Ureaplasma中文

Relationship of Ureaplasma urealyticum infection between women and their male partners

1. Department of Clinical Laboratory, the Shaoxing Hospital of China Medical University, Shaoxing, Zhejiang 312030, China;
2. DAAN Gene Co., Ltd. of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510100, Guangdong, China

Abstract

Objective To understand the relationship of Ureaplasma urealyticum (Uu) infection between women and their male partners. Methods By excluding other urethral pathogen infection, 334 symptomatic and 61 asymptomatic women infected with Uu and 395 male partners were surveyed from February 2010 to March 2011. The endocervix or vagina, urethral secretions were collected from them respectively. Fluorescent quantitative PCR (FQ-PCR) was conducted to determine the Uu gene expression and PCR reverse dot blot (PCR-RDB) assay was conducted for the genogroup detection of Uu. Results Of 395 male partners, 203 (51.39%) were infected with Uu. The infection rates of Uu in symptomatic and asymptomatic women were 56.3% (188/334) and 24.6% (15/61) respectively (χ2=19.50, P<0.01). PCR-RDB assay revealed that biovar 1 infection, biovar 2 infection and co-infection were found in the symptomatic women, but biovar 1 infection was predominant. The asymptomatic women were mainly infected with biovar 1, accounting for 86.9% (53/61), In the symptomatic womens male partners, the infection of biovar 2 and co-infection were found in those who had urethritis symptoms (98.7%, 147/149) and the infection of biovar 1 was found in those who had no urethritis symptoms (94.9%, 37/39). It was also found that all the asymptomatic womens male partners had no urethritis symptoms, and most of them were infected with biovar 1 (80.0%, 12/15). Further analysis showed that when the women were infected with biovar 1, the infection rate of Uu in their male partners was relatively low, but when women had biovar 2 infection or co-infection, the infection rates in their male partners were as high as 98.6% (71/72) or 73.0% (84/115). Conclusion Whether the women were infected with biovar 1 or biovar 2, biovar 2 infection was found in their male partners. Therefore, the genogroup detection of Uu in infected women and their male partners can help physician to make targeted strategies for treatment of Uu infection and track the source of infection.

女性解脲脲原体感染与其男性伴侣解脲脲原体感染的关系

卢志勇1, 王清平1, 单平囡1, 周青玲1, 任延巍1, 许慧2

1. 中国医科大学绍兴医院, 浙江 绍兴 312030;
2. 中山大学达安基因股份有限公司, 广东 广州 510100

收稿日期：2013-10-28

作者简介：卢志勇，男，江西省高安市人，本科，副主任检验师，主要从事感染性疾病病原体检测工作

通讯作者：卢志勇，Tel：0575－85580825，Email：

摘要

目的 探讨女性解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，Uu）感染与其男性伴侣Uu感染的关系，为临床诊治Uu感染提供依据。方法 对2010年2月至2011年3月就诊并排除其他病原体感染的有症状且Uu阳性女性334例，无症状但Uu阳性女性61例和同期男性伴侣395例，分别取宫颈管或阴道、尿道分泌物进行Uu实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative-Polymerase Chain Reaction，FQ-PCR）基因检测和PCR反向斑点杂交（PCR-RDB）基因分群检测。结果 395例男性伴侣中，203例（51.39%）经FQ-PCR检测为Uu阳性，其中，有症状和无症状女性的男性伴侣Uu阳性率分别为56.3%（188/334）和24.6%（15/61），差异有统计学意义（χ2=19.50，P<0.01）。基因分群显示，有症状女性感染者生物1群、生物2群和混合群各占一定比例，但以生物1群占优势，而无症状女性感染者绝大部分以生物1群为主，占86.9%（53/61）；有症状女性的男性伴侣中，有尿道炎症状者绝大部分（98.7%，147/149）为生物2群和混合群感染，无尿道炎症状者则绝大部分（94.9%，37/39）为生物1群感染；而无症状女性的男性伴侣均无尿道炎症状，感染主要以生物1群为主，占80.0%（12/15）。进一步分析发现，女性感染生物1群时其男性伴侣发生感染的比例较低，而女性感染生物2群和混合群时，其男性伴侣感染同类基因群的比例则高达98.6%（71/72）和73.0%（84/115）。结论 无论女性感染生物1群还是生物2群，其男性伴侣感染的主要是生物2群。因此，在女性Uu感染者及其男性伴侣中进行Uu基因分群分析，不但可指导临床制定有针对性的治疗方案，而且对监测Uu的基因变化、追踪传染源、分析流行趋势有重要意义。

近年来，解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum， Uu)所致泌尿生殖道感染日益受到重视，已被列为性传播疾病(sexually transmitted diseases， STD)的病原体，是引起非淋菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGU)的病原体之一。Uu在健康人中分离率很高，其致病性虽仍有争议，但现已知可能与含Uu基因的某生物群(生物1群即Ureaplasma parvumr和生物2群即Ureaplasma urealyticum)等有关[1]。

本研究对女性Uu 感染者及其对应的男性伴侣进行了Uu基因分群分析，初步探讨了女性感染Uu与其男性伴侣Uu感染的关系， 现报道如下。

1 材料与方法
1.1 研究对象  

2010年2月至2011年3月在绍兴医院妇科和泌尿科门诊就诊以及健康体检的女性，经详细登记病史、自觉症状及体征，常规妇科检查后，取阴道分泌物进行病原体(淋球菌、衣原体、支原体、单纯疱疹病毒、滴虫、念珠菌及非特异性细菌等)检查。选取Uu培养阳性并排除其他病原体感染，2周内未行药物治疗的女性。同期，选择上述女性的男性伴侣，要求无论Uu培养是否阳性，均需排除其他病原体感染，并在2周内未行药物治疗。此外，对所有女性及其性伴侣均采用问卷方式调查其性行为特征、婚外性活动情况等，要求入选对象均无非婚性伴史。最终，符合本次研究纳入标准的女性及其伴侣共395对，其中，有泌尿生殖道感染症状和体征(包括阴道炎、尿道炎、宫颈炎以及其他如白带增多、异常) 的女性及其男性伴侣334对，女18~55岁，平均(31.8±5.5)岁；男20~65岁，平均(37.4±6.8)岁。无自觉症状的女性及其男性伴侣61对，女18~55岁，平均(31.5±5.1)岁，男20~65岁，平均(36.9±6.3)岁。

男性伴侣NGU诊断：近3个月内无急性尿道炎、持续性或复发性尿道炎病史，就诊时有明显的男性尿道炎临床表现，实验室检查：男性尿道拭子涂片革兰染色检查多形核白细胞≥5个/高倍视野。

1.2 实验方法  
1.2.1 标本采集 

男性用无菌男性拭子插入尿道2~4 cm处取尿道分泌物或取前列腺液，女性用无菌女性拭子在宫颈管内1~2 cm处取宫颈分泌物，标本无菌密封送检。

1.2.2 DNA 提取 

将棉拭子上的细胞洗脱于1 ml生理盐水中，挤干棉拭子；吸取全部液体转至1.5 ml 离心管中，12 000 r/min离心5 min； 去上清，沉淀加灭菌生理盐水1 ml 混匀，12 000 r/min离心5 min；去上清，沉淀中加入50 μl DNA 提取液充分混匀，100 ℃恒温处理(10±1) min；12 000 r/min离心5 min，取上清液备用。

1.2.3 Uu基因实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative-polymerase chain reaction，FQ-PCR)分析 

标本提取Uu DNA后，取上清液2 μl，用ABI7300荧光定量PCR仪进行DNA扩增。循环条件： 93 ℃预变性2 min；然后93 ℃ 45 s→55 ℃ 60 s, 10个循环；再经93 ℃ 30 min →55 ℃ 45 s, 30个循环。试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。实验操作严格按照说明书进行，每次实验均设阳性(含弱阳性和强阳性)与阴性对照。检测结果以标本DNA≥1.00×103拷贝/μl为阳性[2]。

1.2.4 Uu基因PCR-反相斑点杂交法(PCR-RDB)分群分析 

将Uu不同基因群的特异探针包被在尼龙膜上，用生物素标记的引物进行靶片段PCR扩增(样品5 μl，按下列条件扩增：94 ℃ 3 min预变性，然后按94 ℃ 30 s；55 ℃ 40 s； 72 ℃ 40 s扩增，共40个循环，最后72 ℃延伸7 min)后，将PCR产物和膜条上的特异性探针进行杂交，最后洗膜、显色和结果分析。阳性结果为在显色反应结束后 5 min内出现清晰可见的蓝色圆点，无色或极淡的显色均为阴性结果。本试验试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。实验操作严格按照说明书进行。

1.3 统计学分析  

应用SPSS 13.0软件分析数据，计数资料以率(%)表示，率的比较采用χ2检验或U检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

本组资料共分析了395对女性及其男性伴侣，其中，有症状且Uu培养阳性女性感染者334例，其男性伴侣188例Uu培养阳性，阳性率为56.3%(188/334)；无症状但Uu培养阳性女性感染者61例，其男性伴侣15例Uu培养阳性， 阳性率为24.6%(15/61)。所有Uu培养阳性标本经FQ-PCR检测均为阳性。

2.1 女性及其男性伴侣感染者Uu基因群构成  

见表1。

表1 女性及其男性伴侣感染者Uu基因群构成比
Table 1  Genogroup of Un detected in infected women and their male partners

注：(1)与无症状女性比较， P均<0.01； (2)与无症状女性男伴比比较， P<0.01。

由表1可知，有症状女性及其男性伴侣感染者中，Uu生物1群、生物2群和混合群感染各占一定比例，但以生物1群占优势；而无症状女性感染者以生物1群为主，生物2群感染率最低。其男性伴侣亦以生物1群为主，生物2群感染率极低。χ2检验表明，有症状女性感染者的Uu基因群构成比明显不同于其男性伴侣(χ2=51.70，P<0.01)和无症状女性感染者，差异有统计学意义(χ2=34.65，P<0.01)；与无症状女性男伴比较，有症状女性男伴的Uu基因群构成比也明不同，差异有统计学意义 (χ2=26.20，P<0.01)。

2.2 男性伴侣感染者Uu基因群构成与临床症状的关系  

有症状女性的男性伴侣中，有尿道炎症状者主要感染生物2群和混合群(共占98.7%，147/149)，而无尿道炎症状男性伴侣主要感染生物1群(共占94.9%，37/39)，两者的基因群构成比差异有统计学意义(χ2=164.47，P<0.01)；无症状女性的男性伴侣均无尿道炎症状，感染主要以生物1群为主，见表2。与有症状女性的无症状男伴相比，其基因群构成比差异无统计学意义(χ2=3.02， P>0.05)。

表2 男性伴侣感染者Uu基因群构成与临床症状的关系
Table 2  Relationship between Uu genogroup and clinical symptoms in infected male partners

注：(1)与有、无症状女性的无症状男伴比较，P均<0.01。
2.3 女性感染者与其男性伴侣感染者Uu基因群的对应关系  

Uu在性接触中主要由女性向男性传播，未发现女性感染者感染生物1群而其男性伴侣感染生物2群或混合群，或女性感染生物2群而其男性伴侣感染生物1群或混合群，也未发现男性伴侣感染混合群而其女性伴侣感染生物1群或生物2群；但女性感染生物1群时，其男性伴侣的感染比例较低，仅23.1%(48/208)， 而女性感染生物2群和混合群时，其男性伴侣发生感染比例高达98.6%(71/72)和73.0%(84/115)，见表3。表明生物2群在性接触传播中起主要作用。

表3 女性感染者与其男性伴侣感染者Uu基因群的对应关系
Table 3  Comparison of Uu genogroup between infected women and their male partners

注：(1)与生物2群和混合群比较， P均<0.01； (2)与混合群比较， P<0.01。
3 讨论

Uu普遍寄居在男女泌尿生殖道中，在一定的条件下可引起NGU和其他多种泌尿生殖系疾病。在女性，Uu感染可能与不孕症、自然流产、死胎、女性生殖道炎症等疾病有着密切关系，且无论生殖道哪个部位受到Uu感染，都会引起相当数量的输卵管通液障碍；男性Uu感染除可引起非淋性尿道炎、前列腺炎、附睾炎外，还被认为与男性不育有关[2]。因此，对女性及其伴侣进行Uu检测，并了解其致病性与传播特征有着重要的临床意义。

患者感染Uu后的临床表现多种多样，部分患者病程长、症状明显；部分患者病程较短、症状不明显或者仅为隐性携带状态。因此，有关Uu的致病机制尚不十分清楚，其致病性可能受生物群/血清型、载量、与其他微生物的协同作用及宿主等因素的影响。本研究对女性Uu感染者的检测表明，女性Uu感染者无论有无临床症状均以生物1群感染为主。但笔者进一步分析发现，有临床症状女性感染者混合群和生物2群构的成比明显高于无症状者，这一结果与国内外的一些研究一致[3-5]。相似的报道也见于男性NGU患者[6-7]。提示Uu生物2群的致病性可能强于生物1群；而生物1群则大多以寄居形式定植于泌尿生殖道[8-9]，需在其他因素的共同作用下才可能导致疾病的发生。

作为STD病原体，Uu感染主要与性接触有关。国内有研究者对有非婚性接触或性伴感染史的男性NGU患者和无尿道炎临床表现的就诊者进行了比较，发现不同Uu基因群在NGU患者与无尿道炎症状者之间的分布并无差异，因而认为Uu与NGU无相关性[10]。但本研究对女性Uu感染者的男性伴侣进行分析发现，无论女性感染者有无症状，其有尿道炎症状和无尿道症状男性伴侣感染者之间的Uu基因群构成都存在显著差异。在有症状女性的男性伴侣感染者中，有尿道炎症状者绝大部分感染生物2群和混合群，无尿道炎症状者则绝大部分感染生物1群；而无症状女性的男伴感染者均无尿道炎症状，且以生物1群为主，生物2群感染率极低。这一结果支持Couldwell等[11]的研究，即在性接触中，生物2群与男性NGU显著相关。同时，我们发现女性感染生物1群时，其男性伴侣发生感染的比例较低；而女性感染生物2群和混合群时，其男性伴侣发生感染比例高达98.6%和73.0%。而且，女性感染者与男性伴侣感染者之间的Uu基因群完全一致，未发现女性感染生物1群(或2群)而其男性伴侣感染生物2群(或1群或混合群)，也未发现男性伴侣感染混合群而其女性伴侣感染生物1群或生物2群。提示生物2群可能是性接触传播的主要病原体。国内研究认为Uu与NGU无相关性[10]，可能与我们的研究人群不同有关。值得注意的是，本研究仅对Uu培养阳性的女性男伴Uu感染情况进行了分析，因此，要明确女性Uu感染与其男性伴侣Uu感染的关系，尚需对Uu培养阳性的男性女伴Uu感染情况进行进一步分析。

总之，本组资料表明，Uu生物1群和生物2群均可在女性感染者中引起相应的临床症状，且均可引起其男性伴侣感染，但由于生物2群的致病力和传播能力均强于生物1群，导致其男性伴侣感染并出现尿道炎症状的主要是生物2群。因此，对女性感染者进行Uu基因分群分析，进而对其男性伴侣进行跟踪调查，将有利于防治Uu感染并控制传染源。

参考文献

[1] Chen H, Yang B. Progress in research of pathogenicity of Ureaplasma urealyticum in lower gential tract[J]. China journal of Leprosy and Skin Diseases, 2010, 26 (4):264-266. (in Chinese) 陈辉, 杨斌. 下生殖道解脲脲原体致病性研究进展[J]. 中国麻风皮肤病杂志, 2010, 26(4):264-266.
[2] Salmeri M, Valenti D, La Vignera S, et al. Prevalence of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis infection in unselected infertile men[J].J Chemother, 2012, 24(2):81-86.
[3] Domingues D, Tavira LT, Duarte A, et al. Ureaplasma urealyticum biovar determination in women attending a family planning clinic in Guine-Bissau, using polymerase chain reaction of the multiple-banded antigen gene[J]. J Clin Lab Anal, 2002, 16(2):71-75.
[4] Gupta V, Dhawan B, Khanna N, et al. Detection and biovar discrimination of Ureaplasma urealyticum in Indian patients with genital tract infections[J]. Diagn Microbiol Infect Dis, 2008, 60(1):95-97.
[5] Povlsen K, Thorsen P, Lind I. Relationship of Ureaplasma urealyticum biovars to the presence or absence of bacterial vaginosis in pregnant women and to the time of delivery[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2001, 20(1):65-67.
[6] Yoshida T, Deguchi T, Meda S, et al. Quantitative detection of Ureaplasma parvum(biovar 1) and Ureaplasma urealyticum(biovar 2) in urine specimens from men with and without urethritis by real-time polymerase chain reaction[J]. Sex Transm Dis, 2007, 34(6):416-419.
[7] Deguchi T, Yoshida T, Miyazawa T, et al. Association of Ureaplasma urealyticum(biovar 2) with nongonococcal urethritis[J]. Sex Transm Dis, 2004, 31(3):192-195.
[8] Ren Y, Zhu X. Investigation on biovars and genotypes of Ureaplasma urealyticum in the cervix in a Chinese gynecologic check-up population and sex workers[J]. Acta Derm Venereol, 2003, 83(3):175-178.
[9] Qin CR, Yao JL, Zhang DK, et al.Rapid diagnosis the genotype of Ureaplasma urealyticum by Reverse dot blot and clinical significance[J].Maternal & Child Health Care of China, 2007, 22(3):382-385.(in Chinese) 覃春容, 姚吉龙, 张帝开, 等. 反相斑点杂交快速诊断解脲脲原体基因型及其临床意义[J]. 中国妇幼保健, 2007, 22(3):382-385.
[10] Zhong S, Huang JM, Huang SJ, et al.Study on the subtypes of Ureaplasma urealyticum isolated from STD clinic attenders[J].Journal of Diagnosis and Therapy on Dermato-Venereology, 2009, 16(1):26-29.(in Chinese) 钟山, 黄进梅, 黄澍杰, 等. 性病门诊男性就诊者尿道解脲支原体分群分型研究[J]. 皮肤性病诊疗学杂志, 2009, 16(1):26-29.
[11] Couldwell DL, Gidding HF, Freedman EV, et al. Ureaplasma urealyticum is significantly associated with non-gonococcal urethritis in heterosexual Sydney men[J]. Int J STD AIDS, 2010, 21(5):337-341.