Classifications
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
Abstract
本发明提供了一种浮萍及其制剂的特征图谱检测方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,包括如下步骤:1)参照物溶液的制备;2)供试品溶液的制备;3)分析特征图谱。供试品特征图谱应呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内;规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。本发明的浮萍及其制剂特征图谱检测方法,可以检测牡荆素,也可用于浮萍药材‑饮片‑提取物及配方颗粒的质量检测,结果可靠,为浮萍颗粒的质量控制提供了新方法。
Description
一种浮萍及其制剂特征图谱检测方法
技术领域
本发明具体涉及一种浮萍及其制剂特征图谱检测方法。
背景技术
浮萍作为浮萍科(Lemnaceae)植物的统称。喜温气候和潮湿环境,忌严寒。宜先水田、池沼、湖泊栽培。生长于水田、池沼或其它静水水域,常与紫萍,Spirodela polyrrhiza混生,形成密布水面的飘浮群落,由于本种繁殖快,有如李时珍所云:“一叶经宿即生数叶”,通常在群落中占绝对优势。带根干燥全草入药,性寒,味辛,功能发汗透疹、清热利水,主治表邪发热、麻疹、水肿等症;浮萍含大量水溶性维生素、无机元素、黄酮及多糖等成分。现代药理研究表明,浮萍具有抗癌、抗氧化、保肝、抗菌、增强免疫等多种生理活性。
由于浮萍的特殊功效,目前成为中药处方药如小儿柴桂退热颗粒、荆防消玫胶囊、紫铜消白颗粒等的原料药,临床应用广泛,但是有关浮萍的质量检测,目前仅限于性状、薄层色谱鉴别和运用液相色谱测定其中个别成分的含量,还未有全面反映和控制浮萍的检测方法。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种浮萍及其制剂的特征图谱检测方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:
1)参照物溶液的制备:取牡荆素对照品,加50%甲醇溶解,即得;
2)供试品溶液的制备:取待测样品,加50%甲醇提取,过滤,取滤液,即得;
3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B梯度洗脱;梯度洗脱程序如下:
4)分析特征图谱。
进一步地,步骤1)所述对照品牡荆素为每1ml含50μg的溶液。
进一步地,步骤2)所述待测样品为药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的一种或几种。
更进一步地,所述药材、饮片与50%甲醇的质量体积比为1:25g/ml;所述标准汤剂、配方颗粒与50%甲醇的质量体积比为1:125g/mL。
进一步地,步骤2)所述提取为超声提取。
更进一步地,所述超声提取的功率600W,频率40kHz、时间20min。
进一步地步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。
进一步地,步骤3)所述色谱条件的波长为300nm,柱温为30℃,流动相流速为1.00ml/min,理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。
进一步地,步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱规格为柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm。
进一步地,所述步骤4)的特征图谱中应呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内,规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。
本发明的浮萍及其制剂特征图谱检测方法,可以检测牡荆素,也可用于浮萍药材-饮片-提取物及配方颗粒的质量检测,结果可靠,为浮萍配方颗粒的质量控制提供了新方法,也能用于检测浮萍药材、饮片、提取物,具有良好的应用前景。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1浮萍药材特征图谱(S1-S16分别为:010149-1709002、XLS201807869、XLS201807870、XLS201807871、XLS201807872、XLS201807873、XLS201807874、XLS201807875、XLS201807916、XLS201807917、XLS201807918、XLS201807919、XLS201807920、XLS201807921、XLS201807922、XLS201807923)
图2浮萍饮片特征图谱(S1-S16分别为:FP181001、FP181002、FP181003、FP181004、FP181005、FP181006、FP181007、FP181008、FP181009、FP181010、FP181011、FP181012、FP181013、FP181014、FP181015、FP181016)
图3浮萍标准汤剂特征图谱(S1-S16别为:FPBT181001、FPBT181002、FPBT181003、FPBT181004、FPBT181005、FPBT181006、FPBT181007、BT181008、FPBT181009、FPBT181010、FPBT181011、FPBT181012、FPBT181013、FPBT181014、FPBT181015、FPBT181016)
图4浮萍配方颗粒特征图谱
图5药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒对照图谱叠加图
图6牡荆素紫外吸收光谱图
图7浮萍配方颗粒不同波长色谱图
图8柱温考察色谱图
图9流速考察色谱图
图10提取溶剂考察色谱图
图11提取方法考察色谱图
图12提取时间考察色谱图
图13溶剂加入量考察色谱图
图14浮萍对照药材
图15色谱峰指认
图16 3批浮萍配方颗粒特征图谱验证图
图17浮萍配方颗粒对照特征图谱
具体实施方式
1、材料、试剂与仪器
1.1实验仪器
高效液相色谱仪:安捷伦1260型高效液相色谱仪、Waters e2695型高效液相色谱仪、岛津20AD型高效液相色谱仪;
电子天平:ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司);
超纯水机:细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司);
超声波清洗器:KQ5200DB型(600W,40KHz;昆山市超声仪器有限公司);
色谱柱:Agilent 5 TC-C18 250×4.6mm、Diamonsil 5μm C18(2)250×4.6mm、Agilent Eclipse XDB-C18 5μm 4.6×250mm
1.2试剂及试药
牡荆素(中国食品药品检定研究院,批号:111687-201704,含量以94.9%计)。
乙腈(SIGMA公司,色谱纯);磷酸(色谱纯);水为超纯水,其它试剂均为分析纯。
浮萍配方颗粒1805034、SY1810001、SY1810002、SY1810003。
浮萍药材010149-1709002、XLS201807869、XLS201807870、XLS201807871、XLS201807872、XLS201807873、XLS201807874、XLS201807875、XLS201807916、XLS201807917、XLS201807918、XLS201807919、XLS201807920、XLS201807921、XLS201807922、XLS201807923
浮萍饮片FP181001、FP181002、FP181003、FP181004、FP181005、FP181006、FP181007、FP181008、FP181009、FP181010、FP181011、FP181012、FP181013、FP181014、FP181015、FP181016
浮萍标准汤剂FPBT181001、FPBT181002、FPBT181003、FPBT181004、FPBT181005、FPBT181006、FPBT181007、FPBT181008、FPBT181009、FPBT181010、FPBT181011、FPBT181012、FPBT181013、FPBT181014、FPBT181015、FPBT181016
实施例1浮萍药材特征图谱
1)参照物溶液的制备:
取牡荆素对照品,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,作为对照品参照物溶液;
2)供试品溶液的制备:
分别取16批浮萍药材各1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇25ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
3)特征图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,得到色谱图;
色谱条件如下:
检测波长:300nm;
色谱柱:C18色谱柱(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm);
流动相:乙腈(A)和0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~40min,5%~15%A;40~80min,15%~28%A;80~100min,28%~28%A);
柱温为30℃;
流速为1.00ml/min;
记录16批浮萍药材的特征图谱。结果见图1。
4)分析特征图谱
浮萍药材特征图谱中呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。
实施例2浮萍饮片特征图谱
1)参照物溶液的制备:
取牡荆素对照品,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,作为对照品参照物溶液;
2)供试品溶液的制备:
分别取16批浮萍饮片各1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇25ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液;
3)特征图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,得到色谱图;
色谱条件如下:
检测波长:300nm;
色谱柱:C18色谱柱(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm);
流动相:乙腈(A)和0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~40min,5%~15%A;40~80min,15%~28%A;80~100min,28%~28%A);
柱温为30℃;
流速为1.00ml/min;
对16批浮萍饮片进行特征图谱测定,记录图谱。结果见图2。
4)分析特征图谱
浮萍饮片特征图谱中呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。
实施例3浮萍标准汤剂特征图谱
1)参照物溶液的制备:
取牡荆素对照品,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,作为对照品参照物溶液;
2)供试品溶液的制备:
分别取16批浮萍标准汤剂粉末0.2g,研细,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,称定重量,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
3)特征图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,得到色谱图;
色谱条件如下:
检测波长:300nm;
色谱柱:C18色谱柱(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm);
流动相:乙腈(A)和0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~40min,5%~15%A;40~80min,15%~28%A;80~100min,28%~28%A);
柱温为30℃;
流速为1.00ml/min;
对16批浮萍标准汤剂进行特征图谱测定,记录图谱。结果见图3。
4)分析特征图谱
浮萍标准汤剂特征图谱中呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。
实施例4浮萍配方颗粒特征图谱
1)参照物溶液的制备:
取牡荆素对照品,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,作为对照品参照物溶液;
2)供试品溶液的制备:
分别取3批浮萍配方颗粒粉末0.2g,研细,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,称定重量,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
3)特征图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,得到色谱图;
色谱条件如下:
检测波长:300nm;
色谱柱:C18色谱柱(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm);
流动相:乙腈(A)和0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~40min,5%~15%A;40~80min,15%~28%A;80~100min,28%~28%A);
柱温为30℃;
流速为1.00ml/min;
对3批浮萍配方颗粒进行特征图谱测定,记录图谱。结果见图4。
4)分析特征图谱
浮萍配方颗粒特征图谱中呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内。规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。
实施例5浮萍药材-饮片-提取物及配方颗粒对照图谱
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)分别将实施例1中16批浮萍药材特征图谱合成一张药材对照图谱,实施例2中16批浮萍饮片特征图谱合成一张饮片对照图谱,实施例3中16浮萍标准汤剂特征图谱合成一张标准汤剂对照图谱,实施例4中3批浮萍配方颗粒特征图谱合成一张配方颗粒对照图谱。将以上浮萍药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒对照图谱进行对比,结果见图5。
结果表明:饮片和标准汤剂、配方颗粒中的7个特征峰均能在药材中检出,说明这些成分都来源于药材,同时从对照图谱可知浮萍药材、浮萍饮片、浮萍标准汤剂、浮萍配方颗粒的化学成分相同,物质基础一致。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果:
试验例1特征图谱方法学
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm)以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,按表1中的规定进行梯度洗脱,理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。
表1流动相梯度洗脱比例
1波长选择
在以上拟定的实验条件基础上,利用二极管阵列检测器分别对牡荆素、供试品溶液(批号1805034浮萍配方颗粒)进行全波段扫描,并分别提取供试品溶液在220nm、240nm、260nm、280nm、300nm、320nm、340nm波长下的色谱图。见图6-7。
结果表明,在检测波长为300nm时色谱峰信息量较大,色谱图基线更平稳,故检测波长确定为300nm。
2柱温考察
在以上拟定的实验条件基础上,取同一供试品溶液,分别对柱温为25℃、30℃、35℃时进行考察。见图8。
柱温考察结果表明,当柱温为30℃时,色谱图峰形均较为对称,分离度均好,故最终确定30℃作为浮萍特征图谱方法的柱温。
3流速考察
在以上拟定的实验条件基础上,取同一供试品溶液,分别对流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时进行了考察。见图9。
结果表明,流速在1.0ml/min时,色谱图峰形较好,分离度适中。故流速确定为1.0ml/min。
综上所述,浮萍特征图谱色谱条件与系统适应性试验确定为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm);以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱(0~40min,5%~15%A;40~80min,15%~28%A;80~100min,28%~28%A);柱温为30℃;检测波长为300nm。理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。
4参照物溶液的制备
取牡荆素对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,即得。
5供试品溶液的制备
5.1提取溶剂考察
取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g,置具塞锥形瓶中,分别加入甲醇、75%甲醇、50%甲醇、水、乙醇、50%乙醇、75%乙醇各10ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz)30分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。见图10。
结果表明,提取溶剂中50%甲醇作为提取溶剂时色谱峰信息量大,故供试品提取溶剂确定为50%甲醇。
5.2提取方式考察
取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,密塞,分别对供试品提取方法为回流、超声时进行考察,提取时间20min,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。见图11。
结果表明,对供试品分别进行超声提取与回流提取时效果一致。因超声提取操作更为简便,故供试品提取方法确定为超声提取。
5.3提取时间考察
取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz),分别对供试品提取时间为20分钟、30分钟、40分钟时进行考察,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。见图12。
结果表明,在提取时间为20分钟时,即可充分提取。故供试品提取时间确定为20分钟。
5.4溶剂加入量考察
取浮萍配方颗粒(批号1805034)0.2g,置具塞锥形瓶中,分别加入50%甲醇10ml、25ml、50ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz)20min,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。见图13。
结果表明,在溶剂加入量为25ml时,特征图谱色谱峰面积适中,基线更平。故供试品溶剂加入量确定为25ml。
5.5确定供试品制备方法:取浮萍制剂,研细,取0.2g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,超声20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
5.6特征图谱方法确定为
照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm);以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;柱温为30℃;检测波长为300nm。理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。
参照物溶液的制备取牡荆素对照品,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,作为对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备取浮萍药材、饮片粉末1g,置具塞锥形瓶中,加50%甲醇25ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。另取浮萍标准汤剂粉末、配方颗粒,研细,取0.2g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,称定重量,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
试验例2特征图谱方法学考察
1色谱峰指认
供试品溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备浮萍配方颗粒供试品溶液。
参照物溶液的制备:取牡荆素对照品适量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液,即得。
浮萍对照药材溶液的制备:取浮萍对照药材粉末1g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇25ml,密塞,超声处理(功率600W,频率40kHz)20分钟,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺浮萍配方颗粒阴性对照溶液。
对浮萍配方颗粒特征图谱峰进行定位。见图14-15。
2精密度试验
取浮萍配方颗粒供试品溶液,按拟定实验方法连续进样6次,每次10μl,计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积。见表2-3。
表2精密度考察-保留时间
表3精密度考察-峰面积
结果表明,该仪器精密度良好。
3重复性考察
精密称取浮萍配方颗粒6份,按拟定实验方法进行制备及测定。见表4-5。
表4重复性考察-相对保留时间比值
表5重复性考察-相对峰面积比值
结果表明,该方法重复性好。
4中间精密度考察
4.1不同仪器考察
在以上拟定的实验条件基础上,分别精密称取浮萍配方颗粒两份,制备供试品溶液,分别在安捷伦1260、岛津LC-20AD、Waters e2695型高效液相色谱仪上进行测定。见表6-7。
表6仪器耐用性考察-相对保留时间比值
表7仪器耐用性考察-相对峰面积比值
结果表明,用上述3种仪器对供试品进行检测时,各特征峰相对保留时间的RSD范围为0.0%-1.2%。
4.2不同人员和时间考察
在以上拟定的实验条件基础上,由不同人员(A、B)在不同时间(T1、T2)分别精密称取浮萍配方颗粒各两份,制备供试品,进行测定。见表8-9。
表8人员和时间考察-相对保留时间比值
表9人员和时间考察-相对峰面积比值
结果表明,由不同的人员在不同的时间对同一个样品进行测定,方法稳定性较好。
5耐用性考察
5.1色谱柱耐用性考察
在以上拟定的实验条件基础上,分别对色谱柱为Agilent TC-C18 5μm250×4.6mm、Diamonsil 5μm C18(2)250×4.6mm、Agilent Eclipse XDB-C18 5μm 4.6×250mm进行考察。见表10-11。
表10色谱柱耐用性考察-相对保留时间比值
表11色谱柱耐用性考察-相对峰面积比值
结果表明,用上述3种色谱柱对样品进行检测,特征峰相对保留时间的RSD在0.0%~9.8%。
5.2稳定性
在以上拟定的实验条件基础上,取同一供试品溶液,分别于0h,4h,7h,14h,20h,24h时测定。见表12-13。
表12稳定性考察-保留时间
表13稳定性考察-峰面积
结果表明,其相对应的特征峰保留时间的RSD为0.1%,峰面积RSD为0.1%-1.5%,样品溶液在24小时内稳定。
综上所述,各特征峰相对保留时间的RSD在以上各项考察中均符合要求,该方法良好。将上述8个特征峰纳入后续考察。
6特征峰的确定及对照图谱的建立
6.1相对保留时间规定值限度的制定
方法学各考察项目及验证结果汇总见表14。
表14方法学各项目结果RSD%汇总标准—相对保留时间
在色谱柱耐用性考察项中,峰1的RSD为9.8%,RSD值较大,因此不将峰1纳入特征峰范围内。除去峰1,峰2至峰8的RSD范围为0.0%-6.3%,故将各峰的相对保留时间规定值暂定为±8%。
最终规定:供试品特征图谱中应呈现7个特征峰,其中与牡荆素参照物相应的峰为S峰。
6.2 3批浮萍配方颗粒验证结果
采用拟定的方法对浮萍配方颗粒3批样品进行特征图谱的测定,计算相对保留时间、相对峰面积。见图16,表15-16。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对3批浮萍配方颗粒进行合成,建立了浮萍配方颗粒特征图谱的对照图谱。见图17。
表15 3批浮萍配方颗粒相对保留时间
表16 3批浮萍配方颗粒相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则,共选择了7个重复性较好的峰作为特征峰。计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内,规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、峰6)、1.21(峰7)。
通过特征图谱方法学考察,确认了该方法能检测浮萍配方颗粒中的7个特征峰;对浮萍药材、饮片、标准汤剂及浮萍配方颗粒均能检测7个稳定峰,说明浮萍药材、饮片、标准汤剂及配方颗粒的物质基础一致。该方法能用于药材-饮片-提取物及配方颗粒的质量检测,能准确反应浮萍药材-饮片-提取物及配方颗粒多成分的整体面貌。
Claims (10)
1.一种浮萍及其制剂的特征图谱检测方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:
1)参照物溶液的制备:取牡荆素对照品,加50%甲醇溶解,即得;
2)供试品溶液的制备:取待测样品,加50%甲醇提取,过滤,取滤液,即得;
3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B梯度洗脱;梯度洗脱程序如下:
4)分析特征图谱。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤1)所述对照品牡荆素为每1ml含50μg的溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤2)所述待测样品为药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的一种或几种。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于:所述药材、饮片与50%甲醇的质量体积比为1:25g/ml;所述标准汤剂、配方颗粒与50%甲醇的质量体积比为1:125g/mL。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤2)所述提取为超声提取。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于:所述超声提取的功率600W,频率40kHz、时间20min。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的参照物溶液和供试品溶液量为10μl。
8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述色谱条件的波长为300nm,柱温为30℃,流动相流速为1.00ml/min,理论板数按牡荆素峰计算应不低于5000。
9.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于:步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱规格为柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm。
10.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述步骤4)的特征图谱中应呈现7个特征峰,与牡荆素参照物相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±8%范围之内;规定值为0.35(峰1)、0.47(峰2)、0.72(峰3)、0.91(峰4)、1.00(峰5,S峰)、1.07(峰6)、1.21(峰7)。
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