作用。 表48在所有三个受试者组中等位基因和基因型的频率N 11 12 22 p q ％11 ％11，221A.DRD1 DdeII.Tourette综合症组对照 63 4 37 22 0.34 0.66 6.4 41.3TS先证者 227 36 97 94 0.37 0.63 15.9157.32II.戒烟组对照 61 3 37 21 0.35 0.65 4.9 39.3吸烟者 177 31 60 86 0.34 0.66 17.5366.14III.赌博组赌博者 163 23 72 68 0.36 0.64 14.1555.86总体对照 124 7 74 43 0.35 0.65 5.7 40.3总体受试者 567 90 229 248 0.36 0.64 15.8759.681x sq＝3.75 p＝0.0532x sq＝5.08 p＝0.0243x sq.5.88 p＝0.0154x sq.13.45 p＝0.00025x sq.5.39 p＝0.020(赌博者和总体对照间)6x sq.6.75 p＝0.009(赌博者和总体对照间)7x sq.8.81 p＝0.0038x sq.15.38 p＝0.0001 表48(续)N 11 12 22 p q ％121B.DRD2 TaqII.Tourette综合症组对照 73 3 14 56 .15 .85 19.2TS先证者 345 17 122 206 .23 .77 35.31II.戒烟组对照 65 6 17 42 .22 .78 26.2吸烟者 194 7 83 104 .25 .75 42.82III.赌博组赌博者 186 3 85 98 .24 .76 45.73总体对照 138 9 31 98 .20 .80 22.4总体受试者 725 27 290 408 .24 .76 40.041x sq＝7.19 p＝0.00732x sq.＝5.69 p＝0.0173x sq.18.61 p＝＜.0001(赌博者和总体对照间)4x sq.15.26 p＝0.0001 表48(续)N 均无 其一 均有 ％均有1C.DRD1 DdeI 11，22加DRD2 Taq1 12I.Tourette综合症组对照 67 4 51 12 17.9TS先证者 214 19 124 71 33.21II.戒烟组对照 58 17 27 14 24.1吸烟者 176 64 32 80 45.52III.赌博组赌博者 154 32 86 36 23.3总体对照 125 21 78 26 20.8总体受试者 544 115 242 187 34.331x sq.5.71 p＝0.0162x sq.8.25 p＝0.00413x sq 8.63 p＝0.0033均无：DRD1 12和DRD2 11，22其一：DRD1 12和DRD2 12，或者DRD1 11，22和DRD2 11，12均有：DRD1 11，22和DRD2 12 表49在TS组中利用ANOVA的DRD1结果|----------等位基因组-------------|11 12 22n＝43 n＝136 n＝125行为 M S.D. M S.D M S.D. F-比*p酒精 1.30 3.3 0.23*1.2 0.42 2.2 4.17 0.0096吸烟 0.97 0.4 0.77*0.5 0.81 0.5 2.80 0.062强迫进食 1.17 0.5 0.94 0.6 0.94 0.5 2.71 0.068抽动 4.51 4.5 3.17 3.6 3.23 3.8 2.18 0.115赌博 0.41 1.2 0.12 0.7 0.15 0.8 2.00 0.136重性抑郁发作 4.27 3.0 3.64 3.1 3.25 2.9 1.88 0.154购物 1.56 2.9 1.00 2.3 0.78 2.2 1.74 0.177*通过Tukey检验在α＝0.05处显著低于基因型11。 表50在Tourette综合症组中对于DRD1 Dde 11基因型的卡方分析行为 对照无 病例无 病例有 卡方 pN ％ N ％ N ％赌博 67 4.5 217 15.2 17 35.3 10.91 0.00095酒精 70 5.7 216 15.3 18 33.3 9.08 0.002购物 54 7.4 182 13.7 52 26.9 7.85 0.005药物 70 5.7 209 15.8 25 24.0 6.50 0.011暴食 49 6.1 185 15.1 43 23.3 5.35 0.020吸烟 70 5.7 218 16.4 15 20.0 5.02 0.024表51在Tourette综合症组中对于DRD1 DdeI 11基因型同不同行为评分的单变量回归分析行为 r r2T行为 r r2T31A.DRD1 DdeI(12，22＝1，11＝2)赌博 0.190 0.036 3.36酒精 0.168 0.028 2.97强迫进食 0.139 0.019 2.33吸烟 0.129 0.016 2.26抽动 0.119 0.014 2.98阅读 0.112 0.012 1.97购物 0.095 0.009 1.6731B.DRD2 TaqI(11，22＝1，12＝2)对立违抗 0.205 0.042 3.59品行障碍 0.197 0.038 3.43强迫进食 0.202 0.041 3.37吸烟 0.184 0.033 3.21赌博 0.173 0.029 2.98ADHD 0.163 0.027 2.82躁狂 0.156 0.024 2.70口吃 0.148 0.022 2.55强迫 0.146 0.021 2.53分裂样 0.136 0.018 2.3431C.DRD1和DRD2赌博DRD1 0.171 0.029 3.00DRD2 0.168 0.028 2.94F 0.243 0.059 9.10强迫进食DRD1 0.124 0.015 2.8DRD2 0.201 0.040 3.38F 0.237 0.056 7.91吸烟行为 r r2TDRD1 0.119 0.014 2.09DRD2 0.181 0.032 3.18F 0.219 0.048 7.37酒精DRD1 0.189 0.035 3.30DRD2 0.060 0.000 1.05F 0.199 0.040 6.0731D.DRD1 11和DRD2 12均有＝3；其一＝2，均无＝1(N＝293)赌博 0.240 0.057 4.21吸烟 0.219 0.047 3.84强迫进食 0.236 0.055 3.97对立违抗 0.196 0.038 3.42ADHD 0.176 0.031 3.05品行障碍 0.174 0.030 3.01强迫 0.172 0.029 2.99躁狂 0.171 0.029 2.98酒精滥用 0.162 0.026 2.82抽动 0.134 0.018 2.32分裂样 0.118 0.014 2.23 表52在TS组中利用ANOVA的DRD1+DRD2结果(均无＝DRD1 12，22和DRD2 11，22；其一＝DRD1 11或DRD2 12；均有＝DRD1 11和DRD2 12)|---------等位基因组----------|行为 均无 其一 均有 F-比 pn＝168 n＝112 n＝15M S.D. M S.D M S.D.强迫进食 0.87～ 0.6 1.06 0.5 1.42 0.5 15.76 0.0001吸烟 0.73～ 0.5 0.91 0.4 1.13 0.3 14.71 0.0002对立违抗 3.05*3.1 4.21 3.3 5.06 3.7 11.70 0.0007ADHD 20.31*14.5 24.63 13.6 28.60 12.7 9.31 0.0025品行障碍 2.58*2.1 3.54 2.4 4.26 3.0 9.15 0.0027强迫 2.47*3.0 3.40 3.2 4.27 4.1 8.93 0.0030躁狂 1.43 2.0 2.06 2.4 2.80 2.7 8.89 0.0031酒精 0.24 ^1.5 0.53 ^2.0 1.93 4.1 7.99 0.0050#线性ANOVA*通过Tukey检验于α＝0.05处显著低于其一组^通过Tukey检验于α0.05处显著低于均有组～通过Tukey检验于α＝0.05处显著低于其一或均有组表53在Tourette综合症组中对于具有DRD1 11或DRD2 12基因型或者均有的受试者百分比的卡方分析行为 对照 病例无 病例有 卡方 pN ％ N ％ N ％ square躁狂 63 22.2 153 44.4 75 57.3 16.82 0.00004酒精 67 23.9 211 46.9 17 70.6 16.51 0.00005强迫 64 23.4 155 44.5 73 57.5 15.87 0.00007品行障碍 54 22.2 94 41.5 134 53.7 15.45 0.00008分裂样 62 25.8 144 44.4 82 57.3 13.94 0.0002性 52 26.9 158 41.1 85 56.5 11.94 0.0005强迫进食 46 23.9 181 47.0 41 58.5 10.76 0.0010MDE 46 28.3 134 44.0 94 55.3 9.12 0.0025只给出“病例有”至少高于“病例无”20％的受试者表54在戒烟组中DRD1和DRD2数(1％)每天所吸包数基因型 0 1-11/2 2-21/2 合计DRD1 11 3(4.9) 9(16.4) 22(18.0) 20412，22 58 46 100 34总计 61 55 122 238 5.14 0.023*DRD1 11，22 24(39.3) 34 (61.8) 83(68.0) 14112 37 21 39 97总计 61 55 122 238 12.87 0.00033* 每天所吸包数基因型 0 1-11/2 2-21/2 合计DRD2 12 17(26.2) 20(34.5) 63(46.3) 10011，22 48 38 73 159Total 65 58 136 259 7.99 0.0047*DRD1和DRD2 均无 17 23 41 81其一 27 13 19 59均有 14(24.1) 19(34.5) 61(50.4) 94合计 58 55 121 234 23.48 0.0001***线性卡方d.f.＝1**Perason卡方d.f.＝4表55在戒烟组中DRD1和DRD2基因的多变量线性回归分析r r2T pDRD1 DdeI 12 0.232 0.054 30.73 0.0002DRD2 TaqI 12 0.220 0.048 30.54 0.0005F 0.325 0.105 13.63 ＜0.0001 实施例8用内啡肽酶抑制剂和释放剂治疗的效果在本实施例中，检测了d-苯丙氨酸(其它内啡肽酶抑制剂)、Tyr-D-Arg(一种内啡肽释放剂)和纳曲酮(麻醉拮抗剂)的相互作用对于多巴胺释放入Lewis(多药喜好)和Fischer(非多药喜好)大鼠的伏核(Acb)中的效应。Lewis和Fischer大鼠均被分成两组：急性和慢性。慢性组每日给予三种药物的剂量为：每天早晨500mg/kg的d-苯丙氨酸(DPA)、1-5mg/kg的Tyr-D-Arg(TDA)以及1-2mg/kg的纳曲酮(NX)(杜邦，Wilmington，DE)共18天。在第19天，对慢性治疗或急性组开始进行微量透析采样。药物的联合如下变化：给予所有三种；任何两种的联合；单独各药。三种药物的急性剂量将如下：DPA＝500mg/kg i.p.，TDA 5mg/kg i.p.，NX i.p.2mg/kg。 微量透析方法在研究之前七天，所有大鼠将在苯巴比妥钠(50mg/kg)麻醉下通过手术于立体定位协同下(相对于前囟点)在左侧Acb中植入微量透析探针：A+2.0、L1.2和V-8.0(距颅骨)。探针设计为同心的并用0.5mm外径不锈钢管制造(Small PartsCompany，Roanoake，VA)。每个探针带有250μm外径并基本上覆盖Acb垂直范围的2mm暴露透析膜(Spectra/Por中空纤维素纤维，MWCO5000，Spectrum Medical Industries，洛杉基，CA)。 透析回收率通过体外研究确定，探针的相对回收率将大约为3.9％的多巴胺(DA)、4.1％的3，4-二羟苯乙酸(DOPAC)和3.2％的高香草酸(HVA)。就在植入后，将开始探针输注并整个研究中持续。将利用耦联至两个LC-4C检测仪的双重玻璃碳工作电极(生物分析系统公司，West Lafayette，IN)进行电化学测量，均设在对应于Ag/ACl参考电极+0.7V处。一个电极用于DA检测而另一个用于DOPAC和HVA检测。在动物已经从手术中恢复20-24h后开始透析采样。直到透析液的DA、DOPAC和HVA水平稳定后收集透析标本。然后收集三个20min基线的注射前标本。在任何慢性注射前，将分析预透析液确定基线量。在该基线量建立后开始慢性注射。对于急性大鼠组，在收集前以一个根据研究而改变的预定的间隔开始药物联合给药。给药后收集2h以上总共六个20min的标本。还将从研究的开始对在慢性和急性组中的大鼠进行运动和刻板行为的观察。在所有收集完成后，对所有大鼠的脑进行标准的组织学分析来确证探针的位置。 自我选择还将进行其它涉及药物联合在Lewis和Fischer大鼠间对自我选择影响的研究来特异性地确定单独DPA以及TDA和NX联合对系统性地降低对酒精、可卡因、糖溶液、大麻和尼古丁渴望的影响。抑制GABA传输活动的DPA和TDA的联合对中央脚盖GABA能活性的抑制在显著增加DA进入Acb的量方面应是最有力的。NX的利用看起来预防酒精诱导的欣快。 实施例9DRD2 A1等位基因和身体脂肪百分比的关联方法肥胖症受试者。本研究的目标是获得主要而不必绝对地由病态肥胖受试者组成的受试者组。具有34％或更大的脂肪含量的女性以及具有28％或更大的脂肪含量的男性被认为是病态肥胖。 对照。对照由来自“明尼苏达双胞胎家庭研究”的双胞胎的父母组成。由于简单地基于具有11或17岁双胞胎以整个状态来确定这些受试者，所以他们代表比大学学生更随机的所有社会经济和教育组织的组。由于物质滥用评价的结果在双胞胎对照中还无法提供，所以发明者将这些列为“未筛选的对照”。由于也未对肥胖样本中的受试者筛选物质滥用，所以这使得对照同受试者对于肥胖症的存在是相当的。 结果。肥胖组由91个受试者组成，76个女性和15个男性。女性中，60或78.9％为病态肥胖，而其余的16或21.1％为超重但具有低于34％的脂肪％。男性中，12或80％为病态肥胖，而其余的3或20％为超重但具有低于28％的脂肪％。由于不是病态肥胖的受试者的比例太小而不允许独立的统计学分析，所以合并两组用于分析。 在肥胖受试者和对照中DRD2 D2A1等位基因的流行率示于表56。对于男性和女性的总体，肥胖受试者中67.0％携带D2A1等位基因，而未筛选对照为32.3％，x2＝32.95，p＜0.00001。这个值实际上同自从1990年的文献中所报道的对于980个未筛选的白种人对照的32.9％值是相同的(表57)。68.4％的流行率显著高于对照。对于DAT1基因的结果示于表58中。同DRD2基因相反，同对照相比在肥胖受试者中10/10基因型的流行率没有显著的增加。 表56明尼苏达双胞胎对照—未筛选物质滥用D2A11 12 22 Tot ％12M+F N 14 83 203 300％ 0.047 0.277 0.677 1 0.323F N 7 46 99 152％ 0.046 0.303 0.651 1 0.349M N 7 37 104 148％ 0.047 0.250 0.703 1 0.297肥胖症样本—％脂肪数及未筛选物质滥用D2A11 12 22 Tot ％12M+F N 5 58 30 92％ 0.055 0.615 0.330 1 0.670F N 5 47 24 76％ 0.066 0.618 0.316 1 0.684M N 0 9 6 15％ 0.000 0.600 0.400 1 0.600表57对照 11 12 22 合计 ％1对照—状态未知Bolos等.，1990 4 17 41 62 33.9Grandy等.，1989 2 14 27 43 37.2Comings等.，1995 0 21 67 88 23.9Gelenter等.， 3 21 44 68 35.3Uhl，1992 3 27 71 101 29.7Goldman Finns 4 38 70 112 37.5Goldman 1993 11 42 114 167 31.7Nother等.， 5 26 38 69 44.9Noble等.，1994 2 18 38 58 34.5Jonsson等.，1993 4 13 38 53 32.1Hedebrand等.，1993 4 19 38 61 37.7O′Hara等.，1993(白人非使用者) 6 39 115 160 28.1合计＝ 44 278 658 980 32.9表58DAT1 其它 合计.10/10M+F N 160 122 282％ 0.567 0.433 1F N 89 63 146％ 0.568 0.432 1M N 77 59 136％ 0.566 0.434 1M+F N 44 47 91％ 0.484 0.516 1F N 38 38 76％ 0.500 0.500 1M N 6 9 15％ 0.400 0.600 1 实施例10用于RDS的检测的其它多基因等位基因的分析色氨酸2，3二氧化酶。5-羟色胺代谢的缺陷以及血液5-羟色胺和色氨酸水平的异常在多种精神障碍中已经被报道。色氨酸2，3-二氧化酶(TDO2)是色氨酸降解为N-甲酰犬尿氨酸的限速酶。该基因的功能变体可能负责所观察到的在多种障碍中5-羟色胺和色氨酸的同时增加或降低。已经鉴定出了人TDO2基因的四种不同的多态性。关联研究表明这些多态性的一个或多个同Tourette综合征(TS)、注意力缺乏多动障碍(ADHD)以及药物依赖的显著相关性。内含子6G→T变体是同血小板5-羟色胺水平显著相关的。经Bonferroni校正时，只有同TS的相关性是显著的(p＝0.005)。 受试者。TS先证者、TS家族成员、ADHD先证者、三分之二的孤僻症先证者以及大部分的对照是希望之城国立医学中心(COH)的TS和其它诊所治疗的患者或患者亲属。TS、慢性运动抽动或慢性发声抽动障碍、ADHD和孤僻症的诊断是基于DSM-III-R(美国精神病联合会，1987)标准的。TS先证者被限定为在该TSS-ADHD诊所寻找医学治疗的TS个体。对所有先证者和大部分的亲属个人会见并通过D.E.C.进行检查。在先证者中，82％具有TS而其余的18％具有慢性运动抽动障碍或慢性发声抽动障碍。TS家族成员为TS先证者的父母，无论他们具有TS与否。三分之一的孤僻受试者来自Sagamore儿童医院，Dix Hills，NY(J.S.)。每个先证者及他们的亲属均被提问关于他们四位祖父母的人种和种族背景，而且仅包括所有四位祖父母均为非西班牙白种人的受试者。所有受试者签定了书面协议，而且研究被研究管理委员会(Institutional Review Board)批准。吸烟者(Comings等，1996a)和病理性赌博者(Comings等，1996b)以及具有酒精依赖(Comings等，1994)和药物依赖(Comings等，1994)的个体来自DRD2基因在这些障碍中作用的研究。这些受试者的筛选和来源在这些各自的文件中被详细描述。 精神分裂症和抑郁受试者的DNA标本是从来自“国家神经病学研究库”(V.A.Wadsworth医院，CA)的具有这些诊断的受试者的大脑标本中分离的。精神分裂症的受试者具有慢性的精神分裂症，通常有长期精神住院史。具有抑郁的受试者曾自杀并有慢性抑郁史。精神分裂症和抑郁的诊断是在一个以上精神病医生的同意下基于DSM-III或DSM-IIIR标准的。同时具有酒精中毒和药物滥用的受试者被排除了。 对照。COH对照来自四个来源：a)来自CEPH(Centre d’Etude duPolymorphisme Humain)家庭的无关祖父母；b)TS患者的收养、抚养或继父母；c)来自一内分泌病诊所具有甲状腺癌或非胰岛素依赖性糖尿病的受试者；以及d)包括职业、半职业、技术人员和维护工人的医院工作人员。这种广泛的对照用来避免当利用更局限的来源时可能产生的潜在的筛选问题。选择内分泌患者作为对照，因为两种病态均是可治疗的，具有高的治愈率，而且对日常生活产生最小的干扰，存在于广泛的年龄范围，以及患者基础同TS受试者的是相同的。所有对照均被筛选来排除酒精、药物和烟草滥用。 内含子6突变区的PCRTM扩增。扩增TDO2靶序列的PCRTM反应如下：10mM Tris HCl，pH8.3、50mM KCl、1.5mM MgCl2、0.05％Tween20、0.05％NP-40、各100μM dATP、dCTP、dTTP、dGTP和0.1μM引物。引物为116号GACACTTCTGGAATTAGTGGAGG(SEQ ID NO：5)和117号GAAGTTAAATCCATGTGGCTC(SEQ ID NO：6)。将下列物质加至20ul：0.5U AmpliTaq(珀金-埃尔默，Foster City，CA)，1μl(250ng)基因组DNA。利用下面的操作在一PE-9600热循环仪(珀金-埃尔默)或一PTC-100可编程热控制仪(MJ研究公司，Watertown，MA)上进行反应：94℃ 5min，然后30个循环的94℃ 30sec，60℃30sec，72℃ 1min，然后72℃ 5min。为确定扩增是否发生，取10μl的反应混合物在TBE缓冲液中于1.5％的琼脂糖凝胶上电泳。 克隆和测序。将引物116(SEQ ID NO：5)和117(SEQ ID NO：6)的PCRTM产物用乙醇沉淀，并重悬于TE缓冲液(Tris HCl 10mM，EDTA 1mM)中。将片段克隆到经修饰的Blue Script pBdT(Hoton和Graham，1991)中。20μl连接反应中含有下面的成分：20μl 10×连接缓冲液(宝灵曼)，100ng的每种PCRTM产物，pBdT和1μl T4连接酶。将其在11℃孵育18h。在一Applied Biosystems公司(FosterCity，CA)自动测序仪上用末端引物T3、T7以及内部引物129号GCTGATTTTCAGACTGAGTGTG(SEQ ID NO：7)和130号CTACAAACATATTTAAACATATGTT(SEQ ID NO：8)测定片段的序列。 变性梯度凝胶电泳。通过PCRTM扩增了在内含子6寡聚物116号(SEQ ID NO：5)和117号(SEQ ID NO：6)间的DNA，产生一1359bp的片段。用RasI消化该片段产生816、470和60bp的片段。将其在20-80％变性的6.5％丙烯酰胺凝胶中于60℃、70V电泳16hr(Grey，1992)。在10mM Tris HCl、50mM KCl、1.5mM MgCl2、0.05％Tween20、0.05％NP-40、pH8.3的缓冲液中用0.2μM各种引物和0.2mM的各种脱氧NTP进行PCRTM。利用2.3μl的10×反应1缓冲液(New EnglandBiolab，Beverly，MA)，用5U酶(在1μl中)进行20μl PCRTM产物的RsaI消化，在37℃消化过夜来判别片段的大小。 BslI消化。从上面的PCRTM反应中，取10μl的一份用1.5U的限制性内切酶BslI以及最终1×缓冲液(由New England Biolab，Beverly，MA提供)进行消化，并在55℃孵育过夜。将消化产物中10μl的一份在1×TBE(Tris-硼酸盐100mM，EDTA 1mM)中于4％的metaphor琼脂糖(F.M.C.产品，Rockland，ME)凝胶中100V进行电泳1h。将凝胶在溴化乙锭中染色。预期有三个不同大小的片段。当多态性位点为G/G时，DNA被完全消化产生673bp和359bp的片段。当多态性位点为A/A时，1032bp片段未被消化。G/A杂合子具有三个片段，1032bp、673bp和359bp。 寡核苷酸连接试验(OLA)。在对G→T变体的OLA中所用的寡核苷酸如下：对于G特异性寡聚物OLA-G CTATTCTTATCCCTCTTTTCTTAA-(HEO)1(SEQ ID NO：9)。对于T特异性寡聚物OLA-TATATTCTTATCCCTCTTTTCTTAAT-(HEO)3(SEQ ID NO：10)。G特异性寡聚物具有1个而T特异性寡聚物具有3U的加至5’末端来改变这两个寡聚物分子量的六环氧乙烷磷酰胺(Grossman等，1994)。通用的寡聚物为FAM-TATATATTACGGTTTATTACCGT-PO4(SEQ ID NO：11)，其中FAM为5’羧基荧光素亚磷酰胺(Applied Biosystems公司，FosterCity，CA)。当G特异性和通用的寡聚物通过连接反应连接时，预期大小为50.5bp。当T特异性和通用的寡聚物连接时，预期大小为56.5bp。OLA反应的反应混合物由下述成分组成：20mM Tris HCl，pH7.6、100mM KCl、10mM MgCl2、10mM二硫苏糖醇、1mM NAD、0.1％Triton X-100、10nM寡聚物。10U连接酶(New England Biolab)和1μl的PCRTM产物加至各20μl的反应混合物中。在一PE-9600热循环仪上利用下面的循环操作进行反应：20个循环的94℃30s，54℃2min30s。将每个2μl反应同0.5μl的去离子甲酰胺混合并加热至92℃2min来变性。所用2.5μl均上样至一在TBE和8M尿素中的8％丙烯酰胺凝胶中并电泳3h。通过在Applied Biosystems DNA测序仪中利用荧光染色的引物进行电泳或通过银染色来鉴定反应产物。后者由双重染色组成，首先用Stains-All，然后用银染。将凝胶置于在50％的甲酰胺pH7.5中制备的0.01％的Stains-All(Eastman Kodak，Rochester，NY)溶液中20-30min，然后在2％的甘油中脱色过夜。然后在10％乙醇和0.5％的乙酸中将凝胶洗两次，每次30min。然后将凝胶在0.1％的AgNO3溶液中孵育20-30min，用去离子水洗两次，然后置于新鲜制备的于1升蒸馏水中的1.5％NaOH、0.01％NaBH4、4ml 37％的甲醛溶液中。在10-20min内显带，然后用0.75％的Na2CO3终止反应，并在5％的乙酸中固定。 通过DpnII消化对G→T变体的鉴定。紧接G→T 3’的序列为GATA。GATC是DpnII限制性内切酶的识别位点。设计3’23bp的寡聚物同紧接G→T变体3’的ATC序列相配如下(寡聚物下划线而且对于变体的两个g位点下划双线)：5’-TCATTAATCCTCTGGGTATTGTAAATGTGGATTTAGGTTAATGTATTATATATAATGCCAAATAATGGCAGATAAGAATAGGGAGAAAAAGAATTA-3’(SEQ ID NO：12)，5’-ATTAATCCTCTGGGTATTGT-3’(SEQ ID NO：13)，5’-TAGTCTTATCCCTCTT TTTCTTA-3’(SEQ ID NO：14)。这种在第三个位点上的不相配很少损害其作为PCRTM引物的效果。选择5’引物来提供一92bp的产物。当G→T变体为A时，仅有一92bp的片段出现。 PCRTM反应的条件如下：0.1μM的各种引物，0.2mM的各种dNTP，50mM KCl，10mM Tris HCl，1.5Mm MgCl2，0.001％(w/v)明胶，每100μl 2.5U的AmpliTaqDNA聚合酶(珀金-埃尔默，Foster City，CA)，80ng基因组DNA。PCRTM循环为94℃4min，然后30个循环的94℃ 30sec，52℃ 90sec，72℃ 120sec，然后72℃ 5min。DpnII消化的条件为10μl的PCRTM产物，0.05μl的10Uμl-1的DpnII；1.5μl的：1M NaCl，0.5M Bis HCl，0.1M MgCl2，10mM二硫苏糖醇，pH7.9；3.5μl H2O，于37℃过夜。将产物在4％的metaphor琼脂糖中电泳。 CCCCT重复的扩增。用于检测内含子5 CCCCT重复的寡聚物为166号5’-CTCTTACAATAGAAGAAACCATTT-3’(SEQ ID NO：15)以及167号5’-TCTCCTCTCTTTCCCTTCCC-3’(SEQ ID NO：16)的反向互补。扩增条件为95℃ 5min，然后30个循环的95℃ 1min，50℃ 1min，然后72℃1min，随后72℃ 5min。在反应混合物中的终浓度为50mM KCl、1.5mM MgCl2、10mM Tris HCl，pH8.3、0.1μM引物、各200μM的dATP、dCTP、dTTP、各100μM的dGTP和7-脱氮-dGTP和0.5μl的模板。 外显子7A→C突变(Asn→His)多态性的鉴别。用于扩增A→C变体的PCRTM引物是5’-GCATGGCTGGAAGAACTCC-3’(SEQ ID NO：17)5’引物和5’-TCTTCCAGGCCTCTGGTCATAT-3’(SEQ ID NO：18)3’引物。产生的89bp产物在C变体位点被NdeI消化成67和22bp的片段。 关联研究。所用的方法是比较在相同人种群体中先证者和无关对照间各种等位基因的流行率。在表59、60和61中Bonferroni校正α为0.05/10或0.005。在几年的时间内完成这些研究。由于鉴定了新的多态性，如果开始的几百个受试者的研究提示变体同一行为表型并非显著相关，则无受试者被进一步检测。结果，对于不同的变体所研究受试者的数量是不同的。 表59内含子6G→ATDO2多态性的结果组 n GG GA AA ％A OR CI x2p对照 141 136 4 1 3.5ADHD 113 110 3 0 2.7 0.74 0.2-3.2 0.16 NS酒精依赖 65 65 0 0 0.0 0.00 --- 2.36 NS孤僻症 65 61 2 2 6.2 1.78 0.5-6.8 0.72 NS抑郁 16 14 1 1 12.6 3.88 0.7-21.9 2.70 NS药物依赖 71 69 2 0 2.8 0.79 0.2-4.2 0.78 NS病理性 166 158 8 0 4.8 1.38 0.4-4.3 0.30 NS赌博精神分裂症 41 41 0 0 0.0 0.00 --- 1.45 NS吸烟者 93 92 1 0 1.1 0.30 0.03-2.6 1.37 NSTS 299 268 29 2 10.4 3.15 1.1-7.8 5.93 0.015TS携带者 151 135 14 2 10.6 3.22 1.1.9.0 5.43 0.020OR＝奇比率GA，AA/GGCI＝OR的置信区间适当处使用Fisher精确检验表60内含子6G→T TDO2多态性的结果组up n GG GT TT ％T OR CI x2p对照 197 166 30 1 15.7ADHD 108 81 25 2 25.0 1.78 1.0-3.2 3.89 0.048酒精依赖 65 61 3 1 6.1 0.35 0.1-1.0 3.88 0.049孤僻症 65 58 5 2 10.8 0.65 0.3-1.5 0.97 NS抑郁 19 16 3 0 15.8 1.00 0.2-3.6 0.00 NS*药物依赖 73 52 19 2 28.7 2.16 1.1-4.1 5.81 0.016病理性 165 127 33 5 23.0 1.60 0.9-2.7 3.10 0.078赌博精神分裂症 43 33 10 0 23.3 1.62 0.7-3.6 1.41 NS吸烟者 108 88 18 2 18.6 1.22 0.6-2.2 0.388 NSTS 320 263 52 5 17.7 1.16 0.7-1.9 0.37 NSTS携带者 134 119 14 1 11.1 0.67 0.3-1.3 1.37 NSOR＝奇比率GT，TT/GGCI＝OR的置信区间*Fisher精确检验表61内含子6G→T TDO2多态性的结果组 n G/G A或T A+T ％A或T OR CI x2p对照 135 112 23 0 17.0ADHD 96 68 27 1 29.1 2.01 1.1-3.7 4.80 0.028酒精依赖 64 60 4 0 6.3 0.32 0.1-1.0 4.31 0.038孤僻症 64 53 11 0 17.2 1.01 0.4-2.2 0.01 NS抑郁 15 10 5 0 33.3 2.43 0.8-7.8 2.36 NS*药物依赖 70 47 23 0 32.9 2.38 1.2-4.7 6.63 0.010病理性 165 123 38 4 25.4 1.66 0.9-2.9 3.10 0.078赌博精神分裂症 34 26 8 0 23.5 1.50 0.6-3.7 0.76 NS吸烟者 84 69 15 0 17.9 1.06 0.5-2.1 0.24 NSTS 271 190 80 1 29.9 2.08 1.2-3.5 7.81 0.005TS携带 者 98 74 21 3 24.5 1.58 0.8-3.0 1.96 NSOR＝奇比率A或T，A和T/GG GGCI＝OR的置信区间*Fisher精确检验非随机等位基因关联。由于未进行家族研究，所以不能确定阶段特异性单倍型频率，依次减轻了经典的连锁不平衡分析方法(Lewontin和Kojima，1960；Lewontin，1964)。通过在受试者中的交叉列表来估计在所研究的四个不同多态性间非随机等位基因关联的程度，其中对同一个体进行两个或多个测试。在所有诊断分类中的所有受试者均包括在这些分析之中。 通过特定行为的分析。在多巴胺D2受体基因DRD2、DβH和DAT1基因在TS中作用的研究中(Comings等，1996c)，发明者发现通过不同的行为症状群的分析是可以提供相当信息的。这是检测在没有所研究行为的对照和TS先证者和具有所研究行为的亲属中特定等位基因的流行率。 5-羟色胺和色氨酸水平。用于血小板5-羟色胺水平、5-羟色胺/血小板比率和血浆5-羟色胺水平分析的技术在他处给出(Comings，1996b)。结果对照。无关的CEPH祖父母组成60％的对照。为确定是否发明者自身对照组的任何一个给出不同的结果，在不同组间比较多态性的频率。通过卡方分析无显著性差别。 内含子6 DGGE多态性。在聚丙烯酰胺凝胶电泳上判断多态性。原始内含子6 DGGE多态性的结果示于表62中。在91个对照的12.1％中出现代表等位基因2的较低频率的条带。在40个TS患者中其显著增加至27.5％，在10个药物成瘾中至50％，而在8个曾自杀的抑郁受试者中达37.5％。然而，这些数字均较小，而且发明者意图在发展为一大量受试者的研究前鉴定所涉及的变体。测序研究鉴定了两个多态性，一个G→T变体以及另一个G→A变体，不同的两个碱基对(Comings等，1995)。发明者首先利用连接试验来分别检测这些变体，然后利用经修饰的引物和限制性内切酶发展了一个更简单的步骤(见方法)。 表62TDO2内含子6的DGGE多态性的初步结果组 n 11 12 22 ％2 OR CI x2p对照 91 80 11 0 12.1抑郁 8 5 3 0 37.5 4.36 0.91-20.8 3.91 0.083*药物依赖 10 5 4 1 50.0 7.23 1.8-29.2 9.71 0.008*病理性 26 16 7 3 38.5 4.55 1.6-12.3 9.55 0.007*赌博TS 40 29 9 2 27.5 2.76 1.1-7.0 4.72 0.031OR＝奇比率12，22/11CI＝OR的可信区间*Fisher双尾精确检验G→A变体。内含子6 G→A变体的结果示于表59中。141个对照中，只有3.5％携带A等位基因。所检测的10个组中，在α＝0.05处唯一的显著结果是A等位基因增加至299个TS受试者中的10.4％(奇比率3.15)，以及在151个TS一级亲属中的10.6％。这些在Bonferroni校正的p值0.05/10或0.005处均不显著。 G→T变体。G→T变体的结果示于表60中。在197个对照中，15.7％携带T等位基因。其增加至在108个具有ADHD的受试者中的25.0％(p＝0.048)，在73个具有药物或多物质依赖的受试者至28.7％(p＝0.016)以及在65个具有酒精依赖的受试者中的6.1％(p＝0.049)。在α＝0.005处这些均不显著。 G→A或G→T变体。发明者检测了G→A或G→T多态性存在的流行率(表61)。在135个两种检测均进行了的对照中，17％携带任一种等位基因。其对于96个具有ADHD的受试者增加至29.1％(p＝0.028)，对70个具有药物依赖的受试者至32.9％(p＝0.01)，以及对271个具有TS的受试者至29.9％(p＝0.005)。对于64个具有酒精依赖的受试者，其降至6.3％(p＝0.03)。在α＝0.005处只有具有TS的结果是显著的。 外显子7的A→C，748 Asn→His变体。发明者对Asn→His变体可能能提供信息充满信心，因为其为一种外显子变体，而且涉及在血红素结合中重要的氨基酸。C或His等位基因存在于48个对照的6.3％中，而且这个值对于具有ADHD、孤僻症、精神分裂症以及TS的受试者由些许变化，但无一显著。 CCCCT多态性。对于所有被测受试者，在内含子5 3’末端GCCCT重复区域处等位基因的碱基对长度和频率如下：等位基因 频率大小210bp 0.018 240bp 0.838215bp 0.053 245bp 0.018220bp 0.023 260bp 0.005230bp 0.045迄今，240等位基因和240/240基因型是最常见的。为了分析的目的，将240/非240和非240/非240基因型的频率同240/240基因型的频率相比。对于125个对照，31.2％携带240/非240或非240/非240基因型。对于其它组的流行率几乎相同，在22.1％到30.5％的范围内，而且无一同对照显著不同。 非随机等位基因关联。表63显示在四个所研究的TDO2变体间非随机等位基因相关性估计值的结果。虽然对总共1245个受试者测定了G→A和G→T变体，但仅有10个受试者对于A和T等位基因均为杂合的，一个是TT纯合子和A杂合子，表明两种突变在同一染色体上。每个变体等位基因相对罕见，18.0％的T等位基因以及24.1％的二者之一。这些结果表明这两个邻近的突变(2bp距离)存在于不同的染色体上，而且所观察的分布同独立事件的偶然联合没有区别。312个测试了G→T和A→C变体的受试者(表63-B)中，没有一个两者均为杂合的。对于总群，只有7.4％在相同染色体上携带C等位基因(在AA纯合子中AC杂合)。621个测试了G→A和CCCCT多态性的受试者(表63-D)中，只有六个为A和非240bp CCCCT等位基因杂合的，以及一个非240/非240纯合子为GT杂合子。这些分布同偶然性没有不同，表明它们是在完全分离的染色体上。 最后，696个测试了G→T和CCCCT多态性的受试者中，(表63-E)，169个240/非240杂合子中80个(47.6％)为GT杂合子，非240/非240纯合子中19个(70.3％)为GT或TT，而TT纯合子中10个(100％)为非240/非240纯合子。这个关系是高度显著的(x2＝421.07，p＜0.00001)，表明在非240 CCCCT变体和T等位基因之间存在高度的非随机等位基因关联。结果表明至少50％的非240等位基因发生在T等位基因染色体上，而且至少78％的T等位基因发生在非240等位基因染色体上。 表63四个不同TDO2变体间非随机等位基因相关性的估计(df＝4)63A.内含子6 T→A和T→G间G GT TT 合计 x2pG 944 194 19 1157GA 70 10 1 81AA 7 0 0 7 2.74 0.60合计 1021 204 20 124563B.内含子6 G→T和外显子7 A→C(Asn→His)G GT TT 合计 x2pA 227 60 6 293AC 18 0 0 18CC 1 0 0 1 5.43 0.24合计 246 60 6 31263C.内含子6G→A和外显子7A→C(Asn→His)间G GA AA 合计 x2pA 254 16 0 270AC 20 1 1 22CC 2 0 0 2 9.72 0.045合计 276 17 1 29463D.内含子6 G→A和内含子5 CCCCT多态性间G GA AA 合计 x2p240/240 426 17 5 448240/x 144 6 0 150x/x 21 1 0 23 1.97 0.74合计 591 25 5 62163E.内含子6 G→T和内含子5 CCCCT多态性间G GA TT 合计 x2p240/240 473 28 0 501240/x 88 80 0 168x/x 8 9 10 27 421.07 ＜0.00001合计 569 117 10 696 单个行为的比较。当对于A或T等位基因比较不同行为评分的均值时，只有多种恐怖症存在的结果是显著的，对于“均无”的那些平均评分为2.89(p＝0.043)。当在没有恐怖症的对照、没有恐怖症的TS先证者和亲属以及具有恐怖症的TS先证者和亲属间对各变体的流行率进行比较时，对于恐怖症的结果具有最高度的线性x2(3.45)，但并不显著(p＝0.06)。此处每种的流行率在这三组间从18.8％增加至24.15％到34.1％。各行为中无一同CCCCT多态性的非240bp等位基因显著相关。 TDO2多态性和5-羟色胺水平。从以前的研究中可获得血小板5-羟色胺和血液色氨酸水平的资料(Comings，1990b)。由于一些受试者参与到两个研究之中，所以确定在具有不同TDO2等位基因的受试者中血小板5-羟色胺或血液色氨酸水平是否存在任何差别是可能的。这些结果示于表64中。通过ANOVA分析或通过Mann-Whitney非参数检验，对于G→A变体，同G/G受试者相比，G/A和A/A中5-羟色胺/血小板比率无显著性改变。5-羟色胺/血小板比率值的分布对于那些具有GG或GT、TT基因型的。 虽然数值范围是相似的，但分布不同于正态分布。对于携带G→T多态性的GG基因型的那些，许多值集中在0.5-1.25的范围内。相反，携带T等位基因的那些很少在这个范围内。对于T等位基因组还有一个10.9的超偏值。当清除该超偏值时，对于携带T等位基因的那些，平均5-羟色胺/血小板比率显著较高(p＝0.003)。当该值当排除该值时，p值降至0.081。然而，用更合适的Mann-Whitney非参数检验，T等位基因组仍具有显著高的均值。对于CCCCT重复多态性，如所预期的，携带非240等位基因的那些具有较高的5-羟色胺/血小板比。然而，差异不显著。色氨酸水平对任何多态性均不显著。 实施例11遗传学关联的累加性PS1基因多态性。早衰素-1(PS-1)多态性时一个双等位基因标志，定位于14号染色体上，已证明其参与阿尔茨海默氏病。鉴于吸烟者发展为阿尔茨海默氏病的风险降低的报道，发明者在一系列的132个已经确定了其酒精和香烟使用模式的非西班牙白种人受试者中检测了PS-1基因。发明者发现该基因的纯合子(基因型1/1和2/2)显著更常见为吸烟者(p＜0.05)，而且在“密执安酒精中毒筛选测试”(MAST)中具有显著升高的评分(p＜0.01)。 通过标准的方法从全血中提取受试者的基因组DNA。用PCRTM方法(Saiki等，1988)来扩增靶DNA，在不同的反应中利用0.1μM的各引物(5’CACCCATTTACAAGTTTAGC3’(SEQ ID NO：19)和5’CACTGATTACTAATTCAGGATC3’(SEQ ID NO：20))。反应首先在94℃变性5’，然后进行第二步94℃变性30”，50℃退火30”并在72℃延伸30”。将第二步重复34循环，而且最后延伸步骤在72℃ 5’。将199bp的扩增产物用2.5U的限制性内切酶BamHI在37℃消化过夜。 将所消化的产物在10％的PAGE上于150V跑2h，并用溴化乙锭染色。基于产生181bp和18bp的两个片段的限制性酶切位点A-C确定基因型。 ADRA2C二核苷酸重复多态性。ADRA2C二核苷酸重复多态性在染色体4p上，跨越179-193碱基对。该基因的人基因组数据库登记号为M94915。发明者在一系列53个非西班牙白种人物质滥用者中检测了该遗传学标志并发现低碱基对等位基因(≤181bp)的存在同更严重的药物滥用模式(可卡因、安非他明和海洛因使用)，但较少地同重度酒精中毒相关。发明者以下面的方式构建了二核苷酸重复等位基因的基因型：基因型1＝≤181bp的纯合性；基因型2＝杂合性(等位基因1≤181bp，等位基因2≥183bp)以及基因型3＝≥183bp的纯合性。基因型1同花费在药物上的高钱量(p＜0.01)、高安非他明使用年数(p＜0.05)以及高海洛因使用年数(p＜0.05)相关。相反，高碱基对等位基因(基因型3)同在过去的30天中酒精使用多(p＜0.01)、高酒精使用年数(p＜0.05)和将酒精中毒(而不是药物)指定为寻找治疗的首要原因(p＜0.05)相关。 该多态性的人基因组登记号为GDB：196352而序列为M94915。通过标准的方法从全血中提取受试者的基因组DNA。用PCRTM方法(Saiki等，1988)扩增靶DNA，在不同的反应中利用0.1μM的各荧光标记的引物(5’AGTGGGCAGGGCGGGGCAGGT3’(SEQ ID NO：21)和5’CGCTGCCTCCCTTCCACCTGTTG3’(SEQ ID NO：22))。反应首先在94℃变性5’，然后进行第二步94℃变性30”，57℃退火30”并在72℃延伸30”。在一个循环中将第二步重复29次，而且程序以一在72℃ 5’的延伸步骤结束。对于凝胶分析，每个反应由0.5μl稀释的扩增PCRTM产物(15μl于75μl去离子水中)、2.5μl含有2.0μl去离子甲酰胺+0.25μl的ROX500标准+0.25μl兰色doxtran染料的混合物组成，并在92℃变性2’。将变性的样品上样于AppliedBiosystems 373 DAN测序仪(GeneScanTM)的6％PAGE中，并于1500伏特以及300W下将跑胶5h。处理凝胶，并利用内标准(ROX500)分析。基于颜色和片段的大小通过基因分型仪(genotyper)(1.1版本)识别两个峰。所分配的值是表现其等位基因大小精确性判断的分数。从每个凝胶文件打印出每个标本完整的信息，并将编辑过的资料进行分析。 发明者在一系列64个物质滥用者中检测了二核苷酸重复的多态性，PENK基因的3’末端的CA重复。发明者发现高碱基对等位基因(≥80个碱基对)纯合的受试者具有显著更严重的酒精中毒和药物滥用。高碱基对等位基因同高醉酒年数(p＜0.05)、高药物戒毒治疗次数(p＜0.01)、高海洛因使用年数(p＜0.05)、高药物治疗次数(p＜0.05)以及美沙酮维持治疗的高频使用(p＜0.05)相关。 实施例12确定对用PHENCALTM治疗敏感的等位基因多态性为确定哪种RDS基因、特别是哪种多态性可诊断出对药物干预抑制特定RDS行为最敏感的个体，对潜在的候选者将检测RDS基因中的特定多态性，进行各种心理测验来鉴定RDS行为，和/或利用此中所公布的组合物进行药理学治疗。可以统计学评价特异RDS基因或基因多态性的存在同通过心理测验鉴定的RDS行为的存在和/或同利用此中所公布组合物的治疗在RDS行为中的改变的相关性。表现出同被神经营养组合物抑制的RDS行为有统计学显著(例如p＜0.05)相关性的RDS基因多态性被鉴定作为诊断更可能利用神经营养组合物成功治疗个体的标志。在表4中给出了RDS治疗组合物成分的总体配方，而且考虑所列的一个或多个成分将在治疗表现出此中所描述的一个或多个RDS行为的人中是有效的。此外，表6-16含有对此中所描述的特定的RDS行为的治疗中优选的特定配方。而且，对于特定的成分如何影响由兴奋剂(可卡因等)、阿片剂和镇静-催眠剂所诱导报偿的简要示意图见表17-19。对于RDS行为的联合遗传学诊断的治疗方法的具体实例描述于下面：碳水化合物暴食或抗肥胖。关于同碳水化合物暴食和成功治疗的遗传学联系，发明者目前正测定许多先证者的基因型，并提供受试者每天6个PHENCALTM配方的胶囊，而且测定在90天的阶段所失的磅数，碳水化合物暴食评分，以及在接下来的6-8个月后确定体重的再增加。这将对照安慰剂组进行。通过研究将确定各种基因型下是否发生最大的改善。对于肥胖症的研究，发明者将确定下面的基因和可能其它的以及它们各自的多态性，此中已经提供的同用PHENCALTM成功治疗有关的有：D1、D2、D4、DAT1、DβH、COMT、MAOA(x)、TDO2、APO-D、染色体-2标志、UCP-2、CNR1、GABAB3、HTR2A、HTR1A和nNOSla(见表5)。具体操作：对PHENCALTM和含有烟酸铬盐的变体的根据基因型不同的临床反应研究参与者。在该研究中的参与者将为病态肥胖者而且体重在理想体重的130-180％之间或者对于女性具有34％的身体脂肪以及对于男性具有28％的身体脂肪。参与者将在18-65岁的年龄之间。患者如果具有高血压、糖尿病或其它衰弱性疾病将被排除。 研究设计。该临床实验将是一个受试者的双盲安慰剂对照研究，同相配的安慰剂(由Weider营养组，盐湖城，Utah制造)相比他们被给予每天6个PHENCALTM胶囊(对于总体配方见表4，而对特定配方见表7)。这将是一个14wk研究。前两周包括深入的病情检查，包括血液筛选和口腔拭子DNA收集以及磅秤体重检测。一旦受试者进入本研究而且签定了一个标准的书面协议，则将由独立的地方肺实验室利用Collins Helium稀释肺功能单位(Warren E.Collins公司，Braintree，Mass.)来测定残余肺容积。将利用同水压称重高度相关并具有0.96到0.99间的再测试可靠性(Ward等，1978)的Whitmore容积仪(Whitmore Eenterprises，San Texas)进行水下测试(替代方法)。将使用一种校准至1/10磅的Deteco商用平台磅秤(8850型，Deteco Scale公司，Web City，Missouri)来获得磅秤体重。此外，发明者将利用双能量X线吸光测定法(DE&A)测骨密度。 在完成所有这些测试的2周期间内，将除了他们的基因型(它们将保密直至准备对研究进行分析)外的测试结果提供给受试者，并随机选择预先编码的含有PHENCALTM或其相配的安慰剂的瓶子中的一个。受试者将被要求每天服用6个胶囊-在早餐、午餐和晚餐吃饭前大约1小时服两个。制造者将作为管理员，并将在分发前编码每批。研究者、分发产品的研究技术员或受试者中将无人知道哪个编号对应PHENCALTM或相配的安慰剂。同其它的一些研究特别是单用或联合d-氟苯丙胺或芬特明来完成的那些不同，没有提供饮食或锻炼信息而且受试者只要他们严格地按照所开处方服用补充剂则将被要求在测试期间进行任何他们希望的活动。(在一特定数量的受试者中，发明者可能加入由Dr.Gilbert Kaats，San Antonio，Texas发展的“最适健康饮食计划”)。受试者将每周到中心来选另一瓶补充剂或安慰剂，并测定磅秤体重。在测试阶段的总结时(从服用胶囊开始的额外的12wk)，受试者将完成一个最后身体组成测试。将所有资料进行计算机处理并将由德克萨斯Houston-San-Antonio的德克萨斯大学健康科学中心的计算机化研究系进行分析。在分析时，管理员将被要求公布编号。将由他们自己报告的产品使用情况计算所耗PHENCALTM和安慰剂的实际数量。 在该研究中，主要的结果衡量将是在接受安慰剂或PHENCALTM的受试者间不同的身体组成平均改变的比较。将评价PHENCALTM而无铬盐以及含有吡啶甲酸铬盐、烟酸铬盐或两者都有的PHENCALTM。将在根据基因型划分的小组中比较平均身体组成变化。如上面所描述的，如早些所讨论的由Comings利用的方法，用标准多基因回归分析来分析所有检测的基因间的一些单倍型(见关于基因分型细节的OBKITTM)。 抗吸烟。利用NicorestTM配方，根据发明者的基本计划对许多重度吸烟者测定基因型。在每天6个NicorestTM胶囊到90天的治疗方案后，将根据舒服直至戒烟；戒断症状(包括抑郁)；复发来衡量结果。对应所有上面的基因来评价该资料。根据Comings等(1996)以前的工作，将采用完整的吸烟史(见关于基因分型细节的NICOKITTM)。 具体方法：AlcotrolTM和CocotrolTM作为基因型的函数。研究将包括将被给予抗酒精和抗可卡因配方的门诊病人，而且将根据早期解毒戒断症状、和通过没有回到治疗方案中或已知回到药物选择来测定的复发率来衡量结果(见表5)。 受试者。在该研究中，将利用明尼苏达多相人格调查表(Minnesata Multiphasic Personality Inventory)(MMPI)和经同意而进行的血液分析(CBC/SMACO24)对所有患者进行评价。在研究的结束没有采取进一步血液测试。分组为：酒精-AlcotrolTM；酒精-安慰剂；兴奋剂滥用者(可卡因)-CocotrolTM；兴奋剂滥用者-安慰剂。 研究设计。对于依赖性评价，将作为可能的协变量测试年龄、体重、性别、种族和进入BAL。在住院患者治疗处、医生、护士和受试者中以及资料收集员均无人被提供关于哪个受试者接受AlcotrolTM或CocotrolTM或相配的安慰剂的信息。剂量为每个配方每天两个胶囊(见表8和9)，在饭前一小时分剂给予。测试项目皮肤电导水平(SCL)。皮肤的电特性已经被广泛地用于情绪反应的评价中。该技术已经证实作为患者中应激水平(例如，焦虑或发怒的程度)的一种检测是非常可靠的。如此，这是患者中应激水平的一个间接的检测。SCL，皮肤电流阻抗(GSR)的倒数，监测由微欧姆测定的绝对皮肤电导水平(Edelberg，1972)。在定位和通过交感活化导致皮肤电导率增加的焦虑反应间存在相关性。因此，电导的降低同自我觉醒的降低相关(Luthe，1969)。为进行这些检测，将Autogen 3000连接至每个患者的优势手的中间三个指头上，并获得一个读数。对于每个所选进行研究的患者在非预定的时间进行检测以便患者不会意识到何时他/她将被检测。 临床检测。身体评分(同酒精的临床研究所戒断评价[CIWA-A]一致)和BESS评分是在整个这28天留在住院患者治疗中心期间用于每个患者的主观检测。身体评分和BESS评分均已经描述过(Blum等，1989)。在治疗过程中，将由临床指导者、医生和临床护理指导者每天观察这些因素的改变，而且将讨论他们的观察并协调至达成一致。进入时每个患者均被分配一个5的基线评分值。每天将在一从6-10的改善范围内和从0-4的倒退范围内注明改善或倒退，而5指同进入状态无变化。 基因分型。如在本申请的SUDKITTM中所描述的，获准进入临床的每个患者将被给予DNA-口腔拭子检测。所有基因型将对包括医疗指导者的所有人员保密。当准备分析资料时，为了统计学的目的将基因型仅仅提供给德克萨斯-Houston/San-Antonio的德克萨斯大学计算资源系。待测的基因包括：D1、D2、D4、DAT1(10/10、9/9)、TDO2、nNOS1α、CNR1、GABAB3、HT2R、MAOA(X)、COMT。 资料的统计学分析。将同安慰剂对比对单独酒精和兴奋剂滥用者组和联合组分析AlcotrolTM和CocotrolTM治疗的效果。最重要的是，发明者将评价对应激的治疗反应，临床检测包括身体评分和Bess评分，作为基因型的函数。具体操作：在ADHD先证者中HyperGenTM作为基因型的函数研究参与者。发明者在一个双盲安慰剂对照的研究中给予利用ADHD量表、TOVA测试和CCPT门诊诊所诊断的ADHD儿童每天6个HyperGenTM配方的胶囊。发明者然后比较前和后测试的测试评分以及结果同所研究的各种基因的相关性。该研究包括在两个地点(德克萨斯和田纳西)的门诊诊所中的ADHD受试者。已经通过大量的心理测试包括TOVA和ADHD量表(Cull和Blum，1997)以及Wisconsin卡片分类测试诊断了受试者。参与者具有AxisII诊断的精神病状况排除的阴性历史。在测试时所有受试者均没有开药，而且每个受试者均被要求签署一个书面的同意和协议来按照方法服用胶囊。 研究设计。受试者进行两次完整的测试(包括TOVA、Cull/BlumADHD量表和表现任务(见下面))，其形成一个测试-再测试模型。在第0天进行最初测试(前测试)然后90天后重复一次(后测试)。在两次之间，受试者被要求以每天6个胶囊的剂量(在早餐、午餐和晚餐大约饭前1小时各服2个)服用HyperGenTM或者一种相配的安慰剂。HyperGenTM的组分示于表12中。这是一个双盲安慰剂对照研究，而且制造商持有预先编码的信息，其在研究结束时提供给统计学家。工作人员或受试者中无人知道关于编码的瓶子的信息。 表现任务。使用两个表现模型来诱发电生理反应：空间定位。这是一个反应时间任务(SOT)，(Posner等，1988)其中引发提示呈现于左侧或右侧视野。比较当提供或不提供引发提示时的反应时间。通过反应时件间的比较，其使得可以评价个体在视野间平滑转移注意力的能力。在本研究中，任务是有结构化的，所以其允许评价注意力过程的更基本的阶段，其同更深层的注意力操作相关，而且趋向于在注意的更自动阶段上负载更重(Defrance等，1993)。 应急持续表现。应急持续表现任务(CCPT)是一经典主题的变体，其并入选择性和持续性注意力的因素。分析该任务以确保表现的质量来代表注意力过程的更受控阶段。在屏幕的中心一次出现一个字母。基本上，要求个体用他优势手通过点鼠标左键(右手人群)对一特定的字母顺序作出反应：例如，如果立即由另一个“T”跟上上一个“T”。在一对“T”中的第一个“T”用作一个警告提示，第二个为“T”为靶。所有其它字母被认为是干扰物，其应被受试者忽略。资料的基本计算是根据以前的工作(Defrance等，1997)。值得注意的是，前额皮质似乎是参与持续注意力和努力最重的，关于该任务上的总的表现其为重要的因素而且对兴奋剂药物非常敏感(Sostek等，1980)。 记录方案。如所描述的(Defrance等，1996)，参考电极连接在耳垂(A1-A2)，由28个有效记录位点记录EEG。每个刺激出现的开始引发800msec。从中构成ERP的EEG采样：在每个信号时间中包括100msec的刺激前采样，其用于基线校准。 资料分析。基本分析同以前的工作(Defrance等，1997)而且大体上包括三个参数的评价，其中每个可能根据个体注意力过程的效率而不同。这些参数为：ERP成分中的潜伏期、幅度、对称性(空间分布)(Defrance等，1996)。 该工作可能使出于HyperGenTM的注意力过程改变同已经表明同ADHD相关的等位基因(如前面所讨论的以及在该申请中所描述的HYPERKITTM中所表明的)关联。至少预期携带DRD2A1等位基因、DβH B1等位基因、DAT1的VNTR10/10重复以及TDO2、MAOA(X)和HTR1A基因的多态性的受试者将表现出最强的反应。 抗暴力和攻击。由于已经发现在“病理性暴力”和多巴胺能多态性(即DRD2和DAT1等位基因)间的相关性以及同分裂样和回避行为间的相关性，所以评价攻击配方的使用同如在表14和15中所描述的这些行为是合乎逻辑的。剂量将是每天6个胶囊，标准安慰剂作对照。结果的衡量将是在各种先证者(即青少年和犯人)中非动机爆发次数的降低以及敌意降低的大体平静。将结果值在6个月的时间框内同上面所描述的基因型(见TEMPKIT)关联。在该研究中，发明者将利用同表14或15相应的配方。该研究将在Larned Kansas的青年中心中的40个监禁的青年中完成。 实施例13用于多基因障碍中基因鉴定的一种多重累加性关联技术(MAA)：对于ADHD和共发病障碍的结果ADHD是一种由大部分儿科心理学家和精神病学家治疗的最常见的障碍，据估计存在于百分之2到8的学龄儿童中。有清楚的证据表明ADHD是一种器官的、神经和/或遗传学障碍。同对照相比，ADHD或多动儿童的父亲具有较高的ADHD、酒精中毒和反社会人格障碍(ASPD)的频率，而母亲具有较高的ADHD、酒精中毒和“癔病”或癔病人格的频率(Morrison和Stewart，1971；Cantwell，1972)。ADHD儿童的同胞具有较高的ADHD的频率(Augest和Stewart，1972；Pauls等，1983；Weiner等，1977)，特别是如果父母中一个具有ADHD或如果儿童是同卵双生(Hechman，1994)。在同胞与半同胞间这些行为的比率在从2.0到5.2的范围内，同ADHD的遗传学病因学一致。同正常儿童相比，父母中一个具有ASP的儿童在ADHD、发怒和发脾气的频率上具有显著增加(Cadoret等，1978)。 同对照亲属的8％相比，ADHD先证者更多的亲属具有ADHD。对于重度抑郁障碍、对立违抗障碍(ODD)、品行障碍、反社会人格障碍、酒精依赖、药物或酒精依赖、包括广泛性焦虑障碍的焦虑障碍也有显著增高的风险(Biederman等，1990)。ADHD和情绪障碍可能拥有相同的家族易感性(Biederman等，1990)，具有品行障碍的ADHD可能是ADHD的一个不同的亚型(Farone等，1993a)，而且ADHD和焦虑障碍(Hodge等，1986)以及ADHD和学习障碍(LD)(Farone等，1993b)在家族中独立传递。 很长时间以来已经观察到多巴胺代谢的缺陷参与ADHD的病因学。边缘系统(腹侧被盖区)的多巴胺能神经元的损伤在啮齿类中导致多动、反应过度、对应激反应差以及一系列其它障碍(Lemoal等，1976；Lemoal等，1991)。刚刚出生后额叶多巴胺能神经元的化学破坏产生一种对刺激剂反应的ADHD的动物模型(Shaywitz等，1976；Shaywitz等，1991)。在具有Tourette障碍(TD)的儿童中检测到低水平的HVA(Cohen等，1979k；Butler等，1979k)。在ADHD的儿童中报道了低CSF HVA(Shaywitz等，1979k)，然而，也报道了在CSF HVA和ADHD的多动和品行障碍的评分间的正相关性。大脑影象研究表明在ADHD中富含多巴胺的纹状体中有缺陷(Comings等，1991k；Noble等，1994k)，以及在ADHD和TD中额叶的功能低下(Zametkin等，1990)。研究已经表明在缺少多巴胺转运蛋白或DRD3基因的基因敲除小鼠中的多动症。多巴胺能激动剂已经被成功地用于ADHD的治疗中。 发明者的总的假设是ADHD为一种由于影响多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、GABA和其它神经递质的基因的累加效应的多基因障碍。所涉及的一些特定的基因为多巴胺基因(DRD1、DRD2、DRD3和DRD4受体基因、多巴胺β羟化酶以及多巴胺转运蛋白)；去甲肾上腺素(NE)和肾上腺素(EPI)基因(ADRA2A和ADRA2C受体、PNMT、去甲肾上腺素转运蛋白、MAOA、COMT)；5-羟色胺基因(TDO2、5-羟色胺转运蛋白、5-羟色胺受体基因)；GABA基因(GABA受体基因GABRB3及其它)以及还未鉴定的其它基因。 发明者检测了三个多巴胺能基因DRD2、DBH和DAT(Comings等，1997b)，三个肾上腺素能基因DBH、ADR2C和ADR2C(Comings等，1998a)，以及雄激素受体基因AR，加上DRD2和5-羟色胺转运蛋白基因，HTT(Comings等，1998b)对于ADHD和其它共发病障碍的累加性效应。这些研究证明两个原则：第一，当将受试者分成代表这些基因的0、1、2、或3个中有变体存在的组时，在QTV的大小上存在一个渐进性的增加，其比对任何单个基因的相关性更显著。第二，这些研究表明该技术可以用来鉴定通过增加QTV评分而在表型中发挥作用的基因，以及由于它们降低QTV评分而在表型中发挥最小的或可忽略的作用的基因。 发明者已经扩大这些原则来检测在ADHD中的合计29个不同基因的累加性作用。发明者已经命名这为多重累加性关联(MAA)技术。发明者已经检验了几个关于MAA技术的假设。由于不同的QTV可能在评分的范围和大小中变化非常大，为了可以进行在不同QTV上多个基因大小效应的比较，发明者已经利用回归相关性r、以及所解释的方差r2的百分比对结果进行分析和绘制。下面是一些假设以及引入这些研究中的方法。 用于ADHD和其它行为研究的MAA技术是基于这种假设，其认为大多数精神病障碍是从双亲遗传影响多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、GABA、NMDA和其他神经递质的基因的许多变异等位基因的结果(Blum等，1990；Comings等，1996a；Comings等，1998a)。在该报道中发明者选来检测的候选基因是基于该假设的。基于以前表明它们在行为表型中发挥作用的研究选择同神经递质无关的基因。对于筛选所添加的一个原则是同必须是可提供的候选基因相关的有用的多态性。 第二，双胞胎研究表明大多数多基因障碍，包括ADHD和行为障碍，百分之50到90是遗传的(Sherman等，1997；Slutske等，1997)。由于每个基因负责仅仅百分之1到2的变异，所以简单的数学表明必须涉及至少20到40个基因。在一给定的个体中数量可以更小。第三，为避免环形析因，表明在由发明者或他人所研究的受试者的一独立的组中对于每个基因的基因型的评分具有有效性是重要的。发明者所检测的基因列于表65中。“证实的”列指那些在受试者的一个独立的组中所用的评分已经被证实的基因。第四，用0、1或2中的一个值对每个基因评分。例如，如果涉及一个双等位基因多态性而且独立的研究表明1等位基因的显性，则评分为11或12＝2以及22＝0。如果独立的研究表明基因型为共显性，则评分为11＝2，12＝1以及22＝0。将一个类似的三个评分技术用于重复多态性。这便于每个基因的加性效应的测试而且使得可以以一0到2的相似的尺度对每个基因评分。第五，由于多基因障碍是常见的，所以许多基因被涉及的事实表明所涉及的遗传学变体本身必须是很常见的。由于此，发明者希望利用多态性和基因型分群来使评分为1或2的受试者的百分比最大化。这些结果示于表65中％1，2列之下。注意在大多数病例中，1+2百分比的总和大于百分之25，而且通常大于百分之50。 表65MAA技术检测的基因基因 多态性 基因评分 ％1， 2 证实0 1 2多巴胺基因1.DRD1 RFLP DdeI 12，22 11 -，12 是(Comings等.，1997b)(Cichon等.，1994)2.DRD2 RFLP TaqI A(Grandy等.， 11，22 12 -，36 是(Blum等.，1995；Comings和1989) MacMurray，1998)3.DRD3 RFLP McsI(Lannfelt等.，1992) 12 11，12 -，47 是(Crocq等.，1992；Comings等.，1993；Asherson等.，1996)4.DRD4 SS重复(Lichter等.，1993) 其它 任何6-8 -，52 是(Comings等.，1997a)5.DRD5 DN重复(Ravindranathan等.，2151/21513151/3151 25，61 是(未发表)1994)6.DAT1 SS重复(Vandenbergh等.，1992) x/x 10/10 42，51 是(Cook等.，1995)是(Blum等.，1997)5-羟色胺基因7.HTT 启动子插入/缺失(Collier SS LL SL 27，47 是(Kauck等.，1997；Lesch等.，1996)等.，1996)8.HTRIA MR(Bolos等.，1993) 127bp 其它 -，24 是(未发表)9.HTR1Db RFLP HincII 12，22 11 -，59 是(Lappalainen等.，1995) 基因 多态性 基因评分 ％1，2 证实0 1 210.HTR2A RFLP Mspl(Arranz等.，1995； 11，22 12 -，51 是(未发表)Williams等；1996)11.HTR2C RELP HinfI(Lappalainen等.， 其它 M1，F11 -，79 是(未发表)1994)X12.TDO2 RFLP BslI(Comings，1995) GG GA，AA -，5 是(Comings等.，1996)去甲肾上腺素基因13.DBH RFLP TaqI(Wu等.，1997) 22 11，12 -，79 是(Wei等.，1997)(未发表)14.ADRA2A RFLP MspI(Lario等.，1997) 11 12 22 38，7 是(未发表)15.ADRA2C DN(Riess等.，1992) 杂合 homo**-，27 是(未发表)16.NT RFLP MnlI***(Stber等.， 22 11 12 45，431995)儿茶酚胺代谢基因17.MAOA SS重复X(Hinds等.，1992) 其它3320****-，65 是(Gade等.，1998)18.COMT RFLP NlaIII(Lachman等.， 22 12 11 51，74 是(Lachman等.，，1996)(未发表)1996)GAGA基因19.GABRAA3 DN(Hicks等.，1992)X 其它3168# -，67 是(未发表)基因 多态性 基因评分 ％1，2 证实0 1 220.GABRAB3 DN(Mutriangura等.，1992) het ＜188/＜188 39，14 是(Gade等.，1996)(未发表)3188/3188大麻酯受体基因21.CNR1 SS重复(Dawson，1995)25/2525/其它 其它 43，10 是(Comings等.，1997c；Johnson等.，1997)烟碱胆碱能22.CHRNA4 SS重复(Weiland和 x/x x/9 9/9 32，7 是(未发表)Steinlein，1996)NMDA受体基因23.NMDAR1 RFLP HpalI*(Rupp等.，1997) 11 22 12 10，44 是(未发表)脑啡肽基因24.PENK SS重复(Konig等.，1996) 其它2178/2178 -，64 是(Comings等.，1997d)雄激素受体基因25.AR GGC(Sleddens等.，1993； 其它216### -，58 是(Coetzee和Ross，1994；lrvineSleddens等.，1992) 等.，1995)γ-干扰素基因基因 多态性 基因评分 ％1，2 证实0 1 226.INFG RFLP NlaIII(Wu和Comings， 11 12 22 50，27 是(Comings等.，1998c)1996)27.CD8A SS重复(Polymeropoulos等.， 142/142 其它 -，73 是(未发表)1991)早衰素-128.PS-1 RFLP BamHI(Scott等.，1996) 12 11，22 -，54 是(未发表)CRF基因29.CRF RFLP XmnI(GDB) 11 12 22 8，2 是(未发表)表65说明X＝X-连锁的*homo 154＝＜154bp纯合性以及3154bp纯合性；hetero＝杂合子**homo 183＝＜183bp纯合性以及3183bp纯合性；hetoro＝杂合子***A1970G****2＝男性3320bp。女性任何3320#2＝男性中3168，女性中3168/3168，0＝其它##2＝a-c/a-c或d-g/d-g纯合子，0＝杂合子###2＝男性216重复而女性216/216，0＝其它MR-单核苷酸重复；DN二核苷酸重复；SS短序列重复；RFLP-单碱基对多态性(限制性片段长度多态性)未发表-来自发明者实验室的在一独立的受试者组中该基因和多态性对一个或多个其它表型的效应的未发表的观察。 GDB-基因组数据库第六，如果在多基因障碍中所涉及的遗传学变体是常见的，它们必须从根本上同引起单基因障碍的那些不同，即它们必须仅仅导致基因表达中度的改变，因为如果它们引起基因表达重度的改变则它们可能引起单基因障碍(Comings，1998b)。基于这些观察，发明者已经表明通过形成Z-DNA的可变的长度，常见的二核苷酸重复多态性本身在多基因遗传中发挥一个重要的作用(Comings，1998b)。这些重复是大量的，等位基因是普遍的，而且所形成的Z-DNA对基因表达发挥一个适度的作用。一个有意义的表型效应可以仅仅通过将在许多不同功能相关基因处的变体的效应加到一起来产生。对于本研究其影响为当存在时发明者特别对利用短的串联的重复多态性感兴趣，而且任何单碱基对多态性可能同一个或多个与该基因相关的短的串联重复的等位基因是连锁不平衡的。由于后者，发明者假设任何单核苷酸多态性，即使其同外显子或启动子无关，可能为MAA技术提供有价值的信息。第七，为检测影响一给定神经递质或功能组的两个或多个基因的加性效应，基于每个单个基因评分的简单相加设立一称为多基因(PG)的虚构变量。检测在一给定功能群中基因的各种联合对方差百分比的效应使得可以鉴定对一定量评分具有加性效应的基因的亚群。然后将该群基因用来形成一个在不同功能组间检测基因加性效应的反式多基因评分(TPG)。PG或TPG评分越高，一个体拥有的表型相关基因变体的数量越多。 第八，如在以前的研究中(Comings等，1996b；Comings等，1998a；Comings等，1998b)，线性回归分析用来检测加性的基因评分。这使得可以计算r2或被检测基因贡献于性状的方差的百分比，只要F来估计效应的大小，而p是效应的显著性。一个基因解释仅仅一个性状大约百分之1的方差的事实并不意味着该效应是不重要的。依因子的数量，其可以提供一表型效应的高达百分之10(r)的可预测性(Rosenthal和Rubin，1982；Ozer，1985)。第九，由于各种行为评分具有不同的大小范围，所以将累积的r2值而非行为评分用来提供在不同表型间29个基因的效应的精确比较。 第十，发明者已经选择来首先检测基于DSM-IV(美国精神病协会的诊断和统计学手册IV，1994)标准的注意力缺陷多动(ADHD)评分。发明者已经利用通过比较具有不同群基因型的个体中ADHD评分的均值来利用全范围评分的方法，而不是强调一个两分的诊断。第十一，有两个潜在的方法用于回归分析：单变量和多变量。对于单变量分析，将每个基因的评分相加来产生一个单个的评分，并确定在该评分和QTV之间的相关性。这是0、1、2、3评分方法的扩展。该方法的优点是只有当一个或多个基因对QTV具有加性效应时r值才增加。当加入具有减性效应的基因时，r降低。这对最终r和r2值的确定是保守的。然而，由于将所有的基因评分合并成一个单个的变量，所以不管所加基因的数量自由度通常为1。关于p值这是非保守的。 对于第二种方法，在依多变量回归拟合中评价每个单个基因评分并同分析QTV的相关性。由于随着每个基因的加入自由度增加，所以其对于p值是保守的。然而，由于加性和减性基因均对r值有贡献，所以这种方法对于不论基因在其效应上是加性还是减性的而均增加的r和r2值是非保守的。 发明者由于两个原因而选择了单变量方法。第一，因为当加入对QTV没有贡献的基因时r和p值均降低，所以其更保守。第二，由于基因由一单个自由度所代表而不考虑所检测基因的数量，所以其具有同时检测几百个基因的效应而不丢失一个力的潜力。 第十二，为检测大多数致病性的障碍同ADHD具有相同的基因的假设，发明者还检测了同一群的29个基因在对对立违抗障碍(ODD)、行为障碍(CD)、抽搐、学习障碍(LD)和其他QTV的定量评分上的加性效应。对于大于14岁的受试者，发明者还检测了对酒精滥用/依赖、药物滥用/依赖和吸烟的QTV。第十三，这些致病性障碍的检测还使得发明者可以检测这种假设(Comings等，1996b；Comings等，1996a)，认为除了共用的基因外，不同的致病性障碍利用一些基因以及对特定表型唯一的基因的组合。第十四，为探索对于在一单个基因和一给定表型间的相关性，是否一个p＜0.05的显著性水平在是否那个基因具有一加性效应上具有任何意义，发明者检测了在关于是否它们在表型评分上具有一加性或减性效应的145个基因-表型相关性的r2和p值间的关系。最后，在一个利用所有候选基因的最初的操作鉴定出那些具有加性效应的后，渐进性地将每个加性基因加到一个新的TPG评分中，并分析同问题中的QTV的相关性。这提供了可以通过只利用那些被鉴定为对问题中QTV有贡献的基因而获得的总体r2的一个估计。 一个加性评分的优点。一加性基因评分的利用发掘出许多多基因遗传的最唯一的方面——不同基因的加性效应、不同基因的减性效应、杂种优势和上位性的作用以及当在任何给定的个体或个体的群中许多不同基因可能贡献同一表型时，仅有那些基因的一个亚群可能存在这个事实。最重要的是，该方法可以补偿在不同个体中不同群基因的存在。因此，许多次一个相关研究被一些而并非全部的后续研究所重复。这是因为这样的事实，即该基因仅对一小百分比的方差有贡献而且基因的一个群可能参与一个受试者组而另一群参与一不同的受试者组。一个同等有效的结论是不同的基因群在不同的个体群中能够产生相同的表型，而并非暗示一个或另外的结果是不正确的。由于加性评分衡量所涉及基因总群的效应，所以MAA技术在不同的受试者组间可能是更加可重复的。为了给出一个特定的例子，虽然DRD2(TaqIA1等位基因)(Comings等，1996b；Blum等，1998)、DRD4(48bp7个重复)(Lahost等，1995)、DBH(TaqI B1等位基因)(Comings等，1996b)、和DAT1(10个重复等位基因)基因的变体(Comings等，1996b；Cook等，1995；Gill等，1997；Waldmaqn等，1996)均参与ADHD的病因学，但每个可能在一些受试者组而非其他的中具有一显著的效应。然而，如果对于每个基因的生理学效应是相似的(在多巴胺代谢中的改变)那么对于所有四个的加性评分应该证明是在所有ADHD受试者的组中一致而且显著高于对照，表明其是一个在多巴胺代谢中普遍的遗传学缺陷而不是任何在ADHD病因学上重要的单个基因。对于在不同神经递质群间的加性基因采用相同的原理。加性评分的一个最终力度是通过利用基因的不同组合可以将一个最大信息群优化为一给定表型的鉴定。同单个基因的最小效应不同，这样一个优化过的群可以提供重要的预测和诊断价值。 假设。第一个假设为，由于多基因障碍涉及多个基因的加性效应，所以MAA技术将在所涉及基因的鉴定中比在一次一个基因的检测中提供更大的力量，而且只有那些具有一加性效应的基因的加入才能使r2和p值最大化。为检验此，发明者检测了在由274个Tourette综合征和62个衡量了ADHD严重性的对照组成的336个白种人个体中29个基因的效应。第二个假设为，如果检测两个独立的样本，发明者推测由于不同的样本可能利用不同的基因群，所以许多而并非全部的在一个样本中为加性的基因可能在再测试样本中是加性的，许多而并非全部的在一个样本中为减性的基因可能在再测试样本中是减性的，一些基因在一个样本中可能是加性的而在再测试样本中是减性的，以及对于两个样本多个基因的加性效应可能显著大于任何单个基因的效应。发明者还检测预期具有一个较小的N时r2波动可能更大。为检验此，将336个受试者随机分成两个独立的168个受试者的组，在每个组中具有相同的TS和对照受试者的数量以及相同的男性和女性数量。对于每个组检测了在ADHD的PG和TPG评分间的相关性。第三个假设为，当检测不同的表型时，发明者假设致病性障碍应该共用一些ADHD基因，而一些基因和基因的组合坑对于致病性障碍是唯一的。为检验此，发明者检测了29个基因对不同QTV——对立违抗障碍、行为障碍、抽搐、学习和其他障碍的加性和减性效应。 测试受试者。研究组由336个无关的、非西班牙白种人受试者组成。这些中，274个具有一Tourette综合征(TS)的诊断，而62个为对照。TS受试者来自在希望城医疗中心的Tourette综合征诊所。所有均符合TS的DSM-IV标准，而且所有均由发明者个人会见。虽然这些主要是在以前的研究中检测的相同的受试者(Comings，1995a；Comings，1990)，但当在先前的研究中所用的受试者的DNA标本被清除时，加入了一些新的TS先证者。发明者以前已经将发明者的TS受试者分成那些具有轻度(1级，慢性抽搐太轻而无须治疗)、中度(2级，足够严重而需治疗)以及重度(3级，在他们生活的一些方面上具有非常的效应)(Comings和Comings，1987b)。在TS受试者中，30％为3级，62％为2级而8％为1级。TS和ADHD为相似的障碍而且来到诊所的TS受试者的大部分具有致病性ADHD(Comings和Comings，1987b；Comings和Comings，1984)。TS受试者中，54％符合ADHD的DSM-IV标准。对照以及具有和没有ADHD的TS受试者的存在使得该组特别适合于检测作为一个连续的变量的在不同等位基因和ADHD间的相关性。TS受试者的年龄平均为18.0岁(S.D.13.2)。虽然大多数为较大的儿童和青少年，但29％为21岁或更大。对照的平均年龄为46.3岁(S.D.15.38)。TS受试者和对照均已经在他处描述过(Comings等，1996b；Comings， 1995a；Comings，1994b；Comings，1994a；Comings，1995b)。 每个对照和TS先证者均被要求填写一个基于诊断会见程序(Robins等，1981)、DSM-III-R(精神障碍的诊断和统计学手册，1987)和DSM-IV(美国精神病协会诊断和统计学手册IV，1994)对于一系列障碍的标准的调查表。问题询问是否在儿童和青少年时期DSM-IV ADHD症状从未或很少出现(评分＝0)，偶尔出现(评分＝1)或一直存在(评分＝2)。对立违抗障碍(ODD)和行为障碍(CD)评价也基于这些障碍DSM-IV标准的数量的合计。为评价具有学习障碍的问题的存在，询问受试者三个问题。1。你曾被置于一教育受阻(EH)、学习受阻(LH)或学习障碍(LD)的特殊班吗？2。你曾经上过游戏班吗？3。你曾经被告知你有学习障碍吗？每一个问题评分为不＝0或者是＝1而且相加形成LD评分。在加利福尼亚置于上述特殊班中的任何一个均需要一个或更多的教育心理学家的全面的评估，并且评价为比其同伴落后两年或两年以上。酒精评分(Comings，1994b)基于酒精滥用/依赖的DSM-IV症状的总结。抽搐评分基于一系列运动性和声音性抽搐存在的总结(Comings，1995a)。用于行为评分的特定的问题在他处已经有详细的描述(Comings等，1996b；Comings等，1998a；Comings等，1995a；Comings，1990；Comings，1994a；Comings，1995b；Robins等，1981；Comings，1995c；Comings，1994c)。对每个受试者均复查了调查表以保证它们的精确性。一个基于症状评价方法的调查表其精确性、利用性和敏感性已经由他人通过比较这样一种工具的使用证实(Gadow和Sprafkin，1994；Grayson和Carlson，1991)。 为检测在仅利用加性基因时即使随机评分的等位基因群可能表现出一显著的效应的可能性，根据在一算法中的一循环关闭随机数指定每个基因0和2的评分，其产生如在表65中所报道的那些的相同的最终等位基因频率。 发明者利用dstatt10.exe程(http；//odin.mdacc.tmc.edu/anonftp/)来提供在线性回归分析中获得的大F值的精确p值。利用线性卡方分析来检验在没有和那些具有ADHD的受试者间基因数量的显著性差别。利用了来自SPSS，Inc(芝加哥，IL)的SPSS统计学软件。 结果。表65列出29个基因的名字、多态性的类型、一个对于多态性的参考其包括测定基因型的技术、如何对基因型评分、评分为1或2的受试者的百分比、是否已经在一独立的受试者组中确证了基因型评分的方法以及何时提供的，其参考。为检验假设#1，通过线性回归分析计算渐进性PG和TPG基因评分对应ADHD变量的r、r2、F和p值(表66)。在目前的结果中，发明者将基因分成基于神经递质或它们影响的功能的组。 表66单个基因、PG和TPG评分对ADHD QTV的回归分析结果(N＝336)r r2F p多巴胺基因DRD1 .064 .0041 1.38 .240DRD2 .091 .0084 2.83 .093DRD3 .016 .0003 0.08 .772DRD4 .007 .0000 0.02 .901DRD5 .047 .0022 0.74 .388DAT1 .090 .0081 2.73 .099PG：D1+D2 .111 .0125 4.23 .040PG：D1+D2+D3 .095 .0092 3.08 .080PG：D1+D2+D3+D4 .084 .0071 2.39 .122PG：D1+D2+D3+D4+D5 .096 .0093 3.13 .078PG：D1+D2+D3+D4+D5+DAT .117 .0139 4.70 .031PG：D1+D2+D5+DAT(D) .144 .0208 7.10 .0081 r r2F p5-羟色胺基因HTT .103 .0106 3.57 .059HTR1A .071 .0050 1.68 .20HTR1Dβ .030 .0009 0.31 .57H7R2A .040 .0016 0.53 .46H7R2C .015 .0002 0.08 .78TDO2 .050 .0025 0.73 .39PG：HTT+1A .120 .0143 4.84 .028PG：HTT+1A+1Dβ .117 .0137 4.65 .032PG：HTT+1A+1Dβ+2A .115 .0145 4.92 .027PG：HTT+1A+1Dβ+2A+2C .118 .0139 4.71 .031PG：HTT+1A+1Dβ+2A+2C+TO .125 .0158 5.38 .021PG：HTT+1A++2A+TO(S) .126 .0167 5.68 .018TPG：D+S .192 .0370 2.83 .0004 r r2F p去甲肾上腺素基因DBH .087 .0077 2.57 .105ADRA2A .110 .0122 4.11 .043ADRA2C .154 .0238 8.14 .0046NET .081 .0066 2.23 .136PG：DBH+2A .130 .0170 5.79 .017PG：DBH+2A+2C .188 .0355 12.30 .00052PG：DBH+2A+2C+NET(N) .205 .0422 14.70 .00015PG：2A+2C .185 .0344 11.89 .00064TPG：D+N .249 .0624 22.23 .000036TPG：S+N .231 .0535 18.87 .00025TPG：D+S+N(DSN) .272 .0741 26.73 .0000040儿茶酚胺降解基因MAOA .156 .0244 8.35 .0041COMT .099 .0098 3.32 .069 r r2F pPG：MAOA+COMT(C) .182 .0333 11.51 .00077TPG：D+C .215 .0465 16.29 .00067TPG：S+C .213 .0453 15.85 .00084TPG：N+C .272 .0741 26.71 .0000041TPG：DSN+C .317 .1005 37.31 .000000028GABA受体GABRA3 .090 .0082 2.77 .097GABRB3 .081 .0066 2.21 .14PG：A3+B3(G) .119 .0143 4.85 .028TPG：D+G .178 .0318 10.97 .0010TPG：D+N+G .262 .0686 24.62 .000011TPG：DSN+G .281 .0792 28.14 .0000021TPG：DSN+C+G .329 .1087 40.72 .000000005 r r2F p大麻酯受体基因CNR1 .041 .0017 0.57 .45TPG：D+CN .149 .0223 7.62 .0061TPG：DSN+C+G+CN .333 .1109 41.64 .000000003烟碱胆能受体基因CNRA4(NC) .119 .0143 4.87 .028TPG：D+NC .179 .0320 11.06 .0010TPG：DSN+C+G+CN+NC .342 .1171 44.31 .000000001NMDA受体基因NMDAR1 .076 .0058 1.96 .16TPG：D+NM .163 .0267 9.17 .0027TPG：DSN+C+G+CN+NC+NM .350 .1226 46.67 .000000000 r r2F p脑啡肽PENK .034 .0011 0.39 .53TPG：PENK+D .137 .0187 6.37 .012TPG：DSN+C+G+CN+NC+NM+PE .351 .1234 47.03 .000000000(NT)雄激素受体基因AR .106 .0111 3.77 .053TPG：D+AR .168 .0284 9.77 .0019TPG：D+N+AR .271 .0731 26.36 .0000048TPG：DSN+AR .287 .0829 30.19 .00000078TPG：NT+AR .364 .1327 51.13 .000000000免疫基因CD8A .026 .0007 0.23 .63INFG .031 .0009 0.32 .57 r r2F pPG：CD+ING(I) .039 .0016 0.52 .47TPG：NT+AR+I .354 .1258 48.08 .000000000早衰素-1PSI .071 .0051 1.71 .191TPG：NT+AR+PS .348 .1212 46.06 .000000000促皮质激素释放因子基因CRF .071 .0050 1.67 .196TPG：NT+AR+CF .369 .1362 52.67 .000000000 多巴胺基因。检测了所有五个多巴胺受体基因和多巴胺转运子基因(DAT1)。其中，DRD2(Comings等，1996b；Comings等，1991)、DRD4(Lahoste等，1996；Swanson等，1998)和DAT1(Comings等，1996b；Gill等，1997)基因已经表明参与ADHD。DRD1、DRD2、DRD5和DAT1基因对ADHD评分具有最强的效应，其r2值在从0.0022到0.0088的范围内。分别的p值在从0.388到0.093的范围内。在本研究中虽然DRD4基因在ADHD中不发挥作用，但为确证以前的文献，发明者对该基因进行评分来强调较长的6至8个重复的等位基因，尽管发明者自己的研究表明这2个等位基因可能也是重要的(Comings等，1997a)。 PG评分显示DRD1和DRD2基因在它们的效应中是加性的，使得它们各自r2值的总和(0.0041+0.0084＝0.0125)与观察到的对于D1+D2的PG评分(0.0125)相同。发明者称这些为加性基因。相反，当将DRD3基因评分加入到那些D1+D2 PG评分中时，所获的r2(0.0092)低于对于DRD1加上DRD2基因的。因此，关于ADHD表型，发明者称这些DRD3为一减性基因。由于加入DRD4基因r2继续降低(0.0071)，其也被认为时一减性基因。由于在加入DRD5和DAT1基因后r2值再次增加，这些被认为是加性基因。同加性和减性基因均包括在PG评分中时的0.0138相比，当在PG评分中仅包括加性基因时，总的r2为0.0208。 基于这些结果，发明者制定了这个原则，即如果加入一个基因增加r2、增加F而降低p，则其在表型中起着一种加性作用，然而如果其逆转这些值，则其对表型具有一个减性效应。在这些研究的剩余部分中，发明者选择其而非一个武断的p值作为对于在PG或TPG评分中包括该基因的标准。因此，发明者选择DRD1、DRD2、DRD5和DAT1作为TPG评分的加性多巴胺能基因(D)群。这些四个多巴胺能基因一起负责ADHD评分方差的百分之2.08(p+＝+0.0081)。 5-羟色胺基因。对于六个5-羟色胺基因的r2值在从对于5-羟色胺转运子(HTT)的0.0106到对于HTR2C的0.0002的范围内。当将HTR1A基因加入到HTT基因时，r2值从0.0106增加至0.0143。当加入HTR1Dβ时，r2值降低，加入HTR2A基因后r2值增加，加入HTR2C基因时r2值降低以及加入TDO2基因时r2值增加。这表明HTT、HTR1A、HTR2A以及TDO2基因可能时加性5-羟色胺基因的最适群。这些基因的r2为0.0161。然而，由于对于HTR2A基因的r2值(0.0016)是四个中最低的，所以发明者还确定了对于HTT、HTR1A和TDO2的r2值。由于其较高(0.0167)所以将HTR2A基因置于5-羟色胺能基因的加性群之外。排除具有次低r2值的基因并未进一步增加加性r2。这些四个基因一起负责ADHD评分方差的1.67％(p+＝0.018)。当加入加性多巴胺能以及5-羟色胺能基因时，它们负责ADHD评分方差的3.7％(p+＝0.0004)。 去甲肾上腺素基因。对于四个去甲肾上腺素基因的r2值在0.0066到0.0122范围内。在此情况下，所有四个基因在总的r2值上具有一个渐进性的加性效应。它们一起负责ADHD评分方差的4.22％(p+＝0.00015)，表明去甲肾上腺素基因在ADHD中发挥比多巴胺或5-羟色胺或者多巴胺和5-羟色胺联合更重要的作用。事实上，两个去甲肾上腺素能α2受体基因本身负责几乎同多巴胺和5-羟色胺基因联合同样多的ADHD评分的方差(3.44％)。这些肾上腺素能基因在ADHD中的具体的作用在他处有提供(Comings等，1998a)。当联合多巴胺能加5-羟色胺能加去甲肾上腺素能基因的效应(DSN TPG评分)时，它们负责ADHD评分方差的7.41％(p+＝0.0000040)。 儿茶酚胺降解基因。两个儿茶酚胺降解基因对ADHD评分的r2值在从对于MAOA基因的0.0244到对于COMT基因的0.0098的范围内。当加入(C)时，它们负责ADHD评分方差的3.33％(p+＝0.00077)。当加入到DSN评分时，它们负责ADHD评分方差的10.05％(p+＝2.8×10- 8)。 GABA受体基因。两个GABA受体基因对ADHD评分的r2值在从对于GABRA3基因的0.0082到对于GABRB3基因的0.0066的范围内。对于两个联合的r2值是0.0143(p+＝0.028)。当同DSN和C评分联合时，它们负责ADHD评分方差的10.87％(p+＝5.9×10-9)。 其它神经递质基因。对于四个额外的神经递质基因的r2值为对于大麻酯受体基因CNR1的0.0017、对于烟碱胆碱能α4基因CHNRA4的0.0143、对于NMDA受体基因NMDAR1的0.0058、对于内啡肽原基因PENK的0.0011。当将每个加到前面的基因中时，ADHD评分方差的百分比渐进性地增加至11.09％、11.78％、12.26％和12.34％。对于整个神经递质相关基因(NT)群，p+＝3.4×10-10。 雄激素受体基因。由于发明者检测的所有的行为在男性中更常见，所以发明者还检测了AR基因。在他处提供了该基因在ADHD、ODD和CD中的具体作用(Comings等，1998b)。AR基因对ADHD评分的r2值为0.0111。当加到前面的基因中时，它们负责ADHD评分方差的13.27％(p+＝5.5×10-11)。 免疫基因。由于最近对免疫因子在ADHD(Warren等，1995)和TS(Swedo等，1998)中潜在作用的兴趣，发明者检测了两个免疫基因，γ-干扰素和CD8A基因。两者被证明是减性基因而且并未包括在加性群中。 其它基因。检测了两个其它基因，早衰素-1(PS1)和促皮质激素释放因子基因(CRF)。虽然对于两者的r2值相似(0.0051和0.0050)，但仅有CRF基因是加性的。当将所有的加性基因联合时，它们负责ADHD评分方差的13.62％(p+＝2.8×10-11)。 ADHD评分。图4示增加数量的变体加性基因对ADHD评分的效应。其表现出一种从对那些仅具有4或5个变体基因的1.0到对那些携带有15个变体基因的25.0的渐进性增加的趋势。对于在ADHD评分中一个渐进性增加的线性卡方检验的p值为＜10-8。图5显示对于逐渐加入所有所测试的29个基因的r2值。紧邻基因标记左侧得曲线斜率提供了那个基因对ADHD评分的相对贡献的提示。当斜率增加时，该基因对ADHD评分有贡献。斜率的角度越大，贡献越大。当斜率降低时，基因为减性的，而且同其它基因相比，在ADHD评分中发挥较小或不发挥作用，尽管最初的基因评分通常对评分为1或2的基因型表现一种较大的表型效应。已确定DRD1、DRD2、DRD5和DAT1多巴胺基因对ADHD评分有贡献而DRD3和DRD4基因则没有。5-羟色胺能基因中，HTT、HTR1A和TDO2基因对ADHD评分有贡献而HTR2A和HTR2C基因则没有。四个去甲肾上腺素能基因比任何其它神经递质组的基因对ADHD评分贡献都大。当包括所有29个累加性和减性基因时，最终的r2值为0.113，p+＝2.7×10-9。 发明者检验了如果将相同群的基因基于随机指定为等位基因，而且只利用同ADHD评分产生正相关性的基因，那么所获的r2可能是显著的这种可能性。结果示于图5的底部。由空的正方形表示出r2值的渐进性累加性效应，而由含有x的正方形表示出仅利用正相关性的累加性效应。共同利用累加性和减性基因的最终r2为0.0001。仅使用累加性随机基因的最终r2为0.0004。两者均不显著。此外，虽然随机PENK基因处的替代r2高达0.008，但当加入最后一个随机累加性基因(CD8A)时其降为0.0004。 为检验性别的潜在混淆作用，发明者分别检测了男性和女性。两组均表现出r2值的显著升高，其基本上被在每组中小数量的受试者的力度降低所清除。 因此，假设#1的检验表明29个基因的累加性效应产生显著高于任何单个基因的r2和p值，而且当仅利用累加性基因时r2和p值被最大化。假设#2的检验结果示于图6中。其表明所观察到的结果同假设的结果相符。14个基因在两群中均为累加性的，2个在两群中均为减性的，13个在两群中是不同的。大体上，在总群中累加性最强的基因，如DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、所有四个肾上腺素能基因(DBH、ADRA2C、ADRA2C、NT)、MAOA、COMT和AR基因是在两群中均为累加性的基因，而在总群中减性最强的基因，DRD3、DRD4为在两群中均为减性的。在两群中最明显不同的基因是CNR1、CNRA4、NMDAR1和PENK基因。例如，NMDAR1基因在组2中是相当累加性的，而在组1中则是减性的。然而，在两群中虽然N较小但r2渐进性增加，其对两组的最终p值＜+5.0×10-4。当只包括累加性基因时，两者均显著，p＜10-6。在总群中只利用那些对两组均为累加性的基因时，r2＝0.108，F＝40.82，p+＝5.6×10-9。当在总群中利用那些在两组中均是或仅在一组中是累加性的基因时，r2＝0.11，F＝43.71，p+＝1.5×10-9。这些结果进而用来展示当检测单个基因时在重复中的常见困难。相反，MAA技术在一系列条件下产生强的结果。图4、图5和图6显示共发疾病同ADHD享有相同的基因而且利用一些特异的基因这个假设#3的检验。 ODD和CD。检测了29个基因在ODD和CD评分的r2值上的效应。当累加性和减性基因均被包括时，对于ODD评分的最大的r2为0.0775，p+＝3.1×10-6，而对于CD评分的为0.0225，p＝0.0059。同样，通过观察易于鉴定对ODD和CD评分有贡献的基因。当仅利用累加性基因时，对于ODD评分的最大r2为0.10，p+＝3.2×10-8，而对于CD评分的为0.075，p+＝+3.7×10-6。对于ODD最重要的基因为DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、AR和CD8A。对CD最重要的基因为DRD1、DRD2、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADR2C、CHRNA4、AR和CD8A。因此，29个基因中的20个在ADHD中发挥作用，20个基因在ODD中发挥作用，而10个基因在CD中发挥作用。ODD基因同ADHD基因是既相似又不同的，而所有的CD基因均与对于ADHD评分中的相同。 LD和抽动。检测了29个基因对LD和抽动评分r2值的效应。当累加性和减性基因均被包括时，对于LD评分最大的r2为0.011，p＝0.054，而对于抽动评分的为0.014，p+＝0.029。当仅包括累加性基因时，对于LD评分最大的r2为0.043，p＝0.0005，而对于抽动评分的为0.061，p＝0.00005。同样，观察表明参与抽动评分的基因为DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1和CHRNA4。参与LD评分中的基因为DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADRA2A、ADR2C、MAOA、CNR1和CNRA4。因此，12个基因参与抽动，而9个参与学习障碍。 酒精或药物滥用/依赖以及吸烟。检测了在164个14岁以上受试者中对于酒精滥用/依赖评分的29个基因的测试结果。当N较小时，r2值存在较大的波动。因此，当仅检测成人时，易于区分累加性基因和减性基因。对于酒精滥用/依赖QTV，利用两群基因的最终r2为0.049，p+＝0.0044。然而，当只利用累加性基因时，r2值为0.14，p＝+7.5×10-6。如下面所讨论的，以前已经许多表明这些基因或神经递质系统中在酒精中毒中发挥作用。 药物滥用/依赖QTV(吸烟除外)的结果同酒精滥用/依赖的那些相似。然而，由于药物滥用比酒精滥用/依赖少见，所以r2值水平的幅度较低。主要的差别是HTR1Dβ和HTR2A、ADRA2C基因在药物滥用/依赖中是减性的，但在酒精滥用/依赖中是累加性的，而HTRC和NT基因在药物滥用中是累加性的，但在酒精滥用/依赖中是减性的，INFG在酒精滥用是减性的但在药物滥用中是中性的。吸烟更为常见，而且也检测了这些结果。此处，将QTV评分为曾经吸烟一个月以上＝1，从未吸过＝0。在受试者的该研究中，DRD2基因发挥重要的作用，其自己产生0.055的r2值。其它累加性基因为NMDAR1、PENK、AR和INFG。最终r2＝0.10，p＝0.00038。 其它QTV。发明者还检测了与ADHD常共发病行为的几个其它QTV。总的r2值、p值和主要的累加性基因如下：躁狂-r2+＝0.0721，p+＝5.8×10-6，DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、ADR2AC、GABRB3、CNR1、CHRNA4；分裂样-r2＝0.058，p＝8.3×10-5，DRD2、DRD3、HTR1Dβ、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、CNR1、CHRNA4；OCD-0.46，1.0×10-4，DRD1、DRD2、HTR1Dβ、GABRB3、CNR1、NMDAR1；广泛性焦虑-r2＝0.032，p＝0.001，DRD1、DAT1、HTR1Dβ、CHRNA4、PENK；以及重度抑郁-r2＝0.0271，p＝0.0025，DRD1、DAT1、HTT、HTR1Dβ、TDO2、CNR1、CHRNA4、NMDAR1。 所涉及基因的数量。为检测在有或无特定两分表型的受试者中变体基因数量的相对分布，发明者绘制了在不符合ADHD的DSM-IV标准和那些符合ADHD的DSM-IV标准的受试者间累加性变体基因的数量(图7)。变体的平均数量在无ADHD症状的那些中大约为10，而在具有ADHD诊断的那些中大约为12。在那些没有ADHD症状的中，分布在从3到14的范围内，而在具有ADHD诊断的那些中分布在从7到18的范围内。 累加性效应和p值。由本研究，发明者绘制了所有29个基因对5个定量评分(ADHD、ODD、CD、LD和抽动)的145个r2和p值结果，而且鉴定了对所研究表型为累加性的那些和减性的那些。这显示当一次一个地检测基因时，一个武断地设为＜0.05的p值与一个基因是累加性的而且对表型有贡献、或者是减性的对表型没有贡献的判断没有多少相关性。当单个检测时，大部分累加性基因具有大于0.05的p值而且许多具有在0.10到0.40之间的p值。虽然一个大于0.45的p值广泛地鉴定为减性基因，在0.12和0.45之间范围内的p值则一些为累加性的而一些则不是。 讨论。经常提出关于鉴定参与多基因障碍的基因的困难性的担心。在本研究中，发明者试图将多基因障碍的单一主要特征、许多不同基因的累加性效应转变为通过检测多个候选基因的累加性效应的优点。由于利用了多个关联研究的累加性和减性效应，所以发明者称其为多重累加关联技术。当利用连锁技术来检测复合障碍时，表明必须利用特别严格水平的显著性来避免假阳性(Lander和Krugyak，1996)。由于该建议，在表66以及图5和图6中发明者给出了全长而非缩减的p值。这表明利用MAA技术，29个基因和仅仅344个受试者，可以获得高达10-11的p值。 由于这是一种新的技术，所以仔细检查所用的统计学方法是合理的。其明显地愿意接受几个潜在的批评。第一个为如果仅在一个受试者组中进行研究，当设定基因评分来最大化其在给定表型上的效应时，简单地将那些基因评分加到一起可能产生越来越高的r2值。由于此，发明者在由发明者或文献中的其他人研究的独立的受试者组中仔细检验基因评分。如在表65中所示，所有的基因均满足该标准。对于一些基因，仅有一个变量评分。例如，对于具有两个等位基因多态性的基因，当1等位基因的频率低而因此很少具有11基因型时，22＝0和11或12＝2的评分是唯一的。 第二个潜在的批评是如果检测了足够的基因而且如果只利用了累加性基因，那么基于随机的基础获得显著的结果是可能的。为检验这个可能性，发明者设立了另一套评分，其中对每个个体的每个“虚拟”基因随机分配一个评分，设置其频率以与在观察到的结果中所发现的那些相配。逐渐加入阳性和阴性结果的效应示于图5中(空心正方形)。到第29个基因时为止，阳性和阴性结果彼此抵消而且最终r2为0.001。更重要的是，当仅利用产生正相关的随机基因时，替代r2值增加至对于PENK基因0.006的最大值。然而，加入最后两个阳性随机基因后，r2值回降至0.004，p＞0.25。这种减性效应可能是由于即使CD8A和CRF随机评分的效应是阳性的，但r2值在0.0000到0.0003的范围内，而且产生减性效应。虽然仅利用那些具有正r的相同过程的多重重复无疑可以最终产生一个显著的结果，但重要的一点是当利用在其它研究中已经独立证实同一表型效应相关的候选基因时，最终的p值明显高于(10-5到10-11)随机基因。 第三个潜在的批评是即使明显比由随机评分所预期的强，利用单变量回归以及仅包括累加性基因仍然抬高所获的p值。对于这个相当合理的批评有两种方法。第一个是所有基因研究的金标准是重复或多个独立群的检测。发明者建议对于MAA技术的一个合理的标准是累加性群应该包括在任何具有合理N的研究中被表明为累加性的所有基因。例如，在发明者自己的测试-再测试研究中，所选择的累加性基因群可能包括在任何一个群中为加性的那些。由于这些中的一些在一些研究中可能是减性的，所以这可以帮助来避免r2和p值人为的抬高。当这样做了时，最终的r2仍较大，0.11，而且高度显著，p＜2.0×10-9。 减性效应的原因。一个中度的减性效应可能是由于所研究基因负责的方差百分比相对小。例如，如果基因A的11基因型对ADHD评分具有非常小的效应，另一基因可能负责ADHD评分高于A11受试者的非A11受试者。结果，非A11受试者可能仍具有显著的症状，导致基因的减性效应。当检测许多不同表型时，减性效应的另一个原因可能出现。例如，基因的11基因型可能同ADHD显著相关，而22基因型可能同不同的表型如抑郁相关。结果，当评分为11基因型＝2时，这可能导致对ADHD评分的累加性效应但对抑郁评分为减性效应。 对复合障碍遗传学研究的意义。发明者相信这些研究不仅对精神病遗传学而且对广义的复合多基因障碍的遗传学具有许多影响。1.同单个基因相比检测多个基因的力度。这些研究对一次检测一个基因的关联研究的重复性问题提供了一些了解。其最可能是由于多个基因参与，没有单个基因是关键的，而且每个基因仅贡献方差的一小部分。因此，当一次一个检测基因时，一个基因将在一个研究中具有显著性而在另一个中则不。不能认为这是无尽挫折的来源(Moldin，1997)，或者甚至认为这些研究无一是正确的，这可以看作在复合障碍的遗传学中可预期的结果(Comings，1998a)。此处报道了对于145个利用基因和行为性状的关联研究结果的方差百分比和p值(除了酒精滥用/依赖)。这显示如果利用对于单个基因p＜0.05的显著性的常用标准，累加性基因的大部分将被排除。这还证明为何当利用p＜0.05的界值时对于两个实验室如此难以达成一致。如果产生0.0008到0.025的r2值的关联是来自不同实验室的事实上独立的研究，那么仅有6或20％会被认为阳性而其余的24个会被认为是阴性‘非重复’。然而，通过MAA技术，所有这些关联均被利用了。 由于多基因遗传的单一最显著的特征是多个基因的参与，发明者建议需要利用这个特征来鉴定参与复合障碍的基因(Comings等，1996b；Comings，1996a；Comings，1998a；Comings，1998b)。本研究证实了这个概念而且表明在多基因遗传中的力度来自多个基因累加性效应的检测。发明者还建议确定一个基因在给定的障碍中是否发挥作用的合适标准是其对于相关的定量评分具有加性还是减性效应。这可以通过列出如在表66或图5和图6中所示的结果而很容易鉴别。2.作为多基因遗传最佳方法的关联研究。当前，用来鉴定复合障碍中基因的最流行的方法由利用lod评分连锁的全基因组筛选、患病同胞对技术或单倍型相对风险技术。虽然这具有强大的内在逻辑，但重复通常是困难的而且基于这些研究(Pakstis等，1991)发明者基于累加性基因方法已发现在ADHD或TS中发挥作用的上述基因中有许多已被排除。虽然利用无关对照和显著受累先证者的关联研究具有检测多基因遗传的小效应特征的能力(Risch和Merikangas，1996；Comings，1998a)，但它们也苦恼于非重复性的问题。检测多个基因的累加性效应的MAA技术利用关联研究的能力而且有效地避免了非重复性的问题。这是因为其用一个对累积r2具有累加性效应的较低严格的参数来替代单个基因在p＜0.05处的显著性标准。该方法还更实用，由于利用相同的工具检测，单个无关先证者和无关对照的鉴定比受累同胞对的鉴定容易得多。在鉴定参与许多不同障碍的基因的努力中，已经建立了仅由受累的和不受累的同胞对组成的DNA库。通过包括单个先证者以及相当数量的用相同测试工具筛选的无关对照，病例确证的速度和这些库的发现基因的能力均可以明显提高。其效率可能通过允许不同的库共享相同的公开提供的所筛选对照而被最大化。如对于CEPH(人类多态性研究中心)(Dausset等，1990)样本，其可以通过要求在一给定时间段以后公开所有基因分型结果以便可以整理多个研究者的结果而进一步加强。 结果提供一个额外的理由解释为什么关联研究比基于家族的连锁技术更有力。其显示即使当利用这两个最佳分离群时，变体基因的总数仅轻度不同(10对12的均值)。这提示当在家族内进行比较时，同用实际上或内含地比较受累和未受累同胞对的lod评分、同胞对、单倍型相对风险以及TDT分析(Spielman和Ewens，1996)所发生的一样，差异甚至将更小。当问题被一次仅检测一个基因复杂化时，需要检测极大数量的受试者的相关基因，即使在临界lod评分或p值处。例如，目前即使有很大量的家族和同胞对，但行为障碍的连锁研究的大部分没有鉴定出特定基因。这同在图5和图6中的结果相反，其中利用不到350个受试者临时鉴定了20个对于ADHD的特定基因以及15个对于酒精滥用/依赖的特定基因，而且产生的资料使得可以估计每个基因对于每个表型的相对重要性。3.隐藏的人种分层问题。关于关联研究最常提出的考虑之一是隐藏的人种分层的潜在问题。由于下述原因MAA技术使这种顾虑最小化。虽然当检测单个基因时隐藏的人种分层可能发挥作用，但所有基因的频率将在相同的方向上变化是不可能。随着所检测基因数量的增加，隐藏的人种分层的潜在效应降低。4.检测许多基因的问题。通常在基因寻找和关联研究中出现的另一个反对意见是如果一个人关注足够多的基因，那么出于单纯偶然性一些将是显著的。当一次检测一个基因而且结束点为＜0.05的p值时，这特别有效。然而，多重累加关联技术是不依赖单个基因的p值的，而询问在其它基因的背景下一个基因是以累加性还是减性的方式对表型的r2有贡献。通过强调多基因障碍的这个特征，该技术固有地而且本质地包含大量候选基因的检测。这在对抽动、LD和酒精滥用/依赖评分的合计r2值的上下波动中可以看到。这表明可以加入上百的基因，而最终的r2值可能不断波动。然而，所检测基因越多，所鉴定的累加性基因数量越多，当利用该亚群的基因时最终的r2越大。因此，同检测每个额外基因时力度均丢失的一次一个基因的方法相反，累加性多重关联技术随着越来越多的基因被检测而增加。5.共发性障碍利用相关的基因群。即使ADHD是首要的表型，但许多ADHD基因对于相关表型如对立违抗障碍、品行障碍、酒精滥用/依赖、药物滥用/依赖、吸烟、OCD、躁狂、分裂样行为以及其它RDS行为的代表具有累加性效应。6.共发性障碍利用不同的基因群。除了利用相似的基因群外，共发性障碍可能由于它们利用不同的基因群而具有不同的表型。两个观察提示后者。第一，即使当仅利用累加性基因时，最终的r2值对于ODD、CD、LD、抽动和其它评分低于对ADHD的评分。如果发明者假设对于这些表型的每一个总的遗传学贡献是同对ADHD的相似的，那么一定涉及此处所检测的那些以外的基因来使r2值达到相当的水平。这表明除了共享的基因，这些共发性障碍还利用独特的基因。第二，包括累加性和减性基因的累积r2值线的斜率表明共发性障碍利用不同的基因群或不同的基因型。例如，MAOA基因对于ADHD评分是累加性的，但对酒精滥用/依赖评分是减性的。这提示MAOA基因对酒精滥用/依赖评分比对ADHD评分的重要性小。7.不同表型可以利用不同基因型。利用不同基因群的一个替代方法是不同表型可以利用不同基因型。再用MAOA基因作为例子，不是其在酒精滥用/依赖评分中的重要性小，而是其可能利用不同的基因型。作为另一个例子，抑郁和攻击通常同低的CNS 5-羟色胺水平相关联(Brown等，1982；Coccaro等，1989)而强迫行为同增加的CNS 5-羟色胺或受体敏感性相关(Insel等，1985)。因此，如果一个给定的基因型同抑郁/攻击正相关，而同强迫行为负相关是不令人惊奇的。这些观察提出是否基因评分可以对每个表型个体化的问题。发明者怀疑其应该，但这将需要在独立群的受试者中证实每个这样的评分。8. 利用不同的多态性。在该研究中，发明者仅利用每个基因一个多态性。其它多态性的利用或几种多态性联合成单倍型可以潜在地增加r2值。因此，此处所观察到的总的r2值可能实际上显著低估这些基因对各表型的真正的贡献。9.不同单个基因在不同表型中的比较效应。MAA技术最有力的方面之一是其能够鉴别不同基因的相对重要性。这可能是因为所有基因是在相同的受试者组中检测的。一个例子是AR基因的作用。紧邻对于ADHD(图5)、ODD和CD评分的AR基因左侧的r2曲线的斜率增加表明该基因在所有三中疾病中的相对重要性。相反，AR基因对于抽动和LD评分是减性的，没有作用，而对于酒精滥用/依赖评分是中性的。10.不同群基因在不同表型中的比较效应。MAA技术的另一个方面是其能够鉴定影响特定神经递质的基因群对于不同表型的重要作用。因此，四个肾上腺素基因的群在ADHD评分中发挥显著的作用。它们一起负责基于累加性基因的总方差r2评分的42％。相比较，5-羟色胺能基因负责仅仅总的9.5％。这与许多强烈表明在ADHD中去甲肾上腺素代谢缺陷的研究(Halperin等，1997；Pliszka等，1996；Arnsten等，1996)一致。相比较，对于品行障碍看到了相反的趋势。此处，5-羟色胺能基因负责基于累加性基因的总方差r2的30％，而肾上腺素能基因仅负责13％。这同许多表明在反社会行为中中枢5-羟色胺代谢缺陷的研究(Brown等，1982；Lidberg等，1985；Coccaro等，1997)一致。11.关联研究的多阶段性以及对于单个基因研究公布的影响。MAA技术的结果表明关联研究应该在多个阶段中进行。在第一阶段，需要进行一次一个基因的前期研究来确定哪种多态性可能是有用的而且它们应如何被编码。然而，发明者建议对于单基因研究的重要发现是给定基因的多态性的基因型应如何被评分。根据样本的大小，即使具有＞0.05的p值，该信息也可能是有价值的。由于大部分产生＞0.005的r2或＞0.07的r的单关联研究是累加性的，所以当N足够时，这可能是公布的标准，而不是以p＜0.05为标准。 第二阶段应该是利用所有合理的候选基因的MAA技术的使用。这些结果在图5中由累加性和减性基因的线来代表，而且代表无选择性地包括所有基因。第三个阶段应该是仅利用累加性基因对给定表型产生一个‘新模型’。这由在图5中累加性基因的线代表。最后的阶段应该是独立的重复研究，其鉴定新的累加性基因而且持续测试和再测试所获的基于积累累加性基因群的‘新模型’。12.酒精中毒、药物滥用和吸烟的基因。虽然双生子和收养研究清楚地表明至少一些形式的酒精中毒、药物滥用和吸烟是强烈遗传性的，但基于一次一个基因的方法对所涉及的特定基因的鉴定还不是显著有效。事实上，在所报道的DRD2基因的Taq A1等位基因和酒精中毒之间的关联(Blum等，1990b)的重复和不能重复的联合(Noble，1993；Blum等，1995b)已成为怀疑关联研究能力的贡献者之一。对酒精滥用/依赖评分利用MAA技术的结果提供了对许多关于酒精中毒的分子遗传学问题的了解。第一，DRD2基因左侧r2曲线的斜率表明在该组受试者中DRD2基因利用Taq A1/A2多态性的确在酒精评分中发挥作用。然而，其仅负责总r2评分的10％，而且由于总r2评分仅为0.14，该基因仅负责酒精滥用/依赖评分总方差的1.4％。在累加性基因中这是相当典型的而且是为何利用一次一个基因方法的重复如此困难的一个主要原因。第二，多巴胺能、5-羟色胺能和GABA能基因群在酒精评分中均发挥重要的作用。第三，通过高度显著的最终r2值(p+＝7.5×10-6)证实了MAA技术的力度。据发明者所知，对于一个相当的N，其远远超过任何利用一次一个基因方法曾经报道的结果。第四，虽然研究的焦点是在ADHD上而不是酒精中毒，但大量被ADHD和酒精中毒共用的基因(DRD1、DRD2、DAT1、HTT、HTR1A、DBH、ADRA2C、GABRB3、CNR1、NMDA和CRF)同酒精中毒中高频率的ADHD以及在ADHD中高频率的酒精中毒是一致的(Loney等，1981；Cantwell，1972；Alterman等，1983；Tarter，1988；Biederman等，1995)。 对于吸烟的结果显示DRD2基因的强效应。然而，由于这些受试者具有其本身同DRD2基因相关的Tourette综合征(Comings等，1991)，所以同吸烟的相关性可能被增强而超过其对于仅为吸烟者的受试者应该有的相关性。尽管对于ADHD的基因是首要的焦点，对于酒精滥用/依赖评分的结果显示对ADHD鉴定的基因中许多以前在文献中已经表明为酒精中毒的候选基因。13.在单个受试者组中研究多个表型。在行为的遗传学研究中的一个共同的策略是收集具有某一‘纯’障碍、较少或没有共发性病症的个体，而且两分地将受试者评分为具有或没有那个诊断的那些。这种研究由于两个原因而可能丢失力度。第一，具有许多共发病症的个体更可能具有较高的遗传学负担整体水平，从而增加鉴定基因的力度。第二，筛选一宽范围的行为使得可以在相同的受试者组中检测许多不同的障碍。这在本研究中被证实。由于TS同许多共发病症相关(Comings和Comings，1987a；Comings，1995a；Miller等，1996)，所以在一个受试者组中检测特异性地同许多障碍相关的基因是可能的。结果表明鉴定对不同表型的独特的基因组合仍是可能的。这表明在单个具有高共发病率的受试者组中利用结构化会面进行多重DSM-IV诊断和允许多重数量性状的发展，可能是一种比累积许多每个对应一特定障碍的DNA数据库更有效的发现一系列障碍的基因的方法。14.风险因子以及诊断和可预测性。关于多基因遗传的常见假设之一是所涉及的基因只作为风险因子，而且同单个基因障碍相反，在诊断方式中利用遗传学测试将是不可能的。然而，随着由基因的累加性效应所解释的方差百分比的增加，r也增加，因而在可预测性增加。对于ADHD评分最终0.37的r值表明通过利用这个基因群，ADHD评分的可预测性比没有遗传学信息时高出达37％。随着更多基因的加入，可以获得两倍于此幅度的r值。随着DNA芯片技术的出现，必须进行的遗传学测试的数量不再是一个问题。如在图7中所示的，虽然对于没有ADHD症状受试者和满足ADHD的DSM-IV标准的那些之间相关基因数量的分布曲线表现出很大的重叠，但存在的区别是高度显著的。将累加性基因数量加倍或三倍可能最终产生大部分非重叠的曲线。发明者考虑诊断力度将随着所加入的基因而增加。15.重复。只是由于重复是在连锁和关联研究中的金标准，所以其也应该是MAA技术重复的标准。应预期受试者数量、先证者严重性的组成、对照和受试者间比例、定量评分的范围以及其它因素的变化均改变最终r2值，而不依赖于特定基因本身的效应。除了这些因素，发明者预计重复的水平会变化。最高的水平是其中相同的基因群在不同的受试者组中为累加性或减性，而且曲线的斜率相似。由于不同基因产生相似表型效应的能力是多基因障碍的特征之一，所以发明者预计这个水平的重复既是不太可能的也是无法预计的，而且不同的研究将显示涉及不同的基因群和曲线的不同斜率。这由平分的样本检验所证实(图6)。 另一个而且更现实的重复标准是这样的，其中一个组的大部分而并非全部的累加性基因对于重复组也是累加性的，而且其中r2值和显著性水平随着包括更多的基因而逐渐地增加，但曲线的斜率对于不同基因可能不同。在此水平上，还将预期基因群的相对重要性被重复。因此，本研究，其表明肾上腺素能基因在ADHD中是相对更重要的，而5-羟色胺能基因在品行障碍中是相对更重要的，应该能被重复。这在一平分的样本检验中被证实，其中去甲肾上腺素能基因在ADHD中的重要性在两个样本中被重复。如果加速了在多基因障碍中所涉及的基因的鉴定，则MAA技术重复的最终水平将发生。16.技术问题。虽然已经覆盖了累加性多重关联技术的大部分重要的方面，但还有几个方面值得强调。发明者感觉由于几个原因数量性状是优选的。其需要就同受试者相同的性状评价对照。这是重要的因为在发明者的经验中，对照和受试者可能都具有一宽范围的评分。此外，在检测全范围的定量性状时，分析的力度是较大的。为了最大的力度，对照的数量应该接近受试者的数量，或者具有低评分的受试者的数量应该接近高评分的数量。 虽然最终的r和r2值是不依赖顺序的，但为清楚地鉴定减性基因，需要改变加入基因进入的顺序以便那些具有最强正相关性的首先进入。如果起始的基因没有在r或r2值中产生合适的增加，那么鉴定减性基因将是困难的。 17.治疗和药理学影响。MAA技术基于其鉴别所涉及的基因以及衡量它们的相对重要性的能力，其最后一个方面是其潜在的指导治疗和药理学干预的能力。例如，四个肾上腺素能基因负责ADHD评分最终r2值的40％的观察表明作用于肾上腺素能α2受体的药物在ADHD的治疗中可能是有价值的。临床研究事实上支持肾上腺素能α2受体激动剂可乐定和guanifacine在ADHD治疗中的有效性(Hunt等，1985)。 实施例14吡啶甲酸铬和烟酸铬饮食补充治疗肥胖症在该研究中，吡啶甲酸铬是首要感兴趣的，但认为在最佳条件下(结合身体锻炼)所测试的烟酸铬的初步资料也将是有价值的。关于铬盐补充对年轻肥胖妇女的效应的本研究具有两个目的。第一，来确定是否单独吡啶甲酸铬补充改变体重和组成、糖耐受以及血浆脂类，以及是否这些效应可以用身体锻炼来扩大。第二，来提供对于烟酸铬补充结合身体锻炼的有效性的资料。 方法。受试者为43个健康的惯于久坐的肥胖女性。将各种统计学界点定义用于肥胖症，但为了该调查的目的，肥胖被定义为高于推荐的机体脂肪百分比，对于年轻妇女，推荐为20-25％的机体脂肪(Blackburn等，1994)。发明者发现发明者的群体的一部分仅仅是轻度肥胖。在接受前，调查表用来确定受试者的健康状态和活动模式。受试者中无人证明有任何健康问题，也没有对这种状况的治疗。年龄在从18到35岁的范围内，平均24.4±0.70岁。起始的体重在从50.8到96.1kg的范围内，平均71.3±1.9kg。通过水压称重测定的身体脂肪百分比在从25.0％到45.0％的范围内，平均为33.0％±0.91。起始VO2max值在从1.53到3.30L/min的范围内，平均为2.38±0.13L/min。在签署书面同意文件前，通知每个受试者同参与相关的潜在风险和利益。研究经得克萨斯大学的研究管理委员会批准。 实验设计。受试者被随机指定到四个治疗组中的一个：吡啶甲酸铬补充无身体锻炼(CP)、身体锻炼和安慰剂(E/P)、身体锻炼和吡啶甲酸铬补充(E/CP)以及身体锻炼和烟酸铬补充(E/CN)。治疗阶段是9周。没有控制月经周期阶段的影响。虽然在假定的28天月经周期的不同阶段进行了前测试和后测试，但其影响(如果有)在所有研究参与者中是随机的而且因此不应该影响数据。 铬盐补充剂和安慰剂药片由美国Shaklee公司(旧金山，CA)制备，并以每个100片的编码的瓶子运给研究者。每周给予受试者16片含有吡啶甲酸铬(200μg)、烟酸铬(200μg)、或安慰剂(无效成分)。给予受试者口头指导在整个治疗和后测试阶段每天早晨和晚上服用1片，对接受铬盐补充剂的那些形成每天400μg的剂量。要求受试者每周交还未服用的药片。通过计算归还的药片来衡量顺应性。顺应性没有问题。 身体锻炼由有几个单元的交叉训练程序组成。第一个单元为步行需氧运动，这是一类需氧舞蹈，利用弱拍音乐、12到24英寸高的板凳以及指导者，后者指导参与者进行设计用来提供全身需氧锻炼的一系列动作。这些1小时的课由每个锻炼的受试者一周参加两次，并由有资格的指导者教。允许受试者挑选他们自己板凳的高度。随着研究的进展，指导者逐渐增加运动强度。 第二个单元是骑车。骑车锻炼一周进行两次，在75％-80％最大心率(在起始的VO2max测试中确定)的目标心下处进行30分钟。利用了通用的需氧自行车(通用Gym设备公司，Cedar Rapids，Iowa)。在每个部分开始时将目标心率编入测力计的程序，并在锻炼中进行监测，用仪器上的计算机调节阻力来维持目标心率。 第三个单元是耐力训练。利用Powercise Fitness系统(TruTrac治疗产品公司，Temecula，加利福尼亚)进行耐力训练，一周两次。利用五个独立的机器，其中通过一个电子制动装置设定耐力。这是一个激发主动肌/对抗肌肌群的同心收缩的“双阳性”系统。所用的五个机器锻炼上下躯体的所有主要肌群。最初通过抬起每次重复逐渐加重的重量(10lb.的增加量)直到负载不能再被抬起，来确定每个受试者的最大力量。一旦最大力量已被确定，锻炼重量便自动设为50％的最大力量，指导受试者在每个机器上进行三套15个重复的锻炼。受试者跟随节律灯，其允许每个同心收缩大约1.5秒钟。套间的休息时间为25到28秒。在机器间的时间并不严格控制。在整个研究中鼓励受试者增加所抬的重量但仍然完成三套15个重复，而且记录这些增加。还指导受试者进行三套二十个“abdominal crunches”(仰卧起坐)。 由至少一个研究者监督所有锻炼部分。记录出勤、骑车锻炼中的心率以及耐力训练参数(所抬的重量以及重复和套的完成)。要求受试者在研究过程中不要改变他们的饮食。 实验操作。在治疗开始前的一个星期中，在两个独立的场合利用一具有±200g灵敏度的Health-o-Meter磅秤(Continental ScaleCorporation，Bridgeview，IL)称量受试者的体重，而且通过水压称重(Behnke等，1974)对受试者进行身体组成的分析。利用修改的Burker方法在踏车上用所测定的吸气容积和呼出的气体按照发明者实验室以前的描述(Yaspelkis等，1993)测定VO2max。在分隔的两天抽取空腹血样，并按照随后所描述的进行口服糖耐量测试(OGTT)。 在9周治疗阶段期间，按照上面详细描述的给予营养补充和身体锻炼。在治疗的第九周，重复所有的测试前检测。不论治疗前还是治疗后均以相同的顺序给予测试。补充和身体锻炼持续整个测试后阶段。参与身体锻炼的所有受试者在后OGTT之前两天参与一个步行需氧运动会，然后在测试前的一天休息，这使在最后一次锻炼和OGTT间有大约40h。标本采集和分析。在上午7点和9点空腹12hr后，其包括无咖啡因和尼古丁，获得用于激素和底物分析的血浆。通过肘前静脉的静脉穿刺收集血液(10ml)。如同治疗前血样之一，在同一天进行对于口服葡萄糖负载的葡萄糖和胰岛素反应的测定。受试者摄入室温的含有100克葡萄糖的饮料(Tru-Glu 100橙汁/碳酸化，10oz.FischerScientific，Pittsburgh，PA)，并在摄入前以及摄入后15、30、60、90、120和180分钟时从肘前静脉中的21号静脉导管(BaxterHealthcare，Deerfield，IL)获得血样(3ml)。 所有的血样均用250ml的乙二胺四乙酸(EDTA)(Sigma化学试剂公司，St.Louis，MO)抗凝。通过亲合树脂柱、比色仪、终点步骤(Sigma诊断，St.Louis，MO)将来自基本样品的全血样(200ml)用于糖基化血红蛋白测定。将其余的样品在1,000×g离心15分钟；然后移出血浆并冻存在-20℃用于随后的分析。通过放射免疫分析(ICN Biomedicals公司，Costa Mesa，CA)测定胰岛素的浓度。通过酶法分析来分析血浆样品葡萄糖、三甘油酯和总胆固醇(Sigma Diagnostics，St.Louis，MO)。在LDL-C和VLDL-C沉淀后酶法测定HDL-C(Sigma Diagnostics，St.Louis，MO)。利用以下等式计算LDL-C：LDL-C＝(总胆固醇)-(HDL-C)-(三甘油酯/5)(Sigma Diagnostics，St.Louis，MO)。每个分析均测试标准品来证实一致性。所有样品均双份测试，顺序测试每个受试者的标本。 统计学分析。在所有治疗组间对每个变量的前后值进行多变量方差分析。重复操作处理前测量和后测量的值，以及在OGTT中的时间点。如果观察到一个显著的F值(p＜0.05)，进行进一步分析来确定这些改变发生在何处。一个预定的显著性(p＜0.05)用作进一步测试的标准。根据数据的性质，重复Post-hoc检验来衡量方差分析或Fisher PSLD(p＜0.05)。这些低严谨度用来防止由于样本规模小和因此统计学设计力度受限而发生II型错误的机会。利用用于苹果机的社会科学的统计学软件包(SPSS)软件版本6.0来进行分析。 结果。参与身体锻炼的受试者完成90.0％(±2.2)的指定训练课。在治疗组间顺应性上没有差别。在骑车过程中心率一直在HRmax的75和80％之间。在步行需氧运动过程中心率非常高，在从每分钟175到190次(HRmax的85到95％)的范围内。VO2max在任何治疗组中均没有显著改变。 治疗后，在CP组中体重有显著的增加，而在E/CN组中体重有显著的降低。在身体脂肪百分比、脂肪质量或无脂肪质量中没有显著的改变。无脂肪质量不论在治疗前还是治疗后在E/P组中显著高于在所有其它组中。值得注意的是，在E/P组中非显著性偏高的起始体重可以几乎完全归因于较大的无脂肪质量。 在前和后基础血浆葡萄糖或胰岛素水平上没有显著的差别。糖基化血红蛋白在治疗后也未改变。由3小时口服葡萄糖耐量测试绘制每个治疗组在9周的治疗期间治疗前和后葡萄糖耐量和胰岛素反应曲线。受试者接受铬盐补充(CP)、身体锻炼和安慰剂(E/P)、吡啶甲酸铬(E/CP)或者身体锻炼和烟酸铬(E/CN)。 在接受铬盐补充(CP)、身体锻炼和安慰剂(E/P)、身体锻炼和吡啶甲酸铬(E/CP)或者身体锻炼和烟酸铬(E/CN)的受试者中9周的治疗阶段前和后的来自3小时口服葡萄糖耐量测试的葡萄糖耐量曲线或在葡萄糖曲线下区域的比较表明，对于任何组没有显著的治疗效果。类似的，在CP(p＝0.433)、E/P(p＝0.087)或E/CP(p＝0.110)治疗后在胰岛素反应曲线中没有显著的改善。然而，E/CN治疗后在口服葡萄糖载量后60、90和120分钟处的胰岛素反应有显著的下降，其导致在总体胰岛素反应曲线中的显著下降(p＝0.041)。也发现E/CN治疗的胰岛素反应曲线下的区域在锻炼后显著降低。对于甘油三酯、总胆固醇、LDL-C和HDL-C在治疗前和后标本间未发现显著的差别。 讨论。发明者的研究比较了吡啶甲酸铬补充、身体锻炼或两者均有在年轻肥胖妇女中的效应。由于体外工作提示烟酸铬可能在改变这些风险因子中是也是有效的，还收集了关于烟酸铬补充联合身体锻炼的效应的资料。 治疗后体重在CP组中显著增加。这是一个重要的发现，由于吡啶甲酸铬通常被提倡作为一种减轻体重的辅助。发明者的结果表明没有身体锻炼，吡啶甲酸铬补充不仅在引起体重减轻中可能是无效的而且可能导致体重增加。以前铬盐补充的研究没有看到体重增加(Kaats等，1991；Page等，1991；Riales，1979)，可能是由于未控制饮食和活动模式以及受试者的不同基因型模式(即DRD2 A1及DRD2 A2等位基因的携带者)。而且，发明者的受试者群(年轻的肥胖妇女)以前未被研究过；这可能解释在发现中的差别。类似地，在本研究中所给予的铬盐的量(400μg/d)是以前对女性研究的量的两倍。有可能在这个浓度下铬盐具有一种有助于体重增加的效应，而在较低的浓度下其可能具有抑制效应。 在E/P或E/CP组中未看到体重的显著变化，证实了以前的表明经9周的身体锻炼通常不会看到体重减轻的研究(Stefanick，1993)。然而，在E/CN组中体重存在显著的降低。据发明者所知，这是第一次研究表明烟酸铬补充联合身体锻炼可能是一种有效的减轻体重的方式。 治疗后在相对身体脂肪、脂肪质量或无脂肪质量中没有显著的改变。如同体重一样，在该研究和以前的研究结果间的分歧可能是由于在研究人群、未控制饮食以及活动模式和/或所给予的铬盐的量中的差别。 锻炼后VO2max水平没有显著的增加。这可能是由于测试缺少特异性：在踏车上进行前和后max测试，而且锻炼由骑车和需氧运动组成。此外，锻炼程序的耐力项目可能已经掩盖或清除了需氧性改变。 在任何治疗组中基础葡萄糖水平没有显著改变。这个结果同在正常血糖人群中的其它铬盐补充的研究(Abraham等，1992；Wilson等，1995)以及身体锻炼(Wallberg-Henriksson，1992)一致。同E/P组相比时，血浆葡萄糖水平对口服葡萄糖载量的反应在CP组中不论治疗前和后均明显较高。组的均值提示在无脂肪质量和曲线下葡萄糖区域间的有一个反向的关系，表明较大的无脂肪质量允许葡萄糖绝对数量的更快的处理。然而，个体资料表明在这两个因子间相关性差(r＝-0.26)。 对口服葡萄糖载量的葡萄糖反应未观察到治疗效果。如同基础葡萄糖水平一样，受试者在口服葡萄糖载量后最初表现出正常的葡萄糖水平。糖基化血红蛋白，一个6周后血浆葡萄糖水平的指示，在治疗后没有变化。基础胰岛素水平，最初在正常范围内，治疗后在任何组中没有显著的改变。 对口服葡萄糖载量的胰岛素反应治疗后在E/CN组中显著降低。以前用高血糖受试者已经表明在胰岛素反应中的改善(Djordjevic等，1995)。在其它身体锻炼组中未观察到胰岛素反应的显著改变；这是未预料到的，因为以前记载了通过身体锻炼可以降低(Heath等，1983；Mikines等，1989；Sharma，1992；Wallberg-Henriksson，1992)。然而，已经发现这种降低的存在非常短暂(Heath等，1983；Mikines等，1989)，因此，发明者在这些受试者中无法检测到对葡萄糖攻击反应而降低的胰岛素反应，可能是由于胰岛素改善作用的快速衰退。无论在E/P和E/CP组中缺少对胰岛素作用的身体锻炼效果的原因是什么，结果确实提示身体锻炼和烟酸铬的联合可能是有益的。 经治疗基础血浆脂类没有变化。有趣的是发现少数具有异常起始脂类水平的受试者治疗后朝着正常化移动，虽然这些变化不显著。 总之，高水平的吡啶甲酸铬补充而没有同时身体锻炼在年轻的肥胖女性中引起显著的体重增加，而身体锻炼联合烟酸铬补充导致几种潜在有益的改变，包括显著的体重减轻和对口服葡萄糖载量的胰岛素反应降低。发明者的总论为高吡啶甲酸铬补充量(400μg/d)在年轻的肥胖女性中对于体重减轻是有副作用的，而身体锻炼联合烟酸铬补充可能比单纯身体锻炼在通过风险因子的调整来提供一些保护防止CAD和NIDDM中更有益。 铬盐的补充可能影响冠状动脉疾病和非胰岛素糖尿病的多种风险因子，包括体重和组成、基础血浆激素和底物水平以及对口服葡萄糖载量的反应。一个研究检测了在年轻的肥胖妇女中铬盐在每天400μg时，有或没有身体锻炼对这些风险因子的效应(Grant等，医学和科学运动和锻炼(Med.and Sci.Sports and Exercise)，29：992-998，1997)。吡啶甲酸铬(CP)的补充在这个人群中导致显著的体重增加，而身体锻炼联合烟酸铬(CN)的补充导致显著的体重减轻以及对口服葡萄糖载量的胰岛素反应降低。发明者总结为高水平的吡啶甲酸铬的补充在年轻的肥胖女性中对于体重减轻是有副作用的。此外，发明者的结果提示身体锻炼联合烟酸铬补充可能比单纯身体锻炼对于某些CAD和NIDDM风险因子的调整更有益。 治疗后，在CP组中体重有显著的增加，而在锻炼的CN组中体重有显著的降低(至少P＝0.05)。在身体脂肪比例、脂肪质量或无脂肪质量中没有显著的改变。不论治疗前还是后，在锻炼的安慰剂组中无脂肪质量均显著高于在所有的其它组中。此外，同CP组不同，锻炼的CN治疗导致在60、90和120分钟处胰岛素反应显著的降低。口服葡萄糖载量后，其导致在总体胰岛素反应曲线中显著的降低(P＝0.041)。 来自该研究的资料表明高水平的吡啶甲酸铬补充而没有同时的身体锻炼在年轻的肥胖女性中引起显著的体重增加，而身体锻炼联合烟酸铬补充导致几种潜在有益的改变，包括显著的体重减轻和对口服葡萄糖载量的胰岛素反应降低。该资料提示高吡啶甲酸铬补充量(400μg d-1)在年轻的肥胖女性中对于体重减轻是有副作用的，而身体锻炼联合烟酸铬补充可能比单纯身体锻炼对于体重减轻更有益。OB/基因和DRD2基因联合的等位基因频率在年轻的肥胖妇女中负责多达肥胖症方差的22％，而且该基因型可能影响铬盐在该特定人群的体重减轻上的效果，影响铬盐对人类体重减轻的效果(Comings等人，1997)。可以预期，象在表4中所描述的含有铬盐如烟酸铬和/或吡啶甲酸铬的治疗RDS相关障碍的补充组合物，尤其是表6中描述的涉及肥胖的那些，将在保持体重减轻中有帮助作用。 实施例15作为TaqI多巴胺D2受体A2等位基因的函数吡啶甲酸铬诱导身体组成的变化方法。在本研究中发明者利用标准PCRTM技术(Blum等人，1997)对100个受试者的多巴胺D2受体(DRD2)和多巴胺转运蛋白基因(DAT1)进行了基因分型。评估受试者的体重等级并利用密度测定法评估身体脂肪的比例。根据Kaats等人1998年提出的方法，受试者被分为安慰剂组和吡啶甲酸铬(CrP)组(400mg每天)。 结果。在文献对照中，714个受试者中的26％(185/714)和已很好评估的30个超级对照中的3.3％(1/30)有TaqI DRD2 A1等位基因。卡方分析说明了这两个对照组有显著性差异(p＜0.006)。 DRD2 A1等位基因在67.4％(58/86)的身体脂肪≥28％的肥胖受试者中出现；在61.5％(8/13)的身体脂肪≥28％的肥胖男性中和68.5％(50/73)身体脂肪≥28％的肥胖女性中出现。DRD2 A1等位基因在65.3％(49/75)的身体脂肪≥34％的肥胖受试者中出现；在62.5％(5/8)的身体脂肪≥34％的肥胖男性中和65.7％(44/67)身体脂肪≥34％的肥胖女性中出现。DAT1 10/10等位基因出现在91个对照受试者(34/91)的37.4％中，47.7％(41/86)身体脂肪≥28％的肥胖受试者中，在38.5％(5/13)的身体脂肪≥28％的肥胖男性中，和49.3％(36/73)身体脂肪≥28％的肥胖女性中。DAT1 10/10等位基因出现在46.7％(35/75)身体脂肪≥34％的肥胖受试者中，在37.5％(3/8)的身体脂肪≥34％的肥胖男性中，和47.8％(32/67)身体脂肪≥34％的肥胖女性中。卡方分析说明，当与文献或超级对照相比时，在TaqIDRD2 A1等位基因与病态肥胖显著性相关。表67显示，对于身体脂肪≤28％的男性和女性在与文献中的对照相比时(卡方＝62.6，df＝1，p＝＜.0001)和对于超级对照(卡方＝36.6，df＝1，p＝＜.0001)发现了显著性的相关。发现了对于身体脂肪≤34％的男性和女性在与文献中的对照相比时(卡方＝50.6，df＝1，p＝＜.0001)和对于超级对照(卡方＝33.0，df＝1，p＝＜.0001)的显著性相关。对于身体脂肪≤28％的男性与文献中的对照相比(卡方＝8.31，df＝1，p＝＜.004)，和对于超级对照(卡方＝18.6，df＝1，p＝＜.0001)的效应；以及对于身体脂肪≤28％的女性与文献中的对照相比(卡方＝57.34，df＝1，p＝＜.0001)，和对于超级对照(卡方＝36.11，df＝1，p＝＜.0001)的效应。对于身体脂肪≤34％的男性与文献中的对照相比(卡方＝5.46，df＝1，p＝＜.02)，和对于超级对照(卡方＝16.6，df＝1，p＝＜.0001)的效应；以及对于身体脂肪≤34％的女性与文献中的对照相比(卡方＝46.73，df＝1，p＝＜.0001)，和对于超级对照(卡方＝32.38，df＝1，p＝＜.0001)的效应。相反，对于包括10/10基因型的DAT1基因的任何等位基因组合，在该病态肥胖人群中没有发现相关。对于身体脂肪≤28％的男性和女性与文献中的对照相比(卡方＝2.27，df＝1，p＝＜.132)；和对于身体脂肪≤28％的男性与文献中的对照相比(卡方＝.02，df＝1，p＝＜.89)；和对于身体脂肪≤28％的女性与文献中的对照相比(卡方＝2.73，df＝1，p＝＜.098)。对于身体脂肪≤34％的男性和女性与文献中的对照相比(卡方＝1.75，df＝1，p＝＜.185)；和对于身体脂肪≤34％的男性与文献中的对照相比(卡方＝.01，df＝1，p＝＜.96)；和对于身体脂肪≤34％的女性与文献中的对照相比(卡方＝2.02，df＝1，p＝＜.16)。 表67多巴胺转运蛋白基因和身体脂肪身体脂肪比例 DAT1(％) 卡方b10/10 p值(对照)＜28 41 0.132总人群 (47.7)(N＝86)＜28 5 0.89男性 (38.5)(N＝13)＜28 36 0.098女性 (49.3)(N＝73)＜34 35 0.185总人群 (46.7)(N＝75)＜34 3 0.96男性 (37.5)(N＝8)＜34 32 0.16女性 (47.8)(N＝67)a＝括号表示百分比b＝34/91＝37.4％ 表68多巴胺D2受体基因和身体脂肪身体脂肪比例 DRD2(％) 卡方b卡方b10/10 p值 p值(文献对照) (超级对照)＜28 58 0.0001 0.0001总人群 (67.7)(N＝86)＜28 8 0.004 0.0001男性 (61.5)(N＝13)＜28 50 0.0001 0.0001女性 (68.5)(N＝73)＜34 49 0.0001 0.0001总人群 (65.3)(N＝75)＜34 5 0.02 0.0001男性 (62.5)(N＝8)＜34 44 0.0001 0.0001女性 (65.7)(N＝67)a＝括号表示百分比b＝1/30＝3.3％利用一种叫做逻辑回归分析的统计技术比较超级对照和所有身体脂肪超过34％的病例，DRD2 A1等位基因引起45.9％的变异，在统计学上是显著的(卡方＝43.47，df＝1，p＝＜.0001)。相反，当与文献对照相比时，DAT1(10/10等位基因)引起3％的方差并且在统计学上对该研究人群的该方差是不显著的贡献者。 按照CrP数据，样本分成两个独立的组；有A1/A1或A1/A2等位基因的和只有A2/A2等位基因的。每个组都单独检验在安慰剂和治疗方法对于体重变化各种不同测量项目的差异。这些测量项目包括计算脂肪重量变化百分比、脂肪重量的变化、体重的变化、非脂肪质量的变化、脂肪重量变化百分比、身体组成指数和以公斤数表示的体重变化。用独立组t检验方法统计检验了安慰剂组和治疗组的平均差异。通过在p＝0.05上建立α标准评估它们比较时的统计学显著性。任何低于0.05的p值都被认作在安慰剂组和治疗组的均数上有统计学上的显著差异。 T检验分析揭示了DRD2 A2等位基因携带者比DRD2 A1等位基因携带者对CrP效应更敏感。对脂肪重量的变化(p＜0.032)、体重的变化(p＜0.011)、重量变化百分比(p＜0.035)以及以公斤计的体重变化(p＜0.012)的评估都是显著的，而那些有DRD2 A1等位基因受试者的任何参数没有发现显著性变化。 讨论这些结果说明多巴胺能系统，尤其是D2受体的密度，在体重减轻和身体脂肪变化方面引起显著差别性的CrP治疗效应。当考虑过食和DRD2基因的A1等位基因的关系时，这呈现出甚至更大的显著性(Blum等人，1995)。发明者的观点，A2 DRD2携带者的阳性反应性保持CrP的阳性代谢效应，但是相比之下，A1 DRD2携带者由于碳水化合物暴食增加掩盖了CrP在体重减轻和身体脂肪变化方面的效应。这些数据进一步说明，CrP或其他铬盐和氨基酸前体治疗相结合，即使在A1 DRD2携带者中也会导致减少嗜欲和显著的体重减轻(Blum等人，1997)。另外发明者建议，现观察到的CrP的服用对身体组成方面的混合效应可能通过治疗前对预期患者进行基因分型得以解决。烟酸铬或吡啶甲酸铬具有所观察的效应的原因是，铬盐产生初级的代谢参数而氨基酸影响次多巴胺缺乏，从而减少对甜食的嗜欲。 实施例16氨基酸和草药成分对于集中注意力的增强：在注意缺陷多动障碍中的潜在效力发明者观察到多巴胺D2受体基因多态性和人类脑电生理异常之间的相关性。加权线性趋势分析在该关系中显示，与DRD2 A2基因型和共发病物质滥用障碍(SUD)相比，在DRD2 A1等位基因存在时，事件相关电位(EPs)有明显变差的效应[p＜0.0001]。唤醒相关电位(ERPs)P300波的幅度和潜伏期下降长久以来与酒精和药物依赖相关。发明者也发现，P300潜伏期的明显延长与三种风险因素相关：(1)双亲SUD，(2)化学依赖(如可卡因依赖)，和(3)碳水化合物暴食。发明者也发现，与基因的A2形式(A2/A2)相比，两拷贝的DRD2 A1等位基因(A1/A1)明显与P300波潜伏期的延长相关。另外，P300幅度与酒精中毒和SUD的家族史相关，以及S.Hill(匹茨堡大学)发现P300幅度与DRD2 A1等位基因也明显相关。这些结果说明，DRD2 A1等位基因在参与包括集中注意力和潜在RDS相关行为(如SUD和ADD/ADHD)的脑功能非行为性病理生理表型中的作用。必须注意的是，P300异常已得到很好的证明，但是它并不如一度认为的那样对药物滥用特异。它们在混合性ADD、精神分裂症、谵妄、肥胖和别的精神病障碍中也是常见的。 已提出许多治疗性方法和光谱分析以改善激发电位异常，如胆碱能药，胆碱酯酶抑制剂，多巴胺能和血清素激活剂，兴奋剂，微量元素，饮食(低度精练碳水化合物)，颅侧刺激，生物反馈和其他特异与非特异方法。 由于多巴胺能功能可能通过降低D2受体而影响脑电生理异常，治疗措施可能在于发展增强脑D2受体功能的技术。具有TaqI A1和TaqIB1以及别的等位基因的多巴胺D2受体基因表达产物显著降低，导致多巴胺能缺陷。从基因修复方面来说，目前没有永久性修复这种受体缺陷的已知技术，然而本发明中的特定部分提供了克服该遗传引起的D2Bmax降低的可能性。已经观察到，包括溴环肽和N-正丙基去甲阿扑吗啡的激动剂引起D2多巴胺受体上调(Fitz等人，1994)。另外，在激动剂治疗后，mRNA的变化看起来不能说明受体的增加。相反，对一种蛋白质合成抑制剂放线菌酮的研究表明，蛋白质合成的增加(基因表达的上调)，以及蛋白质降解没有下降，这是由于多巴胺能激动剂引起的上调。利用该逻辑，本发明建议，联合利用经由脑啡肽酶抑制(D-苯丙氨酸)引起的突触多巴胺释放提高以促进D2受体的长期占据和如转染的HEK-293细胞所示可能使D2受体增殖或上调。这进一步形成了本发明的基础。 电生理学和神经递质功能。包括QEEG和皮质激发电位在内的脑电活动定位图，揭示了许多种类的受试者存在精细的神经病学变化(Porjesz等人，1987)，包括精神分裂症患者(Braverman等人，1990；Christian等人，1994；Blum等人，1995)，罪犯(Lovinger等人，1995；Seiden等人，1995)，抑郁(Hudson，1995)，Alzheimer病(Scourfield，1996；Lawford，1995)，爱滋病(Meiswanger等人，1995)，ADD/ADHD和它们对药物的反应(Kokkevi等人，1995；Nunes等人，1995；Yoshida等人，1984)，以及SUD(Gilman等人，1990；Morrow等人，1992；Brown等人，1994；Comings等人，1996；Neshinge等人，1991)。众所周知，药物能够诱导在深部边缘结构中的神经递质缺乏(位于颞叶)(Yoshita等人，1984；Gilman等人，1990)，导致灶性电生理异常。那些局部解剖变化可能是诱导个人物质使用欲望的重要标志或组成部分。已经说明边缘系统的激动现象可能是SUD受试者嗜欲和脱瘾的一个因素(Ballenger等人，1980)。另外，SUD样发病前抑郁可能在发病前就使先证者倾向于随后的Alzheimer脑病、共发的ADD/ADHD以及别的来自于颞叶精神疾病。大脑定位的颞叶异常与PET扫描的代谢减退相关，它与同样具有代谢衰退的发作间颞叶癫痫发作相似(Adams等人，1993)。已经报道DRD2 A1等位基因与额叶PET扫描检测到的低葡萄糖代谢相关(Noble等人，1997)。这表明代谢衰退与导致的机能障碍的脑额叶多巴胺D2受体过低相关。许多文章表明，SUD促进了可能诱导异常激发电位和光谱分析异常的激动反应(Goldstein等人，1994)或电生理不稳定性。此外，可卡因和乙醇诱导激动反应或电生理不稳定性，并在急性基础上很有可能经由多巴胺释放矫正激发电位异常。恢复中的物质滥用者即使在物质使用中断以后仍然有低P300。P300活动只有部分恢复，它也代表先于物质滥用的遗传特征，导致与酗酒者中观察到的相似的可卡因或海洛因滥用(Gilman等人，1990)。 发明者推理，物质依赖显著加重了潜在的发病前状态，并且强烈提示遗传-环境的相互作用。引起伏核多巴胺释放的物质自我给药或行为动作(即可卡因，酒精，尼古丁，烟，性等等)，尤其是药物，通常缓解这些电生理紊乱，但是遗憾的导致了脑机能障碍的加重。 不同多巴胺基因的累加效应。发明者对基因分型直到第四代的ADHD/ADD+RDS家族的三个多巴胺能基因DRD2、DβH和DAT1基因的最近研究总结于此。综合这些结果，在分子遗传学水平提供了对以下概念的支持：ADHD、TD和另外的障碍是以多基因方式遗传的，是相关障碍谱(RDS)的一部分，由共享的基因引起、由人群中常见的等位基因引起、由累加效应的基因引起、由干扰多巴胺系统(及其他)的基因引起。 对注意力缺乏多动障碍(ADHD)先证者和直至四代的多个家庭成员多巴胺基因的世代关联研究。多巴胺D2受体基因多态性与“报偿缺陷综合症”(RDS)或许多相关的冲动-成瘾-强迫行为相关；多巴胺转运蛋白基因(DAT1)的VNTR 10/10基因型与ADHD和Tourette障碍(TD)相关；多巴胺-β-羟化酶基因(DβH)的B1等位基因也与TD和许多RDS行为亚性状相关。 发明者对51个来自于多重影响家庭多达四代的受试者进行了基因分型。DNA根据基于PCRTM的方法从口腔拭纸提取(Blum等人，1997)。两个最初的先证者通过许多标准仪器被细心地诊断为具有ADHD。随后，另外的家庭成员也对ADHD和别的相关RDS行为进行了诊断。对所有受试者进行了三个多巴胺能基因(DRD2，DAT1和DβH)的基因分型。在所有受试者中，百分之八十(40/50)携带DRD2TaqA1。当与“超级”对照(1/30或3.3％携带DRD2 A1等位基因)相比时，观察到奇比率为116[95％置信区间13.6-2，575]的显著相关性(卡方＝41.1，df＝1，p＝0.00000001，Yates修正)。发明者提出这些数据为了说明高度筛选过的对照的重要性。当发明者利用714个非酗酒者和非药物滥用的文献对照(185/714或26％的DRD2 A1等位基因携带者)比较数据时得到了一个相似但稍弱的发现。发现了奇比率为11.4[95％置信区间5.38-24.93]的显著关联(卡方＝63.2，df＝1，p＝0.00000001，Yates修正)。在91个筛选过的对照中，DAT1 10/10等位基因的流行率是34/91或37.4％，51个筛选过的对照中，DβH B1等位基因的流行率是27/51或53％。当与筛选过的对照相比时，在ADHD来源的两家庭成员(30/50或60％)的DAT1(VNTR 10/10等位基因)间发现奇比率为2.64[95％置信区间1.31-5.38]的显著相关性(卡方＝7.51，df＝1，p＝0.0061)。相比之下，当DβH B1携带者(32/50或64％)与筛选过的对照相比时，发现奇比率为0.63[95％置信区间0.28-1.4]的非显著性(卡方＝1.27，df＝1，p＝0.259)。发明者相信，与通常在单个冲动-成瘾-强迫行为亚性状发现的40％-50％相比，DRD2 A1等位基因的高比例是由于包含在RDS下的多个行为亚性状。在一个家庭内，DRD2 A1等位基因出现在100％的诊断为具有ADHD的受试者中。 当对数据进行完全的连锁分析时，利用出现在家庭成员中的至少一个RDS行为作为共变量。值得注意的是，当RDS行为的数目在受试者中增加时，DRD2 A1等位基因的出现也增加。第一眼看起来，与另外两个多巴胺能基因有关的DRD2 A1等位基因至少在目前检验的样本中预测ADHD和RDS行为是更有用的。目前处理的数据和另外的结果将根据这些发现对冲动-成瘾-强迫行为(RDS)以及重要的亚性状ADHD的生物遗传学影响而提出并讨论。 认知、电生理学和神经递质功能。本发明的一个重要方面是注意力的集中受到神经递质功能改变的影响，尤其是在负责“报偿”和别的相关行为的脑位置(中央-边缘)。经由遗传或环境因素如药物、性、和应激在“报偿级链”中的机能障碍可能影响注意力集中。虽然许多神经递质途径最终参与集中注意力、记忆和认知，本发明中大体上优选至少四条主要途径：5-羟色胺能、阿片能、GABA能和多巴胺能。关于认知和神经递质文献的简单回顾将支持多巴胺能系统与注意力集中的正相关性。该相关性提出了这样一种概念：激活多巴胺能系统和促进激动剂在多巴胺受体上的相互作用或释放自然多巴胺的化合物将增强个人集中注意力。 多巴胺D2受体基因多态性与人脑电生理学异常相关。这是发明者所知对多巴胺D2受体基因多态性与人脑电生理学异常相关提供了证据的首次研究。在这点上，加权线性趋势分析显示：与DRD2 A2基因型和共发病物质滥用障碍(SUD)相比，在存在DRD2 A1等位基因时，有事件相关电位(EPs)显著恶化的效应(p＜0.0001)。Duncan’s区间检验说明，与DRD A2对照相比，带有或不带有DRD2 A1等位基因的SUD明显恶化了EPs。此外，相对于发明者的“超级对照”(p＜0.0000033)和大量的文献对照(p＜0.0021)，发明者观察到了严重物质滥用障碍(SUD)和DRD2 A1等位基因的显著相关。唤醒相关电位(ERP)P300波的幅度和潜伏期降低长期以来与酒精和药物依赖相关。在本研究中，发明者发现P300潜伏期的明显延长与三个风险因素相关(1)双亲SUD，(2)化学依赖(如可卡因依赖)，和(3)碳水化合物暴食(p＜0.03)。在该人群中，发明者也发现P300幅度下降与酒精中毒和SUD家族史相关(p＜0.049)，但不与DRD2 A1等位基因相关。这些结果说明了DRD2 A1等位基因在涉及脑功能和潜在成瘾倾向的非行为性病理生理表型中的作用。 本研究的目的是确定是否多巴胺D2受体基因(DRD2)TaqI A1等位基因与私人诊所门诊病人的带有或不带有物质滥用障碍(SUD)的脑电生理异常相关。本发明者的实验室发现D2多巴胺受体基因的A1等位基因与酒精中毒的强相关(Blum等人，1990)，随后几个研究组没能重复该观察(Gelernter等人，1997)。发明者提出了两个可能的原因：第一，对照中酒精、药物和烟草滥用以及别的相关行为的不充分筛选，第二，按照酗酒者的长期性和疾病严重性特征的取样错误(Blum等人，1996)。然而，对文献的回顾揭示了DRD2基因不仅与酒精中毒之间，而且与包括多物质滥用、吸烟、注意力缺乏多动障碍(ADHD)、碳水化合物暴食、Tourette障碍、病理性赌博、创伤后应激障碍的一组冲动-成瘾-强迫障碍以及被称为“报偿缺陷综合症”(RDS)的分裂样/回避行为之间的许多阳性关联(Blum等人，1996)。已有人提出DRD2等位基因变异代表与多巴胺能活动相关的很常见隐性性状中的变异(酒精中毒是仅有的单个表现)(Hill和Neiswanger等人，1997)。此外，从对照和患者组中排除“其它疾病”的工作在San Antonio，Los Angeles，Duarte，和Pittsburgh完成(Hill等人，1997；Blum等人，1996)。发明者的论点是，没有发现连锁或家族内关联的原因可能是对适当的供分析表型理解不完全。 因此，为了减少假结果，发明者决定利用已知为脑电生理异常的非行为性病理生理学表型作为随后对RDR2 TaqI A1等位基因关联研究的标志。另外的对人RDR2 TaqI A1等位基因关联的研究也建议该方法(Noble等人，1994；Blum等人，1994)。迄今为止，在许多行为障碍包括SUD、ADHD、品行障碍(CD)、病理性暴力行为、阿尔茨海默氏病和其他分裂行为障碍中，与光谱和激发电位异常都存在关联(美国精神病协会Task Force，1991)。 由于发明者发现了SUD和肥胖中显著的激发电位异常，发明者决定系统性的评估Priceton，New Jersey神经精神病学和医学诊所的病人中异常脑电活动与DRD2 A1等位基因直接相关的可能性。正相关能够给发病前从遗传学上诊断脑机能障碍提供重要和恰当的临床信息。 对DRD2等位基因变异、SUD、和光谱分析之间的关系进行了检查。在具有RDR2 TaqI A2/A2等位基因的典型的正常受试者中，确定了视觉唤醒反应(VER)的显著概率图(SPM)。计算标准差最大值(0.34)和最小值(-1.00)作为SPM，发明者的对照组与标准化的BEAMTM(脑电活动作图)对照没有显著性差异。带有RDR2 TaqIA1/A2等位基因的非SUD受试者的特征性VER脑图，带有轻微额颞过度阴电至2.92 SD，可视化为亮白蓝。由弱白蓝区显示的右额颞异常在有情绪波动、心悸、焦虑和紧张、有或没有SUD的个人中是典型的。RDR2 TaqI A1/A2基因型的SUD病人特有的VER脑电活动图，带有左和右额颞过度阴电至6.13 SD，可视化为亮白光。 发明者也发现P300潜伏期的显著延长与三个风险因素相关(a)双亲SUD，(b)化学依赖(即可卡因依赖)，和(c)碳水化合物暴食(p＜0.03)。发明者也发现P300幅度下降与酒精中毒和SUD家族史相关(p＜0.049)，但不与DRD2 A1等位基因相关。 最重要的是，加权线性趋势表明与DRD2 A2基因型以及共发病SUD相比时，存在DRD2 A1等位基因时的事件相关电位有显著恶化效应(p＜0.0001)。Duncan区间检验说明，与DRD A2对照相比，带有或不带有DRD2 A1等位基因的SUD显著恶化了EPs。 值得注意的是，在本研究中，52％的严重SUD受试者(N＝29)携带RDR2 TaqI A1等位基因。当与发明者的“超级对照”(排除酒精中毒，SUD，吸烟行为，ADD/ADHD，碳水化合物暴食，病理性赌博，分裂样/回避人格障碍行为，暴力行为，以及酒精中毒，SUD，和肥胖的阳性家族史)相比时，流行率百分比有显著的不同，DRD2 A1等位基因的流行率是3.3％(1/30)[卡方＝17.47，df＝1，p＜0.0000033]。此外，在714个非酗酒者、非SUD(除了烟草)的非西班牙白人对照中，25.9％携带DRD2 A1等位基因。当与非西班牙白人SUD先证者相比时发现了非常强的相关性(卡方＝9.44，df＝1，p＜0.0021)。 据发明者所知，这是观察DRD2 A1等位基因与参加神经精神病学治疗的病人中日益增多的VER和听觉唤醒反应(AER)脑电生理异常之间的显著关联的首次研究。该遗传学证据与关于易于精神兴奋剂滥用/依赖个人的电生理学失调的另一些研究一起进一步说明多巴胺能基因与兴奋剂滥用癖性之间的关系。已有报道SUD加重脑图参数(Braverman等人，1996；Blum等人，1995；Lovinger等人，1995；Seiden等人，1995；Hudson，J.，1995)并且当禁戒时，在大部分病例中出现由一些药物诱导的脑电生理学损伤的持续(Scourfield等人，1996；Lawford等人，1995；Neiswanger等人，1995)。发明者推理精神病先证者的共发SUD显著加重发病前的潜在状态并强烈地提示基因-环境的相互作用(Kokkevi等人，1995；Nunes等人，1995)。非法药物的自我用药，例如象可卡因，是用来缓解这些电生理学失调的，不幸的导致了脑功能障碍的加重，尤其是在长期重复使用者脑的双颞叶。另外，P300幅度和潜伏期的下降与酒精中毒和药物成瘾是相关的(Yoshita等人，1984；Gilman等人，1990)。这是与酒精和药物的急性效应无关的，因为在不使用酒精的酗酒者的儿子中发现了证据(Morrow等人，1992；Brown等人，1994)。这表明存在涉及P300波幅度下降和潜伏期延长的单个基因或多个基因并与SUD的高风险相关。 从总体上讲，发明者相信这些观察资料对进一步了解多巴胺在脑活动(即报偿)中的作用具有重要神经病理学意义。连锁的DRD2多态性是与多巴胺受体的功能关联的(Pohjalainen等人，1996)。在33个芬兰男子志愿者中，与A2/A2受试者相比，DRD2基因的TaqI A1等位基因与校准的Bmax统计学上显著的降低相关。Kd在组间是不显著的。这表明当A1/A2受试者的受体数量下降时，受体的功能看起来没有变化，表明在受体合成中3’介导的多态性的调节作用。另外，DRD2基因敲除小鼠D2受体Bmax显著降低而Kd没有任何变化(Grandy等人，1989)。因此调节性基因元件可能与TaqI A多态性连锁不平衡。因此证明由脑电生理学异常鉴定的特异分子多态性如DRD2 A1等位基因，可能具有深刻的临床应用价值。逻辑上，从这些研究看起来多巴胺系统的多态性关系到特异脑电生理学功能障碍(即VER和AER)，它们看来介导了异常行为(RDS亚性状)。 继续研究这些关联，发明者将够提供更好的预防对策，尤其在高风险组中。另外，更特异的靶向治疗方式最终将来自于这些研究，按照发明者的观点，它们显著影响人类行为病理学。 受试者在本发明中总共利用了二百九十四个受试者。所有的受试者都是非西班牙白人，他们签字表示同意；本研究经过了PathResearch Foundation Institutional Review Board的批准。用于研究的病人是从参加PATH门诊病人私人临床实践超过一年的800例病人的约5000次访问中随机挑选的。 所有SUD组的受试者都经过临床上鉴定具有完全(DSM IV)早期SUD缓解(Brown等人，1994)。发明者的一百七十三例人口统计分类在表69中描述。性别和精神病学诊断在所有组中没有显著性差异。对所有组的平均年龄进行了评估，没有显著变化(p＜0.00001)。对于该研究，性别选择包括53.1％男性和46.9％女性，在精神病诊断中发现年龄差异而在性别中没有发现。 电生理学和基因分型方法.对于确定SUD表型(可卡因滥用，DSMIV代号No.305.60；可卡因依赖，DSM IV代号No.304.20；酒精滥用；DSM IV代号No.305.00；酒精依赖，DSM IV代号No.303.90)的选择标准和评估工具，发明者利用发明者以前报告的相同方法(Braverman等人，1996)。对受试者DRD2等位基因变异(DRD2TaqI A1和A2)进行了基因分型，与Comings等人相一致(1996)。Nicolette BEAMTM用于评估：总体脑异常、总体光谱异常、激发电位(EP，AER，VER)和P300。对评估脑电生理异常的该方法的详细描述见Braverman和Blum，1996。发明者为了相配比较的目的在该研究中也包括了一个没有基因分型的P300对照组。P300对照组包括15个男性志愿受试者，他们没有药物、酒精、和食物成瘾，也没有精神疾病。 统计学分析。为了进行统计学分析，所有脑图数据分为异常和正常。尤其是EEG分为正常和异常两类，光谱分析按标准化BEAMTM对照的2.5 SD分为两类，其中在三个独立的尖峰后有重复出现缺陷(在同一位点)。P300电压以确立的正常电压10dv分为两类(Neshinge等人，1991)，P300潜伏期以350ms分为两类。该值是基于300ms和对照组平均年龄的估计得来的，这是由Lexicor，Inc.，Boulder，Colorado制定的标准，并且在18岁以后P300每年增加大约1.25ms。统计方法学的完全描述以前已经发表(Braverman等人，1996)。此外，发明者使用Duncan’s区间检验进行成对的平均数比较。显著性的α水平设置为0.05。 KantrollTM对健康人注意力集中的增强：具有脑啡肽酶抑制特性的可卡因代用品。这是关于每天摄入特异氨基酸混合物KantrollTM在人体中对认知性事件相关电位(ERPs)效应的首例报道。在正常的年轻成年志愿者中，认知ERPs通过对两个计算机化的视觉注意力工作的反应而产生，空间定位项目(SOT)和应急持续表现项目(CCPT)，每个受试者在28-30天氨基酸摄入的前后分别检验做自身对照。在摄入KantrollTM以后，对于两个项目都见到了ERPs的P300成分在统计学上显著的幅度增强。本研究在正常对照中观察到的变化强烈说明，在氨基酸添加剂KantrollTM摄入以后，神经生理活动的增强可能是报偿缺陷综合症行为(如ADD/ADHD，物质滥用障碍，碳水化合物暴食，尼古丁滥用，等等)加速恢复的基础。 神经生物学最有吸引力的发现之一是，大量神经递质(如多巴胺，去甲肾上腺素，5-羟色胺，褪黑激素和甘氨酸)(它们在脑活动和情绪调节中起重要作用)能够受到循环中其前体氨基酸营养物水平的显著影响(如，Wurtman，1983)。各自的前体氨基酸是L-酪氨酸(或L-苯丙氨酸)，L-色氨酸和L-苏氨酸。所有这些神经递质合成系统具有两个决定性的特征。第一，它们合成的来源氨基酸是九个必需氨基酸：组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，苏氨酸，色氨酸和缬氨酸(酪氨酸是由苯丙氨酸合成的)。第二，在合成途径的第一步利用的酶是不饱和的。这两个特征的结果是这些氨基酸的食物摄取能够推动特异神经递质的合成。由于许多调节性反馈机理，这并不一定是线性关系；但已经表明它是一个高度显著性的调节性途径(Hernandez-Rodriques和Chagoya，1986；Wurtman和Fernstrom，1976；Wurtman等人，1981)。 动物中脑化学转变的复杂测定，包括显微透析，已证明了在前体氨基酸引入后神经递质产量的变化(Hernandez等人，1988)。在动物中，氨基酸在全身性和中枢神经系统直接输入后，报偿行为变化已得到说明(Blum等人，1972)。当L-氨基酸是神经递质和神经调节物的前体时，它们的消旋物、D-氨基酸也有生物学活性。尤其是D-苯丙氨酸和D-亮氨酸降低了情绪和行为的重要调节物阿片样肽的分解(Blum等人，1987；Carenzie等人，1980；Della Bella等人，1979；Ehrenpreis等人，1979)。 神经递质活动形成了行为的神经化学基础，它们的紊乱可能对许多精神病和行为障碍来说是主要的。它们对成瘾性障碍的贡献也一直是相当多评论的焦点(Koob和Bloom，1988；Wise和Bozart，1985；Blum等人，1990；Blum和Kozlowski，1990；Amit和Brown，1982)。尤其是多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酰胺和阿片样肽被认为在成瘾性障碍中起决定性作用，特别是关于酒精、海洛因和可卡因滥用(Blum等人，1977；Geller等人，1972)。这些观察随之产生了这样的观点：选择性营养物摄入能够影响人类的情绪并因此影响行为。 虽然以前运用了几次营养方案(即Williams，1959)，但明确的量化证明受到了明显的限制。然而最近的临床数据说明了氨基酸前体和脑啡肽抑制剂对酒精、可卡因和食物成瘾恢复的明显效应(Blum等人，1988；Halikas等人，1989)。一个有关的研究(Blum等人，1988)检验了氨基酸添加剂KantrollTM在30天的可卡因成瘾住院病人治疗项目中的使用。实验组和对照组的唯一区别是该添加剂的使用。使用了两个重要的测评项目：在完成前离开该项目或者不服从医学建议(AMA)和药物饥饿。药物饥饿是清晰的可卡因相关幻想、躯体反应、请求用药、药物相关对抗反应、项目顺从、激动和暴力或者威胁离开AMA的测评。氨基酸添加剂组在两种测评方面都比对照组明显地好。AMA比率降低了九倍并且测到的药物饥饿也显著地减低。此外，工作人员报告了激动、外向注意和嗜欲的明显降低。然而，评估是复杂的，经常是定性的，并且依赖许多输入因素(Brown等人，1990)。 本发明试图弥补临床经验和对KantrollTM的神经生物学重要性的基础认识之间的差距。在这里，该方法评估与KantrollTM治疗相关的数量神经生理学变化。电生理学部分重点在于认知事件相关电位(ERP)的P300成分，由两种视觉注意力项目引起。与更传统的EEG分析相比，这种电生理学方法的优点在于：由于固定于表现项目，对注意力加工重要的特异系统被激活。这些注意力探针产生了一系列ERPs成分，每个都代表信息加工的一个阶段。然而，ERP分析在这里重点在于认知ERPs，尤其是P300成分。最近表明数量性ERP变化对于许多临床障碍是非常具有预见性的；如，注意力障碍(Buschbaum等人，1973；Halliday等人，1976；Prichep等人，1976)，精神分裂症(Braverman，1990)，抑郁(DeFrance等人，1995a；Vasile等人，1992)，痴呆症(Duffy等人，1984)，和物质滥用障碍(Braverman等人，1990；以及Braverman和Blum，1996)。 该初步报告的重点是注意力加工过程，部分由于注意力/或集中精力的改变都先于并应急持续的物质滥用(Begleiter和Projesz，1988；Whipple等人，1988；Parsons，1990)，并且由于许多被认为对注意力重要的递质底物是KantrollTM控制的目标。本研究的另外一个目的是弄清楚作为神经递质前体或调节物的氨基酸是否影响中枢神经系统。然后该研究弄清楚了在正常受试者长期使用KantrollTM时的电生理学与表现的相关性，特别是由认知ERP的P300成分变化所指示的。 受试者。本研究包括20个正常的志愿受试者；由委员会授权的精神病学家通过DSM IV标准评估没有心理学、神经病学和精神病学疾病。所有受试者签名同意并且每位都对他们在本研究中的参与得到了补偿。每位受试者都施行了两次检验，作为检验-复检验模式，因此作为自身对照。最初的检验在第零天(前检验)进行然后在28-30天后重复(后检验)。受试者每天服用六粒KantrollTM胶囊共28-30天。组成见表6。由于前检验和后检验记录的质量低两位受试者的数据没有包括在内。 表现工作。两个表现参数用作电生理学研究的行为探针。第一个探针是空间定位。这是基于反应时间的项目(Posner等人，1988)，其中priming cues出现在视野的不同部分。当有或无priming crues时对于右和左视野的反应时间进行了比较。通过反应时间的比较，可以评估个人平稳转换注意力的能力。指示是，集中于监视屏中心的十字并且当(*)出现在右框时按鼠标右键，当(*)出现在左框时按鼠标左键。根据亮度转换两个框。将反应时间记录下来，ERPs构成四个类别：(1)对于右视野的强化，(2)对于右视野没有强化，(3)对于左视野的强化，和(4)对于左视野没有强化。出现形式是随机的，但对四种条件有均等的概率。强化框在目标出现前500msec被加亮。记录左右视野的精确评分和反应时间，以及各自的A′(标准信号检测参数)值。该模式示范了对刺激的定位、注意力流动性以及认知加工速度的例子。 第二个探针是应急持续表现。该项目是传统方法(Rosvold等人，1956)的变体。要求个体这样作出反应，出现特定的字母顺序按鼠标左键：如，一个′T′之后出现另一′T′。本版本的项目有恒定的0.8秒的刺激间歇(ISI)并包括500个实验。非′T′的概率设定为50％，预告性′T′的概率设定为30％，目标′T′的概率设定为20％。平均的ERPs根据三个条件之一构成：干扰信号(除了′T′以外的任何字母)，预告性信号(一对中的第一个′T′)，和目的(一对中的第二个′T′)。首要的表现测评是不一致性指数(Ringholz等人，1989)，它是表现一致性的度量。值得注意的是，前额叶皮质看来最大程度地参与了持续性注意力和努力，导致在该类工作中有好的表现(Cohen等人，1987；Corbetta等人，1991)，并且这些项目对兴奋性药物是非常敏感的。 记录方案。参照电极在相联的耳垂(A1-A2)，从28个有效记录位点记录EEG。基于国际10-20系统进行剪接，附加电极置于前颞(FTC1，FTC2)、中颞(CP1，CP2)、颞壁(TCP1，TCP2)和壁枕部(PO1，PO2)区。电极阻抗维持在少于5KOhm。附加电极用于检测眼外人工信号。眼睛垂直移动和眨眼(即VEOG)经由直接置于左眼框上下的电极来记录。眼睛水平移动(即HEOG)用位于外眼角的一对附加电极监视。 EEG和EOG用32通道神经科学脑图象仪(0.1-40Hz，6dB/频程低通滤波器，36dB/频程高通滤波器)放大。粗的EEG通过16bit模拟-数字转换器(TECMAR labmaster DMA)在SCAN EP/EEG收集和分析系统(NeuroScan，Inc.)的控制下取样2.56秒。为了建立事件相关电位(ERPs)，平均波形从800msec以上区间的256点来建立。取样在刺激出现100msec前进行以建立刺激前基线，用作矫正方法的一部分。单扫描数据通过从均数减去进行基线矫正。记录的扫描次数根据行为探针而变化。空间定位中记录了总共200个扫描，应急持续表现试验中记录了500个扫描。行为模型的每个节段。检验了三个参数，每一个可能根据个体注意力工作效率变化。这些参数是：ERPs成分的潜伏期、幅度和对称性(空间分布)。 数据分析。首先，对28个电极位点创建了T检验统计图。这是Duffy等人(1981)的统计学概率图的一个变化形式。虽然是探索性的，该方法确实产生了一个容易可视化的图，说明了那一个电极位点应当进一步分析。由于P300是目标成分，Pz被选作统计学分析的位点，由于从该图来看，这是这些视觉项目中该成分的焦点所在。然后，评估了峰潜伏期和峰幅度(275-325msec的间隔内)。统计分析的第二阶段运用了成对T检验模型(Statgraphics，1988)，比较基线和治疗条件。表现项目的数据用同样的模型进行分析。 用于说明，给出了对于CCPT项目ERPs的置于28scalp记录位点的电极排列图解。也包括了用于人工信号矫正和排除的垂直眼外电图(VEOG)和水平眼外电图(HEOG)记录。 将首先讨论来自SOT的结果。而且，该具体模型产生了许多有趣的成分(DeFrance等人，1993)，包括在100-200msec的间隔中产生的N2否定性。N2成分是一种加工否定性，是定位反应的一个早期阶段(DeFrance等人，1993)。发现该成分在治疗后增强，但是幅度的变化没有超过发明者预先建立的显著性阈值[F(1，17)＝2.30，p＝0.0259]。然而，发现后检验条件中的顶点正性(即P300成分)在幅度上显著高于左[F(1，17)＝8.531，p＝0.0095]和右[F(1，17)＝16.31，p＝0.009]强化条件。因此，当定位于左及右视野时，使用KantrollTM组平均P300成分显著增强。 对局部解剖图检查了关于左视野强化(即′primed′)条件的底线和治疗条件。右视野的模式与左见区域的对应，因此这里不再给出。在100-200msec的间隔中，N2否定性出现在右颞壁区。而且，KantrollTM对该成分的效应接近统计学显著性，但是更大的变化与P300成分相关并通过比较300-400msec间隔容易看出。实质上，P300成分的局部解剖特征仍旧相同，但峰幅度通过KantrollTM治疗得到增强。关于表现的数据，左右视野刺激的联合反应时间在治疗后以232±0.03msec对238±0.03msec而加快[F(1，17)＝8.62，p＝0.001]。总之，对P300成分有显著的效应，对N2成分有界线的增强。也可以看到对与警惕项目CCPT相关的P300成分的显著效应。 与应急持续表现项目(CCPT)相关的认知ERPs的不同成分与由其他持续表现项目产生的有许多相似之处，特征是显著的P300成分(即DeFrance等人，1995b；Hillyard等人，1973)。建立了三组波形用于分析-干扰信号、预告性信号和目标-但只有目标波形需要进行讨论。前检验和后检验条件的比较发现P300幅度的显著[F(1，16)＝7.422，p＝0.015]增强。为了确定该效应，比较了底线和治疗条件的Pz平均目标波形。约300msec时达到峰值的大的正向电位是典型的P300成分。P300波形是当受试者对一对中的第二个′T′(作为指示)反应时采取的那些。测定了KantrollTM前(底线)后(治疗)的目标条件在300-400msec间隔中的局部解剖图，并且P300成分的局部解剖特征仍旧相同，但是当比较前检验和后检验条件时幅度呈现增强。那就是说，在底线和治疗条件下，P300成分占据了后中心位点并同SOT一样是对称的。然而，P300成分的幅度在治疗条件下增强了。虽然治疗约四个星期后有局部解刨学差异，但该行为探针的主要表现变量-不一致性指数没有显著性区别。可能的原因是这些正常受试者已经接近他们精确性的最佳表现。然而，也可能在临床人群中出现表现差异。 KantrollTM被设计用作可卡因滥用的潜在治疗，因为认识到可卡因滥用的表现之一是改变了注意力加工(Robledo等人，1993)。此外，人类注意力加工和认知ERP的P300成分经常是关联的(即，Hillyard等人，1973)。在这点上，有必要回顾一下P300成分的神经病学，因为它提供了重要发现的环境。众所周知，P300是几个内源性认知ERP成分之一，其潜伏期、形态学和空间分布高度依赖于植入刺激的心理学环境(Sutton等人，1965)。因此，由于P300成分在注意力和记忆中推定的作用，它是许多研究的主题。人类深层记录的证据表明前叶(如，杏仁状复合体)和中颞叶(如，海马结构)以及额叶结构可能参与P300成分的调节，并可能实际上引起它在颞区的显示(Halgren和Smith，1987；Wood等人，1980)。然而，由于颞叶切除术没有消除P300成分，因此以前研究者所确信的深部颞结构是P300成分的唯一产生者的说法是不大可能的(Johnson和Fedio，1986；Smith等人，1985)。不过，颞叶的深部看起来对P300成分有清楚的调节作用(Halgren和Smith，1987)，前额区(Simon等人，1977)也如此。 由于任何认知ERP的特性是非常固定于诱发性行为模型的，因此记住本研究中运用的表现探针具有持续的和选择性注意力工作的成分是重要的。因此，ERP的特定成分(如，P300)应当与注意力的两个方面有关。有趣的是，最近的PET研究(Corbetta等人，1991)已经说明框额皮质高度参与注意力的选择性方面，而持续性方面看起来更可能是前额皮质中部的范围(Cohen等人，1987)，右半球部分起到了更重要的作用(Pardo等人，1991；Wilkins等人，1987)。由于框额皮质经由钩状束调节前颞区的活性，那么杏仁状损伤也影响选择性注意力不应当是令人吃惊的。已经说明，杏仁状损伤确实损害了选择性注意力，可能是由于不能对刺激分配充分的感情值(LeDoux，1993)。也已知注意力表现受到传入信息的特点和区别性的影响。有重要的证据说明海马在选择性注意力全面过程中起到的就是这种作用(如，Salzmann等人，1993；White，1993)。因此，框额-杏仁状复合体-海马结构轴看起来在选择性注意力的调节中是重要的，其中杏仁状复合体可能分配特性值给刺激复合体，海马结构在刺激间比较特性值。在该框架内，P300作为选择性注意力加工过程的不依赖于模式的副产品起作用-随后的情感、记忆、和认知过程的必需基础。这些表现探针因此挑战了额-颞轴路径的功能。正是这些前脑区域参与脑对可卡因的反应。 也已说明注意力加工依赖生物胺的调节(Stanzione等人，1990；Scatton等人，1982)。由于合成这些胺所需的前体依赖饮食摄入，饮食补充有可能改变脑中有效的生物胺储存。这已导致致力于脑化学的营养改善的不同临床方案以治疗特异的障碍(Blum，1989c)。该方法利用了正常细胞的控制机理并能够导致心理学前景、行为表现以及防止复发的明确改善。这种营养改善依靠运用关键神经递质的氨基酸前体以及维生素和对这些神经递质合成重要的矿物质。值得注意的是，所有这些化学物质(递质，维生素和矿物质)已发现不仅在酒精和药物滥用者体内缺陷而且经常在恢复期持续缺陷(Blum，1991a)。 本研究因此证明，营养补充能够增强正常对照的神经生理功能，这可能对于氨基酸添加物在可卡因恢复中的利用具有重要结果(Blum等人，1988；Trachtenberg和Blum，1988)。以后的计划将研究恢复中的可卡因滥用者的注意力和记忆功能是怎样受到影响的。由于在注意力中重要的不同神经递质依赖营养来源的前体，有可能通过选择性增加前体以使注意力缺陷减低至最少，和/或加速恢复。与报偿级联模型的意义在于，可证明由于药物滥用和/或遗传异常而功能性改变的这些神经递质中每一个(Blum等人，1990；Noble等人，1991a；Noble等人，1991b；Blum等人，1991a；Blum等人，1991b；Blum等人，1992；Noble等人，1992；Blum等人，1994a；Blum等人，1994b；Blum等人，1995b；Blum等人，1995a；Noble等人，1995)，都应该被调节以促进改善脑活动并因此潜在地改善感觉、情绪和行为。该常见疾病，首先由Blum等人(1995a；1996a)命名为“报偿缺陷综合症”，是“报偿级联”的一种机能障碍。发明者的结果说明可以通过氨基酸引入技术和脑啡肽酶抑制特性至少部分完成对“报偿缺陷综合症”的治疗。 表69可卡因滥用者分类A型 B型滥用问题的原因 更多环境的 更多遗传的性别 男女相同 更多的男性人格 低冲动和 高冲动，寻求刺激寻求刺激，高伤害回避童年因素 很少的早期 品行障碍危险因素起始年龄 晚 早物质滥用 较不严重，更多 更长期和严重严重性 发作性 多药物病理心理学 低严重性， 高严重性，更多情感性 更反社会数年的研究后，研究者能够鉴定将酗酒者分类为A型和B型的因素。NIDA资助的最近研究说明，大体上，同样的多个标准在对可卡因滥用者分类时也是有效的。结果可以证明在解释滥用的不同原因时和在设计特异的预防和治疗方法时是有用的。 实施例17MAA技术用于其他的多态性性状—胆固醇和低密度脂蛋白水平。 在发明者关于不同的基因在心血管疾病中作用的研究中，发明者已经鉴定了四个与胆固醇和脂蛋白代谢相关的基因。它们是5-羟色胺转运蛋白(HTT)、催产素受体(OXYR)、多巴胺DRD2受体(DRD2)和早衰素基因(PS1)基因。各自的多态性是在HTT基因的启动子插入缺失(Collier等人，1996)，OXYR基因的二核苷酸多态性(Mechelini等人，1995)，DRD2基因的启动子插入/缺失多态性(Arinami等人，1997)，以及PS1基因的RFLP(Higuchi等人，1996)。基于受试者的分组研究，评分如下：HTT基因-O＝SS，LL，2＝SL；OXYR基因278/278＝0，278/267＝1，276/276＝2；DRD2 11＝0，12＝1，22＝2；以及PS1基因22＝0，12＝1，11＝2。 图8说明了运用MAA技术评价这四个基因在胆固醇和LDL代谢中的作用。 这些结果说明MAA技术可以推广到任何多基因障碍或性状。这四个基因分别揭示了胆固醇和LDL水平变异的16.2和11.5％。胆固醇的p值是0.0002，LDL的是0.002。 实施例18多巴胺基因、暴力和分裂样/回避行为.关于“病理性暴力”。发明者对年龄在12-19的十一个青少年进行了对DRD2和DAT1基因变体的基因分型，他们参加了San Marcos，Texas的居民治疗项目。这些受试者根据一个小时的结构化交谈诊断具有冲动攻击暴力行为而被挑选出来。所选的用于研究的每个受试者具有由授权精神病学家解释的Nicolett(TM)测定的2.5 SD异常脑电活动图。11个受试者中6个具有D2A1等位基因(56％)，11个携带DAT1(VNTR10等位基因)。当受试者中的D2A1等位基因与“超级对照”(1/30或3.3％)相比时，观察到了显著的相关性(X2＝14.9，df＝1，p＜0.0001)。当与文献对相比时，也发现了DAT1 10等位基因的显著相关性(34/91或37.4％，X2＝7.6，df＝1，p＜0.006)，但没有发现10/10等位基因的相关性(p＝0.093)。 本发明描述了不同多巴胺基因与SAB之间的关联。对于SAB数据组，发明者总共对参加Princeton门诊诊所109个受试者的三个多巴胺基因(DRD2，DAT1，DβB)以及72个筛选对照进行了基因分型。根据卡方检验，发明者发现，与D2A2等位基因相比，D2A1等位基因与Millon Clinical Multi-Axial Inventory计算机化检验所鉴定的带有SAB(评分＞84)的病人显著相关(X2＝7.6，df＝1，p＝0.006)。当与超级对照相比时，发现D2A1等位基因携带者在11/22或50％的分裂样和12/27或44％的回避受试者中显著相关(X2＝16.75，df＝1，p＝0.000044)。而利用该方法，卡方检验分析不能够揭示DβHB1等位基因和DAT110/10等位基因与SAB的关联，当与对照相比时，在诊断带有SAB的受试者(18/28或68％)中发现了DAT1 480bp VNTR 10/10等位基因之间的显著关联(X2＝6.3，df＝1，p＝0.012)。在与筛选对照(而不是超级对照)相比时发现了DβHB1等位基因(17/23或76％)的相似趋势(X2＝2.9，df＝1，p＜0.09)。线性趋势分析说明了D2A1等位基因的频率随SAB严重性增加而增加(A1/A1＝83％；A1/A2＝41％；和A2/A2＝23％；p＝0.0.005)。利用多重变量关联，D2A1等位基因和性都是SAB严重性的预示变量。发明者发现D2A1等位基因的奇比率为2.79(p＝0.0186)和性别的为3.6(p＝0.007)。Hosmer-Lemeshow拟合优度在p＝0.778，和对变异的联合贡献是17.9％。对SAB，看起来DRD2基因比DAT1基因更重要。 实施例19遗传多态性特异分析的实例下面是本发明中建议的用于诊断RDS相关行为和其他多基因性状易感性的不同基因的具体检测方法。许多这些具体分析与文献中的相同，并举例说明这种分析在MAA技术中对于多态性的应用。本领域技术人员将会认识到能够用对检测特异等位基因多态性的这些分析方法进行修饰，以及除本文中描述的以外其他基因和分析方法能够在MAA技术中应用。 DRD1.检查DRD1基因的方法利用包括在5’UTR中A到G改变的Ddel多态性，通过由Cichon等人(1994)描述的PCRTM方法处理。 DRD2.该基因的检测包括获得受试者的DNA，通过Taq I限制性内切酶对上述的受试者DNA酶切，分离产生的DNA片段，上述分离的DNA片段与标记的重组噬菌体-hD2G1(ATCC#61354和61355)或其特异结合人多巴胺D2受体6.6KbA1等位基因的片段杂交，并确定上述的人D2受体A1等位基因的出现。尤其重组噬菌体-hD2G1(ATCC#61354和61355)的片段可以是约1.7kb长度的BamHI片段。检测的替代方法包括PCRTM技术(Noble等人，1994)。 DRD4.提取DNA并利用VENT聚合酶以及高变性温度(98℃1分钟)，复性和延伸联合起来在70℃5分钟进行PCRTM扩增(Sommer等人，1993)。使用的引物是(Nanko等人，1993)，5’-AGG TGG CACGTC GCG CCA AGG TGC A-3’(SEQ ID NO：23)和D4＝42：5’-TCT GCGGTG GAG TCT GGG GTC GGA G-3’(SEQ ID NO：24)。 DAT1.DAT1重复多态性的检测包括VNTR基因分型。提取基因组DNA并通过PCRTM扩增DAT1 40-bp VNTR。3’UTR的等位基因利用Vandenbergh等人，1992a报告的寡聚引物和PCRTM条件通过PCRTM鉴定。PCRTM扩增以后，产物在具有分子量标记的情况下在8％的聚丙烯酰胺凝胶中电泳。 DβH. D’Amato等人(1989)报告了命名为A和B的两个Taq DβH多态性的出现。运用的DβH cDNA克隆AII(Lamouroux等人，1987)含有EcoR I位点2.7Kb的插入。为了改善标记，载体用BamHI和SalI酶切成五段。为检测B多态性，标记了3.5kb的片段。用TaqI限制性内切酶、琼脂糖凝胶电泳、Southern转移至尼龙膜、与32P标记的探针杂交，放射自显影显示了2.8Kb(B1)和1.4Kb(B2)的片段。 MAOA.利用MAOA VNTR多态性(Hinds等人，1992)。该复杂的多态性含有GT微卫星，后者直接相邻于不完全双份新23-bp VNTR基序，等位基因在二核苷酸重复数和VNTR重复中都有差别。DNA用标准的方法提取，然后通过PCRTM扩增，每一条引物都用荧光HEX或FAMAmidite(应用生物系统，Foster City，CA)标记，引物[＜320；320-333；334；≥335]。将两μl经过10倍稀释的PCRTM产物加入2.5μl的去离子甲酰胺和0.5μl的ROX500标准中，并在92℃变性2分钟，然后上样至应用生物系统373 DNA测序仪的6％聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在1100伏特和恒定的30W下电泳5小时。然后激光扫描凝胶并利用内部ROX 500标准分析。峰由基因分型仪(Genotyper，版本1.1)[应用生物系统]基于碱基对长度的彩色片段进行识别。 PCRTM扩增色氨酸2，3二氧化酶的内含子6突变区。扩增靶序列的PCRTM反应如下：10mM Tris HCL，pH 8.3，50mM KCl，1.5mMMgCl2，0.05％Tween 20，0.05％NP-40，100μM的dATP，dCTP，dTTP，dGTP，0.1μM引物。引物是：#116 GACACTTCTGGAATTAGTGGAGG(SEQ ID NO：25)，以及#117 GAAGTTAAATCCATG TGGCTC(SEQ ID NO：26)。在20μL中加入下列物质：0.5U AmpliTAq(珀金-埃尔默，Foster City，CA)，1μl(250ng)基因组DNA。反应在PE-9600热循环仪(珀金-埃尔默)或PTC-100程序化热控仪(MJResearch，Inc.，Wastertown，MA)上进行，利用以下条件：94℃5分钟，然后30个循环94℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，然后72℃5分钟。为了检测是否发生了扩增，10μl的反应混合物在TBE缓冲液中1.5％的琼脂糖凝胶上电泳。 每份10μl的上述反应产物用1.5单位的限制性内切酶bsl I和终浓度为1×的缓冲液(由New England BioLabs，Beverly，MA提供)酶切并在55℃中孵育过夜。10μl的酶切产物在100VV和1×的TBE中4％metaphor琼脂糖(F.M.C.产品，Rockland，ME)中电泳1小时。凝胶用溴化乙锭染色。可得到三种长度的片段。当多态性位点是G/G时，DNA完全酶切为673bp和359bp的片段。当多态性位点是A/A时，1032bp的片段没有被切开。G/A杂合体有三种片段，1032bp，673bp和359bp。 紧接G-＞T突变3’的序列是GATA。GATC是DpnII限制性内切酶的识别位点。如下设计3’23bp的寡聚物以配合紧接G-＞T突变3’的ATC序列(寡引物有下划线和突变的两个g位点有双下划线)5’TCATTAATCCTCTGGGTATTGTAAATGTGGATTTAGGTTAATATATTATATATAATGCCAAATAATGGCATAGATAAGGAATAGGGAGAAAAAGGGAATTA-3’(SEQ ID NO：27)TAGTCTTATATCCCTCTTTTTCTTA(SEQ ID NO：28)在第三位置的不配对很少损害它作为PCRTM引物的效力。 挑选5’的引物以提供29个碱基对的产物。当G-＞T突变是G时，GATC位点被切开产生22和70bp的片段。当G-＞T突变是A时，只出现92bp的片段。PCRTM反应的条件如下：1μM各种引物，0.2mM的各种dNTP，50mM KCl，10mM Tris HCL，1.5mM MgCl2，0.001％(w/v)的明胶，2.5U/100μL AmpliTAq(R)DNA聚合酶，80ng基因组DNA。PCRTM循环是94℃4分钟：30循环的94℃30秒、52℃90秒、72℃120秒，然后72℃5分钟。DpnII酶切的条件是10μL的PCRTM产物，0.05μL10U/μL的DpnII；1.5μL：1M NaCl，0.5M Bis HCL，0.1M MgCl2，10mM二硫苏糖醇，pH 7.9：3.5μL H2O，37℃过夜。产物在4％的Metaphor琼脂糖中电泳。 HTR1A重复多态性。用于检测该复杂多态性的方法已由Bolos等人，1993描述。为了标记PCRTM产物，0.1μM的每种荧光标记引物用于反应中。荧光染料是FAM amidite(应用生物系统，Foater City，CA)。两μl经10倍稀释的PCRTM产物加入到2.5μl的去离子甲酰胺和0.5μl标记的ROX 500标准，92℃变性2分钟，上样至应用生物系统373 DNA测序仪6％的聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在1100伏特和恒定30W情况下电泳5小时，利用内部ROX 500标记的标准进行激光扫描和分析。每一泳道都含有内部标准可以进行非常精确的长度确定。峰由基因分型仪(1.1版本，应用生物系统)分析并通过碱基对长度确定大小。如果计算机检测到两个相似高度的峰，矮峰总是置于a等位基因列中，高峰置于h等位基因列中。如果计算机推断具有单个的峰，受试者则是a等位基因纯合体。 HTR2A基因。利用由Williams等人，1996描述的单碱基对多态性评估HTR2A。利用应用生物系统DNA测序仪的方法如上所述。 OB基因。含有人Ob基因的YAC重叠群中二核苷酸重复的出现已由Green等人，1995描述：D7S1873、D7S1875、D7S514和D7S780。D7S1875与OB基因最密切。Comings称其为OB1875。 大麻酯受体基因。DNA样品利用如Dawson 1995所述的下列引物扩增，5’-GCTGCTTCTGTTAACCCTGC-3’(SEQ ID NO：29)和5’-TACATCTCCGTGTGATGTTCC-3’(SEQ ID NO：30)。这样鉴定了一种(AAT)n三联体重复等位基因。用标准方法标记PCRTM产物并鉴定产物多态性(见上述)。 GABRB3基因。DNA样品利用如Mutirangura等人，1992所述的下列引物扩增。CA链：5’-CTCTTGTTCCTGTTGCTTTCAATACAC-3’(SEQ IDNO：31)和GT链：5’-CACTGTGCTAGTTTAGA TTCAGCTC-3’(SEQ IDNO：32)。它鉴定了长度在181-202bp之间变化的(CA)n重复的11个等位基因。用标准方法标记PCRTM产物并鉴定产物多态性(见上述)神经元氧化氮合成酶基因。氧化氮合成酶基因最近发现与小鼠攻击行为有关(Nelson等人，1995)。利用Hall等人(1994)的方法。发明者检查了神经氮合成酶基因(nNosla)的二核苷酸重复多态性的相关性。利用应用生物系统DNA测序仪的方法如上所述。 COMT基因。对于COMT基因的分析，单碱基对多态性由Lachman等人，1996描述。该多态性已表明与COMT活性的不同水平相关(见Daniels等人，1995)。 载脂蛋白-D基因。提取DNA并用限制性内切酶TaqI酶切。在琼脂糖凝胶电泳后，转移至尼龙膜上(Hybrid N，Amersham，UK)并利用标准方法与32P-标记的APO-D探针杂交。两个等位基因，2.2和2.7kb得以鉴定。 人第2染色体。已鉴定了微卫星多态性D2S1788，其定位于2p21(离短壁的末端约74cM)(Comuzzie等人，1997)。从淋巴细胞制备的DNA用于PCRTM，使用的荧光标记引物，其来自MapParis 6aLinkage Screening Set(Research Genetics)，含有隔开约20cM的169高度多态性微卫星标志。 UCP-2基因。定位于人第11染色体和小鼠第7染色体的该基因已被鉴定与肥胖和血胰岛素过多连锁。该基因的正向引物是5’-CATCTCCTGGGACGTAGC-3’(SEQ ID NO：33)以及反向引物是5’-AGAGAAGGGAAGGAGGGAAG-3’(SEQ ID NO：34)。人UCP2编码序列的GenBank号是U76367。 实施例20MAA技术在遗传多态性中的实例该实施例提出了许多非精神病障碍的多基因性状并说明MAA技术能够推广到所有多基因障碍和所有多基因性状。下文讲授怎样利用MAA技术研究不同多基因障碍够的一系列实例。骨关节炎第1步。鉴定要研究的多基因障碍或性状。全身化骨关节炎(GOA)是关节疾病中最常见的。它是残废的主要原因并在发达国家中列为头三种健康问题的一种。GOA在10％到15％超过45岁以及高达70％超过60岁的男性和女性中导致疼痛和功能丧失。GOA的病因学是复杂的，包括环境和遗传因素。对女性双胞胎的研究估计，累加性基因引起了54％的GOA(Kaprio等人，1996)。单发性GOA是作为多基因障碍遗传的。 第2步。建立评估多基因障碍严重性的尺度。OA的严重性是利用Kellgen评分在X射线的基础上鉴定的(Kellgen和Lawrence，1957)。 第3步。鉴定要检验的候选基因。OA非常有可能是由于在软骨合成和降解中起作用的阈数量变异基因的出现。该概念和部分潜在的候选基因列在表70中。OA的候选基因基于他们在调节软骨合成和降解的作用。 第4步。鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。下面是能够用于OA的MAA技术的部分多态性列表。 表70基因 染色体 多态性类型 参考文献胶原蛋白基因COL2A1 12q12 VNTR-1 Wu等人，1990COL2A1 12q12 VNTR-2 Priestley等人，1990COL2A1 12q12 Mae II RFLP Loughlin等人，1995COL9A1 6q12 DN-1 Warmen等人，1993COL9A1 6q12 DN-2 Warmen等人，1993聚集蛋白聚糖(硫酸软骨素蛋白聚糖I)AGC1 15q26 RFLP Finkelstein等人，1989胰岛素样生长因子和受体IGF1 15q22 DN-1 Weber等人(Weber和May，1989)IGF1 15q22 DN-2 Polymeropoulos等人，1991IGF1R 15q25 TN Meloni等人，1992IGF1R 15q25 插入 Poduslo等人，1991IGF2 11p15 DN Rainer等人，1993IGF2R 6q25 TN Ogawa等人，1993转化生长因子βTGFB1 19q13.2 Leu-＞Pro RFLP Cambien等人，1996TGFB2 1q41 DN Westson等人，1991白介素1IL1A 2q13 TN Zulini和Hobbs，1990IL1B 2q13 C-＞T RFLP DiGiovine等人，1992IL1R 2q12 DN GDBIL1RN 2q14 VNTR GDB金属蛋白酶MMP9 20p11.2 DN St Jean等人，1995MMP1的MMP组织抑制因子TIMP1 Xp11.3 RFLP-1 Allred和Wright，1991TIMP1 Xp11.3 RFLP-2 Allred和Wright，1991维生素D3 12q Uitterman RFLP等，1997VNTR＝可变串联重复。 DN ＝二核苷酸重复。 TN ＝三核苷酸重复。 RFLP＝限制性片段长度多态性。 第6步。建立虚拟多基因或PG变量。不同候选基因的评分相加得到PG评分。 第7步。进行PG对QT或DV的单变量回归分析。应用任何统计程序对具有第一个OA(oa)候选基因(cg)(PG+PG oacg1)评分的PG进行单变量回归分析，然后加入第二个候选基因后进行(PG+oacg2)。继续该过程直到“n”个OA候选基因加入(PG+oacgn)，n是加入的基因数量。 第8步。对结果作图。然后如图4所示对ADHD评分的累加性或减性基因那样对结果绘图。 第9步。只利用累加性基因重复该过程。只有累加性基因进行了如图5所示对ADHD评分的累加性基因那样的作图。胆固醇水平第1步。鉴定要研究的多基因障碍或性状。多年的研究已表明在血液胆固醇水平升高与冠状动脉疾病和中风之间的关联。由于遗传因素和饮食对胆固醇水平起作用，鉴定涉及的基因可能对于鉴定风险个体以及发展降低胆固醇水平的新药是重要的。 第2步。建立评价多基因障碍严重性的尺度。空腹样品的血液胆固醇水平将提供最好的严重性尺度。 第3步。鉴定要检验的候选基因。许多直接参与胆固醇合成途径的基因据推测在胆固醇代谢中起作用。为了说明MAA技术的能力，发明者用它来评估胆固醇途径以外的数个基因的作用，以鉴定它们在胆固醇水平调节中的可能作用。发明者鉴定了四个与胆固醇和脂蛋白代谢相关的基因。它们是5-羟色胺转运蛋白(HTT)、催产素受体(OXYR)、多巴胺DRD2受体(DRD2)和早衰素(presenilin)基因(PS1)。 第4步。鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。各自的多态性是HTT基因的启动子插入缺失(Collier等人，1996)，OXYR基因的二核苷酸多态性(Machelini等人，1995)，DRD2基因的启动子插入/缺失多态性(Arinami等人，1997)，和PS1基因的RFLP(Higuchi等人，1996)。 第5步。给基因型指定评分。基于受试者的分组研究，评分如下：HTT基因-O＝SS，LL，2＝SL；OXYR基因278/278＝0，278/267＝1，276/276＝2；DRD2 11＝0，12＝1，22＝2；以及PS1基因22＝0，12＝1，11＝2。 第6步。建立虚拟多基因或PG变量。不同候选基因的评分相加得到PG评分。 第7步。进行PG对QT或DV的单变量回归分析。应用任何统计方程，对具有第一个胆固醇(c)候选基因(PG+ccg1)评分的PG进行单变量回归分析，然后加入第二个候选基因(PG+ccg2)再进行。继续该过程直到所有胆固醇候选基因加入(PG+ccgn)。 第8步。对结果作图。然后如图5所示对ADHD评分那样绘图。图8说明MAA技术在评估这四个基因在胆固醇和脂蛋白代谢中作用的应用。 第9步。只利用累加性基因重复该过程。只有累加性基因进行了如图所示对ADHD评分那样的累加性基因作图。在该例中，所有四个基因都是累加性的。寿命第1步。鉴定要研究的多基因障碍或性状。当人类存活的平均年龄增加以及人群中超过65岁的个人数量增加时，衰老成了更有意义的主题。鉴定能够预测个人生命长短的许多基因在鉴定具有早期死亡风险的个人时具有价值。针对特定关键基因效应的治疗，在提高生命的质量和延长生命方面能够有相当的益处。 第2步。建立评价多基因障碍严重性的尺度。自然的严重性尺度是年龄。然而，在该例中，评分越高(更老的年龄)，基因型越好。 第3步。鉴定要检查的候选基因。虽然某些基因如超氧化物岐化酶(一种自由基清除剂)已知参与衰老的动物模型以及胆固醇代谢，MAA技术具有鉴定许多以前未猜测到的对寿命起作用的新基因的潜力。由于胆固醇水平与心血管疾病造成的死亡相关，发明者选择鉴定对胆固醇水平起主要作用的两个基因。发明者也包括了APOE基因。 第4步。鉴定与每个基因相关的一个或多个多态性。这些基因以以下的方式评分。候选基因的不同基因型频率通过不同年龄受试者组间的卡方分析进行比较。如果特定的基因型频率在这些年龄组间累进性增加，该基因型评分＝2。保持不变的基因型根据在不同年龄受试者中的相对频率评分＝0或1。 第5步。给基因型指定评分。不同候选基因的评分相加得到PG评分。每个基因逐渐加入到多基因评分中。 第6步。建立模拟多基因或PG变异。不同候选基因的评分相加得到PG评分。 第7步。进行PG对QT或DV的单变量回归分析。应用任何统计程序，对带有第一个寿命(1)候选基因(PG+lcg1)的PG进行单变量回归分析，然后加入第二个候选基因(PG+lcg2)再进行。继续该过程直到所有寿命候选基因加入(PG+lcgn)。 第8步。对结果作图。然后如图5所示对ADHD评分那样绘图。当对基因相对寿命的数据作图时，MAA技术鉴定的三个基因与208个受试者的研究相结合时，得到高度显著的结果p＝1.5×10-7。 第9步。只利用累加性基因重复该过程。只有累加性基因进行了如图5所示对ADHD评分那样的累加性基因作图。 这些仅仅是MAA技术如何能够推广到任何多基因障碍或性状的三个实例，利用任何与研究的障碍或性状相关的人类基因研究。当基因组计划在下一个十年接近于结束时，预期将鉴定出人类每一个基因的多态性，以便于对每一个多基因障碍或性状进行全面检查。发明者预期，MAA技术也将应用于其它动物、植物的多基因性状，并且该技术在另外的生物种类中的应用包括在本发明中。 实施例21抗成瘾组合物的实例和在阿片剂硬核成瘾快速解毒疗法后对TREXAN顺应性增强前言。在过去的十年中，利用麻醉剂纳曲酮(Trexan，Dupont，Delaware)对美沙酮或海洛因成瘾解毒的快速新方法引起了美国、加拿大以及世界范围内的许多国家的许多治疗中心的兴趣。硬核阿片剂成瘾中退出率即使在今天还接近百分之90。该快速疗法的基本概念是给病人提供纯的麻醉拮抗剂以阻断阿片剂诱导的欣快效应。利用该方法，大部分病人不再遵从并且重犯率超过99％(S.Hall，San Antonio Methadone Clinic)。发明者的论点认为，不再遵从的主要原因是由于当麻醉拮抗剂(Trexan)阻断了阿片剂或酒精诱导的欣快时(O’Malley等人，1992；Volpicelli等人，1992)，药物对嗜欲行为几乎没有效应。由于发明者发现氨基酸治疗减少了对许多致欣快物的成瘾行为，他们决定检查是否TREXAN和氨基酸治疗相结合会延长已使用致欣快物高达30年的硬核成瘾者对Trexan的顺应性。 方法。本研究在San Antonio Methadone Clinic完成。进入本研究的标准是，利用DSM III对海洛因/阿片剂依赖诊断为硬核成瘾男性和女性病人。为进行预评估，每个病人首先注射0.4-0.8mg Narcan并评估了和他们的脱瘾(如果太严重的话，他们就不能进入本研究)。如果他们通过了第一项试验，然后口服剂量为12.5mg的Dupont’s Trexan并在一或一个半小时后评估他们的脱瘾症状。如果病人通过该试验，他们每天服用50mg的Trexan。在本研究中，总共评估了12个病人。在该研究中，病人除了根据上述接受麻醉拮抗剂以外，也每天接受下列的氨基酸：DL-苯丙氨酸(2,700mg)，L-色氨酸(450mg)，L-酪氨酸(300mg)，L-谷胺酰胺(150mg)，铬(吡啶甲酸盐-200mcg)，以及吡哆醛-5-磷酸(30mg)。计算没有复发的或自我报告拒绝服用Trexan或与氨基酸联合剂的天数。经由电话或个人接触每天评估每个病人(一定程度的接触失败)。 结果。在对持续服用Trexan的顺应性显著增强方面，结果是戏剧性的。San Antonio Methadone Clinic计算的无氨基酸治疗，接受该快速解毒疗法的数百个病人遵从的平均天数接近37天。令人吃惊的是，本研究中的12个受试者接受了Trexan和氨基酸疗法没有复发，或者报告采用联合疗法平均262天(p至少p＜0.05)。 结论。结果表明该抗成瘾制剂的加入显著减少了对阿片剂的嗜欲，因此在协助那些硬核阿片剂成瘾者防止复发方面是重要的-尤其是与麻醉拮抗剂Trexan联合使用。 实施例22D2多巴胺受体基因作为报偿缺陷综合征的决定因素摘要。多巴胺能系统，尤其是多巴胺D2受体，与脑的报偿机理有深刻的关联。D2多巴胺受体的机能障碍导致异常的物质追求行为(酒精，药物，烟草和食物)以及其它相关行为(病理性赌博，Tourette综合症，以及注意缺陷多动障碍)。发明者推测，D2多巴胺受体基因的变异是“报偿缺陷综合症”重要的常见遗传决定因素。 发明者已经运用Bays(Rosner，1986)定理作为数学方法评估DRD2基因A1等位基因在冲动-成瘾-强迫障碍中的预测值。 Bays’s定理在医学上广泛用于预测特定事件(缺陷)会导致另一事件(疾病)的可能性，例如，拥有DRD2基因A1等位基因将引起异常的药物和酒精寻求行为(表72)。 当评估筛选检验时，敏感性是检验在患所研究疾病的个人时阳性的概率；特异性是检验不患该疾病的个人时阴性的概率。对于Bays’s定理，发明者运用下列方程： 表71多巴胺D2受体基因变异和物质滥用/依赖的总结％流行率物质滥用 等位基因 滥用者 对照 P值＜ 参考文献酒精中毒 DRD2A169 20 0.001 Blum等人，1990i酒精中毒 DRD2A130 19 NS Nakajima，1989i酒精中毒 DRD2B117 13 NS Blum等人，1993i(低严重性)酒精中毒 DRD2C157 33 0.002 Suarez等人，1994i(低严重性)严重酒精中毒 DRD2A147 17 0.001 Blum等人，1991i严重酒精中毒 DRD2B1严重酒精中毒 DRD2In6-Ex739 16 0.02 Zhang等人，1994i单倍型1可卡因依赖 DRD2A151 18 0.0001 Noble等人，1993i可卡因依赖 DRD2B139 13 0.01 Noble等人，1993i多物质滥用 DRD2A144 28 0.25 Comings等人，1994i多物质滥用 DRD2B133 20 0.001 Smith等人，1992i*C1等位基因表示只关于纯合体基因型。酗酒者(47/82)；对照(29/87)：(X2＝9.8，df＝1，p＝0.002) 表72多巴胺D2受体基因作为强迫性疾病的预示变量风险行为 预测值(％)酒精中毒(严重) 14.3可卡因依赖(严重) 12.3多物质滥用 12.8化学依赖 28.3过食(严重) 18.6摄食行为 35.0ADHD 16.0抽烟 41.5病理性赌博 4.6Tourette，综合症 5.5总体冲动-成瘾-强迫行为 74.4支持数据的假设在Blum等人，1995中解释为了计算特异性，发明者运用已经充分鉴定的对照，在某些样本中筛选酒精、药物和烟草滥用(表71)。没有任何以前的研究对于对照用严格排除标准(Blum等人，1995a)，由于酒精中毒并不是与DRD2基因多态性真正相关的表型，这种努力是必需的(Blum等人，1995b；Neiswagner等人，1995；Comings等人，1991)。此外，为了计算基因分型的敏感性，发明者采用了先证者被确定有慢性或严重疾病的研究数据(表72)。 检验的阳性预测值(PV+)是当检验用于含有健康以及疾病个体的群体时，真正阳性的阳性结果百分率(Galen等人，1975)。Taq IA1基因型的PV+是0.744或74％；也就是说，阳性预测值是高的；但是PV-只有0.548或54.8％。当与冲动-成瘾-强迫行为相关的个体从对照组中排除时，发明者预计会有更好的阴性预测值。这些障碍病人的混合数据表明了与DRD2基因变异的强阳性相关(Yates卡方＝63.38，df＝1，p＜10-7)。 实施例23注意缺陷多动障碍症状评测价量表(ADHD SAS)背景：近期的文献(过去15年)表明注意缺陷障碍(ADD)和多动障碍的诊断标准经常变化。在儿童精神病理学的研究中对ADD的本质仍有争论(McGee等，1989)。 虽然父母、老师、少年、儿科医生、家庭医生、心理医生、学校顾问等人了解并且已经在少年身上观察到注意缺陷障碍和多动障碍症状，但在北美，我们在描述这些现象时感到困难。文献中很多研究表明临床医生在决定多动和注意缺陷障碍作为诊断条件是否实际存在、是否共存的诊断条件、还是独立的诊断实体时还有困难。 伴随多动的注意缺陷障碍(ADHD)和不伴随多动的注意缺陷障碍(ADD)分布很广。在美国有三百万到四百万儿童患者以及为数众多的成年患者。 ADHD患者承受着过重的负荷，也就是说他们对受到的刺激，尤其是光、声音和触觉刺激有很高的反应性。他们对环境中正常的刺激反应也很剧烈，以致于不能滤除环境的“噪音”干扰，集中精力于他们面前的工作。他们对集中精力于一个问题或者一项任务有困难。由于注意力不集中，他们会忘记约会、忘记付帐、错过期限，还经常因在问题出现时不能注意到而遇到法律困难。经常匆匆忙忙，他们对固定于一个目标或目的有困难。 患有ADHD的患者生活倾向于无组织，儿童患者的房间杂乱无章，成年患者的桌子混乱无序，日常活动也是杂乱无序。无论在什么年龄，他们对于制定计划都有困难，在按次序实行计划时遇到的麻烦更大。由于不能集中注意力，ADHD患者在完成他们已经开始的工作时，会遇到麻烦。他们不能完成任务，不能实现计划。阁楼和地下室中经常堆着未完成的缝纫品、木工品、修理品及笔记本等物品；书桌上经常散乱的放着未写完的信、提纲及项目计划。 ADHD患者的智力没有问题。许多患病的人还有很高的智力，但是他们的成绩通常达不到智商所显示的程度，因为他们不能集中或持续某一兴趣。随之而来的是家庭、朋友、老师和同事对他们失去耐心并预期他们失败。 ADHD患者难以适应变化，他们的生活充满了混乱，即使在日常生活中发生了很小的变化，他们也会感到心烦意乱。父母去旅游、学校里来了新老师、家搬到了一个新的城市以及宠物死了，这些均会给ADHD患者带来一场危机。 受ADHD折磨的病人生活在高度的压力之下，他们不能承受失败，当遇到挫折时容易发怒。他们的愤怒通常突然发作，如摔门、尖叫及大发脾气等。在儿童中常引起打架，在成人则为怒气冲冲、丢失工作及与朋友疏远。之后，他们能表示道歉，但伤害已经造成了。 由于ADHD患者经常受到挫折，他们变得失去耐心，憎恨排队等候和任何使他们发疯的耽搁。无论干什么——一次旅游、一场电影、一节课、一次讨论——他们都希望进行得快些，尽快结束。 性急使得ADHD患者容易冲动，儿童会不考虑后果而盲目行事，成人表现为开快车，使用电工工具不小心，插入正通着电的物体里而不考虑后果，其结果是常使他们自己或其他人受伤。 ADHD患者的时间感和方位感比较差。他们不得不停下来思考哪个是左手，哪个是右手；他们对依照指令行事、看地图及断定时间等事感到有困难。 许多ADHD患者表现为多动。在儿童或婴儿表现为不停地运动、扭动及翻转等，在成人表现为不安、容易厌烦，当被要求按安排行事时表现为反抗，经常处于活动之中。 ADHD患者的另一个差异是他们的脑电波波形不同。他们的β波——与注意力相关的脑电波——较低，而θ波——与松弛相关的脑电波——较高，该波形与瞌睡和白日梦有关。因而，ADHD患者难以承受与β波有关的预见性及解决问题的活动，这并不奇怪。他们喜欢那种容许他们处于θ波的状态，且外界刺激很小的活动(Lubar等，1991)。 如果将这些症状连在一起来看，会浮现出这样一幅图：一个人承受着过度的负荷，试图与一个太明亮、太嘈杂、太摩擦及变化太快的世界相适应。 早期推测ADHD的起因主要集中在如下的方面：家庭里婚姻失调，父母的养育不当，心理疾病及酗酒或药物滥用等。相关的行为包括品行障碍及反社会的人格，后来这些行为被表明与遗传性的物质利用障碍(SUD)相关。最近的研究已经开始表明这些行为障碍(ADHD)与特异的基因异常有关。 ADHD的起因或其本质是什么？它是由神经递质失衡引起的强迫性疾病，由遗传因素起始。它是在儿童时期就有表现，并延续到成年。它的影响可以通过治疗和咨询缓解。这种疾病的生物学基础被许多研究者所确定(Biederman等，1992)用非常简单的话来说，直接的原因是ADHD患者承受着一个缺陷的过滤系统，换句话来说，他们的大脑网络不能阻止无关的刺激。这些人可以注意到每一种声音、每一个物体及每一次接触，并且他们都处在无组织、不可忍受的混乱中。无关的刺激得到和工作或与其他人相关的那些必要的刺激引起他们相同的注意。 在较深的层次上来说，ADHD是病人的脑细胞或神经元之间的联络出现了问题，也许还包括携带神经间信息的神经递质。这些大脑信使供应不足。如果抑制传入刺激的信使缺乏，太多的信号就可以通过并产生混乱。 在更深的水平上看，问题出现在制定神经递质制造蓝图的基因上。ADHD患者至少存在一个基因缺陷——DRD2基因，这使得神经元对多巴胺的应答出现障碍，多巴胺是与高兴的情绪和调节注意力有关的神经递质。其他的关于基因异常的研究提示其它的多巴胺能基因，如DRD4受体基因、多巴胺β羟化酶基因和多巴胺转运蛋白基因，都可成为ADHD的原因(Cook等1995；Waldman等，1996)遗传学检测由于ADD和ADHD病因的遗传复杂性，发明者考虑通过利用多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测(Multi-Plex DNA BasedReward Deficiency Gene Test)评估ADD和ADHD的存在，这种检测多态性的遗传检测方法可呈现被检测人的DNA结构。多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测可提示是否存在多态性，如果存在，为哪一个基因，它们是纯合体还是杂合体。因为ADHD损伤和症状的严重程度与上面提及的等位基因有联系，所以多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测法能够预测ADHD症状的严重性和一个人的行为。 多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测法是对专业治疗是非常有价值的工具。虽然它的缺点在现在还无法纠正，但是在这里公开的作为抗成瘾药物的化合物在临床上被证实对抑制由刺激(大脑多巴胺的产量和多巴胺受体部位的活性水平)引起的渴望有效果；并且它们已经显示出在如下方面有作用：增加一个人更快的集中注意力的能力，促进焦点转换，增加“在工作”行为和增加注意力集中的范围。 虽然报偿缺陷综合症行为(ADHD是一种遗传基础的疾病，落入该综合征的范围)的检查对RDS具有很高的可靠性和有效性，区别性诊断是有挑战性的。多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测将给出非常确证的资料和广泛的区别性诊断；然而发明人和北得克萨斯大学健康科学中心DNA鉴定实验室及田纳西大学目前提出了一个完整的(相当快速完成的)研究轮廓。该研究将是连锁研究，而不是关联研究。发明人相信目前这个研究的结果将使发明人可以：作出确定的区别诊断，减少ADHD诊断的假阳性(用目前的心理测试和精神检查技术诊断时都有许多假阳性)，提高真阳性率。减少患者和家属的抗拒，减少误诊(错误地对ADHD的焦虑等)并因此改变错误地开出利他林的状况，改进治疗方案及正确的区别诊断ADD和ADHD。 多重DNA为基础的报偿缺陷基因检测试剂盒已做出，用来检测多巴胺能遗传学缺陷。这种检测有99.9％的正确率并且是非侵入性的，需要利用一个口腔拭子，作这项检测不需要特殊的训练，不需要采血(其他DNA检测需要)。拭子用邮递或急差送到指定的DNA实验室检测。针对这项特殊的DNA检测，发明人与北得克萨斯大学健康科学中心DNA鉴定实验室有排他性合同，结果在72或96小时之内可以得到(如果需要“状态”的评估还需要24到48小时)。 在美国精神病学协会出版的第二版《精神疾病诊断和统计手册》(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders)(DSM-II)(1968)中，诊断的目录是“儿童的多动反应”，在1980年出版的该书的第三版中，这部分被分成二部分，拌有多动的注意缺陷障碍(ADD-H)和不拌有多动的注意缺陷障碍(ADD)。 第三版《精神疾病诊断和统计手册》的修订本1989年出版，在这个版本中，美国精神病学协会又将这两部分目录合并，诊断目录为“注意缺陷——多动障碍”(ADHD)。 在1994年出版的第四版《精神疾病诊断和统计手册》中，列出了三个诊断程式：“注意缺陷/多动障碍合并型”；“注意缺陷/多动障碍无注意力优势型”；“注意缺陷/多动障碍多动-冲动优势型”。 第三版的“拌有多动的注意缺陷障碍”和第三版修订本的“注意缺陷多动障碍”之间在“拟合优度”上有重大的区别。《精神疾病诊断和统计手册》的不同的版本或修订本中诊断标准不断变化，在各个诊断标准中缺乏显著的一致性，这似乎表明了在任何版本或修订本中构成诊断标准的评估指标的适用性是有限的。这点在其他的诊断手段中也同样，例如“儿童诊断会面程序”(Costello等，1983)和“儿童和青少年诊断会面”(Herjanic和Campbell，1997)，是以第三版《精神疾病诊断和统计手册》为基础的，在新的诊断体系中对主体的选择考虑的不够充分(Newcorn等，1989)。 注意缺陷障碍是被最广泛地诊断的儿童疾病。在表面上看，这种情况的诊断描述经历了这么多的变化是比较奇怪的，然而这种疾病的症状不是在所有时间或环境下都出现的(Brown，1986)。仅有百分之二十的ADHD少年患者在儿科检查时出现症状(Sleator和Karowe，1969)。许多儿童由于被咨询的心理医生报告为多动，在检测环境中接受心理评估时变得安静并且合作(Tobissen和Karowe，1969)。如果有一个注意或认知相关性的独特模式，其可以将ADD同其他疾病区分开，那么ADD状态作为一种疾病将被进一步确证(McGee等，1989)。 由于表现的症状的可变性，ADHD SAS最初是针对父母、老师及其他熟悉儿童行为举止的人的回答来设计的。因而这些与儿童接触最紧密最频繁的人是处在一个最佳的位置来评估和报告儿童的行为举止的。文献的报道显示老师对儿童和少年的等级评定同临床评定、神经生理学评估及课堂的直接观察资料高度相关。 ADHD SAS是为了提供一个快速的ADHD症状水平的评估而发展起来的，并在一个儿童身上经一段时间的验证。这个评价量表不是用来诊断儿童高度兴奋或运动过多的决定性的诊断工具。作出一个准确的、明确的ADHD的诊断，包括程度、表现和界限，需要有几个职业领域的医生参加的深层次的会诊，包括发育儿科学、儿科神经学、临床心理学、神经心理学、语言、特殊教育及职业治疗等领域。这个量表也不是用来替代深层次的诊断检查的，这种诊断检查需要有上述各领域的职业医生的共同努力。所以这个量表不是心理、神经、精神、神经心理和儿科学等的评价。 许多经常参与儿童和青少年工作的专业人员需要一个可快速执行、评分及解释的标准，它可以表明ADHD的存在及其水平。由于有已经报道的发病率数据，这种需要的一部分是显然的。这种病情的发病率从不到所有学龄儿童的百分之一到百分之二十(August和Garfinkel，1989)。按《精神疾病诊断和统计手册》第四版，ADHD的流行估计约占学龄儿童的3％到5％，青少年和成人的资料有限。 在许多情况中，父母和老师注意到了ADHD的特征性的行为举止，这被解释为懒惰、固执、缺乏兴趣、发怒及不成熟等。有时侯老师们、咨询医生、主要保健医生和其他卫生和教育领域的人员，解释ADHD儿童的行为时，认为是一种不守纪律或是源于部分父母的纪律性差的表现。由于ADHD儿童并不是持续一致的表现症状，所以父母描述的症状被解释为源自有过度父母责任心的父母，而不是孩子的功能障碍(因为在医生的办公室里儿童表现得很安静，行为也很得当)。当父母或老师按这些假设或解释行事时，他们恶化了儿童对潜在问题的反应。ADHD SAS的一个重要价值是它的方便经济的实用性，使顾问、老师、家庭医生、儿科医生、神经科医生及其他的职业医生，快速容易地决定儿童注意缺陷和/或多动的水平。因而，职业医生能够确认或拒绝父母或其他人作出的与儿童行为有关的假设或解释。 ADHD SAS是一个包括43个项目的量表，它可以被老师或父母回答，在15分钟内评分、分析及解释。这个量表是一个客观的评分工具，它让父母或其他熟悉儿童行为的人回答儿童行为、态度或情绪的表现及频率。这个量表要求在一个四点Likert量表上客观地回答问题。在量表上的选择范围是从“没有或很少的时间”到“大部分或全部的时间”。 ADHD SAS是一个高效低花费的筛查设计，它容易执行和评分，在专业人员的监督下，可以被经训练的技术人员和辅助专业人员利用。然而ADHD SAS不能取代对儿童的完整的熟练的临床评价，因为这个评价设计的格式是父母报告的形式，它尤其容易受有意识的或无意识的曲解。因为这个原因及将在下面详细叙述的其他特殊的限制，ADHD SAS应当仅仅被用作注意力缺乏多运症状的提示，它不应该单独地用来指导制定治疗方案或治疗路线。这个筛查设计是作为临床熟练判断的补充，而不是替代它们。 拌有多动的注意缺陷障碍和不拌有多动的注意缺陷障碍患者的核心注意缺陷可能有差异(Lahey，等，1985)。在综合地谈及注意力集中时间、易忘性、按规定行事的困难及不成熟等方面时，老师们认为同对照组相比二者显示了同样的注意力缺乏。然而，在他们的研究中，比较不拌有多动的注意缺陷障碍和对照组，ADHD被描述为不负责的、不专心的、冲动的、不想就回答问题的及不整洁的。考虑到他们的发现(DeLamater和Lahey，1983；Cahey 1994)，可以描绘出一副有注意力问题的两组不同的儿童群体的图画。 ADHD SAS的构成适于评价ADHD的优势类型(August和Garfinkel，1989)，还可评价ADHD疾病症状的总体水平。ADHD SAS的结果反映出总体注意力缺乏-多动症状(ADHD，联合型)、注意缺陷症状及多动症状的存在和程度。 当该量表检测出ADHD症状时，结果也可提示这些症状的程度如何，是很轻、轻度、中度、严重还是极严重。 ADHD SAS用于让父母来描述4岁以上的儿童和青少年的行为。这个量表设计用于内科医生的办公室内、心理治疗医生与父母的会见或者是父母-老师-顾问的会议等场所。很多环境中这种筛查方法都有价值。 然而，在父母不合作、怀有敌意、不能沟通、易曲解或者是他或她的思想太混乱以至于回答不能正确反映父母的感受时，ADHD SAS不能应用。另外，由于缺乏四年级阅读水平而语言表达能力较低的人、将英语作为第二语言且水平有限的人、神经心理受损的人、中度到高度精神迟钝的人，对完成量表有困难。 ADHD SYS可以被经训练的辅助专业人员和技术员容易地执行和评分。然而ADHD SYS应用和解释的最终责任应由具有高级临床经验和技术的人承担。在执行ADHD SAS之前，使用者应当全面熟悉了解量表的理论原理、构造的方法、心理测试学的特点以及在这本手册中详细说明的特殊限制。另外使用者还应当准备做出关于在某种环境中的量表结果有效性的临床判断，在这种环境中，它的使用需要补充检测材料，包括关于儿童的医疗状态、在学校的行为及和同学的相处时的行为信息。 为了帮助确保适当的使用，ADHD SAS使用者还应熟悉并遵守由美国精神病学协会规定(1994)的检测的使用标准，或者复习检测和评估领域的基础教科书。缺乏关于注意缺陷多动障碍年轻人的评价和病例处置的临床训练的人，在使用这个量表之前，应当阅读在这个领域中的相关文献。有几篇相当好的关于注意缺陷多动障碍的文章(例如，Rourke，1985；Rourke，1989；Rourke等，1983；Rourke等，1986)。 无论在临床还是研究中应用ADHD SAS都应当遵守美国心理协会提出的职业和道德准则(1981)。同集中于儿童的任何评价程序一样，ADHD SAS在没有得到儿童的父母之一同意之前不能使用。另外，使用者还应注意保证结果的真实性和将它们的使用限定于专业人员“需要知道的”。就量表结果同儿童或其家长交流时应当集中于注意缺陷多动障碍的性质方面的内容，而不应集中于或报告就特殊项目回答的分析。任何时候解释量表的结果时都应帮助父母理解并详细叙述结果，还要考虑到个人对注意缺陷多动障碍的认识和他或她当前的情绪状况。 鉴定注意缺陷多动障碍是一项复杂的任务，需要临床的敏感性和完整的关于神经心理学和学习无能的临床和研究的知识。ADHD SAS不能独立应用，其他的诊断方法，例如儿科学评价、儿科神经学评价、电子脑造影术评价、计算机辅助的E.E.G.或者脑电活动图、神经心理学评价、语言评价、精神病学评价等，应该用来补充、确证和研究检测结果。ADHD SAS还有许多特殊的限制，在解释检测结果时应当记住这些。首先，这个量表的目的没有被特别掩盖，因而，在个人完成量表时，评分会遭到有意或无意的曲解。第二，量表评估的是父母报告的她或他的孩子在某一时间点行为的评估。 注意缺陷-多动障碍的症状不是持续地出现，也不是在所有的环境中均出现，因而ADHD SYS可能不能准确地预测ADHD症状水平的短暂变化(Brown，1986)。 ADHD SAS的施行施行ADHD SAS所需要的全部物品是一只钢笔或铅笔以及量表单。量表单由儿童的父亲或母亲或由二人共同填写，它要求确定的信息，包括选择的社会人口统计学的因素。在这个单子的前面和后面包含有43个检测项目，并附有回答这些项目的说明和填写答案的地方。 在确定人口统计学的信息完全填入ADHD SAS量表单的上部之后，检测者应当做如下的说明：这里有一些陈述，它可以帮助我更好地了解你的孩子的行为举止。我想让你读一读每一项陈述，指出每一项陈述的时间总量哪一个是真实的，并用“X”符号在适当的栏目中标出来。例如，想一想这个问题， “是手脚乱动坐立不安吗？”，你的孩子适合哪一项，是“没有或很少的时间”、“有些时间”、“相当长的一段时间”，还是“大部分时间”？当检测者大声做这些说明时，还应指出这个项目和四个回答栏目中的每一项。在孩子的父母回答完之后，检测者在适当的空格处标出“X”并说：“现在请你完成剩下的项目，如果有问题，一定要让我知道。”有时做测试的人可能不理解一个词或一个概念。如果父母对理解某个特殊的项目有困难，检测者应当尽可能的作出中立的解释。例如，如果父母不理解“是手脚乱动坐立不安吗”这句话中的“坐立不安”这个词，检测者应当说：“这一项是在问你认为你的孩子有多长时间难以保持手脚安静。”同完成量表的人发展和维持感情和谐是非常重要的。从心理学的观点来看，建立足够的和谐关系对减少回答故意曲解的总量是必要的，尤其拒绝困难时。回答者所做的任何评论都可能对评估填写量表时的态度都有帮助，无论它是否对他或她孩子行动解释的有用陈述。 ADHD SAS的评分ADHD SAS需要评分和解释的仅仅是量表单。给ADHD SAS评分首先要注意在ADHD SAS量表单中每个项目均有项目号，并附有指示是检测注意缺陷还是多动的代码。例如，H01是检测多动的第一项；D04是检测注意缺陷的第四项；还有大约20％的项目的代码前标有“*”号。这些项目的评分模式是平衡的，目的是防止回答者进入一种评分模式。除带有“*”的项目之外，所有的项目按如下的方式评分：“没有或很少的时间”得1分，“有些时间”得2分，“相当长的时间”得3分，“大部分或全部的时间”得4分。那些带有“*”的项目得分与之相反，即“没有或很少的时间”得4分，“有些时间”得3分，“相当长的时间”得2分，“大部分或全部的时间”得1分。下一步将代码为“D”的项目的得分相加，决定注意缺陷障碍的分量表的总分，然后将这些原始得分填入“注意缺陷障碍量表原始总分”后的空白处。 将代码为“H”的项目的得分相加，决定多动障碍分量表的总分，然后将这些原始得分填入“多动障碍量表原始总分”后的空白处。在简表ADHD症状水平下标绘你记录的得分。标绘原始数据后，可以自动将原始得分转换为转换得分，使你能够直接看到注意缺陷障碍、多动障碍和注意缺陷多动障碍的水平。在评论和建议部分可以记录下你对特殊患者或家庭的印象或对其行动的指导。 ADHD SAS的原理和理论基础已经出版的或现有的注意缺陷评估量表仅仅引用由美国精神病学协会出版的最新版本《精神疾病诊断和统计手册》上的诊断标准。然而，这种方法适用性有限，因为它是有时间限制的。应当注意的是不但随着时间的过去最初症状的解释发生了显著的变化，而且这里实际上有问题：这种障碍是否存在？如果存在，是仅仅作为注意缺陷存在吗？或者有时注意缺陷与多动相联系吗？上面的文献回顾中应该注意的是目前理解状况是不断变化的。发明人相信这个表的有效性，并且相信这种障碍是普遍的、广泛分布的及有点流行的青少年的状况。这里有一个首选的诊断ADHD的方法。 在过去的30年中已经就注意缺陷-多动障碍的各种症状及其重要性作了相当多的讨论。有些人将他对注意缺陷-多动障碍的诊断和理解同美国精神病学协会出版的《精神疾病诊断和统计手册》联系起来，由于概念的不断变化，他们多少有点容易受到影响，在检测的构造程序中更是这样。按照(Newcorn等，1989)，为适应《精神疾病诊断和统计手册》的任何版本或修订本的诊断标准而构成的测评量表的适用性是有限的。关于以最新版本的《精神疾病诊断和统计手册》的诊断标准为基础的测评设计，(Newcorn等，1989)强调“构建的诊断工具，例如‘对儿童的诊断会面程序’(DIDC)(Costello，1983)和‘对儿童和青少年的诊断会面’(DICA)(Herjanic和Campbell，1977)，是以第三版《精神疾病诊断和统计手册》的标准为基础的，不能在新的诊断系统中充分考虑到主体的选择。” ADHD SAS的项目选择和有效性考虑ADHD SAS的项目是从过去二十年间专业文献叙述的原理中得来的。回顾专业文献之后，所有的被支持和赞同的原理和理论结构-它们解释或描述注意缺陷或多动的基础-被转换成行为陈述。例如，注意力分散是一个被广泛提及的主要的因素，因而就有关于注意力分散的项目有，如“是否容易分心”、“完成已开始的工作”。 ADHD SAS的标准化 确定ADHD SAS量表同其它量表的相关性，或者用老师的、或心理学家的、或内科医生的、或父母的判断作为一个可比较的标准，这些传统的标准化方法似乎没有必要。发明人没有找到好的检测标准用来检测ADHD SAS的有效性。量表构建的方法是建立在评分的有效性上，因为这个评分衡量在过去二十多年中的专业文献中所提出结构的操作定义。 ADHD SAS是用来检测已经用于定义注意力障碍的构成因素。评分是用来检测被个体证明的症状学总量与被量表的上限证明的总量之间的关系。 按照下面的尺度评价个体。如果一个人不足该量表检测的注意缺陷症状总量的40％，那么就被解释为“未表明有注意缺陷障碍的症状”；如果其值在41％到51％之间，那么就解释为“表明有极轻微的注意缺陷症状”；如果其值在52％到64％之间，那么就解释为“表明有轻度的注意缺陷症状”如果其值在65％到77％之间，那么就被解释为“表明有中度注意缺陷症状”；如果其值在78％到90％之间，那么就被解释为“表明有重度注意缺陷症状”；如果其值在91％到100％之间，那么就被解释为“表明有极重度注意缺陷症状”。 还可以按照下面的尺度评价个体。如果一个人不足该量表检测的多动障碍症状总量的40％，那么就解释为“未表明有多动障碍症状”；如果其值在41％到51％之间，那么就解释为“表明有极轻微的多动障碍症状”；如果其值在52％到64％之间，那么就解释为“表明有轻度的多动障碍症状”如果其值在65％到77％之间，那么就被解释为“表明有中度多动障碍症状”；如果其值在78％到90％之间，那么就被解释为“表明有重度多动障碍症状”；如果其值在91％到100％之间，那么就被解释为“表明有极重度多动障碍症状”。 最终按如下的尺度评价个体。如果一个人不足该量表检测的注意缺陷—多动障碍症状总量的40％，那么就解释为“未表明有注意缺陷—多动障碍症状”；如果其值在41％到51％之间，那么就解释为“表明有极轻微的注意缺陷—多动障碍症状”；如果其值在52％到64％之间，那么就解释为“表明有轻度的注意缺陷—多动障碍症状”如果其值在65％到77％之间，那么就被解释为“表明有中度注意缺陷—多动障碍症状”；如果其值在78％到90％之间，那么就被解释为“表明有重度注意缺陷—多动障碍症状”；如果其值在91％到100％之间，那么就被解释为“表明有极重度注意缺陷—多动障碍的症状”。 注意缺陷—多动障碍症状测评量表的解释和临床应用ADHD SAS结果的解释病例研究 < <p>实施例24雄激素受体基因(ARO)的三核苷酸(GGC)重复多态性与抽动-秽语综合症中ADHD、品行障碍和对立违抗障碍的关联许多行为和认知障碍，包括ADHD、CD、ODD、反社会人格障碍、阅读困难、其它的合作障碍、孤独癖等，在男性中更为常见，是女性的三到五倍(DSM-IV，1994)。虽然通常认为是由于激素和环境因素的原因，但可能也包括遗传因素。如果某个基因是X染色体连锁的，这个特殊基因的功能就非常容易了解。这样，依靠相关等位基因的频率和基因引起的变异的百分率，并假设一个隐性遗传占优势的遗传模式，这样一个X连锁的基因在男性中可能占过量的比例。如果基因在对睾酮的应答中也起重要的作用，那么它非常适合在男性/女性的比率中起作用。雄激素受体基因(AR)就是这样的基因。它定位于X染色体的Xq 11-12(Migeon等1981，Brown等1989)。 AR CAG和GGC重复序列的正常等位基因中较短的，与雄激素受体水平和对睾酮的敏感性的增关联，发明人假设它可能与儿童的一个或几个破坏性行为障碍关联，尤其是品行障碍和对立违抗障碍；还可能解释这些疾病在男性中占优势的原因，为了检测这个假说，发明人检测了267个抽动-秽语综合症患者和59个正常人(共326人)AR基因第一个外显子中的GGC三核苷酸重复多态性(Sleddens等，1992，1993)。因为多巴胺和5-羟色胺常与攻击性行为相关，发明人对AR基因对品行障碍和ODD的影响与多巴胺D2受体基因(DRD2)和5-羟色胺转运蛋白基因(HTT)的影响进行了比较。这个研究的进行是为了决定人类的雄激素受体基因(AR)中CAG和GGC重复多态性的较短的等位基因是否与品行障碍(CD)、对立违抗障碍(ODD)或注意缺陷多动障碍(ADHD)关联。 方法 在326个受试者中确定等位基因的频率。这326人中，患抽动-秽语综合症的人为267，正常对照的59人，237人为男性，89人为女性，均为非西班牙的白种人。用多元方差分析同时检测了男性较短等位基因的杂合体或女性较短等位基因的纯合体与数量行为变量的相关性。用线性回归分析决定由AR基因引起的差异的百分率。并同由多巴胺D2受体基因(DRD2)和5-羟色胺转运蛋白基因(HTT)引起(二者单独和共同引起)的差异百分率进行了比较。 受试者由59个正常对照和267个抽动-秽语综合症患者组成。涉及病人和对照组的细节和行为的评价已在文中给出。在那些研究中发明人检测了如下的数量性状：无注意力、冲动性、多动、CD、ODD、学习障碍(LD)和小学学习表现(GSAP)。在目前的研究和一个伴随研究中，发明人增加了一个数量性抽动评分。 AR基因的GGC重复多态性用Sleddens等1992、1993年所述的聚合酶链式反应技术进行扩增。Irvine等于1995年发现16重复(0.57)是最常见的等位基因，随后是17重复(0.32)和15重复(0.08)。仅有的其它等位基因是10重复。为了研究AR等位基因和个人数量行为评分之间的可能关联，AR基因按如下方式打分：对男性：＞16重复＝0，≥16重复＝1；对女性，＞16/＞16重复＝0；杂合体＝0；≥16/≥16重复＝1。 在品行障碍中，多巴胺D2受体基因(DRD2)的Taq A多态性(Grandy等，1989)被用来将这个基因座的作用同AR基因比较。以在这个多态性中阳性杂种优势的证据为基础(Comings和MacMurray，1998)，它的评分如下，11，22＝0，12＝1。 在5-羟色胺转运蛋白基因启动子区中利用了插入/删除多态性(Hells等.1995，1996)。HTT基因的评分如下，SS＝0，SL，LL＝1(Kauck等，1997；Lesch等，1996)。 在TS病人和正常对照中，AR等位基因或等位基因组频率的可能的差异用卡方检验进行分析。为了避免Bonferroni校正，用多元方差分析法同时检验八个行为评分。为了检验三个基因的累加效应，生成了AR+DRD2+HTT评分，在此处将每个个体的每个单个基因的评分加起来，这样其范围为从0(没有这三个基因的任何相关基因型)到3(所有三个基因的相关基因型)。用线性回归分析AR、DRD2和HTT基因(单独或联合)占CD、ODD和ADHD得分变异的百分率。为了检验这三个基因有累加作用的假说，用线性方差分析检验了每个得分的均数，包括一个总计ADHD得分。 结果 检测了AR等位基因的频率。在59个正常对照中，不同重复等位基因的频率如下：10-0.01，12-0.09，15-0.03，16-0.47，17-0.36，18-0.01，19-0.01，20-0.01。比较了正常对照组的频率和TS组的频率，包括所有等位基因的对照组和TS组的卡方值＝19.69，d.f.＝11，p＝0.0731。在重复等位基因长度与表型作用的潜在关联的研究中，发明人发现最节俭的方法是将等位基因分成一个短组和一个长组，并尽可能地使两个组在大小上相同。按照这种方法，发明人将AR等位基因分成≥16重复组和＞16重复组，在TS病人中，≥16等位基因的频率(0.66)同对照组(0.60)相比没有显著的趋势，x2＝1.06，d.f.＝1，p＝30。因而当对照组和TS组比较时，在α＝0.05时没有差异。 多元方差分析的结果，按照显著性递减的顺序排列，列于表I。CD得分的差异显著性最大p＝0.005，ODD的得分的显著性次之(p＝0.022)，多动的得分也有显著性(p＝0.032)。抽动、GSAP和LD得分的差异显著性最低(p＞0.6)。为了检验这种优先相关是否仅存在于男性中，发明人比较了男性(n＝237)和女性(n＝89)的结果，由于样本量太小，失去了检验的能力，二者差异不显著。然而，当按p值排序时，在两种性别中CD的差异都是最显著的。 因为AR基因的变异与性行为有潜在的相关性，发明人在14岁以上的人中用post hoc分析法检验了AR基因同性行为得分(Comings，1994)的可能相关性，发现没有显著性。还用post hoc分析法在女性中测定了较短的等位基因是隐性的还是显形的。由于杂合体所有得分的平均数相似于或小于＞16/＞16纯合体，表明≥16重复等位基因的作用是隐性的，在女性中只有≥16/≥16纯合体才能显示作用。 回归分析的结果列于表74。对CD的评分，AR基因占差异的2.4％(p＝0.005)，DRD2基因占1.3％(p＝0.005)，HTT占0.5％。AR基因和DRD2基因联合占差异的3.3％(p＝0.0009)，再加上HTT时占3.5％(p＝0.0007)。AR基因在ODD得分的差异中占1.6％(p＝0.022)。此处，AR基因与解释1.4％方差的DRD2基因和0.7％的HTT更具可比性。所有三个基因占ODD得分方差异的3.2％(p＝0.001)，AR基因占ADHD得分方差的1.1％(p＝0.053)。所有三个基因占方差的2.7％(p＝0.0027)。 用线性方差分析法检验累加AR+DRD2+HTT得分的线性结果，测定得分是否随着相关基因型数目的增加而增加。在α＝0.05时，无注意力、冲动、多动、ADHD、ODD和CD的得分均有显著的统计学意义。在Bonferroni校正后，多动、冲动、ADHD、ODD和CD得分仍具有显著的统计学意义。 经多元方差分析检验，AR基因的短GGC等位基因的存在和CD(p＝0.005)、ODD(p＝0.022)和多动(p＝0.023)的症状之间有显著的相关性。在男性和女性中，CD的相关性均最大。AR基因占CD得分差异的2.4％。AR、DRD2和HTT基因联合起来占品行障碍得分差异的3.5％(p＝0.0007)，占ODD的3.2％(p＝0.001)，占ADHD的2.7％(p＝0.0027)。 表73行为评分的多元方差分析(n＝326)A.所有的8个行为得分评分 F值 pCD 8.03 .005ODD 5.32 .022多动 5.20 0.23冲动性 3.18 .075无注意力 1.76 .181抽动 0.22 .634GSAP 0.22 .643LD 0.95 .923合计(Wilkes) 1.48 .171B.只有男性(m＝237)评分 F值 pCD 2.57 .110多动 1.50 .221抽动 1.18 .277ODD 1.13 .288GSAP 0.38 .534学习 0.34 .559冲动性 0.15 .695无注意力 0.11 .736合计(Wilkes) 1.14 .334C.只有女性(n＝89)评分 F值 pCD 1.63 .205 ODD 0.61 .433无注意力 0.54 .463冲动性 0.48 .489GSAP 0.41 .523多动 0.15 .703抽动 0.13 .712学习 0.03 .853总计(wilkes) 0.38 .929 表74对CD，ODD和ADHD评分的线性回归分析(n＝326)评分CD AR .155 .024 2.83 .005DRD2 .113 .013 2.05 .041HTT .073 .005 1.34 .183AR+DRD2 .182 .033 3.35 .0009AR+HTT .158 .025 2.89 .0041AR+DRD2+HTT .187 .035 3.43 .0007ODD AR .127 .016 2.31 .022DRD2 .119 .014 2.17 .031HTT .086 .007 1.57 .118AR+DRD2 .167 .028 3.06 .0024AR+HTT .146 .021 2.66 .0081AR+DRD2+HTT .181 .032 3.32 .0010评分ADHD AR .106 .011 1.93 .053DRD2 .091 .008 1.64 .101HTT .109 .012 1.97 .049AR+DRD2 .134 .018 2.44 .015AR+HTT .146 .021 2.66 .0081AR+DRD2+HTT .165 .027 3.02 .0027 实施例25吡啶甲酸铬补充对机体组成的影响：一个以安慰剂为对照的随机双盲实验前言：发明人还试图回答几个方法学的问题。首先，补充CrP能通过影响食欲而影响热量的摄入及通过增加代谢或日常活动水平而增加热量的消耗吗？第二，如果发明人控制并排除实验组和对照组的热量摄入和/或能量消耗的差异，还能得到同样的结果吗？第三，用比水下测试更精确并且更少依赖于受试者表现的其它检测身体组成的方法(如双能量X射线吸收测量法)进行测试时，这些结果能重复吗？第四，尽管三个研究小组关于人体组成的所有基本测试均相似，但在其它的研究中所见到的相对高的退出率(Anderson，1995)(29.7％)通过选择性损耗使结果偏移吗？如果用某种方法减少退出率或如果用“故意处理”的统计分析，这些同样的结果还能出现吗？为了回答这些问题，发明人采取了一些措施来控制身体活动和热量摄入的差异，应用DEXA法测定身体的组成，应用一种方法来达到近乎完美的顺应性最终完成试验。 材料和方法 在本研究中总共研究了130名患者，有122名(93.8％)完成了所有的检测，其中男性为17名，女性为105名，平均年龄为42.3岁。研究中患者是由健美教练和推销人员从得克萨斯州的圣安东尼奥和修斯顿的健康和运动俱乐部中招募来的，这些教练和推销人员将有关研究的信息提供给俱乐部会员，他们或亲自参加或介绍其朋友和亲属参加。在大多数的情况下，在研究的进行中，雇用健美教练来监督受试者，以确保他们在每周跟踪材料中记录他们的活动水平和热量摄入的量，并完成最终的测试。在填写同意书之前，所有的受试者均被要求咨询他们的私人医生。 大量的研究表明DEXA能准确测量肉中和动物尸体中的脂肪和瘦肉的含量(Evans，1989；Evans和Meyer，1992；McCarty，1993)，同中子活性分析法测定的实际骨骼重量和全身钙的总含量具有高度的相关性，用中子分析法测量全身骨骼矿物质含量，其错误率不到1％(Felig，1975)。同时还表明，对评估肥胖和非肥胖患者的身体组成这是一种精确的方法(Page等.1993；Eckel等，1992)。关于DEXA法精确性的最初研究是在1990年被报道的(Mooney和Cromwell，1993)并被随后的三个研究证实(Page等，1993；Hasten等，1994；Evans，1989)，表明虽然DEXA与水下称重、重氢稀释和全身总钾有高度的相关性(Page等，1992)，在DEXA检测中的错误不到应用全部身体水份或水下检测的错误的一半。对LunarCorporation的DEXA的变异系数(CV％)有如下的报道：脂肪的质量＝500g±2.5g；FFM＝600±1.3g；总组织质量＝400g±0.6g。除了被用来评价临床疾病的变化，DEXA的可靠性使得它可以监测短期限食和/或运动对局部和全身组成的影响(Page等，1993；Eckel，1992)。在最近的一篇关于DEXA的综述中，作者得出结论认为DEXA是迄今最精确地分析身体组成的工具之一(Lindemann等，1993)。 DEXA提供了身体组成的三室模型：脂肪、瘦肉组织质量和骨骼无机质含量。方法是用78kVp的恒压能源和K-edge滤器(铈)得到一束稳定的、双能量的一致光束，其有效能量达到40keV到70keV。这束光从头到脚进行一系列的横向扫描，间隔为1厘米；扫描的面积大约是60厘米×200厘米。每一个横断面收集120个象素元件，每一个象素大约5×10min。扫描速度为16厘米/秒时全身测量在10-20分钟内完成，扫描速度为8厘米/秒时需要20分钟。R值(在软组织中低能衰减与高能衰减的比率)的范围为从1.2到1.4(Lindemann等，1993)。 除了比较体重、身体脂肪百分率、脂肪质量和FFM的变化外，发明人还应用了在发明人以前的研究中描述的身体组成改善指数(BCI)(Glinsmann和Mertz，1966)。BCI的基础是如下的假设，即身体脂肪的丢失和FFM的获得是阳性治疗结果，而脂肪的获得和FFM的丢失是阴性治疗结果。因而脂肪质量的减少和/或FFM的获得在评分时为正，脂肪的获得和/或FFM的丢失为负，BCI值是综合这些得分的净结果。BCI作为变化量度比体重的优势已经在参加监督锻炼项目期间检测身体组成的研究中以及在患者同时接受或不接受行为修正程序的药物治疗研究中被证实。两组间进行比较，在安慰剂组中假设方差相同，进行双尾t检验，在实验组中用协方差分析来使各组在热量摄入和消耗上平衡。 作为减少退出率的一种方法，患者被要求提供100美元的支票，如果患者不能完成最终的DEXA测试和研究终末的调查表，支票不能被返还，这个要求附在签署的同意表中。患者被告知反还他们支票的唯一条件是完成测试，无论他们是多好或多不好的按照研究方案做，只要如实报告就行。完成最初的DEXA测试后，患者将得到一份测试结果的报告并被随机编号，范围为从1到130，每一个编号对应于一个外形一样的可能装有400mcg吡啶甲酸铬也可能是安慰剂的胶囊。调查者、分发药物的研究技术人员和患者均不知道哪一个患者号对应的是安慰剂或哪一个患者号是有活性的药物。一个独立的地方药剂师作为研究的受托管理人并随机将药瓶分配给受试者，这些药瓶事先用“X”或“Y”标记，分别对应于有活性的药和安慰剂。在研究完成并将所有的材料收集和计算完毕后，受托管理人拆开由制造商提供的表明哪一个是活性药的信封并通知高级调查者(GRK)。所有的信息均在第二作者(KB)的监督下由得克萨斯大学健康科学中心的计算资源系进行分析。测试的总结期间，完成最终测试者将得到测试结果和抵押的支票并被要求回答每天实际服用胶囊的量，以交叉核对所用药物的量。对这些资料的随后分析表明受试者每天服用的CrP平均为357mcg。 提供给患者一个工作手册，其中概括了评估热量摄入的一般程序、普通食物的营养信息和计算及记录日常热量平衡的日志。为了监测和调整身体活动时能量消耗的差异，在走路时，所有的患者均配带在以前的研究中用过的计步器(Evans和Press，1989；Kitchalong等，1993)，这些计步器可以反映在每一天中他们行走的步数，或者反映在无法用这些器具的活动中的步数等量值。患者在用来记录他们的热量摄入的相同日志中记录每天他们行走的总步数，随后用来调节患者的身体脂肪的净变化，即身体脂肪每变化1磅+或-3500卡。 结果 表75中提供了对完成研究的122名患者的基线描述的统计表。未完成研究者与完成研究者的比较表明任何身体组成的参数均无显著性差异。 表75122个患者随机筛选进入接受安慰剂或每天400 MCG吡啶甲酸铬组，这些患者的基线人口统计资料的比较 Y身体质量指数年龄(y)*体重(kg)*％身体脂肪*(kg/m2)*有活性的(n＝62) 41.1+-10.5 85.5+23.0 42.4％+8.3％ 30.2+7.1安慰剂(n＝60) 43.5＝-7.6 79.9＝-20.4 41.8％＝-6.7％ 28.4+5.4p水平(双尾检验)) p＝0.24 p＝0.16 p＝0.65 p＝0.13*均值±SD表76提供了一个在90天测试期间发生的变化的比较。 表77在90-天测试期间，接受安慰剂或400 mcg的吡啶甲酸铬的参与者之间身体组成参数平均变化的比较。所有资料均控制热量摄入和消耗的差异体重 无脂肪(kg)*％身体脂肪 脂肪质量*质量*BCI*有活性的 -7.8+-9.7 -6.3％＝8.5％ -7.7+-9.5 -0.1+-2.2 +7.6+-4.5(N＝62)安慰剂 -1.9+-4.0 -1.2％+-5.7％ -3.4+-6.8 -0.3+-2.0 +3.1+-7.6(n＝60)P水平**p＝＜.001 p＝＜.001 p＝.004 p＝.568 p＝.004*均值+-SD**双尾学生t-检验讨论表76的基线资料表明两组的任何身体组成参数在统计学上差异不显著，说明随机分组是成功的，提供了患者数相同的两个分组。表77的资料表明校正两组的热量摄入和能量消耗使两组相当后，服用CrP可以显著影响体重、身体脂肪的百分率和BCI。还值得注意是即使没有校正热量吸收和能量消耗，用药组的变化同发明人先前的研究结果是一致的，包括身体脂肪的显著减少(p＝0.02)。 值得注意的是在本项研究中身体组成的主要改善是身体脂肪的减少。DEXA检测法是少数几种直接检测身体脂肪组织的身体组成检测技术之一，水压检测以及其它许多身体组成的检测方法评估患者身体的脂肪均依赖于一个假设，即假设他们的身体密度反映的脂肪百分率同在一些尸体的研究中发现的结果是相同的。而且，水压检测不能实际测量用来计算身体密度的身体体积—其从在水内及水外得到的体重推测它。因而即使是用水压法检测的身体脂肪组织的重量也是由两种不同的推测而得到的，而不是从身体脂肪组织的测量中得到的。当然，由水压检测得到评估还受受试者在水下时持续呼气能力的影响，即使呼气是一致的也还要受到肺体积差异的影响。DEXA检测法解决了这些困难，因为这种检测仅仅需要在身体被扫描时在开放的检测台上静止15到20分钟。发明人认为在试图检测引起身体组成很小变化的物质的功效时，控制检测技术的易变性是绝对必要的。 要求患者提供按条件返还的抵押金对完成最终测试的受试者人数产生了很大的影响，不再需要设立统计学的对照，如“故意处理”。研究后的评论揭示受试者认为交纳抵押金(并没有施行)的要求是合理的。在参与本研究的130位受试者中只有8人没有完成最终的测试。其中一人怀孕并被要求退出实验；三人从本地搬走；一人在后期测试期间生病；三人原因不清楚。因而，对所有的意图和目的来说，在研究中没有可以偏移结果的退出。虽然发明人的材料不是决定性的，但要求抵押金看来值得进一步研究。 由于要求患者交的抵押金完全是以受试者完成研究和研究结束时的调查表为基础的，并且不考虑患者是多大程度地按着原方案去做的，在安慰剂组和活性药组中的未服药患者的相等人数不能平衡组间影响。安慰剂组中未服药的患者对结果检测无影响，因为安慰剂中不含有活性的组分。然而，在活性药组中不服药的患者将减少药物原本应该起到的作用。实际上，完全不服从实验方案的活性药组的患者实际上是安慰剂组患者。因而，缺乏顺应性将很自然的减小两组间的差异，所以要强调获得受试者实际服用药量的准确材料。每周登记和人员监督为发明人提供了更全面的资料并且减少了由于缺少顺应性而造成的对结果的偏移。 结论 这些资料表明，当身体组成指数(BCI)被用作结果标准代表非脂肪组织中的净增加值加上身体脂肪的丢失值时，服用吡啶甲酸铬可以显著改善身体组成。 实施例26多基因遗传和微/小卫星精神遗传学中的微/小卫星多态性 小卫星被定义为长度达65个碱基对的重复序列(Wright，1994)。微卫星由更短的重复序列组成，其长度为2-5 bp不等。在本实施例中，除非特别说明发明人用微/小卫星这个术语来统称二者。 由于在整个基因组中微/小卫星重复序列的高频率，发明人和其他人经常在关联研究中利用这些多态性。发明人最初的假设是象中性和沉默单个碱基对的多态性一样，微小卫星等位基因应该同其它影响基因功能的“关键”突变是连锁不平衡的。然而经过多年的研究之后，发明人开始怀疑微小卫星本身可能就是“关键”突变。虽然发明人的研究没有包括极长三联体重复的多基因遗传，但是这些研究中的确给出了这样的概念，即重复等位基因的长度变化，即使是在“正常”范围之内，可以通过广泛的机制影响基因的功能。与微/小卫星的多态性相关的两个方面是他们的突变率和大小。 微/小卫星的突变率比非重复序列的突变率更高(Jeffreys等，1987)。缺少侧翼标记的交换表明新的突变可能是由于复制滑动或复合体转换样事件(Wolff等，1989)。高突变率使得这些多态性对关联研究的价值变小，因为数代之后连锁不平衡关系中混入了太多的混杂因素，而这种连锁不平衡关系要求在许多代中同相中保持两种不同的多态性。然而，如果微/小卫星突变本身是“关键”等位基因，在关联研究中它们可能实际上起到更大的作用，尽管突变率较高。 如果连锁不平衡牵涉在微/小卫星等位基因与具体表型的相互关联，那么每一次发生卫星序列新的突变，应该有特定的几率与“关键”的等位基因发生在相同的染色体上。然而，平均来说，在带有这些“关键”等位基因的连锁不平衡中，不应该存在较长的突变等位基因对较短的突变等位基因的优势倾向。然而，如果重复序列的大小在基因的调节中起作用(见下文)，那么各组中不同大小的等位基因，而不是具体的等位基因或等位基因的序列，与数量性状的相关性就应当有一定的倾向性。如果存在一个重复基因频率的主峰，那么较长和较短的等位基因均可能与表型效应相关。 存在长度和序列均被涉及的可能性，并且不同长度的微/小卫星等位基因可能对基因的功能有影响。如果不同的微/小卫星等位基因被表明对基因的转录效率或翻译起作用，这个假说可能会更有意义。实际上有许多这样的例子。 多基因遗传的一般假说 多基因遗传的微/小卫星假说的各个方面如下：许多微/小卫星对与之相关的基因的表达起作用；很多基因同一个或更多的微/小卫星相关联；结果，很多基因以一定范围的功能等位基因多态性变体出现。那些与几个微/小卫星多态性(每一个具有多个等位基因)相关的基因，将呈现尤其大数目的功能单倍型。虽然大部分基因与基因活性平均水平的±10-15％相联系，但是它的范围可以高到±40％，并且如果涉及到多个微/小卫星多态性它们的作用可以是累加性的。 另外，重要的功能变体在普通人群中是普遍的，其流行率范围为1％到100％。如果存在一个完全由高功能等位基因(＞平均的10％)和低功能等位基因(＜平均的10％)组成的等位基因的二分分配形式，100％的流行率便可能出现。这些功能变体对表型仅起轻度的作用(变异的0.5-8％)，很少引起疾病，即，它们通常不是典型的“一个基因-一个疾病”的常染色体的显性或隐性遗传疾病。因为大部分的微/小卫星多态性是在外显子中，多基因疾病中的突变常是在外显子外并且经常在转录序列之外。当给定的疾病涉及六个以上的基因时，Log评分连锁研究将失去效力(Risch和Merkangas，1996；Weeks和Lathrop，1995)。连锁研究是以如下的假设为基础的，即一个给定的等位基因的出现是与某种疾病相关联的，一个给定等位基因的缺失是与某种疾病的缺失相关联的。相反，在多基因遗传中疾病是与几个不同基因的等位基因数目的阈值关联。如此，一个家系中的许多成员可能携带一个突变基因，但是并没有患病，因为缺少必要的其它突变基因的阈数目。因而，一个家庭的许多成员可能携带有一个特殊的基因而且没有患病，其他患病的成员可能没有携带该突变的等位基因(Comings，1996f，l，m)。 高功能和低功能等位基因均可影响表型。例如，在精神病遗传学中，一个给定的受体基因的表达增加导致受体高敏感性或者一个受体基因表达下降导致的受体低敏感性均与表型的变化有关联。当一个人遗传了影响相同表型的低或高功能基因的阈数目时，一种多基因疾病便可发生。这样，如果在一个给定的数量变量中有20种不同的多基因起作用，任何带有10个或10个以上这些低或高功能变体的人将出现明显的表型变化。阈数目的值将根据等位基因的低或高功能性的程度而变化，表型变化的严重程度依赖于多基因的数目超出关键阈数目的范围。 因为微/小卫星非常普遍，所以多基因疾病发生的可能性也相当高。因而多基因疾病比单基因疾病更为常见。在普通人群中，很多多基因的频率范围是从25％到超过50％，遗传阈数目的机会比单基因疾病的机会高的多，对一个给定的微/小卫星，等位基因对表型可能起阳性作用或阴性作用，这依赖于其它基因的遗传背景和表型的特性。一个实际的例子是被Gelernter等(1994)观察到的可卡因引致的妄想狂与多巴胺受体转运蛋白基因(DAT1)的9等位基因之间的关联。相反，Cook等(1995)和Comings等(1996j)观察到DAT1基因的10等位基因与注意缺陷多动障碍关联。有人可能从这些分散的报道中得出结论认为一个或其它的观察结果一定是不正确的。然而，这里存在二者均正确的合理的可能性，一个给定微/小卫星的不同等位基因可能与不同的表型相关。研究多基因疾病的合理方法是选择一个侯选基因并检测最近的微/小卫星多态性等位基因对相关数量特性的影响。 上面提出的多基因遗传的特性还有很多另外的含义。如果许多微/小卫星多态性具有改变与其最近的基因的转录或翻译率的可能性，如果很多基因至少同一个微/小卫星相关，那么很多基因或是大部分基因有可能在一定程度上对它们所控制的表型的多基因遗传起作用。 许多关于在精神病及其它疾病中特殊基因潜在作用的研究中，均以研究侯选基因外显子的突变开始。当这个研究出现阴性结果时，这个基因常常被认为对被检测的疾病没有作用。如果复杂多基因性状中涉及的大多数突变是在非外显子内，这样的结论将是无效的。目前的假说不排除对基因功能仅起很小作用的外显子突变的作用，而只是强调尽管存在那个基因的功能上重要的变体，这些研究仍可能出现阴性结果。 如果每一个侯选基因对一个给定的数量性状的差异仅起0.5-8％的作用，根据研究的表型和大小，结果可能是轻微的、界线的或阴性的显著性。然而，检测两个或多个侯选基因的累加作用可能会显示一个更显著的效应。 许多关联研究仅简单地检测患者的某种特殊等位基因的频率同对照组比较。然而，当诊断是以一套复杂的症状为基础时，一个特定的等位基因可能与这个诊断涉及的几个数量性状显著相关，但不是诊断本身。例如，如果精神分裂症是一种多基因疾病，特定的侯选基因的等位基因可能显示与阴性症状(如感情淡漠)显著相关，这在有些病例中会出现但并不是在所有的病例中都会出现，但是并不与阳性症状(如幻觉或错觉)或精神分裂症的诊断本身相关。对简单的两分行＝性诊断进行有限的分析，而不是检测次级症状数量性状，可能会错过一些对多基因疾病起重要作用的基因。在正常对照和患者中单个等位基因的频率没有差别时，杂种优势也可能会使一个基因对表型起重要作用(Comings和MacMurray，1977)。 如果一种假说有直接启发价值，它就非常有用。当大量的甚至是可能基因型的更大数目的等位基因中的每一个等位基因被检测时，研究的有效性可能严重受损而使其无用，这是在关联研究中使用高度多态的微/小卫星多态性的一个缺点。然而，如果重复序列的大小是关键变量，即便是最复杂的多态性也可被归纳为三个基因型，较短等位基因的纯合体、较长等位基因的纯合体和杂合体。在研究一些基因(OB，MAOA，MAOB，CNR1，GABRA3，GABRB3，DBH，FRAXA和NOS1)在行为性状中的作用时，发明人建立了这个有价值的方法。 虽然许多潜在的有意义的基因已被克隆和测序，但对大部分来说，在基因组数据库中均未报告其多态性，使得关联研究不可能。基于目前的假说，如果序列是已知的，一种鉴定有用的微/小卫星的方法是从商业渠道得到携带有感兴趣基因的大的基因组克隆。在这些克隆中筛选可能为关联研究提供较多信息的重复序列。 目前的模型表明在多基因遗传的研究中，形成Z-DNA的重复序列被证明是最有价值的。这表明用Z-hunt-II程序(Schroth等，1992)筛查已知序列，可以提供关于最有用多态性区域定位的重要线索。为了验证这一点，发明人利用这个程序检测了NOS1的序列(Hall等，1994)。以对NOS1基因敲除小鼠(Nelson等，1995)攻击行为的研究为基础，发明人用重复多态性检测了人的各种行为性状，发明人通过实际检测NOS1基因的序列鉴定了重复多态性(Hall等，1994)。由于观察到了一些关联，发明人想知到：发明人利用的多态性是否可以被Z-hunt-II程序鉴定；在这个基因中是否还有其他区域含有有用多态性。这两个预测都是正确的。基于不同长度的NOS1(CA)n等位基因可能在NOS1基因的功能中起作用的假说，发明人将等位基因分成两组，包含等位基因的最短的50％(＜199bp)组和最长的50％(≥199bp)组。最初的研究提示与行为表型的一些相关性。随后发明人用Z-hunt-II规则系统(Wang等，1997)筛查了公布的NOS1基因序列的Z-DNA区，结果表明发明人应用的多态性是三个高Z-DNA含量区之一。第二个Z得分更高的区域是以前未曾发现的新的多态性区域。 这三个例子实际上说明了这个模型的预测是怎样导致加快鉴定涉及多基因疾病的基因的。这个模型与不久就可以利用的人类基因组计划的材料结合起来应用，通过提高鉴定已知侯选基因附近的微/小卫星的能力，对发明人了解多基因疾病的知识有很大的作用。 单氨氧化酶A基因(MAOA)和VNTR多态性等位基因分成四组，与特殊症状有关的许多数量变量有显著的关联。显示了对351名抽动秽语综合征的先证者及他们的亲属和正常对照的狂燥症状的评分结果。携带有最长等位基因的受试者的得分显著提高(Gade等，1997)。(b)在物质滥用者组和对照组应用相同的多态性。携带最长等位基因与药物滥用得分之间也有显著的关联(Gade等，1997)。(c)基于SCL-90测试的焦虑的数量得分和肥胖基因微卫星多态性等位基因的相关性分成＜208bp等位基因(左)纯合的受试者和≥208bp(右)等位基因纯合或杂合的个体。(d)事件相关电位(ERP)P300波(以微伏计)与CNR1大麻酯受体基因微/小卫星多态性等位基因的关联分为≥5重复等位基因(右)纯合的受试者和＜5bp(左)重复等位基因纯合或杂合的个体(Johnson等，1997)。(e)Brown成人ADD评分和GABAA，B3(GABRB3)受体基因微卫星多态性等位基因的关联分为≥185bp等位基因(左)纯合的受试者和＜185bp等位基因(右)纯合或杂合的受试者。(f)在评估IQ的随机成年人中，行为IQ与FRAXA基因座的正常等位基因间的关联(Comings等，1997a，b或c)。 实施例27三个肾上腺素能基因(ADRA2A、ADRA2C、DHB)对伴随及不伴随学习不能的ADHD患者的累加性效应发明人检测了三个肾上腺素能基因，肾上腺素α2A受体(ADRA2A)基因、肾上腺素(ADRA2C)受体α2C基因和多巴胺β羟化酶基因(DBH)与伴随及不伴随学习不能(LD)的ADHD的相关性或对它的累加性效应。 两种类型的ADHD和发明人指定的可能侯选基因归纳于表78。 表79伴随及不伴随认知不能(CD)的ADHD不伴随CD的ADHD 伴随CD的ADHD认知障碍 无 存在语言IQ 正常 低涉及的大脑区域 前额叶 前额叶/颞叶涉及的大脑神经核 盖区腹侧 蓝斑初级神经递质 多巴胺 去甲肾上腺素次级神经递质 NA、GABA、5羟色胺及其它 多巴胺、GABA、5羟色胺及其它功能 分析信息和起始应答 适应和处理新刺激注意缺陷型 广泛 选择性执行功能障碍 存在 通常不存在侯选基因 DRD2、DRD4、DRD5、 ADRA1A-ID、ADRA2A、ADRA2C、DAT1、DBH DBH、NT、PNMTHalperin等(1997)报道，血浆MHPG与语言IQ(但不是行为IQ)之间的相关性同因暴力或重大的犯罪而被捕的少年犯的语言IQ较低的发现非常相似(Hirschi和Hindelang，1977；Miller，1988；Shulman，1951；Moffitt和Silva，1988)。血浆MHPG水平与低语言IQ之间的负相关说明在反社会行为中可能涉及NA基因。 因为肾上腺素α2受体是可乐定的作用部位，富含于前额和颅顶部的注意力中心，并且在突触的NA转换中起调节作用，因而发明人试图证实肾上腺素α2A(ADRA2A)基因、或肾上腺素α2C(ADRA2C)基因或多巴胺β羟化酶基因的基因型的差异是否与ADHD本身相关，以及是否与ADHD+认知障碍亚型优先相关。发明人应用了ADRD2A基因启动子区域中的MspI多态性(Lario等，1997)、ARDA2C基因的二核苷酸重复多态性(Riess等，1992)和DBH基因的TaqIB1/12多态性(d’Amato等，1989；Wu等，1997)。 方法 在325名受试者中决定ADRA2A和DBH中的单碱基对多态性和ADRA2C中的二核苷酸重复多态性的基因型频率，其中267人为抽动秽语综合征患者，58人为正常对照。ADHD和LD行为变量通过父母或自己填写的调查表和直接会面的方式评价。为了评估与反社会行为的可能联系，还评价了品行障碍和对立违抗障碍的症状。 研究组由325名不相关的受试者组成。其中267人符合DSM-III-R和DSM-IV的抽动秽语综合征的诊断标准且均按D.E.C.直接会面。剩下的58人为对照。所有人均为非西班牙裔白种人。TS患者来自希望医疗中心城(City of Hope Medical Center)抽动秽语综合征诊所。发明人先前将TS患者分成了以下几组，轻度(一级，慢性抽动，很轻不用治疗)、中度(二级，需要治疗)和重度(三级，对他们生活中的某些方面有很严重的影响)(Comings，1990；Comings和Comings1987b；Comings和Comings，1984)。在TS患者中，25％为三级，12％为一级，剩下的71％为二级。TS和ADHD是相似的障碍，大多数到诊所就诊的患者同时患有ADHD(Comings，1990；Coming和Comings，1987b；Comings和Comings，1984)。对照、不伴随ADHD的TS患者和伴随ADHD的TS患者的存在，使得这组研究尤其适合于检测不同基因的等位基因与ADHD(作为连续性状变量)的相关性。TS患者和对照在其它地方均有详细的描述(Comings等，1996j；Comings，1994a；Comings 1994b；Comings，1995a；Comings，1995b)。TS患者的平均年龄为18.0岁(S.D.13.2)。但是，大多数为较大的儿童和青少年，29％为21及21岁以上。对照组的平均年龄为46.3岁(S.D.15.38)。 对照组和TS组的每一位均需要填写一张调查表，其中包括所有的DSM-III、DSM-III-R和DSM-IV对ADHD的诊断标准。对较大的受试者要求对他们小时侯的情况回答。ADHD评分是以DSM-IV(1994)中对ADHD的诊断标准为基础的。问题是问在儿童及青少年时代是否存在这些症状，是没有或很少发生(评分＝0)，偶尔存在(评分＝1)，还是一直存在(评分＝2)？所有这三个回答被用来完全区别三个严重程度的患者。ADHD评分是DSM-IV中无注意力、冲动和多动症状的总和。 如果孩子不到14岁，由父母填写调查表，14岁或14岁以上的受试者由本人填写或在父母的帮助下填写。亲自同受试者及其家属一起看调查表以确保其正确性。 为了评价合作障碍问题的存在，受试者被要求回答下面三个问题：1)你曾被分到过教育困难(EH)、学习困难(LH)或学习障碍(LD)特殊班吗？2)你曾被分到过智力班吗？3)你曾经被告知你有学习障碍吗？每一个问题得分为：不，得0分；是，得1分。将得分相加形成LD的得分。在加利福尼亚参加上述特殊班中的任何一个均需要一个或更多的教育心理学家的全面的评估，即评价该学生比其同伴落后两年或两年以上。 为了评价在小学的学习成绩，受试者被要求回答“从一年级到六年级你的a)数学、b)阅读、c)写作成绩在总体上是平均、平均以下、还是平均以上？”，平均以上得0分，平均得1分，平均以下得2分，将各科得分相加得到GSAP得分。 使用了相似的品行障碍和对立违抗障碍DSM-IV诊断标准的0、1和2分级。 如果受试者符合DSM-IV对注意缺陷/多动障碍联合型、无注意力优势型或多动优势型的诊断标准，则被认为有严重的ADHD问题。如果受试者被分到过上述的特殊教育班或曾被告知有学习障碍，则被认为有严重的学习障碍。符合ADHD和学习障碍诊断标准的受试者被分为A+LD+组；不符合ADHD而符合学习障碍的诊断标准的受试者被分为A-LD+组；符合ADHD而不符合学习障碍的诊断标准的受试者被分为A+LD-组；对二者均不符合的受试者分为A-LD-组。相似的分组在GSAP得分中应用，得分0-4者为GS-，得分为5-6者为GS+。 调查表(Comings，1990)还提供了一个高度结构化的方法，该方法可提供与ADHD相关的数量性状：ADHD量表的次级得分，学习、小学学习成绩、品行障碍和对立行为等问题。通过比较这种工具和接诊者使用相同结构化工具的情况，作为症状评估方法基础的该调查表的准确性、实用性和敏感性已经被其他人证实(Gadow和Sprafkin，1994；Grayson和Carlson，1991)。发明人查阅了每一个受试者得调查表，表明它们可以准确反映那些通过亲自接诊所得到的信息。 ADRA2A是利用启动子区的单碱基对MspI多态性确定基因型的(Lario等.1997)。利用了它们的PCRTM条件和引物。ADRA2C是利用二核苷酸重复多态性和PCRTM程序(Riess等，1992)。用0.1uM荧光标记的引物，通过聚合酶链式反应(PCRTM)扩增靶DNA。PCRTM产物用100ul去离子水稀释，取0.5ul加入到2.5ul的75ul甲酰胺+9.5ul ROX标准液+9.5ul蓝糊精染料的混合物中。在92℃变性2秒钟，将样品加入Applied Biosystem 373 DNA测序仪(AppliedBiosystem，Inc.，(ABI)Forster City，CA)的6％PAGE中，并在1200伏特和恒定30W的条件下跑胶4小时。凝胶用内部标准(ROX 500)处理和分析。根据颜色和片段大小，峰被Genotyper(1.1版)(AppliedBiosystem，Inc.)识别.在183bp和185bp产生主要等位基因，较小频率的181bp等位基因，另外还有几个非常小量的等位基因。这些被分成三个基因型：≤183/≤183bp＝1，杂合体＝2，≤183/≤183bp＝3。 用TaqIB1/B2多态性确定DBH基因的基因型(d’Amato等，1989)。但这原先需要与标记的DBH克隆进行DNA印迹分析，发明人采取了以PCRTM为基础的检测(Wu等，1997)。 多巴胺基因(DRD2和DAT1)的基因分型在先前已被描述(Comings等，1996)，发明人用微卫星多态性及其技术确定DRD5基因的基因型(Sherrington等，1994)。 进行了三种类型的统计分析。首先，为了评价ADRA2A和ADRA2C基因型的作用，对ADHD得分(每个基因得分为11＝1，12＝2，22＝3)进行了方差分析。一旦基因型分组法被选定，每一个基因被指定为一个两分性变量来表明相关基因型的存在与否。A2A+A2C得分被用来评价两个基因的累加性效应。在这里，ADRA2A得分为0和ADRDA2C得分为0的受试者记为0分。ADRA2A得分为1和ADRA2C得分为1的受试者记为2分，任何一个基因的得分为1分者记为1分。NA基因的得分是由所有三个基因的单个得分相加而得。 为了避免Bonferroni校正，将六个行为的得分作为一个组用多元方差分析法进行检查。每个基因单独及各个基因联合起来进行这种检查。为了评估每个基因单独及联合起来占得分差异的百分率，进行了单个基因得分、A2A+A2C得分和NA基因得分与行为得分之间的线性回归分析。基于先前各个NA基因的作用有累加性效应的假设，为了评估这种作用的大小，对ADRA2A和ADRA2C或ADRA2A、ADRA2C和DBH的累加性效应的结果进行了线性方差分析(多项式子命令＝1)。对在α为0.5时有显著性差异的均数进行了post hoc分析。所有的统计分析均用SPSS统计软件包进行处理(SPSS，Inc，Chicago，IL)。 结果为了检查ADRA2A基因型对ADHD得分的作用，进行了方差分析。携带11基因型的受试者的平均得分为17.4(n＝180，SD＝11.1)，12基因型为19.05(n＝125，SD＝10.52)，20基因型为22.05(n＝20，SD＝11.67)，F比＝2.05，p＝0.13。在多元方差分析中，ADRA2A基因的得分如下：11＝1，12＝2，22＝3；在回归分析中，它的得分为：11，12＝0，22＝1。 对六个得分进行了多元方差分析(表80A)。ADRA2A基因与LD、GSAP、冲动性和总的MANOVA有显著性关联。对ADHD、LD、GSAP、CD和ODD得分进行了线性回归分析(表3)。它与LD和GSAP得分有显著性关联，如果经Bonferroni校正(α为0.05/5或0.01)，LD得分仍有显著性。 表80ADRA2A、ADRA2C和DBH基因的多元方差分析(N＝325)评分 F-比 pA.ADRA2A基因无注意力 1.45 .236冲动性 3.67 .027多动 1.23 .295GSAP 3.42 .034LD 3.80 .023品行 0.27 .763ODD 1.21 .299总和 1.81 .034B.ADRA2C基因无注意力 5.18 .006冲动性 4.11 .017多动 2.82 .061GSAP 1.91 .149LD 1.78 .169品行 1.44 .239ODD 1.64 .194总和(Wilkes) 1.09 .360C.DBH基因无注意力 2.02 .134冲动性 1.28 .278多动 1.12 .325GSAP 2.48 .086LD 1.40 .506品行 1.40 .247ODD 1.71 .182 Scores F-ratio p总合(Wilkes) 0.53 .915D.ADRA24+ADRA2C基因无注意力 5.20 .006冲动性 5.51 .004多动 3.73 .025GSAP 5.26 .006LD 5.40 .005品行 0.35 .709ODD 3.06 .050总和(Wilkes) 1.62 .070E.ADRA2A+ADRA2C+DBH基因无注意力 5.25 .002冲动性 4.21 .006多动 3.76 .011GSAP 5.01 .002LD 3.62 .013品行 0.85 .465ODD 3.38 .018总和(wilkes) 1.49 .070F.ADRA2A+ADRA2C+DBH基因+DRD2+DAT1+DRD5无注意力 4.81 ＜.001冲动性 5.31 ＜.001多动 4.44 ＜.010GSAP 4.41 ＜.001LD 2.91 .009品行 2.80 .011ODD 4.73 ＜.001总和(Wilkes) 1.58 .01 表81ADRA2A，ADRA2C和DHB基因的线性回归分析(N＝325)r r2T pADHD得分ADRA2A基因 .086 .007 1.57 .117ADRA2C基因 .161 .026 2.94 .0035DBH基因 .107 .011 1.94 .054A2A+A2基因 .181 .033 3.32 .0010All3NA基因 .200 .040 3.67 .0003All3DA基因 .157 .025 2.85 .0047NA+DA基因 .247 .061 4.56 ＜.0001LD得分ADRA2A基因 .152 .023 2.78 .0056ADRA2C基因 .077 .006 1.40 .162DBH基因 .057 .003 1.04 .291A2A+A2C .136 .019 2.49 .013All3NA基因 .136 .018 2.48 .0135All3DA基因 .028 .001 0.51 .61NA+DA基因 .111 .012 1.97 .049GSAP得分ADRA2A基因 .128 .016 2.32 .020ADRA2C基因 .102 .010 1.86 .065DBH基因 .122 .015 2.22 .027A2A+A2C .148 .022 2.70 .007All3NA基因 .185 .034 3.40 .0008All3DA基因 .097 .009 1.73 .085 r r2T pNA+DA基因 .203 .042 3.66 .0003品行得分ADRA2A基因 .0008 .0000 0.01 .989ADRA2C基因 .045 .002 0.83 .409DBH基因 .088 .008 1.59 .113A2A+A2C .041 .002 0.74 .462All3NA基因 .085 .007 1.54 .125All3DA基因 .071 .005 1.25 .211NA+DA基因 .109 .012 1.92 .054ODD得分ADRA2A基因 .085 .007 1.55 .122ADRA2C基因 .093 .009 1.70 .091DBH基因 .100 .010 1.81 .070A2A+A2C .121 .015 2.20 .028All3NA基因 .151 .023 2.77 .006All3DA基因 .162 .026 2.89 .004NA+DA基因 .221 .049 4.00 .0001为了检测ADRA2C基因型对ADHD得分的作用，进行了方差分析。携带11基因型的受试者的平均得分为18.9(n＝122，SD＝10.41)，12基因型为15.90(n＝112，SD＝10.99)，22基因型为20.54(n＝91，SD＝11.1)，F比＝4.90，p＝0.0080。通过post hoc Tukey检测12杂合体的均数显著低于11和22纯合体，说明存在负性杂种优势(Commings和MacMurray，1998)。因而，在线性回归分析中，ADRA2C基因的得分如下：12＝0，11或22＝1。 对ADRA2C基因得分与六个行为得分的关系进行了的多元方差分析(表80-B)。ADRA2C与无注意力和冲动性有显著的相关性。在线性回归分析中(表81)，与ADHD有显著的相关性，在α为0.01时，仍具有显著性。 发明人先前在TS-ADHD患者中研究了多巴胺-B羟化酶基因(Comings等，1996j)，并发现TaqB1等位基因的存在与ADHD相关(d’Amato等，1989)。因而，发明人对DBH基因得分规定为：22＝0，11或12＝1。通过多元方差分析(表80-C)，发现没有一个得分具有显著性。在线性回归分析中，DBH基因与GSAP得分呈显著相关，α为0.01时则无显著性。 为了检测两个肾上腺素α2受体基因的累加性效应，将两个单个基因的得分相加得到A2A+A2C得分。在325个受试者中，得分为0的有106人(32.6％)，得分为1的有205人(63.1％)，得分为2的有14人(4.3％)。对A2A+A2C得分与六个行为得分的多元方差分析的结果列于表80-D。结果对无注意力、冲动性、多动、GSAP、LD和ODD得分有显著性。在α为0.01时，ADHD和GSAP得分仍有显著性。对除了CD得分以外的其它行为得分的线性方差分析表明，携带有0、1或2个变异基因的受试者的得分是逐渐增加的。ADHD、无注意力、冲动性、多动和GSAP的得分均具有显著性，p＜0.01。 为检查三个肾上腺素基因的可能的累加性效应，将ADRA2A、ADRA2C和DBH基因的得分相加得到NA基因得分。在325个受试者中，得分为0的有36人(11.1％)，得分为1的有132人(40.6％)，得分为2的有145人(44.6％)，得分为3的有12人(3.7％)。对NA基因的得分与六个行为得分的多元方差分析的结果列于表80-E。无注意力、冲动性、多动、GSAP、LD及ODD的得分均有显著性。在线性回归分析中(表81)，ADHD、LD、GSAP和ODD得分均有显著性，在α为0.01时，ADHD、GSAP和ODD仍有显著性。 ADHD的次级得分、LD、GSAP和ODD得分的线性方差分析表明，携带有0、1、2或3个变异基因的患者的得分是逐渐增加的。ADHD、多动、无注意力、GSAP和ODD的得分具有显著性，p＜0.01。 发明人用线性方差分析对NA基因得分与ADHD-LD-、ADHD+LD-、ADHD-LD+、ADHD+LD+四个组之间的关系进行了卡方检验，结果列于表82。结果表明携带所有三个NA基因变体的患者频率在上述四个组中是逐渐增加的：在ADHD-LD-组中为0.6％、在ADHD+LD-组中为5.4％、在ADHD-LD+组中为7.7％、在ADHD+LD+组中为11.4％。在上述四个组中，没有携带NA变异基因的患者的频率是逐渐减少的，分别为14.4％、8.9％、7.7％、2.9％。当对完全4×4表格进行线性趋势卡方检验(Cohran，1954)时，p＝0.0005。如果将A-LD+和A+LD+合并，Pearson卡方值＝17.6，d.f.＝6，p＝0.007，线性趋势卡方值＝12.9，d.f.＝1，p＝0.0003。 表82NA基因评分对ADHD-LD-、ADHD+LD-、ADHD-LD+、ADHD+LD+组的卡方检验分析[病例数(％)]NA得分 A-LD+ A+LD- A-LD+ A+LD- T0 24(14.5) 10(8.9) 1(7.7) 1(2.9) 36(11.1)1 73(44.2) 41(36.6) 4(30.8) 13(37.1) 131(40.3)2 67(40.6) 55(49.1) 7(53.8) 17(48.6) 146(44.9)3 1(0.6) 6(5.4) 1(7.7) 4(11.4) 12(3.7)T 165(51.1) 112(34.3) 13(4.0) 35(10.7) 325(100.0)Pearson卡方18.3，df＝9，p＝0.03线性趋势卡方12.0，df＝1，p＝0.0005因为NA基因与GSAP得分的相关性比与LD得分的相关性更大，发明人还检测了GSAP得分和NA基因得分的交叉表格。结果表明NA基因得分为3分的患者的频率范围是：GSAP得分为0到2的患者是1.6％，GSAP得分为3到4的患者是0.8％，GSAP得分为5到6的患者是11.8％。在二者得分的整个范围内，线性趋势卡方检验有显著性，p＝0.004。因而，不依赖于ADHD的存在或不存在，那些2或3个科目的成绩低于平均值的儿童最有可能携带变异的NA基因。 为了检测ADHD存在与否的作用，受试者再一次被分为四组，在这里GS+是GSAP得分为5到6，GS-是GSAP得分为0到4，四个组分别是A-GS-、A+GS-、A-GS+和A+GS+。与NA得分的卡方检验的结果列于表83。在这四个组中，NA基因得分为3的受试者的频率是逐渐增加的，分别为0.6％、2.4％、4.8％、12.5％。4×4表格的线性趋势卡方检验有显著性，p＝0.0003。 表83NA基因评分对A-GS-、A+GS-、A-GS+和A+GS+组的卡方检验分析[病例数(％)]NA得分 A-GS+ A+GS- A-GS+ A+GS- T0 23(14.7) 7(8.4) 2(9.5) 4(6.3) 36(11.1)1 71(45.2) 31(37.3) 6(28.6) 23(35.9) 131(40.3)2 62(39.5) 43(51.8) 12(57.1) 29(45.3) 146(44.9)3 1(0.6) 2(2.4) 1(4.8) 8(12.5) 12(3.7)T 157(48.3) 83(25.5) 21(6.5) 64(19.7) 325(100.0)Pearson卡方25.89，df＝9，p＝0.002线性趋势卡方12.97，df＝1，p＝0.0003。 发明人分别检测了低于平均成绩的数学、阅读和写作，对NA基因得分与三个科目的得分进行了卡方检验，三个科目的得分标准为：平均或平均以上＝0，平均以下＝1。在数学科目中，PearsonX2＝9.17，p＝0.027，线性X2＝4.18，p＝0.04。在阅读科目中，PearsonX2＝15.14，p＝0.0017，线性X2＝13.14，p＝0.0003。在写作科目中，Pearson X2＝13.18，p＝0.004，线性X2＝10.54，p＝0.001。因而，虽然在这三个科目中低于平均成绩与NA基因的得分有显著的相关性，但对阅读的作用最强，写作次之，数学最小。 为了比较，发明人还检测了多巴胺基因得分对各个科目成绩的作用。在阅读科目中，Pearson X2＝12.08，p＝0.007，线性X2＝8.24，p＝0.004。在数学科目中，Pearson X2＝2.90，p＝0.41，线性X2＝2.21，p＝0.137。在写作科目中，Pearson X2＝11.11，p＝0.011，线性X2＝0.02。因而，多巴胺基因在阅读成绩中也起作用，但在阅读和数学中起的作用较小。 为了检测NA基因相对多巴胺(DA)基因的重要性，发明人将在多元方差分析中包括了DA的得分(表80-F)。对所有六个基因，无注意力、冲动性、多动、GSAP、LD、品行和ODD得分均有显著性。在对所有六个基因的线性回归分析中(表81)，ADHD、LD、GSAP和ODD得分有显著的相关性。象先前已经表明的那样(Comings等，1996)，多巴胺基因在ADHD中起重要的作用。这被在此应用的三个基因证实。它们占ADHD得分差异的2.5％，当与NA基因相加时，所有的六个基因占差异的6.1％(p＜0.0001)。与之相反，AD基因在LD和GSAP中起的作用很小。然而，从GSAP得分来看，差异的百分率从三个NA基因独自起作用时3.4％增加到与DA基因共同作用时的4.2％。虽然DA基因在行为得分中起的作用很小，但在ODD得分中起重要作用，占差异的2.6％(p＝0.004)，所有六个基因占ODD得分差异的4.9％(p＝0.0001)。 发明人检测了四个ADHD：LD组的三个DA基因的频率，所有三个基因在10％的ADHD-LD-组中、19.8％ADHD+LD-组中、15.48％ADHD-LD+组中和17.1％ADHD+LD+组中存在。因而，与NA基因相反，在四个组之间没有逐渐增加的现象出现。在完全4×4表格中，Pearson卡方值＝10.48，d.f.＝9，p＝0.31，线性卡方值＝0.90，d.f.＝1，p＝0.34。 多元方差分析表明了在无注意力、冲动性、多动、学习障碍、小学学习成绩和对立违抗行为的数量得分与被检测的三个基因之间有显著的相关性。相关性最大的是三个基因的累加效应(p＝0.0003)。变异NA基因的数目在下列患者分组中依次显著增加：无ADHD(A-)或无学习障碍(LD-)、A+LD-、A-LD+、A+LD+(p＝0.0005)，但在多巴胺基因中并无可比较的作用。 讨论 两个ADHD亚型-伴随或不伴随认知缺陷，涉及到大脑的不同区域、不同的神经递质和不同的几组基因(表80)-的鉴别可能对ADHD儿童的诊断和治疗有相当大的价值。然而，必须记住的是ADHD是多基因性疾病(Comings，1996a)，从双亲中遗传了多个变异基因(Comings，1996b)。在有这两种类型成分的多数儿童和成年人中存在相当大的重叠。 然而，象在表82和表83中显示的那样，NA代谢缺陷和变异NA基因同无认知缺陷的ADHD儿童相比可能更多地涉及有认知缺陷的ADHD儿童。 观察累加性得分还有这样的优点，如果一个基因在给定的受试者或一组受试者中不起作用，但是另一个具有相似功能的基因起作用，这可能包括了二者的效应。这在本研究中被很好地证明。例如，当三个NA基因的表型作用被单个独立检测时，多元方差分析的显著性水平是较低的(表80-A、表80-B、表80-C)，并且在用线性回归分析检验五个得分时，相关系数并不能支持Bonferroni校正。然而，当将ADR2A、ADR2C基因或ADR2A、ADR2CD、DBH基因相加时，其结果就更可靠。当用线性方差分析检测累进作用时，也是如此。用ADHD得分作为一个例子，单因素回归分析表明，每一个基因单独作用仅占数量得分差异的0.7％到2.6％，而当ADR2A和ADR2C基因相加时，占差异的3.3％(p＝0.001)，当将三个NA基因相加时，则占差异的4.0％(p＝0.0003)。三个多巴胺基因占ADHD得分差异的2.5％，当将所有六个基因相加时，则占差异的6.1％(p＜0.0001)。这说明NA和AD基因在ADHD中起累加性效应。 双生子研究表明累加遗传效应占ADHD的70％或更多(Sherman等，1997a；Sherman等，1997b；Gillis等，1992)。这说明三个NA基因大约占ADHD遗传成分的6％，NA加DA基因大约占10％。虽然这看起来小了点，但当越来越多的基因被累加时，百分比就会持续升高(Comings，等，1998)。值得注意的是，尽管这六个基因仅占ADHD得分差异的6.1％，基于0.25的相关系数，依靠其它变量，这六个基因对ADHD的预测性达25％。 NA基因对GSAP的累加性效应也给人以深刻印象，单个基因占差异的百分率为1.0％到1.6％，而三个基因的累加性效应占3.4％。 表83的结果表明，在A-LD-、A+LD-、A-LD+和A+LD+组中，携带2个或更多的变异NA基因的患者频率是逐渐增加的。然而，另一种假说认为，ADHD+LD或ADHD+其它共发障碍组仅仅是代表带有更多的ADHD基因的遗传负荷的一组。发明人通过检测三个不同的多巴胺能基因在三个组中是否有同样的累加性效应，可以检验这种假说。在受试者中，发明人观察到六个不同的多巴胺基因(DRD1、DRD2、DRD3、DRD4、DRD5和DAT)中，DRD2、DAT和DRD5对ADHD得分有非常明显的累加性效应，它们单独作用时占差异的0.5％到1.0％，而加在一起时占差异的2.5％。因而，发明人制订了一个多巴胺基因评分指标，范围也是从0到3。携带所有三个变异基因的患者的频率范围从A-LD-组的10％，A+LD-组的19.8％，A-LD+组的15.4％到A+LD+组的17.1％。这样，同这种假说相反，A+LD+组与A+LD-组比较，没有增加对三个多巴胺基因的遗传负荷。另外，对整个多巴胺基因的得分范围来说，Pearson和线性趋势卡方检验的结果均无显著性。这同NA得分的线性卡方检验p＝0.0005明显不同。这些结果进一步支持Halerin-Pliszka假说b，即在ADHD+LD个体中NA基因更易被涉及，而在无论有无认知障碍的ADHD个体中，对多巴胺基因的涉及是平等的。 另一个特征是在由变异NA基因的数目决定的区分上，简单地询问个人在学校的数学、阅读和写作的成绩同询问他们是否上过特殊LD学习班的效果是一样好的。当单独检测时，对阅读成绩的作用最大，对写作成绩的作用几乎相同，对数学成绩的作用最小。这些结果说明在小学，阅读、写作和数学成绩低于平均成绩的患有ADHD的儿童最有可能携带变异的NA基因。这还表明需要做长期的双盲实验，验证可乐定对这些儿童学习问题的治疗功效。在发明人之一(D.E.C)进行的为期几个月的临床实验中，学习成绩不好的儿童皮下单独应用可乐定可以显著地提高学习成绩。 低语言IQ和青少年的攻击性反社会行为的相关性在许多研究中被重复(Hirschi和Hindelang，1977；Miller，1988；Shulman，1951；Moffitt和Silva，1988；Moffitt，1990)。在控制了社会经济状况、种族、学习成绩和动机等因素之后，低语言IQ和少年犯罪的相关性依然存在(Moffitt，1993)。Moffitt和Silva(Moffitt和Silva 1988)的研究还显示了低IQ和少年犯罪的相关性不是一个较容易被警察抓到的低智谋犯罪的假象，因为通过面谈确认的未被发现的少年罪犯也有较低的IQ。发明人为发现同品行障碍和对立违抗障碍的相关性，检测了NA基因。虽然三个NA基因的任何一个均同品行障碍没有明显的相关性，但同对立违抗障碍有轻度的相关性。 用患有TS的患者研究ADHD的可能性即有优点又有缺点。一个实用的优点是发明人在TS患者中收集了1500份DNA样品，他们均完成了一个广泛的高度结构化的调查表，这些调查表是以“诊断接诊程序”(Robins等，1981)和DSM-IIIR标准为基础的。这使得发明人可以选择症状相对严重的研究对象，他们比那些症状轻者更有可能有较高的遗传负荷。较极端表型的应用在遗传学研究中被广泛评论(Risch和Zhang，1996；Plomin等，1994)。既然在临床上，大多数(但并不是全部)TS患者还患有ADHD，这提供了一组患有和不患有ADHD的患者。这对发明人检测完整的ADHD数量性状范围的方法尤其有用，因为它与仅研究ADHD患者相比提供了更为广泛的评分范围(Comings等，1996j)。TS患者的人数也是有用的，因为在先证者和他们的亲属中共患的疾病如ADHD、品行障碍、对立违抗障碍和学习障碍等的频率是高的(Knell和Comings，1993；Comings和Comings，1987；Comings，1995a，Comings 1995b)。Biederman和同事报道ADHD先证者和他们的亲属有同样高程度的共发病程度(Biederman等，1990a，b；Biederman等1993)。应用TS患者的一个潜在的缺点是尽管在临床和遗传方面中有相当大的重叠，但带有抽动的ADHD患者与不带有抽动的ADHD患者相比，可能携带略微不同的变异基因群。因而，在不带有ADHD的患者中重复这些发现是重要的。这个研究的更进一步的限制是依赖于父母和自己报告的调查表，应用WISC-R、WRAT-R和其它直接的检测是最理想的。但基于亲自接诊所有被研究的患者得出的经验，这些调查表准确地反映了患者各自的行为。另外，因为发明人从未观察到实际上没有显著的学习问题的孩子曾被分到过EH、LD、LD或特殊教育班的例子，发明人相信以这种方式对LD得分的评估表现了对认知不能的可靠的测试。有意思的是对一个儿童的两个或更多科目(数学、阅读、写作)的成绩是否低于平均成绩的评估与是否上过LD班相比，提供了一个更好的NA基因得分的区别。这表明实际的学习成绩能提供认知不能的可靠评估，并且说明许多学习有障碍的儿童从未被放入特殊班。 因为ADRA2A基因的22纯合体很少，并且同时携带两个肾上腺素α2基因或三个NA基因的患者人数也很少，有人可能会认为目前的结果是从这些少数纯合体的高得分存在的偶然性中得来的。为了检验这点，发明人还将ADRA2A基因进行了如下的评分：11＝0，12或22＝1。当用这种评分方法将两个α2基因联合时，多元方差分析对无注意力(p＝0.010)、冲动性(p＜0.001)和多动(p＝0.021)仍有显著性，当用线性回归分析检测时，这种联合占差异的3.1％(p＝0.004)。当以这种方式评分的ADRA2A基因被加到ADRA2C和DBH基因时，则有66个患者的NA基因的得分为3。多元方差分析对无注意力(p＝0.001)、冲动性(p＝0.001)和多动(p＝0.004)得分有显著性，线性回归分析中，NA得分占差异的4.1％(p＝0.0002)。这些结果说明目前的发现并不是由于少数ADRD2A 22患者的高得分的偶然出现。 发明人推测增加在本研究中未被涉及的几个另外的NA基因，可能会使本结果被进一步证实。这些基因包括去甲肾上腺素转运蛋白(NT)、肾上腺素α1受体(ADRA1A到ADRA1D)和PNMT基因，所有这些均在突触的NA水平调节中起作用。 实施例28神经元的烟碱样乙酰胆碱受体α4(CHRNA4)基因与注意缺陷多动障碍和抽动-秽语综合征的关联前言 尼古丁是一种成瘾性药物，它刺激多巴胺报偿通路，提高注意力、觉醒、学习和记忆，在抽动-秽语综合征和ADHD的治疗中被成功地皮下应用。最突出的烟碱样乙酰胆碱受体的神经元形式是α4β2。发明人提出假说认为神经元烟碱样α4受体CHRNA4基因可能与ADHD或抽动-秽语综合征有关。 神经元烟碱样受体由α(α2-α9)和β亚单位(β2-β4)组成，它们围绕一个中央通道排列(Unwin，1993)。α亚单位拥有一对半胱氨酸，这与烟碱样乙酰胆碱受体的肌肉型α1亚单位相似，β亚单位没有这对半胱氨酸。主要的神经元烟碱样受体亚型由α4和β2组成(Whiting等，1991；Schoepfer等1988)。因为α4和β2是在脑中最广泛表达的亚单位(Wada等，1989；Whiting和Lindstrom，1988；Whiting等，1991)，发明人试图在抽动-秽语综合征和ADHD中检测CHRNA4基因的等位基因与CHRNB2基因的等位基因之间的相关性。因为只有CHRNA4基因有可利用的适合的多态性(Weiland和Steinlein，1996)，所以发明人检测的基因是CHRNA4。 方法在282个非相关的非西班牙裔白种人抽动-秽语综合征患者和63个对照中，发明人检测了CHRNA4基因的染色体组VNTR多态性等位基因的相关性。研究组由345个非相关的患者组成，其中282人符合DSM-IV诊断标准并均由D.E.C.亲自接诊，剩下的63人为正常对照。TS患者来自希望医疗中心城的抽动-秽语综合征诊所。这些人与在实施例27中叙述的用于研究去甲肾上腺素基因在ADHD和学习障碍中的作用的患者是来自同一组。行为评分和ADHD与学习障碍存在与否的区分同在那篇文章中叙述的一样。ADHD评分是以DSM-IV(诊断，1994)中ADHD的标准为基础的。问题是问在儿童及青少年时代是否存在这些症状，是没有或很少发生(评分＝0)，偶尔存在(评分＝1)，还是一直存在(评分＝2)？所有这三个回答被用来完全区别三个严重程度。ADHD评分是DSM-IV中无注意力、冲动性和多动症状的总和。 应用由Welland和Steinlein描述的CHRNA4基因第一个内含子的多态性(Welland和Steinlein，1996)，并应用他们报道的PCRTM引物和反应条件。在88个不相关的白种人的研究中，确定有14个等位基因，长度范围为196到264bp(见表84)。 用聚合酶链式反应扩增靶DNA，所用的每种荧光标记引物的量为0.2uM。PCTTM产物用去离子水稀释10倍，取0.5ul稀释液加到2.5ul的混合液中，后者是由75ul甲酰胺+9.5ulROX标准液+9.5ul蓝糊精染料配置成。在92℃变性2分钟，将样品加到Applied Biosystems 373DNA序列仪(Applied Biosystems，Inc.，(ABI)Foster City，CA)的6％PAGE上，在1200伏特和稳定的30W条件下跑胶5小时。凝胶用内部标准(ROX 500)进行分析。依据片段的颜色和大小，峰用基因分型仪识别(Applied Biosystems，Inc.)。 结果发明人在本研究中鉴定了345个个体的基因型，在其它的研究中也鉴定了几百个个体。除了Welland和Steinlein报道的以外(Welland和Steinlein，1996)，发明人在所有的研究中还发现了许多另外的等位基因，共21个。在本研究的受试者中17个被观察到。因为Welland和Steinlein(Welland和Steinlein，1996)利用了银染，并从胶的顶部开始计数等位基因，直到底部，所以他们的低编号等位基因的bp数是最高的，而编号最大的等位基因是最低的。因为ABI序列仪是在它们到达胶的底部时开始扫描区带的，所以在发明人的程序中，低编号等位基因代表最低bp数的等位基因而最高编号等位基因代表最大的等位基因。虽然发明人最初作了很多努力试图应用同Welland和Steinlein(Welland和Steinlein，1996)一样的编号，但由于测序的结果表明等位基因的bp数大小不同(尤其在末端)，这是很困难的。因而，发明人应用了ABI编号系统，为了比较，发明人将两种命名法列于表84。 表85列出了四种PCRTM产物的测序结果。这证实了这种VNTR多态性的复杂性。 在主要等位基因中，9、12、14和16等位基因的频率在TS患者中较高，在对照组中13、15和18等位基因的频率较高。用卡方检验分析17个等位基因的结果为：X2＝33.65，d.f.＝16 p＝0.0061。当分析被限定于对照组或TS组中的频率为0.05或更大的患者时，结果为：X2＝71.6，d.f.＝6，p＜0.0000001。等位基因频率差别最大的是#9等位基因。 为了保持分析的简便，为了检验数量变量和纯合体与杂合体的效应，为了产生回归分析变量，CNRNA4基因的评分标准如下：x/x基因型(非-9/非-9)＝0，9/x＝2，9/9＝3。 除了在实施例28中对去甲肾上腺素基因(Comings等，1998)检测的一组行为变量以外，发明人检测了总的抽动得分(Comings等，1996)。用多元方差分析法同时检测CNRNA4基因得分与这些变量的相关性。结果表明CNRNA4基因与小学的学习表现(GSAP)、学习障碍(LD)、对立违抗障碍(ODD)及多动得分的相关性是显著的。 为了评价不同基因型对这些得分的影响，进行了总ADHD得分的方差检验和检测每个差异显著性的多元方差检验(在p＜0.1)(表87)。结果说明对9/9纯合体每个得分都是最高的。 因为还有另外一个问题即CNRNA4基因与吸烟是否有一些相关性，发明人在17岁以上的患者中检测了两个变量：“吸过烟”和“每天7包”，这没有显著性，9/9纯合体患者每天吸烟量是0.5包，其它基因型是0.10到0.20包。在这里仅有9个9/9纯合体的患者，较大的样本数可能会得到显著性结果。 当用卡方检验分析CNRNA4基因型与ADHD-LD-、ADHD+LD-、ADHD-LD+及ADHD+LD+四组的关系时，9/9基因型在上述四组中的频率是增加的，依次为5.6％、6.0％、7.1％和13.5％。Pearson卡方检验时，总的相关性是不显著的(p＝0.385)，线性卡方检验时为临界相关(p＝0.051)。因而不象被检测的去甲肾上腺素那样(Comings等，1998)，CNRNA4基因在与大脑颅顶叶相关的ADHD-LD型中起作用的证据很少。 基因型变量对总ADHD得分的单因素回归分析的结果为：r＝0.123，r2＝0.015，T＝2.30，p＝0.022。在TS患者中，9、12、14和16等位基因的频率增加，9等位基因增加最大；在对照组中13、15和18等位基因的频率增加，13等位基因频率增加最大。当用卡方检验对所有的等位基因进行比较时，它们具有显著的差异，p＝0.002。当仅比较频率大于0.05的等位基因时，各组间有显著的差异，X2＝71.6，d.f.＝6，p＜0.0000001。用多元方差分析法检验了ADHD、抽动、品行和学习相关的八个数量得分同基于9等位基因的基因型分组(9/9、9/x、x/x)之间的关系，在小学学习表现、学习障碍、对立违抗和多动得分中有显著的相关性。方差检验表明在所有的得分中9/9纯合体的得分是最高的。基因型得分的线性回归分析表明CNRNA4基因占ADHD得分差异的1.5％(p＝0.022)。 结论 这些结果说明CHRNA4基因座是与ADHD和TS危险有关的多种基因中的一个。 在本研究中应用的PCRTM扩增片段的序列分析表明，这是一个非常复杂的多态性，涉及大小的不同和序列的差异。重复多态性本身可能在与它们相关的基因的调节中起作用。这是以这些重复序列形成Z-DNA的倾向性为基础的。重复序列的长度和序列的变化均在Z-DNA总量的决定中起作用，Z-DNA通过数种途径参与基因的调节(Comings，1997)。在此检测的复杂多态性表明在大小和序列上均发生了显著的变化。因此它可能独特地适合于关联研究。 为了避免对许多其它得分的独立评估能力的降低，发明人将他们的分析限定于在实施例27中检测的同样的行为得分加上一个总的抽动得分。由于尼古丁已经被用来治疗抽动，又增加研究了这个基因是否与抽动本身有关。多元方差分析用来评价作为一个组的得分，避免Bonferroni校正。这表明在八个行为得分中四个有显著的相关性(表86)。当对每个变量进行post hoc方差研究时，9/9纯合体的得分最高。合并的结果说明CHNRA4是在ADHD和ST中起作用的遗传危险因素基因之一。回归分析结果说明它占ADHD得分差异的百分率可能达到1.5％。 虽然CHRNA4基因显示与学习障碍和小学学习表现的相关性比与ADHD次级得分的相关性要大些，但不象检测的去甲肾上腺素基因那样，在带有或不带有ADHD和带有或不带有学习障碍的四个组中，9/9基因型的频率并没有逐渐增高的迹象。 虽然发明人还不知道在此叙述的基因型分组是与CHRNA4基因表达的增加或减少有关，但本研究支持尼古丁对ADHD和TS症状的临床有效性。在其它的人群中，对照和TS或ADHD间的差异也有可能涉及9等位基因以外的其它等位基因。在多个样本检测时，最可重复的结果可能是用卡方检验分析的在对照组与TS组或ADHD组患者中常见等位基因频率的比较。 表84Comings和Wu的以Applied Biosystems，Inc DNA序列仪为基础的：等位基因同Welland和Steinlein等位基因的比较(Weiland和Steinlein，1996)Comings和Wu Welland和Steinlein等位基因 相合 不相合 频率 等位基因 相合 不相合 频率14 196 .0413 198 .011 203 .0082 207 .000 12 208 .013 215 .0244 217 .0635 221 .000 11 208 .016 223 .008 10 220 .047 225 .238 9 222 .018 227 .0249 231 .015 8 228 .0610 233 .00811 235 .03212 237 .06313 239 .302 7 236 .4514 241 .02415 243 .238 6 240 .1916 245 .008 5 242 .0117 253 .000 4 248 .0118 255 .063 3 250 .1119 257 .024 2 252 .0320 259 .0001 264 .0121 272 .008 表85CHRNA4 VNTR重复的4个PCRTM产物的序列等位基因ABI 序列 序列# 大小9 231.6 231 CCGGGCGTGCGC(TG)8(CG)0CCGGGCGTGCGC(TG)8CCGGGCGTGCGC(TG)1113 239.5 239 CCGGGCGTGCGC(TG)8(CG)2CCGGGCGTGCGC(TG)8CCGGGCGTGCGC(TG)1315 243.8 243 CCGGGCGTGCGC(TG)8(CG)2CCGGGCGTGCGC(TG)10CCGGGCGTGCGC(TG)1318 254.9 254 CCGGGCGTGCGC(TG)9(CG)1CCGGGCGTGCGC(TG)10CCGGGCGTGCGC(GTG)1CCGGGCGTGCGC(T( 表868个行为得分的多元方差分析CHRNA4 9/9＝3，9/x＝2，x/x＝1F-比 pGSAP 3.60 .028LD 3.60 .028ODD 3.46 .033多动 3.10 .046无注意力 2.92 .055抽动 1.63 .198冲动性 0.92 .401CD 0.55 .573总和(Wilks) 1.22 .246表87对ADHD因素个体得分的方差分析CHRNA4(n＝345)评分 基因型 N 均数 S.D. F p F1p1ADHD x/x 204 17.28 11.1213/x 113 18.94 11.059/9 23 22.61*9.09 2.83 .060 5.27 .022多动 x/x 209 5.75 4.439/x 113 6.18 4.189/9 23 8.08*3.86 3.11 .045 4.85 .028无注意力 x/x 209 8.72 5.539/x 112 9.73 5.559/9 23 11.08 4.88 2.69 .069 5.34 .021ODD x/x 209 3.45 3.219/x 113 3.83 3.199/9 23 5.26*2.87 3.46 .032 5.60 .0185LD x/x 209 0.61 0.939/x 113 0.84 1.03评分 基因型 N 均数 S.D. F p F1p19/9 23 1.04 1.10 3.61 .028 7.21 .0076GSAP x/x 209 2.78 1.999/x 113 3.35*1.909/9 23 3.40 1.92 3.61 .028 6.49 .011基他曾抽过烟 x/x 91 1.39 0.49(年龄＞17岁) 9/x 49 1.31 0.469/9 6 1.66 0.52 1.66 .192 0.000 .995包/天 x/x 91 0.12 0.449/x 49 0.10 0.379/9 6 0.50 0.84 2.24 .110 1.02 .314*Tukey检验在α＝0.05时，同x/x有显著的差别F1＝线性方差分析，P1线性方差分析的p 实施例29X连锁的MAOA基因VNTR等位基因长度与TOURETTE综合症和药物滥用的表型效应的相关性前言.单氨氧化酶(MAO)水平的异常与许多精神病障碍有关。发明者检测了X连锁的MOA基因VNTR的多态性以检验两种假设：(1)MAOA基因的变异在部分与Tourette综合症或药物滥用相关的行为障碍中起作用吗？(2)如果是这样，在等位基因长度与表型效应之间存在相关性吗？发明者检测了两个独立的组：375个TS病人、亲属和对照，以及280个物质滥用者和对照。等位基因分为长度不断增加的四个组。MAOA基因与两个组的行为表型之间存在显著的相关性，并且在两个组中最长的等位基因与最强的表型效应相关。最强的效应是药物依赖的诊断(p＝0.00003)。VNTR等位基因的这些组和以前表明的与MAO-A活性相关的Fnu4H1多态性显著的连锁不平衡。这些结果与短重复多态性的不同长度等位基因本身可能在基因调节中起作用的可能性是相一致的。 由于年龄(Devor等，1994)、酒精、抗抑郁药、药物、性别、实验技术、饮食、和其它变量对血小板酶水平(Fowler等，1982)的潜在效应，MAO基因遗传多态性的应用比酶水平可能提供更多可重复的结果。MAOA和MAO-B基因的克隆和测序以及相关多态性的鉴定使得现在可以进行这种遗传学研究。 为了明确是否MAOA基因的遗传变异与TA或ADHD相关，发明者利用TS中DRD2、DβH和DAT1基因已报道的技术(Comings等，1996a)，检测了在一系列对照、TS先证者和它们亲属中的MAOA VNTR多态性(Hinds等，1992)。由于对照相对于TS先证者不同等位基因频率的简单比较可能遗漏MAO基因只与在所有例子中未出现的一些特异行为相关的可能性，发明者检验了这些基因在27个不同行为变量中的可能作用。 发明者对等位基因长度可能与表型效应相关的假设产生了兴趣。它的理论基础是大部分简单重复的序列导致了Z-DNA的形成并且其数量依赖于重复的长度(Schroth等，1992)。Z-DNA结构打开了DNA双螺旋并暴露了单个碱基，使它能够与核蛋白相互作用(Rich等，1984)。由于这些和别的原因，Z-DNA与基因调节有关(Comings，1996 a；1996b)。如果小或微卫星多态性确实在涉及多基因遗传的基因功能变异中起作用，它们能够导致单个基因而不是多基因障碍。 X-连锁的基因形成了一个独特的载体以检验该假设并研究精细的效应，这是由于至少在男性中，每个等位基因以半合子状态出现，这样就消除了杂合体的复杂因素，而当多个不同大小的等位基因出现时杂合体的数量是很多的。为了检验重复长度可能与表型效应相关的假设，发明者将VNTR等位基因分为长度不断增加的四个组。这让发明者可以明确是否更短的或更长的等位基因优先与更大的表型效应相关。 方法.受试者包括57个对照、229个TS先证者，先证者大部分受到与多个行为相关障碍的严重影响(Comings等，1990)，以及90个患病的和未患病的TS先证者亲属。所有受试者是非西班牙白人并且90％以上是来源于西欧的。TS组的对照含有TS先证者的养父母和继父母，来自于希望城其他诊所的非精神病障碍受试者、以及希望城医学中心职业和非职业医院员工。TS受试者和对照都在别处有详细的描述(Comings等，1995b；Comings等，1996a；1997b)。 每个TS对照和TS先证者或亲属都被要求填一张基于诊断会面程序(Robins等，1981)或DSM-III-R(精神障碍诊断和统计手册，1987)标准的调查表。这提供了关于大量精神病症状的结构化描述。这些症状分为27个不同的行为，包括ADHD、物质滥用、情绪、焦虑、学校表现、口吃、抽动和其它。用于这些行为评分的问题已在别处详细描述(Comings，1995a；1994a；1994b；1995b；Comings等，1996a；Rubins等，1981；Comings，1995c)。两种行为评分用于评估ADHD。首先，之所以称之为ADHD，是基于至少出现DSM-III和DSM-III-R标准的22个ADHD变量系列的一半。第二，ADHD-R是基于DSM-III-R诊断标准。以前未用的三个QTV是无注意力、冲动性和多动障碍。有这三个亚评分的积累可以得到ADHD评分。QTV缩写包括品行障碍的CD、对立违抗障碍的ODD(Comings等，1995a)、和重性抑郁发作的MDE(Comings，1995c)症状。 检测共发病行为的理论基础是以前的观察，特定的基因可能与TS中出现的特异共发病行为比诊断本身有更强的相关(Comings等，1996a)。该调查表并不意味着提供DSM-III-R或DSM-IV诊断而是提供产生行为不同方面QTV的高度结构化方法。连续性状的优点是可以提供比二歧诊断更大的严重性等级划分。调查表途径的症状评估方法的精确性、实用性和敏感性已由其他人(Gadow和Sprafkin，1994；Grayson和Carlson，1991)通过比较应用这样的工具和接诊者使用相同结构化工具的情况得以说明。发明者对于数百个受试者调查表的查阅说明它们精确地反映了通过个人交谈获得的信息。 第二组受试者含有120个非西班牙白人男性，他们来自于1994年十月以来的California，Loma Linda，Jerry L Pettis VeterransAdministration Hospital住院病人成瘾治疗单位(ATU)，所有表示同意进入ATU的新入院者，参加了国家药物滥用研究所主办的关于药物滥用/依赖遗传因素的研究。 所有ATU受试者通过Michigan酒精中毒等级评估(Davis等，1987)(修订的24项自我执行调查表，包括药物滥用(MAST-R))、临床医师执行的诊断会面程序(DSM-III-R版本)(Robins等，1981)来诊断物质依赖障碍的出现，用临床医师执行的成瘾严重性指数第五版(ASI)(Hodgins和Guebaly，1992)来评估一系列酒精和药物使用变量。 发明者利用药物/酒精使用和ASI的法律状态部分。该方面包含了以下部分：a)使用的具体物质.为了评估具体物质的使用，问了关于喝醉酒、海洛因、其他鸦片/止痛药、巴比妥酸盐、别的镇痛药/催眠药/安定药、可卡因、安非他明、大麻、致幻觉剂、和吸入剂的一生使用(年数)。 b)使用的途径.对于上述的每个药物，在适当的时候，受试者被请问了关于使用途径问题。选择有口、鼻、吸烟、和IV注射。#IV药物使用这一连续变量通过将不同的IV注射药物数相加进行计算。变量IV药物使用是二歧变量，0是没有药物使用，≤1是使用一种或多种药物IV。 c)问题.你有酒精DT多少次了？过量用药吗？在过去的30天里有多少天遇到了酒精问题？药物问题呢？d)花费的钱.在过去的30天里你花了多少钱在酒精上？在药物上呢？e)严重性.基于交谈者对治疗需要程度的等级评估，从0(没有必要治疗)至9(在危及生命的情况下需要治疗干预)。酒精滥用？药物滥用？f)法律状态.也问了关于药物和酒精滥用的不同法律方面。在你的一生中有多少次被控酒后驾车？在你的一生种有多少次因为毒品问题被逮捕并指控？有多少次这样的指控导致了定罪？g)概括的评分.当回答能够从0到任何数变化时，它们是0则被评分为‘0’是其它任何数则评分为‘1’。与酒精使用相关的问题计入总的酒精评分，与药物使用相关的问题计入总的药物评分。 物质滥用组的对照与TS病人的对照无关。它们包括两个部分。第一部分是45个年龄较大的男性，来自San Bernardino的加利福尼亚州立大学非西班牙学生(平均年龄30.1岁)。那些具有显著的物质滥用问题的在MAST-R检验的基础上得以排除。第二部分包括Minnesota双生子家庭研究项目中双生子的父亲。由于这些人明确地来自于一个州，单纯基于具有11或17岁的双生子，他们比大学的学生代表了所有社会经济和教育群体中更为随机的部分。虽然所有的对照在物质滥用变量方面的评分是阴性，但由于对双生子的对照进行物质滥用评估的结果是无效的，所以部分可能是阳性的。然而，由于这是农业州为主的随机交叉实验，发明者设想，在该组中假阴性的数量是很小的。 选择MAOA基因VNTR多态性的理论基础如下。挑选一个短的串联重复多态性用来特异检测这个假设：重复的长度可能与表型效应相关。选择X连锁的基因是由于至少在研究男性时，避免了解释杂合体的复杂性。选择MAO基因是因为它是X连锁的。选择MAOA基因是因为已报道了两个不同的重复多态性与它相关。发明者选择VNTR多态性(Hinds等，1992)因为它在等位基因的长度(40+bp)上比(CA)n重复(16bp)范围宽得多。 该复杂的多态性含有直接与不完全二倍重复新23-bp VNTR基序相邻的GT微卫星，其中等位基因中二核苷酸重复和VNTR重复的数目均不同。VNTR多态性出现在含有MAOA基因第一外显子的噬菌体6.12的2.9-Kb SalI-EcoRI片段上(Hinds等，1992)。通过标准方法从全血中提取DNA。目的DNA通过PCRTM扩增(Mullis等，1986)。为了标记PCRTM产物，标记了荧光HEX或FAM Amidite(应用生物系统，Foster City，CA，USA)的每条引物0.1μM用于反应(表88)。两微升10倍稀释的PCRTM产物加入2.5μl去离子甲酰胺和0.5μl的ROX 500标准(应用生物系统)并在92℃变性2分钟，然后上样至应用生物系统373测序仪6％的聚丙烯酰胺凝胶中。凝胶在1100V和恒定30W下电泳5小时。利用内部ROX500标准对凝胶进行激光扫描和分析。峰由基因分型仪(1.1版本)(应用生物系统)基于由碱基对长度决定的彩色片段大小进行识别。每个样品的全部信息从每块凝胶的文件中打印出来，汇编的数据进行分析。 表88MAOA VNTR多态性：通过方差分析不同的等位基因分组比较不同的行为评分。(均数和标准差)(n＝287)行为 通过bp大小分组的等位基因 F比 P F2＜320 320-333 334 ≥335(n＝82) (n＝43) (n＝110) (n＝52)躁狂 1.43* 1.8 1.36* 1.9 1.59* 2.27 2.59 2.8 3.59 0.014 6.39aOCD 2.18 2.8 2.18 2.4 2.80 2.8 3.31 3.2 2.16 0.093 5.89a性 0.62* 1.1 0.47* 0.9 0.66* 1.2 1.25 1.6 3.91 0.009 5.82a睡眠 0.36 0.7 0.38 0.8 0.49 0.9 0.76 1.1 2.31 0.075 5.56a小学 2.60 1.7 2.90 2.0 2.98 2.1 3.46 2.1 1.89 0.131 5.14a赌博 0.13* 0.9 0.27 0.8 0.22 0.8 0.61 1.6 2.49 0.060 4.82a口吃 0.13 0.3 0.11 0.3 0.25 0.4 0.23 0.4 2.33 0.084 4.41a学习 0.52* 0.9 0.65 1.0 0.54* 0.9 1.00 1.1 3.32 0.020 4.37a无注意力 6.69 5.2 7.37 4.9 7.67 4.7 8.48 5.3 1.42 0.235 4.15ADHD 19.43 14.9 20.95 13.5 21.18 13.9 24.80 15.3 1.53 0.206 3.74aADDR 4.63 4.9 4.84 4.6 5.18 4.7 6.42 5.2 1.57 0.196 3.74a表88(续)行为 通过bp大小分组的等位基因 F比 P F2＜320 320-333 334 ≥335(n＝82) (n＝43) (n＝110) (n＝52)冲动 5.74 4.9 6.30 4.8 6.49 4.7 7.46 5.0 1.35 0.257 3.68a购物 0.58 1.3 1.00 2.2 1.32 2.8 1.09 2.4 1.61 0.186 3.23MDE 3.00 2.8 3.29 3.1 3.45 3.1 3.92 3.1 1.01 0.385 2.90CD 2.78 2.4 2.90 2.1 2.97 2.2 3.54 2.6 1.15 0.328 2.54多动 6.91 5.6 7.27 5.2 7.00 5.4 8.86 5.9 1.59 0.190 2.29恐怖症 2.00 2.7 2.15 3.0 2.45 2.7 2.65 3.3 0.71 0.548 2.10分裂样 1.31 2.3 0.68* 1.3 1.34 2.2 1.84 2.3 2.26 0.081 1.92广泛焦虑 0.21 0.4 0.18 0.3 0.28 0.4 0.29 0.4 0.85 0.463 1.60躯体化 2.13 3.0 1.58 2.4 2.17 3.0 2.90 3.7 1.16 0.325 1.34药物 0.36 1.2 0.45 1.6 0.40 1.3 0.75 2.0 0.81 0.489 1.28阅读 1.86 1.9 1.36 1.8 1.78 2.1 2.34 2.5 1.75 0.156 1.270DD 3.07 3.3 3.02 2.7 3.16 3.1 3.73 3.4 0.57 0.633 1.02抽动 2.81 3.7 3.04 3.4 2.84 3.5 3.57 4.1 0.55 0.642 0.73酒精 0.51 2.3 0.81 2.9 0.31 1.8 1.11 3.2 1.41 0.241 0.45惊恐 2.91 2.0 3.09 2.1 3.18 2.2 2.98 2.2 0.27 0.845 0.20吸烟 0.07 0.3 0.11 0.3 0.05 0.2 0.77 0.3 0.53 0.662 0.10a显著性＜0.05，F2＝线性方差的F比。*显著性低于＞335，在α＝0.05水平通过Tukey。 为了检验MAOA等位基因长度可能与表型效应相关的假设，等位基因分成四组(见结果)。有1到4的标记，最短的到最长的形成MAOA基因型变量。只有在TS组中用到女性。只有在给定的等位基因分组里纯合的那些才包括在分析中。 发明者利用了两条原则进行分组：a)必须有足够的组以检测一系列长度；b)为了将统计的能力最大化，受试者在每组中的数量必须相似。这样，如果等位基因频率只有单一的峰，就应当分为最短的1/3、中等的1/3、最长的1/3。然而，MAOA VNTR等位基因的大小分布为两个峰。对于只有男性，小峰含有32％的等位基因，大小是从299到314bp长。大峰含有68％的等位基因，大小从323到338bp。由于等位基因的主体在该峰里，发明者将其作为存在单个峰进行分离(即短的、中等、长的等位基因分组)。该峰的中心含有单个的334bp组，它包含不能再分组的31％的等位基因。这些规定的应用导致了四个组＜320bp、320-333bp、334bp、≥335bp分别含有32、23、31、14％的等位基因。 利用Hinds等(1992)描述的分组是不可能的，由于他们五个组中三个的基因频率很低。实际上，发明者在这三个次要的组里没有受试者。 Fnu4H1多态性 对该多态性的检验基于Hotamisligil和Breakefield(1994)的方法。发明者将他们的‘-’命名为发明者的‘1’等位基因，他们的‘+’命名为发明者的‘2’等位基因。在他们研究中，+等位基因具有更高的MAOA活性。 对于Tourette综合症组，用方差分析检验四个不同等位基因的分组里每个QTV的相对大小。用线性方差分析检验四个组间平均数的显著累进性增加。应用SPSS(SPSS，Inc，Chicago，IL，USA)统计软件包。对于线性方差分析，子命令多项式设定为1。用多元方差分析检验当所有的变量同时检验时这些QTV是否是显著的。用多变量线性回归分析作为检验当所有的变量同时检验时QTV显著与否的第二个方法。MAOA基因型设定为非独立变量并且27个QTV作为独立变量逐步进入。 卡方分析说明最长等位基因的组对主要QTV有最高的平均值。≥335bp等位基因组频率的潜在累进性下降在TS的症状累进性减少的四个组间进行了比较：有ADHD的TS先证者、无ADHD的TS先证者、有TS的亲属和无TS的亲属。 对于物质滥用组，多元方差分析用于检验是否在四个MAOA等位基因的分组与两个简单化的变量酒精和药物评分之间存在显著的相关。用方差分析检验四个等位基因分组酒精和药物评分的平均数。 用线性卡方检验≥335bp等位基因组的频率在三个组间的潜在累进性增加：对照、没有行为的物质滥用者(ATU无)、以及有行为的物质滥用者(ATU有)。ATU无组包括在内以排除由于不同行为的共发病而造成的该等位基因组在物质滥用者中的频率增加的可能性。为了帮助排除它，在有行为的物质滥用者中等位基因组的频率要至少比无行为的高出20％。由于假设这些等位基因的频率在这三个组里逐步增加，因此应用了线性卡方统计。 为了检测MAOA基因引起的药物相关变量的最大变异比例，在评分为1的携带＜335bp等位基因的受试者和评分为2的携带≥335bp等位基因的受试者进行了回归分析。该分析是对于药物依赖变量进行的，因为这是与MAOA基因最相关的卡方变量(对照评分为1，ATU无评分为2，ATU有评分为3)。 结果.MAOA VNTR多态性等位基因的分布(等位基因总数＝768)。由于这是复杂的VNTR，等位基因不能成为碱基对偶数或奇数的划分方式。结果与基因分型仪程序产生的那样。在316bp和323bp之间没有等位基因，这样就产生了两个明确的重要的组＜320bp和＞320bp。然而，为了检验表性效应可能与大小相关的假设，等位基因的较大分组323-339bp分为三个亚组，包括比主峰短的等位基因320-333bp、334bp的主峰、和比主峰长的等位基因≥335bp。在TS组有219个男性和156个女性总共375个受试者。女性中88个是杂合体。当把这些排除了以后，研究中剩下了287个受试者，其中36个是对照。在最后的组，男性与女性相比四个等位基因分组的频率分布没有显著性差异。 TS组QTV的每一个相对于四个等位基因分组的方差分析结果见表88。常规方差分析结果在F比和P值下面。线性方差分析的F比在F2栏下面，上标a表示显著性＜0.05。QTV通过F2栏的F比率大小递降来安排。由Tukey检验在≤0.05的水平检测，均数显著低于≥335bp组的那些等位基因分组用星号标明。除了口吃、购物和惊恐(有最低的F比率)以外，剩下的24个QTV在那些携带≥335等位基因的受试者中均数是最高的。 所有27个QTV的多元方差分析结果对于性(P＝0.012)、学习问题(P＝0.023)、赌博(P＝0.025)、和躁狂(P＝0.025)是显著的。 当所有27个QTV同时由逐步多元回归分析检测时，变量小学问题(P＝0.012)和赌博(P＝0.038)是显著的。基于r2值，MAOA基因只引起了这些QTV变异的3.9％。 利用卡方分析，携带≥335bp等位基因受试者的比例存在显著的累进性降低，从有ADHD的TS先证者(24％，n＝129)，到无ADHD的TS先证者(20.0％，n＝50)，到TS亲属(12.5％，n＝16)到非TS亲属(5.6％，n＝56)(P＝0.003)。 在物质滥用组比较了对照与ATU受试者。对于160个联合对照，四个等位基因分组的分布如下：＜320 34.4％、320-333 38.1％、334-33521.3％、≥335 6.3％。对于120个ATU受试者，频率如下：＜320 39.2％、320-333 18.3％、334 20.8％、≥335 21.7％。存在显著性差异，x2＝22.17，P＝0.00006。≥335bp组的频率在两个对照组是类似的，SanBernardino组的8.9％和双生子父母的5.2％(x2＝0.774，P＝0.38)。 酒精和药物评分的多元方差分析说明，虽然都与MAOA基因VNTR等位基因显著相关，药物评分(P＝0.001)比酒精评分(P＝0.012)更显著(表89)。联合多元方差分析的结果也是显著的(P＝0.007)。257的n比160个对照+120个ATU的总数或280要小，因为只有97个受试者完成了ASI。相比之下，所有120个都完成了用于酒精和/或药物依赖DSM诊断验证的DIS。 表89物质滥用组酒精和药物评分对MAO等位基因分组的多元方差分析(n＝257，只有男性)变量 F比率 P酒精评分 3.72 0.012药物评分 5.85 0.001总数(Wilks) 2.99 0.007表示每个等位基因分组均数的两组评分的方差分析，见表90。对于TS组，最高的均数出现在≥335bp等位基因的分组里。对于药物评分，通过Tukey检验，另外三个等位基因组显著地比≥335bp等位基因组要低。 表90物质滥用组的酒精和药物评分对MAOA等位基因分组的方差分析等位基因n 均数 标准差 F比率 P分组酒精评分＜320 94 2.27 3.1320-333 81 1.49a3.0334 56 1.94 2.7≥335 26 3.73 3.52 3.72 0.012药物评分＜320 94 3.59a5.2320-333 81 1.94a3.8334 56 3.34a4.9≥335 26 6.42 6.2 5.85 0.0007a通过Tukey检验在α＝0.05显著低于≤335等位基因分组的均数。 为了检测MAO基因是否优先与物质滥用的特定类型相关，利用卡方分析检测了与用到的物质类型相关的14个变量。对照相对无行为ATU的受试者(ATU无)相对有行为ATU的受试者(ATU有)≥335bp等位基因分组的频率见表91。由于检验了物质使用变量的14种类型，只有那些P值低于0.0036(0.05/14)的按Bonferroni矫正被认为显著的。只有那些P值＜0.01的列在表上。只有酒精依赖是例外。这说明了与药物依赖、或药物和酒精依赖的相比，酒精依赖受试者的≥335bp等位基因频率只存在少量的增加。相比之下，只有药物依赖的变量得到了最高值(x2＝17.4，P＝0.00003)。 表91对照相对于没有行为的ATU受试者相对于有行为的ATU受试者携带≥335bp等位基因受试者数量的线性卡方分析行为 对照 ATU无 ATU有 卡方 Pn ％ n ％ n ％ n ％只有药物依赖 160 6.3 58 15.5 62 27.4 17.4 0.00003IV药物使用 160 6.3 56 14.3 27 29.6 13.5 0.00022ODed 160 6.3 71 12.7 25 28.0 11.00 0.0009巴比妥使用 160 6.3 61 13.1 32 25.0 11.56 0.0011DUIs 160 6.3 34 8.8 62 21.0 9.92 0.0016安非他明使用 160 6.3 19 5.3 77 19.5 9.37 0.0022OSH使用” 160 6.3 67 14.9 26 23.1 8.96 0.0027可卡因使用 160 6.3 25 12.0 67 19.4 8.86 0.003大麻使用 160 6.3 14 7.1 82 18.3 8.35 0.004海洛因使用 160 6.3 68 14.7 28 21.4 8.05 0.004鸦片使用 160 6.3 58 15.5 38 18.4 6.88 0.009只有酒精依赖 160 6.3 98 24.5 22 9.1 非线性aOSH＝其他鸦片剂(非海洛因或美沙酮)、镇静药和安眠药。 等位基因分组(＜335对≥335)相对于药物依赖诊断的回归分析得到了以下结果：r＝0.25，r2＝0.0625，T＝4.305，和P＝0.0001。 为了检测VNTR与Fnu4H1等位基因的潜在连锁不平衡，发明者对已经基因分型的273个男性也进行了VNTR多态性基因分型。发明者将分析限定为男性是由于比女性的结果清楚。两个多态性存在非常显著的非随机相关(x2＝132.91，P＜0.000001)。＜320的VNTR等位基因分组与不常见的Fnu4H1 2等位基因相关，而其余的三个VNTR分组与Fnu4H11等位基因相关。 基于数据的比较，可以预测，如果VNTR等位基因分为＜320bp和＞320bp，就能得到与Fnu4H1多态性相似的结果，Fnu4H1 2≈＜320和Fnu4H1 1≈＞320。TS组有71个受试者对两种多态性进行了基因分型。由于躁狂得到了最显著的结果(表88)，因此该变量用于比较。携带Fnu4H1 1等位基因的53个受试者得均数是2.01(标准差2.17)，2等位基因是1.55(标准差)。VNTR类似的数据是＞320bp的1.94(标准差2.12)，和＜320bp的1.75(标准差1.98)。(16个≥335的受试者的均数是2.43(标准差2.42))。因为数量相对少，没有一个组是显著的。由于Hotamisligil和Breakefield的研究(1994)表明Fnu4H1等位基因(发明者的I等位基因)与低MAOA活性相关，发明者设想≥335VNTR等位基因的分组与最低的MAOA活性相关。 由于Tourette综合症是高度可遗传的并且常常与大量的冲动、攻击、情感、性过度和其他行为相关，它是非常适合这种研究的。目前的结果表明MAOA基因是在许多TS相关行为的病因学中起少量作用基因中的一个。 虽然多元方差分析说明了MAOA等位基因与酒精和药物评分都显著相关，存在这两种物质滥用形式的大量共发病性。如表91所示，当药物依赖和酒精依赖分别检测时，与酒精依赖的相关比与药物依赖的相关更强。 虽然男性的突出可能部分由于激素和环境因素，X连锁的基因也可能是一个因素。对于TS组，利用回归系数确定的r2说明，对于不同的QTV，MAOA基因最多引起2.5％或者更少的QTV变异，表明X连锁的MAOA基因不能引起男性中TS、ADHD和相关障碍的突出。相比之下，≥335bp等位基因缺乏或出现相对药物依赖诊断的r2说明，高达6.2％的变异可能是因为MAOA基因。这可能在药物依赖的男性突出中起中度的作用。 发明者开始猜想微卫星和小卫星多态性的不同长度等位基因可能在与它们相关的基因调节中起作用。虽然较长的小卫星等位基因与Tourette综合症组的特异QTV的相关性不强，如表89所示，但在所有QTV之间的趋势存在显著的一致性。由于这可能是偶然的随机相关，发明者试图确证他们是否能够在完全独立德受试者和对照组中重复这些结果。该组(物质滥用组)与MAOA VNTR较长的等位基因，尤其是≥335bp等位基因，比在TS组中观察到的呈现出更强的相关性。这两组的模式是非常相似的，≥335bp等位基因有最高的评分，最小等位基因(＜320)有较高的评分，334-335bp等位基因有中间评分。 为了洞察是否≥335bp等位基因可能与较高或较低的MAO-A活性相关，发明者也对发明者的273个男性受试者进行了Fnu4H1多态性基因分型。与VNTR等位基因分组的连锁不平衡是非常显著的(p＜0.000001)。不常见的Fnu4H1 2等位基因与＜320 VNTR分组相关，而更常见的I等位基因与320-333、334和＞335 VNTR组相关。由于有人已经说明一系列行为障碍与低MAO-A活性相关，并且由于发明者观察到VNTR多态性的最大表型效应与≥335bp组相关，这表明该组也与最低MAO-A活性相关。这些结果说明，当携带Fnu4H1 1等位基因的受试者置于根据VNTR多态性的亚组时，是携带≥335bp等位基因的受试者推动Fnu4H1结果。虽然这些建议的最后论证需要VNTR等位基因对受试者中血清或成纤维细胞MAO-A活性的研究，这些发现与以下可能性一致：Fnu4H1多态性与MAO-A活性差异相关的原因是：1等位基因与≥335VNTR等位基因连锁不平衡，＜320等位基因(与高MAO-A活性相关)相对≥335bp等位基因(推测与最低MAO-A活性相关)的重复数目的大的差别在MAO-A基因的调节中起作用。 与重复等位基因大小的这种相关性与小卫星本身可能在MAO基因的调节中起作用的可能性相一致。然而，很清楚的是，这不能证明该假设，因为与未鉴定的另一位点的连锁不平衡仍可能发生。需要对表达载体以及较长等位基因与转录因子的可能相互作用的研究，来证明MAOA基因的该假设。 TS组的结果说明，MAOA基因对一系列的行为有相对低量的效应。虽然多元方差分析说明四个变量是显著的，多变量回归分析说明两个是显著的，线性方差分析说明27个中的12个是显著的，但有人会提出当完全Bonferroni矫正用于方差分析结果时没有一个在0.05/27或0.0018处是显著的。然而，这恰恰正是要点，即尽管大量文献中MAO与不同的行为相关，当在特异的基因多态性水平检测时，MAOA基因看起来只对许多行为变量起少量作用。虽然在药物滥用中效应强的多，甚至这样MAOA等位基因引起的变异比例仍然是少量的。重复实验是关联研究的一个重要方面，这些结果出现在两个完全不同的受试者组里。这些发现与这一概念相一致：多基因遗传中许多基因参与不同的行为，每个基因只起较小的作用；也与这一假设相一致：小卫星多态性本身可能在提供对多基因遗传很重要的功能性等位多态性变异中起作用。 实施例30有关氨基酸治疗和月经前焦虑障碍(PMDD)的预示性方案月经前焦虑障碍(PMDD)是一种在大部分月经周期循环发生的月经前情绪障碍。在DSM-IV中它包括在”非特异抑郁障碍”的范畴内。然而，许多因素(生物学和认知研究，治疗反应)使PMDD同其余情绪障碍相区别(Yonkers，1977)。 尽管存在黄体期症状表现的预示，该障碍的病因学并没有确立。关于激素和维生素缺陷与PMS相关的理论可能与PMDD有关或无关。然而，孕酮、雌激素、前列腺素、胰岛素、维生素B6、或甲状腺激素(Severino，和Moline，1989；Rickels等，1990；Bancroft和Rennie，1993)的绝对和相对缺陷都没有在PMS或PMDD病人组中确立。相似地，功能性激素试验如对甲状腺刺激激素反应的甲状腺释放激素和葡萄糖耐受试验的结果在PMDD病人中并不异常(Casper等，1989；Girdler等，1995；Haskett等，1984；Roy-Byrne等，1987)。 对于月经前症状是由内源性阿片物戒断引起的这一假设，几个研究小组已经评价了有症状妇女和对照的β内啡肽的水平。在一项包括回顾性报告存在月经前症状妇女的研究中，Giannini及其合作者们发现，在月经周期的黄体期存在β内啡肽水平的下降(Giannini等，1984)；然而，在该研究中没有对照组。不过，四项另外的研究发现，与对照相比，有症状病人的黄体期β内啡肽水平更低(Tulenheimo等，1987；Facchinetti等，1987；Chuong等，1985；和Giannini等，1990)。上述的一项研究发现在滤泡期和黄体期都有低水平(Tulenheimo等，1987)，在另一研究中，卵周期有症状的妇女β内啡肽水平低(Chuong等，1994)。值得注意的是，以前提到的研究中只有两项包括了预期确定了症状的人群，这种确定可能符合或不符合PMDD诊断的严格标准。病人群体间的差异、小样本的大小或者两者可能是导致最近的研究得出不同结论的基础，他们不能发现在月经周期的两个阶段任何一个中PMDD病人与对照的区别(Bloch等，1996)。然而在本研究中，两组的月经前期β内啡肽水平都下降了。月经周期中β内啡肽水平在门静脉的变化也在灵长目动物中发现，虽然在卵周期差异最显著(Wehrenberg等，1982)。 在月经周期中急速下降的β内啡肽的波动能够增加PMDD妇女肾上腺素能的活性并可以解释对肾上腺素能受体结合研究的结果。Halbreich及其合作者(Halbreich等，1993)发现月经前症状妇女在月经周期的黄体期咪唑啉受体结合的增加。根据Grunhaus及其合作者(1990)综述，肾上腺素能受体结合的改变也与MDD和惊恐障碍相关，虽然改变的方向(增加及降低亲和力)依赖于在分析中血小板的准备和使用的配基。 此外，β内啡肽和雌激素的水平已经表明是变化的。在产后和月经前期间，两者的水平变化迅速并且显著(Halbreich和Endicott，1981)，其他人说明麻醉药拮抗剂降低了PMS症状。 Halbreich及其合作者发现血清γ氨基丁酸(GABA)的水平在月经前焦虑症状的妇女黄体期下降(Halbreich等，1996)。也在MDD病人中发现了血清GABA低水平(Petty等，1992)，虽然它是怎样与上述的发现相关还是未知的。 PMS病因学的理论几乎全部集中在雌激素、孕酮、或催乳素的分泌。相比之下，Labrum(1983)在80年代中期首次提议，发生于PMS的症状有着共同的病因学基础，包括5-羟色氨、GABA、和相互联系的内分泌过程的脑水平的异常波动。雌激素反馈可能是过度波动的一个因素，尤其是5-羟色氨。 关于5-羟色氨，许多不同的方法已经用于评估PMS+PMDD妇女的该系统，包括检测全血中5-羟色氨、血小板5-HT的摄入以及神经内分泌挑战。基于灵长类动物和另外的证据：低5-羟色氨与睡眠、食欲、以及应激性的变化相关，Rankin(1992)研究了严重月经前焦虑妇女的全血中的5-羟色氨发现，与无症状对照相比，有症状妇女的5-羟色氨水平更低。部分研究者(Ashby等，1988；Taylor等，1984；Ashby等，1990)而并非所有的研究小组(Mahngren等，1987；Rojansky等，1991)发现，与对照相比，PMS或PMDD妇女黄体期血小板对5-HT的摄入下降了。与对照相比，明确评估为PMDD妇女的丙咪嗪结合位点在早黄体期(Rojansky等，1991)和月经周期的两个阶段(Steege等，1992)都减少了。在后一研究中，只在滤泡期达到了统计学显著性。 对PMDD妇女应用色氨酸在月经周期的两个阶段产生了减弱的生长激素和皮质醇反应(Bancroft等，1991)，说明了PMDD病人与对照之间的性状差异。然而，在同样的两个组里，相对色氨酸的催乳素反应只在月经周期的月经前阶段减弱了(Bancroft等，1991)。另一方面，当5-HT1A不完全兴奋剂丁螺环酮用于滤泡期PMDD病人及健康对照时，产生了减弱的催乳素反应(Yotham，1993)。关于对氟苯丙胺减弱催乳素反应的数据，与一组与对照相比明确鉴定的PMDD受试者发现减弱的反应(FitzGerald等，1996)以及另外一组发现没有区别的(Bancroft和Cook，1995)相混合。最后，与无症状妇女相比较，耗尽5-羟色氨的前体色氨酸明显更有可能引起PMDD病人黄体期和滤泡期的月经前症状(Menkas等，1994)。 许多最近的研究评估了某些精神活性药物对于PMDD的缓解和抗抑郁，包括clonipramine(Sunblad等，1993)、氟西汀(Stone等，1991；Wood等，1992；Steiner等，1995；Brandenberg等，；Pearlstein和Stone，1994)、安非他酮(Pearlatein等，1995)、帕罗西汀(Eriksson等，1995；Yonkers等，1996a)、马普替林(Eriksson等，1995)、舍曲林(Yonkers等，1996b)、奈法唑酮(Girdler等，1995)、和氟苯丙胺(Brzezinski等，1990)。 发明者预期，对单个或者甚至两个个别的神经递质只有有限效应的单个药物对于克服在女性月经前期、期间、和月经以后由激素变化引起的“报偿”系统异常状态是不够的。此外，虽然上述的生物学证据不能明确地归于任何单个的神经生物学系统，但肾上腺素能受体结合、GABA水平和5-HT系统的变化提示神经生物学异常与PMDD表达相关。也在单相MDD中发现了这些标志的变化。没有关于脑啡肽酶抑制剂对PMDD阳性效应的研究报道。实际上，麻醉药拮抗剂的使用如Trexan(Dupont，Delaware)已经表明减少而不是增强PMDD，与发明者在本发明中做的相反。 这与Figuerola及其协作者最近的发现(deLourdes-Figuerola等，1997)表明了月经偏头痛组在第22天血浆ME的增加和血浆去甲肾上腺素(NE)水平的下降以及血浆ME、NE在疼痛期间的增加。作者推断，变化发生于血浆ME和交感神经肾上腺功能上，不仅在疼痛期间也在中黄体期。 发明者提出，氨基酸治疗的应用将对遭受PMDD痛苦者有益。利用表11中特异对该障碍建议的组合物在许多酗酒病人中完成的工作显著减少了典型的PMS症状，包括易怒、紧张、乳腺疼痛、头痛、和抑郁。利用的具体实例在列于表11的PMXTM配方中详细说明。 双盲安慰剂对照研究将在Dallas，Texas诊所的PMDD门诊病人中实施。将研究总共100个病人。发明者将提出PMDD尺度并提供给所有的100个参与者。该尺度将先于接受任何疗法(安慰剂或PMXTM)进行评分。对于该研究，至少三个周期是进入本研究的最低限度。病人必须是育龄妇女并且没有怀孕。将得到两组之间的比较，统计分析通过Texas大学健康学中心计算资源系在Robert Wood的指导下进行。只有经由DSM-IV标准评估的病态PMDD候选者才能进行研究。在三个月时间以后，每个病人将利用本发明中提出的MAA技术进行基因分型。因此将至少评估29个基因。 预期DRD2 A1等位基因以及本文公开的其他RDS相关等位基因的携带者，将对PMXTM有良好反应，在安慰剂情况下将会特别难受。进一步预期，个人的基因分型将对预测靶向治疗结果提供额外的信息。 参考文献下列文献在此被引用作为参考文献，目的是对在本发明中阐述的各个问题提供示例性的程序上的或其它细节上的补充。美国专利第4,761,429号美国专利第5,189,064号Abraham，Brooks，Eylath，″补铬对具有或不具有非胰岛素依赖性糖尿病患者的血清葡萄糖和脂类的影响.″新陈代谢(Metabolism)，41：768-771，1992.Abraham和Dufy，″在具有或不具有病前药物滥用史的惊恐障碍患者中记录脑电波异常″生物精神病学(Biol.Psychiatry)，29：687-690，1991.Accili等，″对D3受体的一种新审视″分子精神病学(Mol.Psychiatry).1：93-94.1996.Adams等，″年长的酒精中毒患者的正电子成象术显示神经心理性缺乏与额代谢减退有关″酒精中毒：临床和实验研究(AlcoholClin.Exp 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(B)街道：1211 Lost Stone(C)城市：San Antonio(圣安东尼奥)(D)州：得克萨斯(E)国家：美国(F)邮政编码(ZIP)：78258(A)姓名：Kenneth Blum(B)街道：1211 Lost Stone (C)城市：San Antonio(圣安东尼奥)(D)州：得克萨斯(E)国家：美国(F)邮政编码(ZIP)：78258(A)姓名：David E.Comings(B)街道：59 Crestview Court(C)城市：Duarte(D)州：加利福尼亚(E)国家：美国(F)邮政编码(ZIP)：91010(A)姓名：John L.Ivy(B)街道：10405 Skyline Drive(C)城市：Austin(奥斯汀)(D)州：得克萨斯(E)国家：美国(F)邮政编码(ZIP)：78759(ii)发明名称：报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗(iii)序列数：34：(iv)电脑可读形式：(A)媒体类型：软盘(B)电脑：IBM PC兼容(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS(D)软件：PatentIn Release#1.0，版本#1.30(EPO)(v)当前申请资料：申请号：未知(2)SEQ ID NO：1的信息：(i)序列特征：(A)长度：8碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑学：线性(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：ATTTGCGC 8(2)SEQ ID NO：2的信息：(i)序列特征：(A)长度：8碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑学：线性(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：TAAACGCG 8(2)SEQ ID NO：3的信息：(i)序列特征：(A)长度：20碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑学：线性(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：GCTGCTTCTG TTAACCCTGC 20(2)SEQ ID NO：4的信息：(i)序列特征：(A)长度：21碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑学：线性(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：TACATCTCCG TGTGATGTTC C 21(2)SEQ ID NO：5的信息：(i)序列特征：(A)长度：23碱基对(B)类型：核酸(C)链：单链(D)拓扑学：线性(xi)序列描述：SEQ ID 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3.一种用于预防或治疗注意缺陷障碍的组合物，其基本构成如下：a)抑制阿片破坏量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物质，所说的物质选自：氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；b)神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，它选自：多巴胺前体L-酪氨酸、L-苯丙氨酸和L-多巴，5-羟色胺前体L-色氨酸和5-羟色氨酸，和γ氨基丁酸(GABA)前体L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷氨酸盐；c)色氨酸浓度增强量的吡啶甲酸铬或烟酸铬；以及d)神经递质合成促进量的至少一种神经递质合成促进物质，它选自Rhodila或石杉碱，选择上述的物质、神经递质前体、无机化合物以及神经递质合成促进物质，使该组合物可以有效降低注意缺陷障碍，改善注意力处理或记忆。 4.一种治疗受试者的RDS行为的方法，所述行为基本选自：SUD、肥胖、吸烟、抽动-秽语综合症、ADHD、分裂样/回避行为、创伤后应激综合症、PMS或烟草使用，该方法包括给予受试者如下组合物，它包括：a)抑制阿片破坏量的至少一种抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物质，所说的物质选自：氨基酸、肽、及其结构类似物或衍生物；b)神经递质合成促进量的至少一种神经递质前体，它选自：多巴胺前体L-酪氨酸、L-苯丙氨酸和L-多巴，5-羟色胺前体L-色氨酸和5-羟色氨酸，和γ氨基丁酸(GABA)前体L-谷氨酰胺、L-谷氨酸和L-谷氨酸盐；以及c)色氨酸浓度增强量的吡啶甲酸铬或烟酸铬。 5.权利要求4的方法，其中所说的给药是在每天的饮食消耗中含有32到10,000mg DL-苯丙氨酸、5到5,000mg L-色氨酸、3到30,000mg L-谷氨酰胺，所述组合物还进一步含有1到300mg吡哆醛-5’-磷酸。 6.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是肥胖。 7.权利要求6的方法，其中所说的给药是在每天的饮食消耗中含有460mg DL-苯丙氨酸、25mg L-色氨酸、25mg L-谷氨酰胺，该混合物还进一步含有5mg吡哆醛-5’-磷酸。 8.权利要求6的方法，其中受试者具有化学品依赖的家族史，所说的家族史提示成功的可能性提高。 9.权利要求6的方法，其中所说的给药抑制暴食行为。 10.权利要求6的方法，其中所说的给药抑制成瘾。 11.权利要求6的方法，其中在受试者中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高：D2TaqI A1、B1、C1或外显子6-7单倍型，HTR2A-C等位基因纯合，OB-1875二核苷酸重复多态性＜208bp等位基因纯合性，人类2号染色体微卫星多态性，APO-D-TaqI2.2或2.7bp，或OB基因D7S1875等位基因。 12.权利要求6的方法，其中所说的给药包括服用有效剂的烟酸铬，且受试者中存在DRD2 A1等位基因提示反应的可能性提高。 13.权利要求11的方法，其中所说的给药包括服用有效量的吡啶甲酸铬，且受试者中存在DRD2 A2等位基因提示反应的可能性提高。 14.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是烟草使用。 15.权利要求14的方法，其中在受试者中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高：D1(Dde A1纯合性)，D2(TaqI A1)，D4(VNTR2)，D5(二核苷酸13等位基因，范围在135-159bp)，DAT1VNTR(10/10)，DβH(TaqI B1等位基因)。 16.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为进一步包括：孤独癖、抽动-秽语综合症或ADHD，并且其中所说的受试者含有至少一种下列等位基因：D(Dde A纯合性)，D(Taq)，D(VNTR)，D(二核苷酸等位基因范围-bp)，DAT VNTR(/)，DβH(Taq B等位基因)，MAOA(X)，至少一种等位基因的存在提示成功反应的可能性提高。 17.权利要求16的方法，其中所说的给药进一步包括服用有效剂量的Rhodila或石杉碱。 18.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是病理性赌博，并且在受试者中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高：D(Dde A纯合性)，D(Taq A，B，C)。 19.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为进一步包括病理性暴力、分裂样/回避症(SAB)、攻击、发怒、敌意或创伤后应激障碍，其中在受试者中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高：D(Taq A，B，C，外显子)，DAT(VNTR/)，mNOSIa-对于≤BP等位基因的纯合性。 20.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为是PMS，其中存在至少一种下列等位基因提示成功反应的可能性提高：DAT1 VNTR(10/10)，D2TaqI A1，B1，C1，外显子6-7单倍型，或来自于DRD1、DRD2、DRD4、HTT、HTRIA、TDO2、DβH、MAO、COMT、GABRAB、GABRB3、PENk、ADRA2A或ADRA2C基因的等位基因。 21.权利要求4的方法，其中所说的RDS行为进一步包括物质滥用障碍。 22.权利要求21的方法，其中所说的RDS行为是物质使用障碍。 23.一种确定受试者对至少一种RDS行为的遗传素质的方法，包括检测下组中的至少一种等位基因：DRD1，DRD2，DRD3，DRD4，DRD5，DAT1，HTT，HTRIA，TDO2，DβH，ADRA2A，ADRA2C，NET，MAOA，COMT，GABRA3，GABRB3，CNR1，CNRA4，NMDAR1，PENK，AR，CRF，HTRIDβ，HTR2A，HTR2C，γ-干扰素，CD8A，或PSl基因。 24.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：涉及躁狂、OCD、性、睡眠、小学行为、赌博、学习、无注意力、ADHD、ADDR、冲动性、MED，、CD、多动、恐怖、分裂样行为、广泛焦虑、躯体化、药物、静脉注射药物、阅读、ODD、抽动、酒精或烟草使用的障碍。 25.权利要求24的方法，其中所说的等位基因是MAOA基因的VNTR多态性。 26.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是分裂样或回避症。 27.权利要求26的方法，其中所说的等位基因选自：DRD2基因A1等位基因，DAT1基因VNTR10/10等位基因，DβH基因B1等位基因。 28.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是药物使用。 29.权利要求29的方法，其中所说的等位基因是在CNR1基因中(AAT)n三联重复序列数增加。 30.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：肥胖，焦虑，抑郁，精神病，敌意，偏执观念，强迫，症状总和，一般症状指数，追求新奇，整体总和，神经过敏症和谨慎。 31.权利要求30的方法，其中所说的等位基因选自：在OB基因中D7S1873、D7S1875、D7S514或D7S680二核苷酸重复序列数增加。 32.权利要求31的方法，其中所说的D7S1875二核苷酸重复序列在CNR1基因的两个拷贝中的数目都大于225bp长度。 33.权利要求32的方法，其中所说的等位基因是DRD2基因的D2A1等位基因。 34.权利要求30的方法，其中所说的检测是检测DRD2基因的D2A1等位基因，和从下面的组中选择出来的一个等位基因，该组包括：OB基因中D7S1873、D7S1875、D7S514或D7S680二核苷酸重复序列数增加。 35.权利要求34的方法，其中所说的确定是用于肥胖。 36.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合症、躁狂症状、对立违抗、性、ADHD-R、分裂样、ADHD、抽动、重性抑郁、品行、口吃、强迫、躯体化、酒精滥用、学习和睡眠问题。 37.权利要求36的方法，其中所说的等位基因是DRD2基因的D2A1等位基因。 38.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合症、ADHD、吸烟、学习、小学行为、ADHD-R、对立违抗、抽动、躁狂、酒精、阅读、药物滥用、睡眠、口吃、强迫、躯体化和重性抑郁。 39.权利要求38的方法，其中所说的等位基因是DβH基因的Taq A1等位基因。 40.权利要求36的方法，其中所说的RDS行为是抽动—秽语综合症，其中所说的确定是通过检测DβH基因中Taq B1和Taq A1等位基因数增加来进行的。 41.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合症、孤独癖、躯体化、酒精、ADHD-R、重性抑郁、恐慌、强迫、广泛性焦虑、躁狂、对立违抗、性、阅读和ADHD。 42.权利要求41的方法，其中所说的抽动—秽语综合症是通过检测DAT1基因的至少一个10等位基因数目增加来进行的。 43.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：ADHD、口吃、ADHD-R、对立违抗、抽动、品行、强迫、躁狂、酒精、广泛性焦虑、恐慌、分裂样、睡眠、性、药物和重性抑郁。 44.权利要求43的方法，其中所说的RDS行为是通过检测至少一种等位基因的数目增加来进行的，这些等位基因选自：DAT1基因的10等位基因、DβH基因的Taq A1等位基因、DRD2基因的D2A1等位基因。 45.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：酒精、吸烟、强迫进食、抽动、赌博、药物、阅读，购物、对立违抗，重性抑郁发作、分裂样、ADHD、品行障碍、强迫症和躁狂。 46.权利要求45的方法，其中所说的确定是通过检测DRDI基因的DdeI等位基因的纯合性来进行的。 47.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：对立违抗、品行障碍、进食、吸烟、赌博、ADHD、强迫症、躁狂和酒精。 48.权利要求47的方法，其中包括检测DRD2基因的TaqI A1和TaqIA2等位基因。 49.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：抽动—秽语综合症、吸烟和赌博。 50.权利要求49的方法，其中所说的确定是通过检测DRD1基因的11或22基因型而进行的。 51.权利要求50的方法，其中所说的确定是通过检测每个基因组两个拷贝的DRD1基因的Dde1等位基因而进行的。 52.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：对立违抗、品行障碍、冲动进食、吸烟、赌博、ADHD、躁狂、口吃、强迫症和分裂样行为。 53.权利要求52的方法，包括所说的确定是通过检测DRD1基因的11基因型的数目增加而进行的。 54.权利要求23的方法，其中所说的确定是通过检测DRD2 A1等位基因而进行的，而所说的RDS行为选自：赌博、吸烟、强迫进食、对立违抗、重性抑郁发作、ADHD、品行障碍、分裂样、强迫症、躁狂和酒精。 55.权利要求54的方法，其中所说的确定是通过检测每个基因组两个拷贝的DRD1基因的Dde1等位基因而进行的。 56.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：酒精、吸烟、强迫进食、抽动、赌博、药物、阅读、购物、赌博和小学问题。 57.权利要求56的方法，其中所说的确定是通过检测DRD1基因的11或22基因型而进行的。 58.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是抽动—秽语综合症。 59.权利要求58的方法，其中所说的确定是通过检测色氨酸2，3二氧化酶基因的内含子6G→A多态性来进行的。 60.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：ADHD、酒精依赖、药物依赖、病理性赌博。 61.权利要求60的方法，其中所说的确定是通过检测色氨酸2，3二氧化酶基因的内含子6G→T多态性来进行的。 62.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：ADHD、酒精依赖、药物依赖、病理性赌博和抑郁症。 63.权利要求62的方法，其中所说的确定是通过检测色氨酸2，3二氧化酶基因的内含子6DGGE多态性来进行的。 64.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是药物使用。 65.权利要求64的方法，其中所说的确定是通过检测ADRA2C二核苷酸多态性的低数目碱基对等位基因(≤181bp)的多态性来进行的。 66.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为是酒精使用。 67.权利要求66的方法，其中所说的确定是通过检测ADRA2C二核苷酸多态性的高数目碱基对等位基因(≥183bp)的多态性来进行的。 68.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：酒精和烟草使用。 69.权利要求68的方法，其中所说的确定是通过检测早衰素-1(PS1)多态性的两个同源等位基因来进行的。 70.权利要求68的方法，其中所说的确定是通过检测PENK基因CA二核苷酸重复序列多态性的大于80bp的两个同源等位基因来进行的。 71.权利要求23的方法，其中所说的RDS行为选自：CD、ODD或多动症。 72.权利要求71的方法，其中所说的确定是通过检测AR基因的短GGC等位基因的存在来进行的。 73.权利要求23的方法，其中所说的确定是确定酒精中毒者、可卡因成瘾者或RDS先证者中的B型行为的素质，包括在上述患者中检测与所说的素质相关的DRD2等位基因的存在来进行的。 74.一种确定多基因性状的遗传素质的方法，包括检测与下组基因相关的至少一种等位基因，该组包括：DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTRIA、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A或PS1基因。 75.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对ADHD的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTRIA、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、GABKB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR或CRF基因。 76.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对ADHD缺乏易感性的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：DRD3、DRD4、NTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A、PS1基因。 77.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对ODD的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因。 78.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对抽动的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、NTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因。 79.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对LD的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C、MAOA、CNR1或CNRA4基因。 80.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对LDL水平升高的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：HTT、OXYR、DRD2或PS1基因。 81.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对胆固醇水平升高的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：HTT、OXYR、DRD2或PS1基因。 82.权利要求74的方法，其中所说的遗传素质是对长寿的遗传素质，并且所说的确定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因是：PS1、OXYR、或APOE基因。 83.一种发展诊断性多基因检测的方法，包括下列步骤：a).鉴定所研究的性状，b).创造一种用于测量所研究性状之严重性的量度，c).选择至少一种可能对所说的性状有贡献的侯选基因，d).鉴定至少一种与所说的侯选基因有关联的多态性，e).将所述多态性的等位基因模式与所说的量度关联，f).将所说的等位基因模式的关联与所述侯选基因与所述性状的相关性进行比较，和g).那些与所说的特点具有正关联的等位基因模式被加进来，形成诊断性多基因检测。 84.权利要求83的方法，其中侯选基因包括：DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、CRF、DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A、或PS1基因。 85.权利要求83的方法，其中多基因性状包括：ADHD、ADHD缺乏，ODD、CD、LD、抽动、药物滥用/依赖、吸烟、骨关节炎、胆固醇水平升高、LDL水平升高或长寿。 86.权利要求85的方法，其中对所述ADHD的所述多基因检测包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、DRD2、DRD5、DAT1、HTT、HTR1A、TDO2、DBH、ADRA2A、ADRA2C、NET、MAOA、COMT、GABRA3、GABRB3、CNR1、CNRA4、NMDAR1、PENK、AR、或CRF基因。 87.权利要求85的方法，其中对所述ADHD缺乏的所述多基因检测包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD3、DRD4、HTR1Dβ、HTR2A、HTR2C、γ-干扰素、CD8A、或PS1基因。 88.权利要求85的方法，其中所说的对所说的ODD的多基因鉴定包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、DRD2、DRD3、DAT1、HTT、HTR1A、HTR2A、HTR2C、DBH、ADRA2A、ADRA2C、MAOA、GABRA3、GABRB3、CNR1、CHRNA4、NMDAR1、PENK、AR或CD8A基因。 89.权利要求85的方法，其中对所述抽动的多基因检测包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、DRD5、HTR1A、HTR1Dβ、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2C、COMT、GABRA3、CNR1或CHRNA4基因。 90.权利要求85的方法，其中对所述LD的多基因检测包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：DRD1、HTR2C、TDO2、DBH、ADR2A、ADR2C.MAOA、CNR1或CNRA4基因 91.权利要求85的方法，其中对所述LDL水平升高的多基因检测包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：HTT、OXYR、DRD2、或PS1基因。 92.权利要求85的方法，其中对所述长寿的多基因检测包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：PS1、OXYR或APOE基因。 93.权利要求85的方法，其中对所述骨关节炎的多基因检测进一步包括检测与下列基因有关的至少一种等位基因，这些基因有：COL2A1、COL2A1、COL2A1、COL9A1、COL9A1、AGC1、IGF1、IGF1、IGF1R、IGF1R、IGF2、IGF2R、TGFB1、TGFB2、IL1A、IL1B、IL1R1、IL1RN、MMP9、TIMP1或维生素D3基因。 94.一种用于在受试者中治疗RDS行为的组合物，其基本构成如下：a)抑制阿片破坏量的至少一种可以抑制神经肽酰阿片的酶解破坏的物质，所说的物质选自氨基酸、肽以及其结构类似物或衍生物；b)一种脑啡肽酶释放物质，它释放神经元的脑啡肽或内啡肽，所说的物质选自多肽或氨基酸；和c)阿片拮抗量的至少一种阻滞阿片在δ、μ、κ、σ或ε受体上之效果的化合物，所说的物质选自麻醉拮抗剂如nalopotone或IC1154129，上述的物质、神经递质前体、铬化合物以及阿片拮抗剂的量是有效减少受试者的RDS行为的。 Applications Claiming Priority (2)Application NumberPriority DateFiling DateTitleUS4439497P1997-04-291997-04-29US60/044,3941997-04-29Publications (1)Publication NumberPublication DateCN1261801A true CN1261801A (zh)2000-08-02ID=21932148Family Applications (1)Application NumberTitlePriority DateFiling DateCN98806484A Pending CN1261801A (zh)1997-04-291998-04-29报偿缺陷综合征的等位基因多基因诊断和治疗Country Status (10)CountryLinkEP (1)EP0979092A2 (zh)JP (1)JP2002511850A (zh)KR (1)KR20010020422A (zh)CN (1)CN1261801A (zh)AU (1)AU7267798A (zh)CA (1)CA2288990A1 (zh)IL (1)IL132634D0 (zh)IS (1)IS5233A (zh)NO (1)NO995257L (zh)WO (1)WO1998048785A2 (zh)Cited By (8)* Cited by examiner, † Cited by third partyPublication numberPriority datePublication dateAssigneeTitleCN100457182C (zh) *2000-12-012009-02-04可以有限公司行为化学疗法CN103497993A (zh) *2005-02-072014-01-08基因信息公司轻度骨关节炎生物标志物及其用途CN109069824A (zh) *2016-02-022018-12-21阿莱瓦神经治疗股份有限公司使用深部脑刺激治疗自身免疫疾病CN109316196A (zh) *2018-12-122019-02-12上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心）基于虚拟现实联合脑电监测的苯丙胺类兴奋剂渴求评估方法CN110507294A (zh) *2019-08-072019-11-29北京安龙脉德医学科技有限公司基于互联网信息传递的急救系统CN112862751A (zh) *2020-12-302021-05-28电子科技大学一种用于自闭症的自动诊断装置US11266830B2 (en)2018-03-022022-03-08Aleva NeurotherapeuticsNeurostimulation deviceUS11311718B2 (en)2014-05-162022-04-26Aleva Neurotherapeutics SaDevice for interacting with neurological tissue and methods of making and using the sameFamilies Citing this family (18)* Cited by 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請你觀察這張圖的單位形是以什麼方式延伸群化成右方的排列圖案呢
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